微生物实验1(1)

1、微生物学与免疫学实验(四)实验内容实验内容n录象：微生物学发展史录象：微生物学发展史n细菌形态结构细菌形态结构: 球菌、杆菌、螺形菌球菌、杆菌、螺形菌 荚膜、鞭毛、芽孢荚膜、鞭毛、芽孢n细菌的培养、生长现象、变异细菌的培养、生长现象、变异n示教：消毒灭菌器材和方法示教：消毒灭菌器材和方法n操作：操作：革兰染色法革兰染色法 细菌的基本形态细菌的基本形态 细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（体微小，一般以微米（mm）作为测量单位。细菌作为测量单位。细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺形菌三大类。不按其外型可分为球菌、杆菌、螺形菌三大类。不同种

2、类的细菌大小不一，大多数球菌直径约同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1m1m，杆菌长杆菌长2 2 5m5m，宽，宽0.30.3 1m1m。球菌球菌 ( coccus )杆菌杆菌( bacillus )螺形菌螺形菌(spiral bacterium)弧菌：一个弯曲弧菌：一个弯曲 螺菌：多个弯曲螺菌：多个弯曲细菌的特殊结构细菌的特殊结构 荚膜、鞭毛、芽胞、荚膜、鞭毛、芽胞、菌毛菌毛荚膜荚膜(capsule)(capsule) 细胞壁外的黏液性物质细胞壁外的黏液性物质 1 1、组成：多数为多糖，少数是蛋白质、组成：多数为多糖，少数是蛋白质 2 2、功能：、功能： A A 抗吞噬作用抗吞噬作用 -

3、重要毒力因子重要毒力因子 B B 粘附作用粘附作用 -与感染有关与感染有关 C C 抗损伤作用抗损伤作用鞭毛鞭毛(flagellum)(flagellum) 菌体表面的细长并呈波状弯曲的丝状物。菌体表面的细长并呈波状弯曲的丝状物。 鞭毛的功能：鞭毛的功能： 1 1、运动、运动 2 2、与致病性有关，如穿过粘液层、与致病性有关，如穿过粘液层 3 3、细菌的分类鉴定，具有抗原性、细菌的分类鉴定，具有抗原性芽胞芽胞( (endosporeendospore, spore) G, spore) G+ +菌菌 1 1、形成：、形成： 内因内因芽胞基因决定芽胞基因决定 外因外因环境条件环境条件 2 2、结

4、构：保存细菌全部生命必需物质：、结构：保存细菌全部生命必需物质： 即完整的核质、酶系统和合成菌体组分的结构即完整的核质、酶系统和合成菌体组分的结构 3 3、特点：折光性强，壁厚，不易着色。、特点：折光性强，壁厚，不易着色。 芽胞的功能芽胞的功能 （1 1）对热、干燥、辐射、化学消毒剂等不利因素）对热、干燥、辐射、化学消毒剂等不利因素 的抵抗力强。的抵抗力强。 （2 2）鉴别细菌。）鉴别细菌。细菌的培养细菌的培养n培养基：培养基：人工配制而成的，专供微生人工配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合性营养物制品物生长繁殖使用的混合性营养物制品n按物理状态分：按物理状态分：（1）液体培养基液体培养基

5、：未加任何凝固剂，：未加任何凝固剂， 用于大量扩增细菌。用于大量扩增细菌。（2）半固体培养基半固体培养基：加入少量凝固剂（：加入少量凝固剂（0.3-0.5%琼脂），琼脂）， 用于观察细菌动力和短期保存菌种。用于观察细菌动力和短期保存菌种。（3）固体培养基固体培养基：加入一定量凝固剂（：加入一定量凝固剂（1.5%琼脂），琼脂）， 用于细菌的分离、鉴定及菌种保存。用于细菌的分离、鉴定及菌种保存。 琼脂斜面、琼脂平板琼脂斜面、琼脂平板培养基分类培养基分类培养基分类培养基分类n按成分不同分：按成分不同分：（1）天然培养基天然培养基：由天然有机物组成，如牛肉汤、：由天然有机物组成，如牛肉汤、牛奶、血清等

6、牛奶、血清等（2）合成培养基合成培养基：是根据天然培养基的成分，用化：是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、配制的培养基学物质模拟合成、配制的培养基n按用途分：按用途分：（1 1）基础培养基基础培养基：含细菌生长繁殖所需的基本营：含细菌生长繁殖所需的基本营 养物质，如牛肉膏蛋白胨培养基。养物质，如牛肉膏蛋白胨培养基。（2 2）营养培养基营养培养基：在基础培养基中加入某些特殊：在基础培养基中加入某些特殊的营养物质，如血琼脂培养基。的营养物质，如血琼脂培养基。（3 3）鉴别培养基鉴别培养基：加入特定的能与某种细菌代谢：加入特定的能与某种细菌代谢产物发生反应的化学物质。产物发生反应的化学物质。

7、（4 4）选择培养基选择培养基：加入特殊化学物质抑制某些细：加入特殊化学物质抑制某些细菌生长，促进另一些细菌生长。如菌生长，促进另一些细菌生长。如SSSS平板平板。培养基分类培养基分类细菌的生长现象细菌的生长现象n细菌在培养基中的生长现象与其细菌在培养基中的生长现象与其形状、结形状、结构、对氧气需求程度构、对氧气需求程度等有关。等有关。细菌的生长现象细菌的生长现象n液体培养基：液体培养基：n半固体培养基：半固体培养基： 细菌的生长现象细菌的生长现象混浊生长混浊生长有鞭毛细菌有鞭毛细菌观察细菌的动力观察细菌的动力无无鞭鞭毛毛细细菌菌线状生长线状生长n固体培养基：固体培养基：细菌的生长现象细菌的生

8、长现象细菌的变异细菌的变异n形态结构变异形态结构变异: L型细菌（细菌细胞壁缺陷型型细菌（细菌细胞壁缺陷型 ） 鞭毛变异：鞭毛变异： HO变异变异n生理性状变异：菌落变异：生理性状变异：菌落变异： S R变异变异 毒力变异毒力变异 耐药性变异耐药性变异 鞭毛变异（鞭毛变异（HO变异）变异）n细菌的鞭毛在某些情况下（如细菌的鞭毛在某些情况下（如0.1%0.1%石炭酸）可以消失而变石炭酸）可以消失而变成没有鞭毛的细菌。成没有鞭毛的细菌。 鞭毛抗原（鞭毛抗原（H H抗原）抗原） 菌体抗原（菌体抗原（O O抗原）抗原）n有鞭毛的细菌由于鞭毛的动力，可在平板上形成有鞭毛的细菌由于鞭毛的动力，可在平板上形

9、成迁徙现象迁徙现象，菌落形似薄膜（德语菌落形似薄膜（德语hauchhauch意为薄膜），故称意为薄膜），故称H H菌落。菌落。 若若细菌失去鞭毛，只能在点种处形成不向外扩展的单个菌落，细菌失去鞭毛，只能在点种处形成不向外扩展的单个菌落，称为称为O O菌落（德语菌落（德语OhneOhne hauchhauch意为无薄膜）意为无薄膜）。（示教平板）（示教平板）n光滑型菌落光滑型菌落( (Smooth,SSmooth,S型型) ) 表面光滑有光泽，表面光滑有光泽，边缘整齐。边缘整齐。 粗糙型菌落粗糙型菌落( (RouthRouth, R, R型型) ) 表面粗糙而暗淡，表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。边

10、缘不整齐。n不仅菌落形态发生变异，生理特性也改变，一般光不仅菌落形态发生变异，生理特性也改变，一般光滑型细菌毒力强；粗糙型细菌毒力减退或无毒力。滑型细菌毒力强；粗糙型细菌毒力减退或无毒力。 （示教平板）（示教平板）菌落变异（菌落变异（SR变异）变异）光滑型菌落光滑型菌落 粗糙型菌落粗糙型菌落菌落变异（菌落变异（SR变异）变异） 消毒消毒(disinfection)：杀死物体上杀死物体上病原微生物病原微生物的的 方法，并不一定能杀死芽胞或非病原微生物。方法，并不一定能杀死芽胞或非病原微生物。灭菌灭菌(sterilization)：杀灭物体上杀灭物体上所有微生物所有微生物的的 方法，包括杀灭细菌方

11、法，包括杀灭细菌芽胞芽胞在内的全部病原微生在内的全部病原微生 物和非病原微生物。物和非病原微生物。 消毒灭菌法消毒灭菌法抑菌抑菌(bacteriostasis)抑制体内活体外细菌抑制体内活体外细菌 的生长繁殖。的生长繁殖。防腐防腐(antisepsis)防止防止 或抑制体外细菌生或抑制体外细菌生 长繁殖的方法。长繁殖的方法。无菌无菌(asepsis)不存在活菌不存在活菌消毒灭菌法消毒灭菌法n物理消毒灭菌法：物理消毒灭菌法： 1）热力灭菌法）热力灭菌法 2）辐射杀菌法）辐射杀菌法 3）过滤除菌法）过滤除菌法n化学消毒灭菌法：化学消毒灭菌法： 消毒剂消毒剂示教：消毒灭菌器材示教：消毒灭菌器材干热干

12、热湿热湿热 一、热力灭菌法一、热力灭菌法 高温杀灭細菌高温杀灭細菌焚烧焚烧最彻底的灭菌方法最彻底的灭菌方法烧灼烧灼直接用火焰灭菌方法直接用火焰灭菌方法干烤干烤加热加热160 2160 2小时小时红外线红外线 产生高热产生高热干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法最有效的灭菌方法 121.3 1530分钟分钟煮沸消毒法煮沸消毒法水煮水煮100 5分钟分钟(繁殖体繁殖体) 2小时小时(芽胞芽胞)流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法水蒸汽水蒸汽100 1530分钟分钟(繁殖体）繁殖体）间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌反复多次流动蒸汽间歇加

13、热灭菌巴氏消毒法巴氏消毒法较低的温度（较低的温度（72 15s）杀灭致病菌杀灭致病菌湿热灭菌与干热灭菌的比较湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好原因原因1. 湿热中细菌菌体蛋白较易凝固湿热中细菌菌体蛋白较易凝固2. 湿热的穿透力比干热大湿热的穿透力比干热大3. 湿热的蒸汽有潜热湿热的蒸汽有潜热二、辐射杀菌法二、辐射杀菌法 紫外线紫外线杀菌机理：杀菌机理：波长波长200300nm200300nm的紫外线具有杀菌作用的紫外线具有杀菌作用 干扰干扰DNADNA的复制与转录的复制与转录紫外线穿透力较弱紫外线穿透力较弱不耐热物品的表面消毒不耐热

14、物品的表面消毒特特 点：点：应用范围：应用范围： 空气消毒空气消毒手术室、传染病房、细菌实验室手术室、传染病房、细菌实验室 三、滤过除菌法三、滤过除菌法用物理阻留的方法将液体或空气中的用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到除菌目的细菌除去，以达到除菌目的滤菌器滤菌器 含有微细小孔含有微细小孔0.220.22微米，只允许液体或气体微米，只允许液体或气体过，而大于孔径的细菌等颗粒不能通过过，而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 适用范围适用范围 血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌 滤滤菌菌过过程程 革兰染色法革兰染色法 材料材料 1. 1. 葡萄球菌与大肠杆菌的混合菌液。葡萄球菌与大肠杆菌的混合菌液。 2. 2. 革兰染色液一套。革兰染色液一套。 3. 3. 玻片、生理盐水、接种环等。玻片、生理盐水、接种环等。操作步骤操作步骤 【涂片涂片】 取载玻片取载玻片 接种环取混合菌液接种环取混合菌液1 1环涂片（直径环涂片（直径约约1cm1cm） 自然干燥自然干燥 固定（通过火焰三次）固定（通过火焰三次