血液标本采集和制片

1、会计学1血液标本采集和制片血液标本采集和制片l 临床检验基础l 临床生化检验l 临床免疫检验l 临床微生物检验l 临床血液检验l 临床输血检验l 临床分子诊断学检验临床医学检验 医学检验是一门具有多学科理论交叉、应用性强、发展迅速的应用技术学科，是医学各科中发展最快的专业之一。 电子技术和计算机在医学检验中得到了广泛应用，基础医学的重大进展促进了实验诊断迅猛发展。 标本用量少、减少标本的转运环节、更快速、更灵活、易操作、信息量大、易质控、报告及时。 但是许多手工操作仍然是基础,是金指标,可校准仪器,是质量控制重要方法。l二、临床检验现状和特点 （一）现状 1、临床检验已进入仪器化时代： 由简单

2、的为临床提供检验结果发展检验技术+参与临床咨询+临床诊断+治疗及预防工作 3、运用循证医学理论为临床提供合理的检验项目。 4、检验医师与临床医师共同制定诊断和疗效判断标准。l（二）医学检验的特点l（二）医学检验的特点l 能做能质控能维护能分析 期待检验医师能遵照和参与国家、国际标准化检验的实践活动，精通先进检验操作方法，并能与临床医生进行交流。 五、学习的基本要求学习目的： 1、掌握本学科基本技能，用准确 、经济 、简便 、快速的检测方法获取检测结果 达到协助诊断疾病和预防疾病的目的 2、为探索准确 、经济 、简便 、快速的检测方法，培养创新能力打下坚实的基础。五、学习的基本要求 1、掌握临检

3、的基本理论 2、掌握各种操作技能 3、掌握方法学评价 4、熟悉各项实验的参考区间 6、加强职业道德培养 必须养成严谨、细心 、有条不紊 、一丝不苟 、 认真负责、实事求是的工作作风 , 树立优良的职业道德。 5、熟悉实验项目的临床意义五、 学习的要求: 7、勤学苦练基本技能和具有过硬的形态学本领,才能胜任工作,成为一个优秀的检验工作者。 8、上课要同时带理论教材和实验教材。 9、实验课前要求预习实验指导；不无故缺课，实验考试不及格不准参加理论考试。 本课程总课时学128时,其中理论64学时; 实验64学时 皮肤采血 静脉采血法 动脉采血采集部位普通静脉采血真空采血法 二、血标本采集的方法 （一

4、）皮肤采血(毛细血管采血) 2）耳垂：痛感较轻，操作方便，适于反复采血。 缺陷：血循环较差，受气温影响较大，血细胞汁数和血红蛋白浓度等结果静脉血，且冬季波动幅度较大，已是淘汰。入试管。入试管。 抗凝：应用物理的或化学的方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称抗凝。 抗凝剂（物质）：能够阻止血液凝固的化学试剂或物质。 P10 表1-3 （一） 枸橼酸钠 机理：与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。 浓度：109mmol/L(32.0g/L)， 106mmol/L(30.8g/L) （一）枸橼酸钠 用途： 1.止凝血象检查，血液保养液用109mmol/L按1:9比例。 2.

5、血沉测定，用106mmol/L与血按1:4比例。（ICSH国际血液学标准化委员会推荐） 缺点：不适于血细胞计数。三、血液标本的抗凝 （二）草酸钠： 机理：可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，阻止血凝固。 浓度：0.1mol/L，与血按1:9比例混合。 用途：出凝血性疾病 缺点：不能作血涂片，因可产生草酸盐结晶，还可使淋巴细胞核出现“三叶式”改变或红细胞出现棘形。三、血液标本的抗凝 （三）双草酸盐：草酸钾+草酸铵 机理：与钙离子形成草酸钙沉淀达到抗凝。 配制：100ml抗凝剂中含草酸钾0.8g，草酸铵1.2g取此液0.20.5ml于小瓶内80以下/烘干可使25ml血不凝。80草酸酸盐可被分解为碳酸盐而

6、失效。 三、血液标本的抗凝 （三）双草酸盐：草酸钾+草酸铵 用途：草酸钾盐或钠盐可使红细胞体积皱缩（约11%）。草酸铵可使红细胞胀大。二者适当混合不影响红细胞形态和体积如：红细胞比积，血细胞计数，网织红计数等，抗凝以后小时结果可靠。 缺点：草酸盐可引起血小板聚集，并可影响白细胞形态故不适用于血小板计数和白细胞分类计数。 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 肝素广泛存在于肺、肝、脾等几乎所有组织的血管肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 机理： 1.与抗凝血酶(AT-)一起，在低浓度能抑制因子IXa、和PF3之间的作用，阻止凝血酶形成。 2. 加强抗凝血酶(AT-)灭

7、活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成 3. 抑制凝血酶的自我催化抑制因子的作用。 4. 高浓度时可阴断凝血酶与纤维蛋白的反应 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 配制：肝素粉（每mg含100125单位），配成1g/L水溶液取0.5ml置小瓶中，放3750烘干，可抗凝血5ml。 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 用途：肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞引起溶血等优点，为一种较好的抗凝剂。红细胞计数，血红蛋白测定，红细胞比积及多种生化分析。也是抗血栓药物之一。 缺点：过量肝素会引起白细胞凝集和血小板减少，故不能用于白细胞计数，血小板计数。肝素抗凝血瑞氏染色后背景呈是深兰色，影响镜检，故也不适于作DC。

8、（五）乙二胺四乙酸（EDTA）盐： 机理:与血中钙离子结合成螯合物,阻止血液凝固. 配制：ICSH建议其使用浓度为每毫升血1.52.2mg。实验室常将其配成15g/L，取0.5ml100，烘干，可抗凝血5ml。 用途：适用于多项血液学检查 血细胞计数（特别是血小板计数） 红细胞比积测定（室温下48h内红细胞比积不改变）（五）乙二胺四乙酸（EDTA）盐： （五）乙二胺四乙酸（EDTA）盐： 缺点： 1.影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，不适于出血凝血检查及血小板功能检验。 2.能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适于制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。 （六）脱纤维蛋白法（物理抗凝）：

9、方法：将血液注入有玻璃珠的盛器中不停转动，使纤维蛋白缠绕凝固于玻璃珠上，从而阻止血凝固。或用棉签挠。 用途：适用于免疫学检查和红斑狼疮细胞检查。 血液标本的采集是分析前质量控制的重要环节之一l 、药物对检验结果影响: l 影响反应系统待测成分的物理性质；l 参与检验化学反应；l 影响机体生理功能和细胞活动的代谢；l 对器官的药理活性和毒性作用。第三节血涂片制备和染色（二）制血片： 推片法于载玻片1/3与2/3交界处加绿豆大血1滴左手拇指与中指持载玻片(血滴靠中指端) 右手持边缘平滑的推片,从血滴前方接触血液使血液散开成一线 以推片与载片保持25 30度夹角向前(母指方向)推动形成血膜 体尾体头

10、尾(四四)涂片好坏与下列因素有关涂片好坏与下列因素有关l(1)瑞氏粉的组成：l 美蓝的氯盐 + 伊红的钠盐 +水 瑞氏粉沉淀(ME)l 瑞氏粉不溶于水，而溶于甲醇l(一)瑞氏染色法（right)l 【原理】 l1、瑞氏染液组成：l (1)瑞氏粉的组成：l ME(瑞氏粉)甲醇M+ E -l 瑞氏染液l 美蓝氧化后-天青(紫红色)l(一)瑞氏染色法（right)l 【原理】l1、瑞氏染液组成：l(一)瑞氏染色法（right)l 【原理】 l1、瑞氏染液组成：l2、甲醇作用： l a. 玻片必须化学清洁（洗衣粉）；l b. 用PH6.46.8缓冲液或新鲜蒸馏水调节PH；l c. 染色完后应用近中性水冲洗。正常染色偏酸偏碱l 临床检验基础l 临床生化检验l 临床免疫检验l 临床微生物检验l 临床血液检验l 临床输血检验l 临床分子诊断学检验临床医学检验 五、学习的基本要求学习目的： 1、掌握本学科基本技能，用准确 、经济 、简便 、快速的检测方法获取检测结果 达到协助诊断疾病和预防疾病的目的 2、为探索准确 、经济 、简便 、快速的检测方法，培养创新能