药物处方制剂体内评价PPT课件

1、一一. 制剂评价应适应新释药系统的发展制剂评价应适应新释药系统的发展二二. 药物制剂处方体内评价药物制剂处方体内评价三三. 先进、配套、规范的体内药物分析检测技术是制剂先进、配套、规范的体内药物分析检测技术是制剂 处方体内评价的基本手段处方体内评价的基本手段四四. 药物制剂设计和体内评价考虑的问题药物制剂设计和体内评价考虑的问题五五. 研究室基本情况介绍研究室基本情况介绍第1页/共74页 一一 制剂评价应适应新释药系统的发展制剂评价应适应新释药系统的发展1. 新制剂和创新药物研究同等重要新制剂和创新药物研究同等重要 新化学实体药物（新化学实体药物（NCE） 成本高成本高 周期长周期长 难度大难

2、度大 新释药系统（新释药系统（DDS） 投入少投入少 见效快见效快 投入产出比高投入产出比高 p 切合发展中国家国情，尤其适合我国国情；切合发展中国家国情，尤其适合我国国情；p 国外（著名制药企业）愈加重视国外（著名制药企业）愈加重视DDS研发；研发；p 技术含量高的药物制剂产品也可以象创新化合物一样，成为技术含量高的药物制剂产品也可以象创新化合物一样，成为 “重磅炸弹重磅炸弹”；p 有的药物多年后新型制剂的有的药物多年后新型制剂的“二次二次”开发上市，所产生的社会开发上市，所产生的社会和和 经济效益不亚于首次普通制剂。经济效益不亚于首次普通制剂。第2页/共74页 药物：化学合成药品、生物技术

3、药品、中药和天然产物药物：化学合成药品、生物技术药品、中药和天然产物 用药：口服（用药：口服（po）、静注（）、静注（iv）、）、 药剂：药剂：只有通过药物制剂处方的设计评筛和制备，只有通过药物制剂处方的设计评筛和制备， 才能成为直接用于人体的药品；才能成为直接用于人体的药品； 才能成为直接投放市场的商品。才能成为直接投放市场的商品。2. 药剂研究的使命、责任，主要动力和经济源泉药剂研究的使命、责任，主要动力和经济源泉第3页/共74页 药物制剂可改善药物的理化性质，提高稳定性，改善药药物制剂可改善药物的理化性质，提高稳定性，改善药 物溶解度；物溶解度； 改善药物的体内行为，增加药物吸收，优化药

4、物改善药物的体内行为，增加药物吸收，优化药物 的体内的体内 分布特征，延长体内作用时间；分布特征，延长体内作用时间； 提高药物治疗效果，降低药物毒副作用；提高药物治疗效果，降低药物毒副作用； 改善人体用药的顺应性。改善人体用药的顺应性。3. 达到实现安全、有效、稳定、可控和用药方便达到实现安全、有效、稳定、可控和用药方便第4页/共74页“重大新药创制重大新药创制”科技重大专项科技重大专项“十一五十一五”计划课题申报指南计划课题申报指南 依据依据国家中长期科学和技术发展规划纲要（国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006200620202020年）年）的部的部 署，国务院决定组织实施署，国务院决

5、定组织实施“重大新药创制重大新药创制”科技重大专项（以下简称科技重大专项（以下简称专专 项）。项）。 4. 4. 临床前药物代谢动力学技术平台临床前药物代谢动力学技术平台建设目标建设目标（略）略）建设内容：建设内容：l 天然产物活性成分及中药药物代谢动力学研究；天然产物活性成分及中药药物代谢动力学研究；l 天然药物多成分药代动力学行为与血清药理学、血清化学及多成分相天然药物多成分药代动力学行为与血清药理学、血清化学及多成分相 互作用的整合评价研究；互作用的整合评价研究；l 药物代谢动力学与代谢组学整合研究；药物代谢动力学与代谢组学整合研究；l 细胞分子水平的体外药代动力学高通量筛选与评价技术研

6、究；细胞分子水平的体外药代动力学高通量筛选与评价技术研究；l 代谢产物的快速鉴定、活性预测及活性代谢物的药代动力学研究；代谢产物的快速鉴定、活性预测及活性代谢物的药代动力学研究；l 药物代谢相互作用的整体和离体研究，临床药物相互作用预测；药物代谢相互作用的整体和离体研究，临床药物相互作用预测；l 生物技术药物及基因治疗药物的药代动力学研究；生物技术药物及基因治疗药物的药代动力学研究；l 难溶（不溶）药物和新型药物释放系统的体内外代谢动力学研究；难溶（不溶）药物和新型药物释放系统的体内外代谢动力学研究；l 药代动力学理论模型等方面的研究。药代动力学理论模型等方面的研究。 4. 药物制剂处方体内评

7、价药物制剂处方体内评价第5页/共74页5. 新型给药系统（新型给药系统（Drug Delivery System, DDS）：）： 靶向给药靶向给药 透皮给药透皮给药 粘膜给药粘膜给药 口服缓控释口服缓控释 速释给药速释给药 载体给药载体给药 生物技术给药生物技术给药第6页/共74页 二二 药物制剂处方体内评价药物制剂处方体内评价1. 药代动力学性质与制剂体内评价药代动力学性质与制剂体内评价化学药物制剂研究基本技术指导原则中： 原料药与制剂； 药代动力学与制剂原料药生物学性质对制剂研究有重要指导作用：原料药生物学性质包括对生物膜的通透性，在生理环境下的稳定性，原料药的吸收、分布、代谢、消除等药

8、代动力学性质，药物的毒副作用及治疗窗等。对于口服吸收较差的药物，通过选择适当的制剂技术和处方，可能改善药物的吸收。如药代动力学结果提示药物口服吸收极差，可考虑选择注射剂等剂型。缓释、控释制剂对药物的半衰期、治疗指数、吸收部位等均有一定要求，研发中需要特别注意。 第7页/共74页生物利用度（生物利用度（Bioavailability; BA）：）：指药物活性成分从制剂释放吸收进入全身循环的程度和速度；指药物活性成分从制剂释放吸收进入全身循环的程度和速度；是反映药物活性成分吸收进入体内的程度和速度的指标。是反映药物活性成分吸收进入体内的程度和速度的指标。绝对生物利用度：绝对生物利用度：以静脉制剂为

9、参比获得的药物活性成分吸收进入体内循环的相对量。以静脉制剂为参比获得的药物活性成分吸收进入体内循环的相对量。相对生物利用度：相对生物利用度：以其他非静脉途径给药的制剂为参比获得的药物活性成分吸收进入体循环以其他非静脉途径给药的制剂为参比获得的药物活性成分吸收进入体循环的相对量。的相对量。第8页/共74页生物利用度可用下式表示：生物利用度可用下式表示： Fabs % =（ D（非静脉）（非静脉）/ D（iv）100% =（KeVd AUC（非静脉）（非静脉）/ KeVd AUC（iv）100% =（AUC（非静脉）（非静脉）/ AUC（iv）100%同样：同样： Frel % =（AUC（非静脉

10、）（非静脉）/ AUC（非静脉）（非静脉）100%l 认为静脉给药的吸收率为认为静脉给药的吸收率为100%；l 生物利用度是同一药物或不同剂型中相同主药的比较；生物利用度是同一药物或不同剂型中相同主药的比较；l 对同一受试个体来说，可认为消除速率常数（对同一受试个体来说，可认为消除速率常数（Ke）和分布容积（）和分布容积（Vd） 不变，所以生物利用度实验最好采用大动物，在同一受试个体进行交不变，所以生物利用度实验最好采用大动物，在同一受试个体进行交 叉比较实验。叉比较实验。第9页/共74页2. 药物制剂生物利用度评估：药物制剂生物利用度评估：由血浆浓度由血浆浓度-时间数据来评定生物利用度通常涉

11、及三个主要时间数据来评定生物利用度通常涉及三个主要的参数，即：的参数，即：Cmax Tmax AUC024680123450 8 16 24 32 40 48 56 64 血药浓度（血药浓度（ ug/ml ）服药后时间（服药后时间（h）最小毒副反应浓度最小毒副反应浓度最小有效浓度最小有效浓度CmaxTmaxAUCCmax: 血药达峰时的浓度血药达峰时的浓度 （血药浓度峰值）（血药浓度峰值）Tmax: 血药浓度达峰时间血药浓度达峰时间AUC: 药药-时曲线下面积时曲线下面积第10页/共74页由药代动力学参数指导设计预期临床目的的药物制剂由药代动力学参数指导设计预期临床目的的药物制剂某些药物的某些

12、药物的Tmax是关键参数；是关键参数；某些药物的持续时间是关键参数；某些药物的持续时间是关键参数；血浓度血浓度时间时间第11页/共74页生物等效性（生物等效性（Bioequivalence； BE）：）：生物利用度生物利用度生物等效性生物等效性 BA 和和BE 两者均是评价制剂质量的重要指标。两者均是评价制剂质量的重要指标。Cmax：Tmax：AUC：第12页/共74页原创药（原创药（Innovator Product）：）：是指已经过全面的药学、药理学和毒理学研究以及临床研究数据证实其是指已经过全面的药学、药理学和毒理学研究以及临床研究数据证实其安全有效性并首次被批准上市的药品。安全有效性并

13、首次被批准上市的药品。药学等效性药学等效性(Pharmaceutical equivalence)：如果两制剂含等量的相同活性成分，具有相同的剂型，符合同样的或可如果两制剂含等量的相同活性成分，具有相同的剂型，符合同样的或可比较的质量标准，就可以认为它们是药学等效的。比较的质量标准，就可以认为它们是药学等效的。药学等效不一定意味着生物等效：药学等效不一定意味着生物等效：因为辅料的不同或生产工艺差异等，可能会导致药物溶出或吸收行为的因为辅料的不同或生产工艺差异等，可能会导致药物溶出或吸收行为的改变。改变。第13页/共74页治疗等效性治疗等效性(Therapeutic equivalence)：若

14、两制剂含有相同活性成分，并且临床上显示具有相同的安全性和有效若两制剂含有相同活性成分，并且临床上显示具有相同的安全性和有效性，可以认为两制剂具有治疗等效性。性，可以认为两制剂具有治疗等效性。若两制剂中所用辅料本身并不会导致有效性和安全性问题，生物等效性若两制剂中所用辅料本身并不会导致有效性和安全性问题，生物等效性研究是证实两制剂治疗等效性最合适的办法。研究是证实两制剂治疗等效性最合适的办法。若药物吸收速度与临床疗效无关若药物吸收速度与临床疗效无关,吸收程度相同但吸收速度不同的药物也吸收程度相同但吸收速度不同的药物也可能达到治疗等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化学形式不同可能达到治疗等效。

15、而含有相同的活性成分只是活性成分化学形式不同（如同一药物的盐、酯等）或剂型不同（如片剂和胶囊剂）的药物制剂（如同一药物的盐、酯等）或剂型不同（如片剂和胶囊剂）的药物制剂也可能治疗等效。也可能治疗等效。第14页/共74页药代动力学研究方法：药代动力学研究方法：即采用通过测量不同时间点的生物样本（如全血、血浆、血清或尿液）即采用通过测量不同时间点的生物样本（如全血、血浆、血清或尿液）中药物浓度，获得药物浓度中药物浓度，获得药物浓度-时间曲线（时间曲线（C-T）来反映药物从制剂中释放）来反映药物从制剂中释放吸收到体循环中的动态过程。并经过适当的数据，得出与吸收程度和速吸收到体循环中的动态过程。并经过

16、适当的数据，得出与吸收程度和速度有关的药代动力学参数如曲线下面积（度有关的药代动力学参数如曲线下面积（AUC）、达峰浓度（）、达峰浓度（Cmax）、）、达峰时间（达峰时间（Tmax）等。）等。3. 药物制剂药物制剂BA研究方法：研究方法：药效动力学研究方法：药效动力学研究方法：在无可行的药代动力学研究方法建立生物等效性研究时（如无灵敏的血在无可行的药代动力学研究方法建立生物等效性研究时（如无灵敏的血药浓度检测方法、浓度和效应之间不存在线性相关），可以考虑用明确药浓度检测方法、浓度和效应之间不存在线性相关），可以考虑用明确的可分级定量的药效学指标通过效应的可分级定量的药效学指标通过效应-时间曲线

17、（时间曲线（Effect-Time curve）与）与参比制剂比较来确定生物等效性。参比制剂比较来确定生物等效性。以药代动力学参数为终点指标的研究方法是目前普遍采用的以药代动力学参数为终点指标的研究方法是目前普遍采用的生物等效性研究方法。一个完整的生物等效性研究包括生物等效性研究方法。一个完整的生物等效性研究包括生物生物样本分析、实验设计样本分析、实验设计、统计分析、结果评价等方面的内容。、统计分析、结果评价等方面的内容。第15页/共74页实验设计与操作实验设计与操作自身交叉对照：自身交叉对照： 清洗期（清洗期（Wash-out Period）：）： 受试动物选择：受试动物选择： 例数：例数：

18、 分组：分组： 动物福利：动物福利：第16页/共74页参比制剂参比制剂( Reference Product , R )：受试制剂受试制剂 ( Test Product，T )： 参比制剂和受试制剂含量差别不能超过参比制剂和受试制剂含量差别不能超过5%；参比和受试制；参比和受试制剂均应注明研制单位、批号、规格、保存条件、有效期。剂均应注明研制单位、批号、规格、保存条件、有效期。给药剂量：给药剂量：生物样品取样：生物样品取样：药代动力学参数计算：药代动力学参数计算： 研究过程标准化与规范化：研究过程标准化与规范化： 第17页/共74页靶向给药系统：靶组织分布：活性成分透皮给药系统：药物透过皮肤吸

19、收进入血液循环从而治疗疾病的新型给药系统，其特点是可以避免口服给药可能发生的肝脏首过效应及胃肠灭活效应，克服药物口服生物利用度不高的问题，可以维持恒定的血药浓度或药理效应、延长作用时间、减少毒副作用、增强用药顺应性等。药物、辅料等与皮肤的相互作用问题；血药的持续时间；生物利用度等。 缓控释给药：缓释制剂的突释问题；体内驻留时间( MRT )。粘膜给药：生物利用度；辅料与粘膜的作用以及对药物转运的影响。载体给药系统：载体材料对药物转运的影响；活性药物的测定；生物技术药物：给药技术相对滞后；生物技术药物对给药系统的依赖性很大；PD/PK研究；第18页/共74页三三. . 先进、配套、规范的体内药物

20、分析检测技术先进、配套、规范的体内药物分析检测技术 是制剂处方体内评价的基本手段是制剂处方体内评价的基本手段1. . 灵敏、专一的体内药物（被测组分）检测技术方法的建立灵敏、专一的体内药物（被测组分）检测技术方法的建立 与应用成为药学领域重要研究内容与应用成为药学领域重要研究内容l 新型化学结构药物新型化学结构药物l 生物技术药物生物技术药物l 高活性低剂量药物高活性低剂量药物如：如：低剂量结构特殊的化学合成药物；低剂量结构特殊的化学合成药物； 天然药物中的糖类药物；天然药物中的糖类药物； 生物技术药品生物技术药品 内源性化合物药物内源性化合物药物第19页/共74页SFDA：（一）生物样本分析

21、方法的建立和确证（一）生物样本分析方法的建立和确证 （PP6-11 / PP1-30） 1. 常用分析方法常用分析方法 2. 方法学确证（方法学确证（Method Validation） 2.1 特异性特异性(Specificity) 2.2 标准曲线和定量范围（标准曲线和定量范围（Calibration Curve） 2.3 定量下限（定量下限（Lower Limit of quantitation，LLOQ） 2.4 精密度与准确度精密度与准确度(Prcision and Accuracy) 2.5 样品稳定性样品稳定性(Stability) 2.6 提取回收率提取回收率 2.7 微生物学

22、和免疫学方法确证微生物学和免疫学方法确证 3. 方法学质控方法学质控 4. 分析数据的记录与保存分析数据的记录与保存 4.1 方法建立的数据方法建立的数据 4.2 样品分析的数据样品分析的数据 4.3 其他相关信息其他相关信息第20页/共74页灵敏度高：灵敏度高：2. 体内药物（代谢产物）分析测定方法的特点体内药物（代谢产物）分析测定方法的特点浓度低：浓度低：样品来源有限样品来源有限专一性专一性样品量少：样品量少：个体差异大：个体差异大：方法快捷：方法快捷：方法可靠：方法可靠：分析方法和检测手段配套：分析方法和检测手段配套： 第21页/共74页内标法定量方法内标法定量方法 ：提高分析方法的可靠

23、性；操作简便。提高分析方法的可靠性；操作简便。 在实际操作中，由于样品处理步骤繁琐，难于达到每次操作的完全在实际操作中，由于样品处理步骤繁琐，难于达到每次操作的完全 平行，因而会引入较大的误差。平行，因而会引入较大的误差。对内标化合物的基本要求：对内标化合物的基本要求：l 供选作内标的化合物，其理化性质与被测组分应相近；供选作内标的化合物，其理化性质与被测组分应相近；l 内标的色谱峰应靠近被测组分的色谱峰，最好位于几个被测组分色谱内标的色谱峰应靠近被测组分的色谱峰，最好位于几个被测组分色谱 峰的中间，但又能完全分离。峰的中间，但又能完全分离。l 内标浓度的选择内标浓度的选择 ：一般内标加入量应

24、控制在使标准曲线中段的药物与：一般内标加入量应控制在使标准曲线中段的药物与 内标物响应值（注意不是浓度）比近似为内标物响应值（注意不是浓度）比近似为1 。3. 体内药物（代谢产物）分析测定中的特殊问题体内药物（代谢产物）分析测定中的特殊问题l 对内标的纯度要求：从实际应用角度出发，不苛求内标具有高纯度与对内标的纯度要求：从实际应用角度出发，不苛求内标具有高纯度与 高含量，只要求在同一次测定中，标准曲线和样品各管内内标加入量高含量，只要求在同一次测定中，标准曲线和样品各管内内标加入量 相等。相等。 l 内标物能很好地溶解在样品中，但不能与样品发生化学反应。内标物能很好地溶解在样品中，但不能与样品

25、发生化学反应。l 供作内标的化合物不应当是体内的内源性成分，或药物在体内可能产供作内标的化合物不应当是体内的内源性成分，或药物在体内可能产 生的代谢物，并且最好不用患者可能同时使用的其他药物。生的代谢物，并且最好不用患者可能同时使用的其他药物。 第22页/共74页内原性药物分析内原性药物分析：生物机体内天然固有的物质，如生物递质类、激生物机体内天然固有的物质，如生物递质类、激 素类等。素类等。 内源性物质作为外源性药物，如何区分于内源性的干扰？内源性物质作为外源性药物，如何区分于内源性的干扰？u 生物耗竭：生物耗竭：如：利血平对单胺递质的耗竭；如：利血平对单胺递质的耗竭； 注意：内源性物质耗竭

26、与生物机体生理机能变化关系。注意：内源性物质耗竭与生物机体生理机能变化关系。u 扣除本底：扣除本底：本底样品的样本数量；本底样品的样本数量； 内源性物质的分泌（时辰）节律性；内源性物质的分泌（时辰）节律性；u 同位素标记：同位素标记：将化合物用同位素标记后给予动物，以便区别于生物将化合物用同位素标记后给予动物，以便区别于生物 机体内的内源性物质。机体内的内源性物质。第23页/共74页间接分析测定方法间接分析测定方法：不是直接测定药物的本身浓度，而是通过其它指标不是直接测定药物的本身浓度，而是通过其它指标 相应的变化，间接、定量的反映被测成分的量。相应的变化，间接、定量的反映被测成分的量。u 衍

27、生化方法：衍生化方法：药物药物（不能直接测定或可测性差）（不能直接测定或可测性差）药物衍生物药物衍生物（新化合物直接测定）（新化合物直接测定）衍生化反应；定量形成新的化合物衍生化反应；定量形成新的化合物u 化学反应方法：化学反应方法：底物底物 产物产物在被测在被测药物药物的作用下的作用下（产物是依赖于被测组分（产物是依赖于被测组分定量形成的）定量形成的）（产物是可测的）（产物是可测的）u 生物反应（效应）方法：生物反应（效应）方法：生物效应变化生物效应变化在被测在被测药物药物的作用下的作用下生物效应的变化是定量的；生物效应的变化是定量的；生物效应是定量可测的；生物效应是定量可测的；（注意：生物

28、效应的变化范围）（注意：生物效应的变化范围）第24页/共74页4. 方法学确认（评价、确证、考评、方法学确认（评价、确证、考评、validation ）“生物样品测定的关键是方法学的确证。方法学确证是整个药代动力学研究生物样品测定的关键是方法学的确证。方法学确证是整个药代动力学研究的基础。这是药代动力学研究有别于其它药理毒理研究的特殊之处。所有药的基础。这是药代动力学研究有别于其它药理毒理研究的特殊之处。所有药代动力学研究结果，都依赖于生物样品的测定，只有可靠的方法才能得出可代动力学研究结果，都依赖于生物样品的测定，只有可靠的方法才能得出可靠的结果。在通过特异性、灵敏度、精密度、准确度、稳定性

29、等研究建立了靠的结果。在通过特异性、灵敏度、精密度、准确度、稳定性等研究建立了检测方法学，得到了标准曲线后，在检测过程中还应进行方法学质控，制备检测方法学，得到了标准曲线后，在检测过程中还应进行方法学质控，制备随行标准曲线并对质控样品进行测定，以确保检测方法的可靠性。随行标准曲线并对质控样品进行测定，以确保检测方法的可靠性。” 引自引自: 化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则第25页/共74页名词解释名词解释: :生物介质：生物介质：一种生物来源物质，能够以可重复的方式采集和处理。一种生物来源物质，能够以可重复的方式采集和

30、处理。 例如：全血、血浆、血清、尿、粪、例如：全血、血浆、血清、尿、粪、 各种组织等。各种组织等。准确度：准确度：在确定的分析条件下，测得值与真实值的接近程度。在确定的分析条件下，测得值与真实值的接近程度。分析批：分析批：包括待测样品、适当数目的标准样品和包括待测样品、适当数目的标准样品和QC样品的完整系列。样品的完整系列。 一天内可以完成几个分析批，一个分析批也可以持续几天完成。一天内可以完成几个分析批，一个分析批也可以持续几天完成。精密度：精密度：在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一系列测在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一系列测 量值的分散程度。量值的分散程度。重现性

31、：重现性：不同实验室间测定结果的分散程度，以及相同条件下分析方不同实验室间测定结果的分散程度，以及相同条件下分析方 法在间隔一段短时间后测定结果的分散程度。法在间隔一段短时间后测定结果的分散程度。第26页/共74页重现性：重现性：不同实验室间测定结果的分散程度，以及相同条件下分析方不同实验室间测定结果的分散程度，以及相同条件下分析方 法在间隔一段短时间后测定结果的分散程度。法在间隔一段短时间后测定结果的分散程度。介质效应：介质效应：由于样品中存在干扰物质，对响应造成的直接或间接的影由于样品中存在干扰物质，对响应造成的直接或间接的影 响。响。稳定性：稳定性：一种分析物在确定条件下，一定时间内在给

32、定介质中的化一种分析物在确定条件下，一定时间内在给定介质中的化 学稳定性。学稳定性。标准样品：标准样品：在生物介质中加入已知量分析物配制的样品，用于建立在生物介质中加入已知量分析物配制的样品，用于建立 标准曲线，计算质控样品和未知样品中分析物浓度。标准曲线，计算质控样品和未知样品中分析物浓度。质控样品：质控样品：即即QC样品，系指在生物介质中加入已知量分析物配制的样品，系指在生物介质中加入已知量分析物配制的 样品，用于监测生物分析方法的重复性和评价每一分析样品，用于监测生物分析方法的重复性和评价每一分析 批中未知样品分析结果的完整性和正确性。批中未知样品分析结果的完整性和正确性。第27页/共7

33、4页标准曲线：标准曲线：实验响应值与分析物浓度间的关系。应采用适当的加权和统实验响应值与分析物浓度间的关系。应采用适当的加权和统 计检验，用简单的数学模型来最适当地描述。标准曲线应是连续的计检验，用简单的数学模型来最适当地描述。标准曲线应是连续的 和可重现的，应以回归计算结果的百分偏差最小为基础。和可重现的，应以回归计算结果的百分偏差最小为基础。回收率：回收率：分析过程的提取效率，以样品提取和处理过程前后分析物含量分析过程的提取效率，以样品提取和处理过程前后分析物含量 百分比表示。百分比表示。选择性：选择性：分析方法测量和区分共存组分中分析物的能力。这些共存组分分析方法测量和区分共存组分中分析

34、物的能力。这些共存组分 可能包括代谢物、杂质、分解产物、介质组分等可能包括代谢物、杂质、分解产物、介质组分等定量范围：定量范围：包括定量上限包括定量上限（ULOQ）和定量下限和定量下限（LLOQ）的浓度范围，的浓度范围， 在此范围内采用浓度在此范围内采用浓度- -响应关系能进行可靠的、可重复的定响应关系能进行可靠的、可重复的定 量，其准确度和精密度可以接受。量，其准确度和精密度可以接受。内标方法：内标方法：指选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶指选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶 液中，以待测组分和对照物质的响应信号之比为定量依据，液中，以待测组分和对照物质的响应

35、信号之比为定量依据， 测定待测组分含量的方法。测定待测组分含量的方法。第28页/共74页体内药物分析方法的评价内容：体内药物分析方法的评价内容：（1） Selectivity:（2） Linear Range and Response Factor：（3） Inter-Day Precision and Accuracy: （4） Intra-Day Precision and Accuracy:（5） Dilution Integrity:（6） Sensitivity:（7） Recovery (Extraction Efficiency)：（8） Matrix Effects:（9） C

36、arryover Evaluation：（10） Stability:（11） Relative Retention:第29页/共74页受试验药物标准样品的色谱图受试验药物标准样品的色谱图正常生物样品（空白）色谱图正常生物样品（空白）色谱图 （6个不同来源的受试个体）个不同来源的受试个体）正常生物样品外加受试药物色谱图正常生物样品外加受试药物色谱图 （ 6个不同来源的受试个体：血浆种属；血浆外加药物浓度；内标浓度）个不同来源的受试个体：血浆种属；血浆外加药物浓度；内标浓度） 给药后生物样品色谱图给药后生物样品色谱图 （受试种属；给药途径、剂量；生物样品采集时间点）（受试种属；给药途径、剂量；生

37、物样品采集时间点）Selectivity:被测组分与内源性物质、试剂中杂质、代谢产物以及其它干扰物质有被测组分与内源性物质、试剂中杂质、代谢产物以及其它干扰物质有良好的分离良好的分离; ; 必须证明所测定的物质是预期的分析物，内源性物质和其他代谢物不必须证明所测定的物质是预期的分析物，内源性物质和其他代谢物不得干扰样品的测定。对于色谱法至少要考察得干扰样品的测定。对于色谱法至少要考察6 6个不同来源空白生物样品个不同来源空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图。对于质谱法则应着重考察分析过

38、程中的介质效应生物样品色谱图。对于质谱法则应着重考察分析过程中的介质效应。第30页/共74页必须用至少必须用至少6 6个浓度建立标准曲线个浓度建立标准曲线( (n = / 5););应使用与待测样品相同的生物介质应使用与待测样品相同的生物介质; ;定量范围要能覆盖全部待测浓度定量范围要能覆盖全部待测浓度; ;不允许将定量范围外推求算未知样品的浓度。不允许将定量范围外推求算未知样品的浓度。建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。 Linear Range and Response Factor：标准曲线标准曲线标准曲线线性范围标

39、准曲线线性范围标准曲线的相关系数标准曲线的相关系数标准曲线线性范围最低和最高浓度样品的色谱图标准曲线线性范围最低和最高浓度样品的色谱图空白生物样品外加被试药物空白生物样品外加被试药物(低、中、高三个浓度；低、中、高三个浓度； n5)经经标准曲线的反算标准曲线的反算(back-calculated)测定浓度测定浓度第31页/共74页Inter-Day Precision and Accuracy:Intra-Day Precision and Accuracy:要求选择要求选择3个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在定量下

40、限（低浓度选择在定量下限（LLOQ）附近，其浓度在）附近，其浓度在LLOQ的的3倍以内；倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限；高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品，为获得批间精密度应至个样品，为获得批间精密度应至少少 连续测定连续测定3个分析批。个分析批。精密度用质控样品的批内和批间相对标准差（精密度用质控样品的批内和批间相对标准差（RSD）表示，）表示，RSD一般应小一般应小于于15%，在，在LLOQ附近附近RSD应小于应小于20%。准确度一般应在准确度一般应在85%115%范围内，在范围内，在LLOQ附近应在附近应在80

41、%120%范围内。范围内。 第32页/共74页Precision of the method, defined by the percent relative standard deviation ( %RSD = （standard deviation）（mean）100)， was determined from the interpolated QC sample concentrations.Accuracy of the method, defined by the percent relative error ( %RE = （standard observed concentra

42、tionnominal concentration） （ nominal concentration ）100)Precision and Accuracy第33页/共74页Dilution Integrity:目的是为解决在样品测定过程中，出现超过最高定量上限目的是为解决在样品测定过程中，出现超过最高定量上限的样品的测定问题。的样品的测定问题。采用与标准曲线相同的空白血浆，对超出定量上限的样品采用与标准曲线相同的空白血浆，对超出定量上限的样品进行一定比例的稀释，稀释后的待测样品浓度应在所建立进行一定比例的稀释，稀释后的待测样品浓度应在所建立的标准曲线范围之内。的标准曲线范围之内。高浓度样品稀

43、释后，所测定结果的准确度和精密度不受稀高浓度样品稀释后，所测定结果的准确度和精密度不受稀释的影响。释的影响。第34页/共74页Dilution Integrity for xxDrugAcceptance Criteria-15%42500+15%57500Nominal Concentrations (ng/ml) 50000Acceptance Ratio47478 6/649950 47794 51204 4926553459mean:49858SD2239% RSD4.49%RE-0.284n6第35页/共74页Sensitivity:定量下限是标准曲线上的最低浓度点，要求至少能满足测

44、定定量下限是标准曲线上的最低浓度点，要求至少能满足测定35个半个半衰期时样品中的药物浓度，或衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的的1/101/20时的药物浓度，其准时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的确度应在真实浓度的80%120%范围内，范围内，RSD应小于应小于20%。应由至。应由至少少5个标准样品测试结果证明。个标准样品测试结果证明。 最低检测浓度最低检测浓度(X/ml)最低检测量最低检测量(X)最低定量下限最低定量下限(LLOQ)第36页/共74页Recovery (Extraction Efficiency)提取回收率提取回收率: : 应考察高、中、低应考察高、中、低3 3个浓度的提

45、取回收率，其结果应个浓度的提取回收率，其结果应当一致、精密和可重现。当一致、精密和可重现。 低低、中中、高高(3(3个浓度个浓度):):第37页/共74页Conc.(ng/ml)Peak Area Fortified SamplesMean Peak Area Fortified SamplesPeak Area Processed SamplesPercent RecoveryMean Percent RecoverySDL.A1AB1B1/ACDA2B2B2/AA3B3B3/AA4B4B4/AA5B5B5/AMA6EB6B6/ EGHA7B7B7/ EA8B8B8/ EA9B9B9/ EA

46、10B10B10/ EHA11IB11B11/ IKLA12B12B12/ IA13B13B13/ IA14B14B14/ IA15B15B15/ I萃取回收率萃取回收率:第38页/共74页Matrix Effects:在采用质谱方法进行体内药物定量检测时在采用质谱方法进行体内药物定量检测时, ,应进行基质效应试验应进行基质效应试验, ,观察基质对药物测定的影响观察基质对药物测定的影响. .基质（基质（matrix） 尚无统一的解释，曾称为尚无统一的解释，曾称为“一种分析物（一种分析物（analyte）的）的环境（环境（milieu）”，即指标本中除分析物以外的一切组成。，即指标本中除分析物以

47、外的一切组成。 生物介质生物介质 样品处理样品处理 加入待测药物加入待测药物 测定测定fortified samples: 标准样品标准样品 测定测定 analytical samples:(两种测定方式的药物浓度相等两种测定方式的药物浓度相等)第39页/共74页Matrix Factor (MF;基质因子基质因子): peak area (fortified samples) / / peak area (analytical samples含有生物基质、已知浓度样品不含有生物基质、已知浓度样品IS adjusted Matrix Factor (内标校正的基质因子): ratios of

48、peak area(Drug/IS) (fortified samples)ratio of peak area (Drug/IS) (analytical samples)含有生物基质、已知药物和内标浓度样品不含有生物基质、已知药物和内标浓度样品第40页/共74页Carryover试验试验：Run Code药物LLOQ（信号）内标（信号）双空白生物样品1B1A1-一般是在分析测定标准曲线的定量上限浓度的样品之后，立即测定一般是在分析测定标准曲线的定量上限浓度的样品之后，立即测定 一个空白样品（最好是双空白生物样品）。一个空白样品（最好是双空白生物样品）。 要求：要求：空白生物样品在被测药物和

49、内标的出峰位置（或时间），没空白生物样品在被测药物和内标的出峰位置（或时间），没 有有 残留现象；或残留的相应信号为残留现象；或残留的相应信号为LLOQ或内标信号的或内标信号的20%以下。以下。第41页/共74页Stability:（1）药物母液（长期或较长时间）放置稳定性）药物母液（长期或较长时间）放置稳定性（2）血浆样品长期放置稳定性）血浆样品长期放置稳定性（3）血浆样品室温放置稳定性）血浆样品室温放置稳定性（4）血浆样品处理后（自动进样器）稳定性）血浆样品处理后（自动进样器）稳定性（5）血浆样品冻融稳定性）血浆样品冻融稳定性样品的浓度一般设为：低、中、高（三个浓度梯度）；样品的浓度一般设

50、为：低、中、高（三个浓度梯度）； 常依样品测定中的常依样品测定中的QC样品进行试验。样品进行试验。原则上以研究过程的实际状况为稳定性考察的依据。原则上以研究过程的实际状况为稳定性考察的依据。标明：药物的浓度；药物储存的介质（或溶媒）；标明：药物的浓度；药物储存的介质（或溶媒）； 样品放置（或储存）的条件和环境；样品放置（或储存）的条件和环境； 放置的时间或处置的条件等。放置的时间或处置的条件等。第42页/共74页Relative Retention:评价和观察分析系统的适宜性评价和观察分析系统的适宜性(suitability)选定一个浓度的样品选定一个浓度的样品(QC中的一个浓度中的一个浓度)

51、进行不同日期进行不同日期( (批批) )的测定的测定计算出相对保留的可接受范围计算出相对保留的可接受范围 Retention Time (min.)天天( (批批) ) 药物药物 内标内标 Relative Retention 1 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3 4.10 4.06 1.01 3.98 3.94 1.01 4.10 4.06 1.01 4.12 4.06 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 4

52、3.98 3.94 1.01 . . . 7 4.02 3.97 1.02 . . . 10 4.02 3.94 1.02 . . . Mean Relative Retention 1.01 Acceptable Relative Retention Range -15% 0.859 +15% 1.16第43页/共74页5. 常用分析测试方法：常用分析测试方法：以以LC-MSn为主流的检测分析手段：为主流的检测分析手段： 选择性选择性、灵敏度明显提高灵敏度明显提高；方法学建立和样品测试快。；方法学建立和样品测试快。 药物药物 剂量剂量 检测灵敏度检测灵敏度 备注备注 8021 1 mg /人

53、人 25 pg/ml LXT-101 0.05 mg / kg 20 pg/ml 缓释缓释14天天 Leuprorelin 0.3 mg / kg 30 pg/ml 缓释缓释45天天 NTX 1.0 mg / kg 50 pg/ml 缓释缓释45天天 SNF 0.1 mg / kg 50 pg/ml BUSPHCl 5 mg /人人 25 pg/ml第44页/共74页生物技术制剂分析技术：生物技术制剂分析技术：生物技术药物：生物技术药物：分子量大，稳定性差，半衰期短；分子量大，稳定性差，半衰期短； 多次注射给药，顺应性差；多次注射给药，顺应性差； 对给药系统的依赖性大。对给药系统的依赖性大。

54、药物制剂中的稳定化性，药物制剂中的稳定化性， 提高生物利用度问题，提高生物利用度问题， 延长体内时间，延长体内时间， 体内、外评价问题。体内、外评价问题。第45页/共74页sample poolingone point (36# & D2 ) 05101520250200400600800time（min)plasma drugconcentration（ug/ml)D236#36#-meanD2-mean快速样品检测方法：快速样品检测方法：适合于处方设计初期的评筛。适合于处方设计初期的评筛。第46页/共74页1. 药物相互作用的类别药物相互作用的类别 ( Types of Drug Inte

55、ractions )：药物理化性质相互作用：药物理化性质相互作用：药剂学的相互作用药剂学的相互作用 药物效应学的相互作用：药物效应学的相互作用：药理、毒理的相互作用药理、毒理的相互作用 药代动力学的相互作用：药代动力学的相互作用：ADME的相互作用的相互作用四四. 药物制剂设计和体内评价考虑的问题药物制剂设计和体内评价考虑的问题第47页/共74页（1） 药物的理化药物的理化性质相互作用：性质相互作用：两种或两种以上的药物可以发生种种物理、化学反应；两种或两种以上的药物可以发生种种物理、化学反应；药物药物之间、药物赋形剂之间；药物药物之间、药物赋形剂之间；产生沉淀：产生沉淀：沉淀不明显：沉淀不明

56、显：药物制剂中的增溶剂被稀释：药物制剂中的增溶剂被稀释： 第48页/共74页改变组织或受体的敏感性：改变组织或受体的敏感性：（2） 药效学的药效学的相互作用：相互作用：药物合用时，一种药物可以对另一药物的血浓度没有明显影响，但药物合用时，一种药物可以对另一药物的血浓度没有明显影响，但可以改变后者的药理效应。可以改变后者的药理效应。 对受体以外部位的影响：对受体以外部位的影响： 改变体液和电解质的平衡：改变体液和电解质的平衡：这种相互作用多发生在作用于心肌、这种相互作用多发生在作用于心肌、 神经肌肉突触传递及肾脏的药物；神经肌肉突触传递及肾脏的药物； 如：两性霉素如：两性霉素B和排钾利尿药可增加

57、强心甙的毒性；和排钾利尿药可增加强心甙的毒性； 保泰松、吲哚美辛可加重皮质激素类的水钠潴留等。保泰松、吲哚美辛可加重皮质激素类的水钠潴留等。 第49页/共74页（3）药代动力学的相互作用：）药代动力学的相互作用： 影响药物的影响药物的ADME以及药物与血浆蛋白的结合。以及药物与血浆蛋白的结合。影响药物的吸收：影响药物的吸收：肠蠕动变化对药物吸收的影响：肠蠕动变化对药物吸收的影响： 影响吸收部位酶或菌丛变化：影响吸收部位酶或菌丛变化： 口服地高辛以后，部分药物可在肠道细菌的作用下转化为无强心口服地高辛以后，部分药物可在肠道细菌的作用下转化为无强心 作用的双氢地高辛和双氢地高辛甙元。但口服红霉素等

58、药物后可作用的双氢地高辛和双氢地高辛甙元。但口服红霉素等药物后可 抑制肠道里这些细菌的转化作用，使地高辛的转化减少，在肠道抑制肠道里这些细菌的转化作用，使地高辛的转化减少，在肠道 里的吸收增加，血浓度升高，可引起中毒。里的吸收增加，血浓度升高，可引起中毒。第50页/共74页影响与血浆蛋白的结合：影响与血浆蛋白的结合：l 大多数药物吸收后，在不同程度上可与血浆蛋白结合；大多数药物吸收后，在不同程度上可与血浆蛋白结合；l 结合型与游离型药物保持一定的动态平衡；结合型与游离型药物保持一定的动态平衡；l 游离型药物可转运、保持活性；游离型药物可转运、保持活性；l 结合型药物一般没有药理活性；结合型药物

59、一般没有药理活性；l 当游离型药物的浓度降低时，被结合的药物又能再分离出来；这种机当游离型药物的浓度降低时，被结合的药物又能再分离出来；这种机 制有利于避免血药浓度瞬间过高，也可以延长药物的治疗作用时间。制有利于避免血药浓度瞬间过高，也可以延长药物的治疗作用时间。 D + P DP 与血浆蛋白的结合竞争作用：与血浆蛋白的结合竞争作用： 不同的药物与血浆蛋白的结合力不同。当两种药物合用时，结合力不同的药物与血浆蛋白的结合力不同。当两种药物合用时，结合力 强的药物可把结合力弱的药物置换出来，使后者游离型的药物浓度强的药物可把结合力弱的药物置换出来，使后者游离型的药物浓度 增加，引起不良反应。增加，

60、引起不良反应。 如：磺胺类、水杨酸类药物保泰松，可以置换甲苯磺丁脲等口服降血如：磺胺类、水杨酸类药物保泰松，可以置换甲苯磺丁脲等口服降血 糖药，引起低血糖反应；糖药，引起低血糖反应； 保泰松、羟基保泰松、水杨酸类、安妥明、苯妥英钠可置换双香保泰松、羟基保泰松、水杨酸类、安妥明、苯妥英钠可置换双香 豆素、华法林等抗凝血药，引起凝血障碍、出血等。豆素、华法林等抗凝血药，引起凝血障碍、出血等。 第51页/共74页大部分药物进入机体后主要在肝脏内经微粒体酶的催化而代谢；大部分药物进入机体后主要在肝脏内经微粒体酶的催化而代谢；药物也可经肝外代谢，如肾脏和血浆的酶对药物也有转化作用；药物也可经肝外代谢，如