检验科-产前诊断操作规程SOP文件

1、南宁市妇幼保健院检验科遗传室文件编号：NNSFY-JYK-YCS03版本/修订号：第三版/2主题内容标准操作规程生效日期：20120801 第 131 页 共131 页唐氏征产前筛查腾程孕期胎儿软件操作规程本文档提示医院从孕妇初次到医院抽血筛查直至最后孕妇妊娠结局，孕妇、检验科、产科涉及其它相关部门需要注意的一些步骤、过程以及其他注意事项。各医院可以结合自身流程融入这些步骤。一、 孕妇告知书：在孕妇进行唐氏征产前筛查之前，医院有义务告知孕妇“什么是筛查”，“产前筛查是做什么的”“筛查报告的结果和意义”，需要提到存在假阳性和假阴性的可能。在孕妇知情并签字同意后才能进行筛查。告知书的内容可以参考另

2、一文档。通常情况下，孕妇告知书可以和孕妇资料收集同时进行。需要注意的是孕中期唐氏筛查的最佳时间是孕15 周0 天到18 周0 天，本软件可以筛查的孕周时间是14 周0 天到21 周6 天。由于唐氏筛查是为随后可能需要的诊断测试服务，而目前很多地方做产前诊断需要排很长时间的队，这很可能耽误后续措施实施的最佳时间。医院可以根据这个情况，适当缩短可以筛查的时间范围，并在孕妇告知书里注明这个原因。二、 孕妇资料收集：知情书经孕妇本人签字后，孕妇还需如实提供一些筛查必须数据，并提供一些筛查相关数据。筛查必须数据包括：姓名、出生日期、末次月经信息、B 超信息、体重、糖尿病史、人种、吸烟史。相关数据包括夫妇

3、的遗传病史和孕妇的孕产史。其中筛查必须数据一定要准确录入唐氏软件，如果孕妇在唐筛之前还没有做过B 超，医生可以建议孕妇在唐筛的同时做第一次B 超。其它一些便于医院统计的数据可以根据需要决定是否录入唐氏软件，包括住院号、门诊号、有效联络方式等，软件可以提供大部分信息导出的文件，可用Excel 打开。另外，为了表明医院尽到告知义务，如果孕妇不原意做唐筛，最好也让她签字“不筛查”，医院也留一份底。三、 检验申请单:医生开具检验申请单，并附上孕妇告知书和孕妇资料。四、 采样:检验科医生根据检验申请单采集孕妇静脉全血样本，并在检验申请单中注明采样日期。采集全血样本不少于5ml。唐氏筛查的采血无需空腹，同

4、时也不宜吃太刺激油腻的食物。根据对一些大型医院操作流程的观察，我们发现：1. 如果是每天都做唐氏筛查样本，全血可在4冰箱内保存一天。2. 如静置半小时到两小时后离心，分离吸出血清后，血清可在4冰箱内保存6 天。在吸去上样的血清后，还需要吸取1ml 左右的血清保存于-70冰箱，具体保存时间根据各地不同规范在1-3 年之间。如果发现全血有肉眼可见脂肪或者溶血现象，请参照贝克曼试剂盒上相关操作处理。五、 软件信息输入:操作医生需要在腾程孕期胎儿唐氏征产前筛查软件中准确输入孕妇用于筛查的信息。六、 满足仪器操作要求，保证仪器数据质量:用于测试的仪器必须满足仪器所有要求。贝克曼公司的免疫系列分析仪器必须

5、严格按照贝克曼库尔特公司提出的仪器使用规章，仪器保养程序要求，保证仪器的良好性能。仪器性能的维护，详见设备装机时随机配备的仪器操作手册(详见仪器操作手册第8 章)。同时必须严格按照(hCG、uE3 和AFP)三个项目的试剂说明书来使用试剂，并按照相关定标、质控要求，保证试剂的稳定性，从而确保检测结果的真实可靠。(详见仪器操作手册第六、第七章和试剂说明书)。这里特别需要指出的是质控的一些问题：目前国内没有关于唐氏筛查的统一质控规定，只有按照三个单项来操作。由于唐氏筛查风险计算的敏感性，需要执行较为严格的质控标准，CV值要控制在+/-5%。同时在开展唐氏筛查之前，要在一到两周时间内预先做高中低三个

6、标准各20-30 个的质控品来确定靶值，不能以质控品盒上的值作为靶值。需要注意的是，每次质控时，质控品从冰箱取出后放置于常温下的时间最好相当，保证质控结果的稳定。七、 软件操作要求;仪器测试结果可以直接传输到腾程孕期胎儿唐氏征产前筛查软件中并显示在“唐氏筛查”界面。当然也可以手动录入，通过综合计算唐氏征的影响因素后可得到该孕妇的唐氏风险度。软件的操作和使用必须严格按照用户手册使用。八、AFP、HCG、uE3 三联检测的结果运算:正常孕妇和唐氏征儿孕妇三指标血液浓度的分布经过大样本调查，求得正常孕妇在孕中期(第1421 周)各周的AFP，hCG 和uE3 的血清浓度。各孕妇的血液浓度测定结果会有

7、所不同。若以该孕周正常孕妇的中位值为基准作分母，各孕妇实际测定值作分子，其比值-中位值的倍数(Multiples of Median，简称MoM)必然呈现关于1 的两侧对称的正态分布。以MoM 的对数值作横坐标，以相应的频率(该浓度的孕妇例数)作纵坐标，即可绘制成一条分布曲线，即正常孕妇的相应分布曲线。计算MoM 实际是将妊娠各周的三个指标运算进行了归一化。九、计算各指标测值的唐氏儿发生的似真率(Likelihood ratio，简称LR)孕妇的唐氏风险是由两部分组成，孕妇年龄风险和三个筛查指标得到拟真率。孕妇的每个测试结果都会除以该孕周的中位数，得到MoM 值，然后在根据一些诸如体重、人种、

8、是否多胎、是否糖尿病等因素进行矫正，(矫正也可理解为对中位数进行矫正然后再把测试结果除以矫正后的中位数，当然结果是一样的)得到的是矫正后的中位数。这三个矫正后的中位数就是带入统计分布中的数据，得到一个三个指标的拟真率。拟真率的范围也在1 的两边，例如一个很明显的唐氏高危指标指标AFP 0.5MoM，hCG 2.0MoM，uE3 0.5MoM，其三个指标的拟真率大约为27，乘以一个1/1000 左右的年龄(对照前面年龄风险表格大约为29 岁的年龄)，最终的怀有唐氏儿的风险在1/35 左右，肯定是筛查高风险范围内。例如一个很明显的唐氏低危指标AFP 1.0MoM，hCG 1.0MoM，uE3 1.

9、0MoM，其三个指标的拟真率大约为1/8，乘以一个1/250 左右的年龄(对照前面年龄风险表格大约为37 岁的年龄)，最终的怀有唐氏儿的风险在1/2000 左右，肯定是筛查低风险范围内。十、筛查程序：十一、 发报告前复核要求:报告单交付孕妇前必须复核，建议复核内容包括测试结果和孕妇个人信息，如有问题及时纠正，完全正确后核对者签名。如果孕妇在拿到报告后对孕周有疑义，医生应该在和孕妇沟通的情况的同时，计算另一孕周的结果，最后发哪张报告由医生根据2 个孕周的可信程度判定。若筛查结果为唐氏风险度高人群应及时召回，进行遗传咨询。十二、 数据回访以及高风险度报告的处理:临床医生对唐氏和18 三体高风险的孕

10、妇必须建议羊水穿刺，开放性脊柱裂则通过后面的B 超(彩超)做进一步的观察。医院需要对在本院做唐氏筛查的孕妇的最终妊娠结局进行跟踪，如果是本院羊水穿刺或出生的，则与产科沟通得到结果，如果去了别的医院，则希望通过电话回访的手段，得到结果。结果可以录入软件，也可以单独记录真阳性和假阴性。由于目前唐氏筛查开展的医院比较广泛，而能够进行产前诊断的医院比较少，希望那些只能开展产前筛查的医院能有一家固定转诊的产前诊断中心，同时与诊断中心保持一定的联系和沟通。十三、 假阴性情况的处理:假阴性情况极为少见，但并不代表不会发生。如果出现假阴性，医院首先要检查该孕妇筛查时，自身流程是否有问题。医院需要保留筛查过程中

11、的文件包括告知书、孕妇信息采集、检验申请单、筛查结果、当次筛查的质控，保存的样本等。-70保存时间根据各地规范需超过该孕妇的婴儿出生时间1-3 年。同时请把该样本的分析结果发送给软件供应商。以上十三项注意 事项必须严格遵守，不遵守此操作规范的部门或个人将承担所有后果及责任。贝克曼ACCESS 2化学发光仪产筛项目操作规程一激活项目： 对于新开展的项目，首先要“激活项目”：主屏幕F8设置F2测试把要激活的项目打勾退出二装载消耗品装载试剂：主屏幕F3消耗品F1装载试剂扫描试剂条码打开试剂仓盖后放入试剂盒F1 完成卸载试剂：主屏幕F3消耗品F2卸载试剂打开试剂仓盖后取出试剂盒F1 完成装载反应管：主

12、屏幕F3消耗品F4装载RV管打开反应管仓盖放入整包的RV管关上黑色仓盖，往下压打开黑色仓盖，取出支架关上仓盖F1完成更换废物袋：主屏幕F3消耗品F6更换废物袋取出废物袋，换上新的袋子F1完成更换发光底物：主屏幕F3消耗品F5更换发光底物扫描底物的条码信息换上新的试剂盒F1完成 三定标定标液信息输入：主屏幕F5定标F5定标液设置F1添加定标液逐条扫描定标液条码F1完成定标步骤：主屏幕F1样本管理输入架子号F3测试请求F6请求定标选取所需定标液F1完成F1装载架子放入架子等待样本架扫描确认后，点击“运行”查看定标结果：主屏幕F5定标选取要查看的项目F2查看结果四 样本编程单个样本编程：主屏幕F1样

13、本管理输入架子号F3测试请求输入相应的标本号选取要做的项目F1装载样本架放入架子等待样本架扫描确认后，点击“运行”批量样本编程：主屏幕F1样本管理输入架子号F3测试请求输入相应的标本号选取要做的项目光标移到下一个位置F8更多选项F1启动批量生成自动生成样本ID号：主屏幕F1样本管理输入架子号F3测试请求输入相应的标本号选取要做的项目光标移到下一个位置F8更多选项F2启动自动ID生成 五、 结果查询 主屏幕F2结果查询 六、 清除标本机上架子清除：主屏幕F1样本管理选取需要取出的架子F6处理扫描完成后取出架子F1清除（F2不清除，仅移到机外）机外架子清除：主屏幕F1样本管理选取需要取出的架子F7

14、清除七日清洗：主屏幕F1样本管理输入架子号F4保养请求选取“日清洁”F1完成按要求放入清洗液后，按F1装载样本架放入架子等待样本架扫描确认后，点击“运行”特殊清洗：主屏幕F1样本管理输入架子号F4保养请求选取“特殊清洁”F1完成按要求放入清洗液后，F1装载样本架放入架子等待样本架确认后，点击“运行”系统检测：主屏幕F1样本管理输入架子号F4保养请求选取“系统检测”F1完成按要求放入检测液后，F1装载样本架放入架子等待样本架确认后，点击“运行”地贫血常规筛查检验标准操作规程（1）标本用EDTA-K20.2ul抗凝静脉血1ml。门诊血标本检测用SYSMEX XS-800I和SYSMEX XT-40

15、00I，病房血标本检测用SYSMEX XE-2100I血球分析仪。（2）试剂及仪器SYSMEX XS-800I五分类血球分析仪及配套试剂，质控用SYSMEX原装全血质控品，SYSMEX XT-4000I五分类血分析仪及配套试剂，质控用SYSMEX原装全血质控品。SYSMEX XE-2100I五分类血分析仪及配套试剂，质控用SYSMEX原装全血质控品。（3）操作1） 门诊：a) 收到血常规标本后，查看核对检验项目，姓名和条码号，立即编号。b) 血标本在XS-800I和XT-4000I上检测。c) 对于中间细胞比较多的应当手工涂片染色分类，对于血小板等图形不好或结果异常较大的应手工复查。d) 结果

16、核对后，在半小时内报告。2） 病房：a) 采集血常规标本后，立即编号，试管加盖后放于专用试管架上放入仪器进样区域。b) 血标本在SYSMEX XE-2100I上机检测。c) 对于分类图形不好的结果应当手工涂片染色分类，对于血小板等结果图形不好或结果异常较大的应手工复查。（复查条件）结果核对后，签发报告单。 （4）结果分析 1.地贫筛查阳性结果判断：MCV<82fl，MCH<27pg。 2.地贫血常规筛查阳性，需要做血红蛋白电泳进一步确认。 SYSMEX XT-4000i血液分析仪标准操作规程1.分析参数和方法学名称Sysmex XT-4000i提供40项可报告参数的结果，各检测参数

17、和方法见表1。表1. Sysmex XT-4000i各检测参数和方法参数首字母缩写检测方法白细胞WBC流式细胞计数红细胞RBC鞘流DC检测方法血红蛋白HGBSLS血红蛋白检测法红细胞比积HCTRBC累积脉冲高度检测法平均红细胞体积MCV由RBC和HCT算出平均红细胞血红蛋白量MCH由RBC和HGB算出平均红细胞血红蛋白浓度MCHC由HCT和HGB算出血小板PLT鞘流DC检测方法中性粒细胞百分比NEUT%流式细胞计数淋巴细胞百分比LYMPH%单核细胞百分比MONO%嗜酸性粒细胞百分比EO%嗜碱性粒细胞百分比BASO%中性粒细胞数NEUT#淋巴细胞数LYMPH#单核细胞数MONO#嗜酸性粒细胞数E

18、O#嗜碱性粒细胞数BASO#红细胞分布宽度标准差RDW-SD根据红细胞直方图算出红细胞分布宽度变异系数RDW-CV根据红细胞直方图算出血小板分布宽度PDW根据血小板直方图算出平均血小板体积MPV根据血小板直方图和PLT算出大血小板比率P-LCR根据血小板直方图算出血小板压积PCT根据血小板直方图算出网织红细胞百分比RET%流式细胞计数网织红细胞数RET#幼稚网织红细胞比率IRF低荧光强度网织红细胞比率LFR中荧光强度网织红细胞比率MFR高荧光强度网织红细胞比率HFR光学血小板计数PLT-O网织红细胞血红蛋白含量RETHe未成熟粒细胞百分比IG%未成熟粒细胞数IG#白细胞数体液WBCBF流式细胞

19、计数红细胞数体液RBCBF单个核细胞比例体液MN单个核细胞数体液MN多个核细胞比例体液PMN单个核细胞数体液PMN2.试剂 2.1 稀释液（CELLPACK）2.2白细胞分类溶血素（STROMATOLYSER-4DL）2.3白细胞分类染液（STROMATOLYSER-4DS）2.4血红蛋白溶血素（SULFOLYSER）2.5清洁剂（CELLCLEAN）2.6网织红细胞稀释液（RETSEARCH-II Dilution）3.操作步骤 开机：3.1按以下顺序打开电源：1)打印机，2)信息处理装置（IPU），3)主机（信息处理装置程序的登录屏幕出现以后）。3.2开启信息处理装置（IPU）。 3.2.

20、1Windows Vista（操作系统）启动。以“XT”用户自动登录到Windows Vista系统。3.2.2 显示XT-4000i应用程序登录对话框。3.2.3 输入用户名及密码，然后点击“确定”。3.3 主机电源打开后，按以下顺序执行操作：自检、主机控制程序下载、机械部件和液流部件初始化、流动池清洗、等待温度稳定和本底检查。本底检查通过后即可进入检测。 3.3.1开机后先做质控，质控通过后进行样本检测。 3.3.2以进样架模式进行样本分析3.3.3确保仪器处于准备就绪状态。READY LED应点亮。3.3.4双击菜单屏幕上的“控制器”图标。显示控制器菜单。3.3.5双击控制器菜单上的“进

21、样器标本号”图标，或点击工具栏的“进样器”按钮。 3.3.6弹出进样器标本编号对话框。 3.3.7输入标本ID编号，或使用条码扫描自动读ID号。3.3.8核查第一个管架编号和标本管位置号。如果需要更改，点击需要更改的项目然后输入数值。3.3.9检查随选设置。如果需要更改设置，点击相应的“Discrete”进行设置。3.4将标本管放入标本架，然后将标本架放在进样器右侧的架槽中。可以一次性装载多达5个标本架3.41在进样器中放置标本架后，点击进样器标本编号对话框中的“启动进样器”核查管架编号/试管位置确认对话框中的管架编号和试管位置号。然后点击“确定”当所有的标本管已移至进样器左侧的架槽时，REA

22、DY LED点亮。将标本架放置于进样器右侧架槽的分析通道的最右侧的位置。按START（启动）开关开始分析。3.5 标本检测：为了验证手动与自动模式，每日随机取2份新鲜血标本进行close与open模式结果比对， 以close为靶值（close-open）/close来计算偏移（CV%）符合比对要求，以上检测通过后进行病人3.6样本检测。 操作中注意个人安全，如标本需打开盖子，应戴好防护镜口罩或在有机玻璃挡板后打开。 3.7每日保养：正常开机、压缩机防逆流瓶液体检查、背景检测通过、温度报警、工作时间（h）、使用情况、关机正常记录在XT-4000i使用维护记录。3.8关机程序：双击菜单屏幕上的“控

23、制器”图标。显示控制器菜单。双击控制器菜单的“关机”图标。显示关机对话框。将CELLCLEAN放在手动取样针上；然后在该状态按START（启动）开关。READY LED闪烁，并且蜂鸣器发出响声，表示正在吸入中。此时，不可移开CELLCLEAN容器。当READY LED熄灭，并且蜂鸣声停止时，取出CELLCLEAN。开始执行主机关机程序。主机关机程序结束后，关机对话框关闭，关机对话框中将出现“请关闭仪器电源”信息。 3.9月保养或需要时进行的维护（根据操作说明书部分由维护工程师完成）3.9.1清洗标本旋转阀。3.9.2清洗手动冲洗杯。3.9.3清洗标本旋转阀托盘。3.9.4清洗穿刺进样器托盘3.

24、9.5清洗RBC检测器孔。3.9.6去除光检测器盒中流动池内的空泡。3.9.7清洗光检测器盒中的流动池。4.质控4.1质控品：Sysmex（高、中、低值3个水平）储存条件： 28（每日须复核一次冰箱温度）。使用期限：质控开瓶后20天。 4.2 质控频率：每天开机后在标本检测前进行一次质控品的分析（每种质控品均做）。质控频度验证每年一次，由岗位操作员完成。4.3质控操作：从冰箱中取出质控品，使用前检查有效期及状况（如极度溶血或失效，应及时更换）,在室温环境下（1830）静置25分钟。保持瓶子直立状态在双掌中轻轻滚动10次，将其颠倒再滚动10次，再将质控品上下颠倒10次混匀至红细胞完全混合，在质控

25、模式下进行检测。 4.4失控时应采取的措施：质控结果超出期望值时，需查找原因，检查质控品是否在有效期内， 过期或近过期需更换新的质控品,检查试剂情况，是否需更换。再检查仪器的各项参数是否在控，如各项检查操作后质控仍失控则联系工程师，责任人需通知组长。与此同时联系急症病人相关医生，如为急诊标本及时送往门急诊化验室检测。直至质控通过，开始做标本。 4.5每次失控必须分析原因，记录处理过程并签名。失控记录夹入指定的文件夹内保存，保存期为二年。 4.6更换批号后靶值设定：取开始20次QC结果，计算均值，为靶值，靶值应落在厂商提供的范围内，以累计6个月CV%均值（或近两个月CV%较大值），通过均值乘以C

26、V%=1SD, 质控范围设定为2.7SD。由组长或组长指定人员负责计算。定期打印质控曲线，曲线上注明使用质控品的批号和效期.所有室内质控打印及记录夹入指定的文件夹内保存，保存期为二年。西比亚毛细管血红蛋白电泳操作规程一 项目名称血红蛋白毛细管电泳（CAPILLARYS HEMOGLOUBIN(E)）二 检验方法名称流动液体毛细管高压液相电泳。三 方法学原理CAPILLARYS系统运用毛细管中液相电泳的原理，带电分子在具有特殊PH值的碱性缓冲液中通过其电泳迁移率而被分离开，这个分离也要依赖于电解质的PH和电渗流。CAPILLARYS系统可同时进行7个标本的血红蛋白量化分析，标本的溶血稀释和注入通

27、过在毛细管阳极末端吸入完成，接着在高电压下蛋白质进行分离，并在毛细管的阴极端于415nm吸光率下直接检测血红蛋白。四 方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服， CAPILLARYS系统已经发展到将该项技术完全自动化，并具有快速分离和良好的分辩性。目前该方法已被大多数人认为是介于传统的区带电泳和液相色谱之间的技术方法。五 仪器5.1. 型号：SEBIA CAPILLARYS（PN1220或PN1222）5.2. 分析和计算参

28、数：5.2.1. 处理量：80-100个样本/小时5.2.2. 所需样本量：100ul5.2.3. 检验时间：20分钟5.2.4. 重复性：有良好的重复性5.2.5. 电泳参数：电压3.59000V电流3.5200mA功率090W六 准备6.1. 蒸馏水或去离子水在SEBIACAPILLARYS的全自动系统中进行毛细管电泳时冲洗毛细管用。建议在使用前先用0.45µm的过滤器将蒸馏水或去离子水过滤一次。为了防止微生物的繁殖，请每天更换蒸馏水或去离子水。如需要长期保存，可加入3.5µl/dl的ProClin300。注意：当充填水罐时，建议先用大量的蒸馏水或去离子水冲洗罐。6.2

29、. 缓冲液（含碱性缓冲液PH9.4）若缓冲液是储藏在2至8，建议在使用前将试剂放置于室温下，一旦缓冲液瓶打开并安置在CAPILLARYS系统上时，缓冲液可保持稳定状态最多2个月。 6.3. 浓缩的冲洗液必须用蒸馏水或去离子水稀释成700ml。在做血红蛋白电泳之前和之后冲洗毛细管。6.4. 分别将一个过滤器转动固定到缓冲液、冲洗液、蒸馏水或去离子水瓶的管子末端的连接器上，用蒸馏水或去离子水冲洗连接器和管子。使用过的过滤器必须用清水冲洗过后才能丢弃。 七 样本的采集和保存7.1. 使用抗凝血的新鲜标本来进行分析，采血应按照临床实验检测要求进行。7.2. 将红细胞在28下静置沉淀数小时或将血标本离心

30、5000转/分，5分钟。7.3. 小心尽可能地弃去血浆。不要使用覆盖在红细胞上厚度超过3mm血浆的标本，若试管中的血浆厚度超过3mm将会影响到分析结果。7.4. 注意： 标本置于冰箱内（28）可保存一周。若需要长时间保存，则依照以下程序在采集8小时内清洗红细胞，并将标本冷冻在-80环境中，可保持稳定最长3个月时间。具体程序：抗凝血离心5000转/分，5分钟，弃去血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞两次（每次洗涤后均要离心处理），冰冻前去除红细胞上层多余的生理盐水并震荡混匀。 血红蛋白（Hb）在28下可发生降解反应。当在28下保存超过7天，在电泳图谱将会出现一个比HbA更阳极端的被称之为HbA

31、3的额外片段，在靠近HbS带附近会出现一个微弱的片段，并且如果出现HbC，则在HbA2更阳极端可出现不会干扰到A2的一个片段。当保存超过10天，可在红细胞中观察到聚集的粘状物，在分析前必须弃去这些粘状物。八 操作步骤8.1. 开机，启动CAPILLARYS仪器和电脑。8.2. 启动“PHORESYS”软件，输入用户名和密码后，按确定（电脑自动向其加载和交换信息，并运行自检，初始化程序。）联机成功，进入待工作状态，显示“READY”。可开始电泳操作。8.3. 在仪器提示，按其要求填写试剂有效期、代码（冲洗液的有关信息在70 ml浓缩试剂瓶标签上可以查到），并调整图象中液位高度。CAPILLARY

32、S系统具有试剂自动监控功能，当需要更换某种试剂时，系统将有信息提示。更换试剂时要注意罐和接口的色码相符。请仔细阅读CAPILLARYS仪器操作手册。8.4. 选择好“HEMOGLOBIN(E)”分析程序，然后将CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)缓冲液瓶放置在仪器上。8.5. 标本架有8个标本试管位置，在每个标本架上放好7个打开了的不含血浆的标本管，若待分析的标本管少于7个，则用含有蒸馏水或去离子水的管补足。放好管的标本架上的每个试管的条形码必须能被看到。8.6. 在标本架8号位上的试管中加入4mlCAPILLARYSHEMOGLOBIN（E）溶血液，避免产生气泡。8.7. 在每个

33、标本架上放一排新的稀释杯。若忘记放稀释杯，系统将会有信息提示。8.8. 将准备好的标本架从仪器中部的敞口处滑入CAPILLARYS系统中，可连续送入13个标本架。使用NO.0标本架来进行质控血标本的分析。8.9. 设置仪器开始运转。8.10.自动化步骤的描述： 8.10.1. 条形码阅读器对每个标本管及标本架进行阅读。 8.10.2. 标本在溶血液中稀释，每完成一个标本的溶血稀释，都会对稀释针进行清洗。 8.10.3. 冲洗毛细管。 8.10.4. 稀释好的标本被注入到毛细管中。 8.10.5. 在恒定的电压下电泳8分钟，帕尔贴软件控制温度。 8.10.6. 血红蛋白在415mm吸光率下直接检

34、测，同时在系统屏幕上显示出电泳剖象。注：上述描述的这些自动步骤适用于第一次传入的标本架。从分析程序开始大约20分钟后可出现电泳图谱。接下来分析的标本架，在上一个标本架进行分析的同时都会进行头两个步骤（条形码阅读和标本稀释）。九 结果分析9.1. 在程序分析的最后，每个血红蛋白片段的相对值自动显示出来，并对剖象进行分析。可自动识别血红蛋白A（HbA）片段，同时在回顾窗口的中间对其进行调整。9.2. 可直观的在视觉上对电泳图谱的异常图像进行评估。9.3. CAPILLARYS系统可忽略降解产物而计算出每个血红蛋白片段的浓度。9.4. 图谱可自动校正HbA片段以便分析解释： 9.4.1. 当缺乏Hb

35、A（黄色警示），将通过之前相同毛细管电泳获得的电泳剖象中HbA的位置对其进行修正。 9.4.2. 当无法进行调整进，将出现红色的警示。9.4.3. 当血标本中出现血红蛋白C时可能会导致血红蛋白A2低于参考值。9.4.5. 当每个分析循环结束，操作者必须启动CAPILLARYS系统的“待命”或“关闭”程序，以便保存当前状态的毛细管电泳结果。十 关机10.1. 电泳全部结束，在状态窗口显示“READY”下，执行关机程序“SHUTDOWNINSTRUMENT”，仪器自行冲洗，排气，复位等。10.2. 约15分钟屏幕显示“Offline”，此时可关闭毛细管电泳仪电源，然后关闭电脑。10.3. 打开电泳

36、仪左盖，取出全部试剂架。10.4. 关闭仪器总电源开关，按每日保养要求对仪器进行保养。10.5. 用仪器防尘罩盖好仪器。10.6. 如果仪器如较长期（超过一周）停用，请用蒸馏水代替试剂，使用特别关机程序。CapillarysSpecial cyclesShutdown with rinsing of the hydraulics with H2O10.7. 仪器如须更址,运输,一定要进行特殊打包运输关机程序处理。 CapillarysSpecial cyclesshutdown and preparation for shipment10.8. 如果运用特别关机或打包运输关机程序后再次开机，一

37、定要在开机输入密码后选择First-wash only 然后“确定”。进入待机状态后，激活毛细管，然后可正常进行工作。十一 参考范围HbA： 96.8HbF： 0.5（*）HbA2： 2.23.2之间十二 临床意义使用CAPILLARYS HEMOGLOBIN（E）试剂可鉴别血红蛋白病和地中海贫血等遗传性疾病。十三. 电泳阳性结果处理： 电泳阳性标本需要召回做地贫基因诊断。Bio-Rad VARIANT II血红蛋白分析仪标准操作程序1目的：VARIANT II（VII）血红蛋白分析仪用于报告个体EDTA抗凝静脉全血样本的血红蛋白F、A2的实验结果，用于个体筛查地中海贫血。2 原理：VARIA

38、NT血红蛋白测试系统是一台全自动化的、高吞吐量的血红蛋白分析仪。它由两个模块构成 VARIANT层析站（VCS）和VARIANT取样站（VSS）。另外，该系统利用一台个人计算机和临床数据管理（CDM）软件来进行系统控制。VARIANT II血红蛋白分析仪应用高效液相色谱法（HPLC）对人全血血红蛋白F、A2的自动化和准确的测定。标本在VARIANT II 取样站(VSS) 自动混合并稀释，之后注入分析柱。VARIANT II层析站的双泵将预先编程设置的由低到高离子浓度的缓冲液注入系统，在这一过程中，血红蛋白经和柱中物质离子反应后达到分离。处理好的样本自动被注入分析通路，分离的血红蛋白随后在流经

39、光感测量计时，测量其在415nm光波吸收情况；由690nm进行校正。VARIANT II临床数据处理软件(CDM) 将每次分析过程中收集到的数据还原。中间要经过两个水平的计算，用来校正血红蛋白的计算数值。然后CDM打印出分析结果和分析谱图，F、A2的峰被标注，该面积计算使用了指数模式的高斯对数，这样计算已经排除了可变F、A2的影响。VARIANT血红蛋白分析仪可从全血管中自动吸取标本，随后进行稀释和分析，每个样本在3分钟内即可完成测定。3仪器使用环境：1 无尘、换气良好的环境。2 避免阳光直接照射。3 室内相对湿度2080% 4 电源电压变动在220V±10V之内5 有保护性接地4安

40、全条款：1 使用对人体有危险或发生感染的样品时，请使用橡胶手套，不要直接接触。如操作人员直接被污染时，用大量的水冲洗、消毒，必要时应及时看医生。仪器污染时应随时清洗干净且消毒。2 仪器上面和周围不要放置或使用易燃、易爆物品，避免引起火灾、爆炸。3 仪器的操作、保养按规定程序进行。5标准操作过程5.1开机程序：1) 确认试剂量充足，废液桶倒空2) 依次开启VSS、VCS、电脑电源（注意：必须按此顺序开启电源）3) 待VSS、VCS自检结束后，双击 启动Variant II应用程序4) 双击左上侧#1的 ，选择Return to Ready，仪器连接完成后，系统显示Ready5) 在Maintai

41、n/Instrument菜单中从Execute Commands中选择Do Startup actions选项 ，按下Start 运行一次Startup 程序6) 运行Startup 程序时，观察屏幕下方显示的仪器压力是否稳定。5.2 关机程序1) Maintain/Instrument菜单中从Execute Commands中选择Do shutdown actions选项， 按下Start 运行shutdown程序2) shutdown完成后，选择 将仪器状态转换为Inactive3) 关闭应用程序软件，关闭计算机、VCS、VSS电源开关注: 建议仪器在不使用时保持inactive状态，并且

42、尽量避免在Running状态突然关机下列情况建议关机： 当更换系统零件时 当需要将系统移动到新位置时 当实验室要断电时5.3 常规样本实验 Variant II常规样本采用EDTA抗凝真空采血管，采血量2ml。1）运行前检查- 记录分析柱的批号和注入次数在SETUP/Test界面选择Cartridges 按纽，如果分析柱的注入次数超过250，需要更换新的分析柱。- 检查缓冲液和洗液瓶的液面高度- 有无漏液现象- 检查泵头连接塑料管道中有无液体（必要时进行活塞/密封圈清洗）- 废液桶的液面高度2）样本顺序1. Prime(引物）2. Blank(空白,去离子水) 3. Blank, 4. Cal

43、ibrator（校准物）5. Calibrator6. Low Level Control（低值质控品）7. High Level Control（高值质控品）8 to N* 病人样本N + 1 质控品, Level 1 (可不用)N + 2 质控品, Level 2 (可不用)N + 3 STOP管*N指操作中最后病人的样本号。3）工作表建立及开始实验将仪器转换到Ready状态，将排好样本的样本架放到自动进样架上（注意样品管的条形码方向），在RUN/Worklist 界面的下方点击Start/Stop 按纽，显示对话框点击Start开始实验。使用工作表控制（Worklist Control）

44、对话框，工作表可被暂停（Pause）和继续（Continue），停止（Stop）。运行时可从RUN/Graph屏幕中监测当前正在分析样本的图谱。刚开始运行时建议从屏幕下方监测系统压力稳定，质控通过后再离开。4）样品ID号的解释和编辑工作表中会显示样品ID号的类型之一：Prime (引物)，Blank（空白），Blank（空白），Cal（校准），Cal（校准），CTRL (低质控)，CTRH(高质控)，和Unknown*（病人样本）。如样品号需要编辑，当该样品实验完成后，可使用滚动条到要编辑的样品。双击编辑区并输入纠正。先前的内容被覆盖（此编辑操作只能执行一次）。5.4 安装新试剂和分析柱5.4

45、.1更换试剂在缓冲液和稀释液使用前应使之达到室温，液体与室温温差在4°C以内，防止产生气泡。1）当屏幕左下角的3种试剂瓶显示液面低时，证实系统处于inactive或manual状态，从试剂瓶上松开瓶帽并小心地将试剂管线垂直拿出试剂瓶。不要在Running状态换试剂。2）撤出空瓶并将其放在一边。3）去除新试剂瓶的瓶帽。将帽拧紧在空瓶上并将空瓶合适地处理。4）将新瓶放在试剂瓶隔间。将试剂管线放入新瓶。拧紧试剂瓶帽。5.4.2更换新的分析柱和过滤片每250人份需更换一个新的分析柱。1）打开层析站的白门。找到位于层析站中央的分析柱电热模块。拧松蝶形螺钉，把盖子打开。2）从电热模块上取出分析柱

46、筒座。逆时针方向旋开，取出旧的分析柱。3）把新分析柱的两端的绿色保护套去掉。把分析柱按流向的箭头方向向上放置。把分析柱用力推入筒座的下端直至稳定地嵌入分析柱座中。把筒座的另一端盖上，顺时针方向旋紧。4）把分析柱筒座放到电热模块上，注意应把上端的管路放入槽中。把住上方管路，关闭电热模块的盖子。按顺时针锁紧蝶形螺丝。5）松开下方预过滤器的外壳。拿掉旧的预过滤片。装上新的预过滤片。注意要旋紧。 5.4.3试剂信息更新： 1整套试剂的信息更新 选择SETUP/Test界面有一个Update Kit 按钮，在CDM Update Kit 界面显示之后，把分析参数光盘插入合适的光驱驱动器中。选择合适的驱动

47、器（光驱）和文件名（*.tss），然后点击OK按钮。所有的试剂（不包括质控信息）和分析柱的信息将被载入。退出光盘。2单独更换分析柱1）在SETUP/Test界面选择Cartridges 按钮。2）在“In Use”框中，将用完的分析柱的“Yes”改为“NO”；3）上方新出现的空格中输入新分析柱的批号。在“In Use”框中，选择“Yes”；4）当使用一个新分析柱时，注射数是“0”。在使用过程中注射数将会增加。一旦注射计数达到为每个分析柱规定的预定限制250时，软件会提醒使用者更换新分析柱。 5.4.4 试剂复溶全血Primer的复溶: 加入1ml蒸馏水，室温静置10分钟后轻轻混匀后使用。溶好的

48、全血Primer 4°C可保存21天。VariantII需复溶两支。校正品的复溶：加入10ml冷的校正稀释液/水平，室温静置10分钟后轻轻混匀后使用。溶好的校正品 4°C可保存1周。质控品的复溶：加入1ml蒸馏水/水平，室温静置10分钟后轻轻混匀后分装。20ul/支，-20°C C可保存3个月。使用时取5ul用1ml wash液稀释在紫盖小样品管中。5.4.5分析柱的灌注所有的新分析柱（没使用过的空分析柱）安装后都要进行其加热器温度调节和双灌注，此后其使用不需再调节，在每次运行前都应进行灌注 1. 按如下顺序放置样品：1 全血Prime2 全血Prime3 蒸馏水

49、4 蒸馏水5 校准物6 校准物7 STOP管 2将仪器转换到Ready状态，将排好样本的样本架放到自动进样架上（注意样品管的条形码方向），在RUN/Worklist 界面的下方点击Start/Stop 按纽，显示对话框点击Start开始灌注实验。3. 运行结束后，注意第二个校准液管（6号管）的血红蛋白HbA2的滞留时间。最佳时间是3.65分钟。若HbA2的滞留时间测量值的变化幅度超过0.05分钟，建议进行温度调节。选择Setup/Test/Cartridge 中的温度设定(滞留时间提前则降温，滞留时间延后则升温)。5.4.6 分析柱的校正和样本实验1 按如下顺序放置样品：1. Prime(引物

50、）2. Blank(空白,去离子水) 3. Blank, 4. Calibrator（校准物）5. Calibrator6. Low Level Control（低值质控品）7. High Level Control（高值质控品）8 to N* 病人样本N + 1 质控品, Level 1 (可不用)N + 2 质控品, Level 2 (可不用)N + 3 STOP管*N指操作中最后病人的样本号。 2确认仪器在Ready状态，将排好样本的样本架放到自动进样架上（注意样品管的条形码方向），在RUN/Worklist 界面的下方点击Start/Stop 按纽，显示对话框点击Start开始实验。5

51、.5 数据管理数据（Data）界面允许查看或打印保存在数据库中的样本信息。1DATA/Select界面可设定查看条件，以选择查看所有、特定日期或特定运行内的运行和样品信息。 2DATA/View Run界面允许显示和打印当前保存在数据库中的任何满足于DATA/Select界面运行设定条件的运行。选择Print按纽去打印当前被选择的运行的报告摘要（只有HbF、A2%值无图谱）。3DATA/View Sample界面显示样本在选择的View Run界面下设定运行的带图谱的样本结果。选择Print可打印选中的样本的完整报告。4质控数据的查询 DATA/QC Data界面，选择要观看的QC data（

52、按照日期或运行等方式），Start Query。 在查询完成后，一个QC Data界面被显示在主屏上（包括Levey-Jennings图，平均值和变异系数等）。从这个界面上使用者可通过点击低或高质控按纽来选择质控水平。5.6 数据库的备份和恢复5.6.1 CDM数据库容量1 CDM数据库的最大容量是350MB.当数据库达到最大容量时，软件将会提示：“There is not sufficient disk space to begin this run,the system will delete the oldest runs until sufficient disk space exis

53、ts” (没有足够的磁盘空间开始本次运行。系统将会删除最老的运行直到充足的磁盘空间存在。)2 如果希望软件删除最早的运行数据，请选择“OK”，软件将提示你哪些运行数据将被删除并返回Ready状态。3如果不希望软件删除最早的运行数据并备份它们，选择“Cancel”。5.6.2数据库的备份 注意：做完数据库备份后，一定要重新做校正5.6.2.1 第一种备份方式将数据备份在光盘上，首先进行光盘格式化在备份前可能需要对光盘进行格式化，CD-R或CD-RW光盘（推荐使用CD-R）1) 如果计算机安装的是HP的刻录光驱，请按照以下说明操作插入空白CD在“Create a CD”窗口，选择Direct CD在下一个窗口，选择CD类型(推荐使用CD-R)，选择在Welcome 窗口，Next，在Driver information(驱动器信息)窗口，Next在Format Disc(格式化光盘)窗口，Next在Name your Disc(为光盘命名)窗口，为光盘命名，Finish将显示正在格式化（Formatting Disc），当完成后，点击OK2) 如果计算机安装的是Plextor的刻录光驱，请按照以下说明操作插入空白CD在“Select a Project”窗口，选择”Make a data CD”在下一个窗口，选择”Format CD”为