实验一紫外-可见分光光度计的性能检验

1、实验一 紫外可见分光光度计的性能检验 一、实验目的 1、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法 2、学会UV1100型紫外可见分光光度计的使用方法 二、实验原理 对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。三、仪器与试剂 UV1100型紫外可见分光光度仪 石英比色皿一对 擦镜纸 蒸馏水 6mg/100ml K2Cr2O7溶液 4溶液 四、实验内容及操作步骤 1、比色皿的配对性注入蒸馏水两个比色皿分别440nm以一个比色皿为空白T1100测定另一个比色皿的T2T=T1-T2T0.5%两个比色皿配对两个比色不配对，应进行校正 2、波长精度的检查以蒸馏水为空白 测定KMnO4溶液的吸收曲线假设测得

2、的最大吸收波长在5251nm以内说明仪器波长精度符合使用要求500800(nm)A0 3、重复性的检查2SO4为空白在257nm处同一K2Cr2O7溶液的T，连续测定7次测定求出极差 假设极差0.5%仪器的重复性符合使用要求 235nm、257nm分别测定 K2Cr2O7溶液吸光度并计算吸收系数2SO4为空白(T100%313nm、350nm与下表规定的吸收系数比较 假设相对偏差在1%以内说明仪器符合使用要求波长/nm 吸收系数 235123.0126.0257142.8146.231347.050.3350105.5108.5五、思考题1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？2、检查分光光

3、度计的重复性对测定有什么实际意义？实验二 吸收曲线的测绘及吸收系数的测定 一、实验目的 1、掌握测绘吸收曲线的方法 2、学会测定吸收系数二、实验原理 1、假设溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的max、min或(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提供了有力的证据。 2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时的吸光度。 即 三、仪器与试剂 UV1100型紫外可见分光光度计 石英比色皿一对 95%乙醇A.R 0.005%丹皮酚对照品溶液四、实验内容及操作步骤丹皮酚对照品10mg95乙醇溶解定容至10ml摇匀精密吸取5ml置100ml量瓶95乙醇定容作为母液备用母液中丹皮酚的含量

4、为0.005%1、吸收曲线的测绘精密吸取母液1ml置10ml量瓶95乙醇定容以95乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。2、吸收曲线的测绘 利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算百分吸收系数。实验三 分光光度法测定槐花中总黄酮的含量一、实验目的 1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2、稳固紫外可见分光光度计的操作方法二、实验原理 黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分析。三、仪器与试剂 UV1100型紫外可见分光光度仪 石英比色皿一对 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品

5、 槐花药材 其余试剂均为分析纯； 四、实验内容及操作步骤1、对照品溶液的制备加甲醇，水浴使溶解芦丁对照品50mg置25ml量瓶中放冷，加甲醇至刻度，摇匀精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，摇匀即得每1ml中含无水芦丁0.2mg2、标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、1、2、3、4、5ml分别置25ml量瓶中各加H2O加5% NaNO2 1ml摇匀放置6min10% Al(NO3)3 1ml摇匀放置6min加加NaOH试液 10ml加水至刻度摇匀，放置15min至5ml=500nm以相应试剂为空白测定吸光度A以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线吸光度浓度mg/ml3、供试品溶液

6、的制备槐花粗粉1g精密称定置索氏提取器中加乙醚加热回流至提取液无色放冷弃乙醚液加甲醇90ml加热回流至提取液无色移至100ml量瓶中甲醇少量屡次洗涤容器洗液并入量瓶中加甲醇至刻度摇匀精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，摇匀即得4、样品的测定精密吸取供试品溶液3ml置25ml量瓶中照标准曲线制备项下的方法自“加水至5ml起从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得依法测定吸光度槐花中含总黄酮以无水芦丁C27H30O16计，不得少于8.0%。五、本卷须知 1、对照品和样品应同时显色 2、显色剂参加的顺序、参加量和显色时间要正确六、思考题 1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线

7、法的优点。实验四、薄层板的制备一、实验目的掌握薄层板的制板方法。二、仪器与试剂天平0.1g 研钵玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液 3 蒸馏水 薄层层析用硅胶GF254青岛海洋化工厂三、实验内容及操作步骤 1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在干净、平整的台面上，阴干备用。2匀浆 将吸附剂1份3.0g和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。 3铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。4活化 将阴干的薄层板至于110烘箱中活化30分钟，置于有枯燥器中备用。四、思考题 1薄层板的铺制过程中

8、应注意哪些问题？ 实验五 薄层色谱定性分析 五味子的定性鉴别 一、实验目的 1. 掌握薄层色谱的定性分析方法。 2. 熟悉薄层板的点样方法。二、实验原理 中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。五味子植株五味子药材三、仪器与试剂定量毛细管已制备好的薄层板硅胶GF254 展开缸 所用试剂均为分析纯五味子粉末定量毛细管双槽展开缸对 照 品四、实验内容及操作步骤1.供试品液的制备：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干

9、，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品液。2.对照药材溶液的制备：取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。3.对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。 4. 吸取上述三种溶液各2l，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚3060甲酸乙酯甲酸1551的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。五、思考题 1如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？ 实验六、高效液相色谱仪的使用一、实验目的掌握高效液相色谱仪的使用方法了解高效液相色谱仪的结构

10、高效液相流程图1 溶剂贮器,2 泵,3 流量与速度检测装置,4 进样阀,5 预柱(保护柱),6 别离柱(色谱柱),7 检测器,8 数据记录及处理系统,9 废液瓶二、仪器与试剂L-2000液相色谱仪L-2400紫外检测器C18反相键合色谱柱250 mm4.6 mm微量进样器25l过滤器0.45m及脱气装置苯、甲苯、萘甲醇色谱纯重蒸馏水三、实验内容与步骤一流动相的预处理 1过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。二安装色谱柱 按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。三液相色谱仪的使用方法 6.色谱柱预平衡7进样8.数据采集完毕后，点击停止进样9.点击“再处理

11、和“报告图标对图谱进行再处理，出报告图11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量色谱条件 流动相为甲醇水8020； 固定相:C18反相键合色谱柱；检测波长为254nm；流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为1g/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10l。四、思考题流动相在洗脱前为何要进行脱气？一、实验目的 1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。 2.稳固高效液相色谱仪的使用方法。实验七、高效液相色谱定性及定量分析中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定二、实验原理 1.采用与化合物对照,对组分进行定 性分析。

12、 2.采用外标一点法进行含量测定。三、仪器与试剂 L-2000液相色谱仪L-2400紫外检测器 C18反相键合色谱柱250 mm4.6 mm 微量进样器25l 芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯 四、实验内容及操作步骤 色谱条件 C18反相键合色谱柱； 流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液4065；检测波长为230nm。 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷枯燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加甲醇25ml，称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放冷，再称

13、定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品含芍药苷C23H28O11不得少于1.8%。五、思考题1外标一点法的主要误差来源是什么？2紫外检测器的优缺点是什么？实验八、气相色谱仪的使用一、实验目的1. 掌握气相色谱仪的使用方法2. 了解气相色谱仪的结构二、实验原理 气相色谱法是采用气体作流动相载气流经色谱柱进行别离分析的方法。主要由气源局部、进样局部、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。三、仪器与试剂岛津GC-2021气相色谱仪FID检测器樟脑对照品溶液四、实验内容及操作步骤 一启动GC-

14、2021气相色谱仪二参数的设定三翻开N2000色谱工作站四运行GC-2021气相色谱仪五进样六待数据采集完毕后，点击停止采集；七待样品分析结束后，在离线处理数据，观察数据报告，打印报告。八关机附: 练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量色谱条件：聚乙二醇PEG-20M毛细管柱柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25m；柱温为160。 样品溶液 樟脑对照品溶液。 进样量 ：1l。五、思考题使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？实验九、气相色谱法定性及定量分析樟脑、冰片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定一、实验目的掌握采用内标法进行定量分析的方法 熟悉利用气相色谱仪进行定性分析二

15、、实验原理 实际工作中，在待测组分的情况下，得到的气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保存值进行定性。 利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造成的误差。三、仪器与试剂 岛津GC-2021气相色谱仪FID；10l 微量进样器；内标物：萘；樟脑对照品；混合样品溶液由樟脑、冰片和薄荷脑组成；其余试剂均为A.R纯；四、实验内容及操作步骤仪器条件 聚乙二醇PEG-20M毛细管柱柱长30m、内径0.25mm、膜厚度0.25 m，柱温160。校正因子的测定 取萘适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作为内标溶液。取樟脑对照品6mg置10ml量瓶

16、中，精密参加内标溶液1ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。吸取1l，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法 精密吸取样品溶液1ml，置50ml量瓶中，精密参加内标溶液5ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。吸取1l，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。五、思考题 1内标法定量的优点是什么？ 2内标法定量有哪些缺乏？w$dp3&tTq(a3A2wwaIPHI$yI1p$szU1%ucnsRatbYs$5$GB*c2$SY18sS3MZ36BZa$mYW7($K4ygp+Fvz2L7)UrT+d5$omoRkpc6h4nQ12njYEdWI8+Fvr5Yg1pM&#RK-reUQI(*rb3b7PBoHW&

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