感染性疾病病原体快速诊断

1、危重病人：临床表现、危重病人：临床表现、WBC+DC WBC+DC 不典型不典型内容提要临床常见细菌感染快速诊断技术结核分枝杆菌的快速诊断技术123临床常见真菌的快速诊断技术降钙素原检测内毒素检测分子诊断血清降钙素(CT)的前肽物质分子量：14.5 kDa由116个氨基酸组成的糖蛋白质无激素活性11 11号染色体上号染色体上的单拷贝基因的单拷贝基因转录转录甲状腺滤泡细胞甲状腺滤泡细胞降钙素原前降钙素原前体体内源多肽酶内源多肽酶降钙素原降钙素原 PCTPCT分解分解细胞内特殊细胞内特殊蛋白酶蛋白酶降降钙钙素素LinscheidLinscheid P, et al P, et al CritCri

2、t Care Med 04; 32: 1715-21 Care Med 04; 32: 1715-21Endocrinology 03; 144: 5578-84 & 05; 146: 2699-708Endocrinology 03; 144: 5578-84 & 05; 146: 2699-708 在病毒感染时，大量产生的IFN-，将会抑制PCT的激活及产生.因此，病毒感染时，PCT的浓度将会保持在较低的水平Bacterial InfectionBacterial Infection(e.g.Endotoxin)(e.g.Endotoxin)IL-6IL-6IL-6IL-6

3、样本：样本：200200l l血清血清/ /血浆血浆结果：结果：30min30min同胶体金免疫层析法，即在标准品上结合有胶体金的小鼠单克隆抗降钙素抗体和绵羊多克隆抗降钙素抗体，待检标本加上后，示踪元素即与标本中的PCT结合，形成一个“三明治式”的复合物，然后通过发光比色判断PCT浓度当PCT浓度0.5g/ml时，夹心复合物呈红色带，颜色深浅与样品中的PCT浓度成正比例，未结合的示踪物扩散到对照区，结合并产生了红色的对照带。 脓毒性休克严重脓毒症系统性感染(脓毒症)局部感染正常值 PCT的浓度随感染的扩散和感染严重程度的加重而升高(n=109)F. Stber, University Bonn

4、, Lecture at ISICEM, Brussels 2001通过PCT不断在体内衰减，反映出抗生素治疗策略的成功随着患者对抗生素治疗的响应，引起了PCT血中浓度水平的典型变化过程AB-antibioticsAB-antibiotics细菌感染而PCT不升高的情况原理：仪器检测试管内反应物的光密度OD值，取当OD上升到0.02的点的时间作为反应时间，该点在反应曲线上的位置为浊度开始快速变化的时期，该取值能够快速、稳定的获得反应时间，从而判断内毒素的含量动态浊度法PCR技术扩增16srRNA基因鉴定常见致病菌革兰阳性球菌革兰阴性杆菌mecA基因VanA/VanB基因 PBP2b基因PCR扩

5、增耐药基因特异性基因ESBLs基因 AmpC基因碳青霉烯酶基因mecA：耐甲氧西林葡萄球菌属（MRS）特异性基因Van A VanB ：耐万古霉素肠球菌（VRA）特异性基因PBP2b ：青霉素不敏感肺炎链球菌（pNSSp）特异性基因ESBLs基因：主要包括TEM、SHV、CTX-M、OXAAmpC基因包括质粒介导型和染色体诱导型。其中前者主要包括MOX、CMY、DHA、ACC、ACT、FOX等亚型，后者主要包括： ADC。碳青霉烯酶基因：A类酶，以KPC为代表；金属酶，以IMP、VIM、NDM为代表；D类酶，以OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-48为主。16S rRNA具有多拷

6、贝多信息的特点TB60%结核夹层杯技术结核感染T细胞检测技术分子生物学技术结核分枝杆菌的快速诊断图1. 直接涂片法（传统方法）：菌量少，背景不清晰阳性率高背景清晰，易于观察易于标准化检测速度快生物安全性好夹层杯诊断技术的优点接触活动性结核病患者接触活动性结核病患者暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除-没有症状没有症状, ,结核杆菌结核杆菌仍旧存在而不能被仍旧存在而不能被发现发现 - X- X-光光/ CT / CT 扫描显示扫描显示正常正常-没有抗体应答没有抗体应答-诊断困难诊断困难-传统的结核感染检传统的结核感染检测只有测只有 TSTTST（PPDPP

7、D）机体被感染机体被感染受机体免疫力抑制受机体免疫力抑制没有临床症状没有临床症状终身处于感染状态终身处于感染状态潜伏感染潜伏感染有临床症状有临床症状具有传染性具有传染性-结核杆菌可以通结核杆菌可以通过涂片、培养检过涂片、培养检测出测出-胸部的胸部的 X- X-光或光或 CT CT 扫描显示异常扫描显示异常 -肺外结核难以诊肺外结核难以诊断断( (特别是儿童特别是儿童)活动性结核活动性结核5%5%5%5%再次激活再次激活活动性活动性TB TB 每年900万新发病例 仅为冰山一角Latent TB Latent TB - “hidden epidemic”- 2 billion people infected诊疗指南中ESAT-6ESAT-6与与CFP10CFP10抗原抗原由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丢失该基因序列绝大多数的环境分枝杆菌也不存在RD1区孵育1小时阴性结果阴性结果阳性结果阳性结果空白对照抗原 AESAT-6抗原 BCFP10阳性对照（PHA） 中国（专家组推荐） 结核病患者的家属/医务工作者/监狱囚犯5、接触追踪接触追踪临床应用增技术。G试验GM试验分子生物学技术分混匀G G试验和