贾莉婷：封闭抗体

1、1 郑州大学第三附属医院郑州大学第三附属医院 贾莉婷贾莉婷 20112011年年9 9月月2一、流产一、流产二、反复性自然流产（二、反复性自然流产（RSA）三、封闭抗体的检测三、封闭抗体的检测四、四、 RSA淋巴细胞免疫治疗淋巴细胞免疫治疗 3n流产定义流产定义 凡妊娠不足凡妊娠不足2828周，体重不足周，体重不足10001000克而妊娠终克而妊娠终止者，称为流产止者，称为流产。 n根据流产发生的时间分为式根据流产发生的时间分为式| 早期流产：早期流产：流产发生于妊娠流产发生于妊娠1212周前周前| 晚期流产：晚期流产：流产发生于妊娠流产发生于妊娠12122828周周n流产又分：流产又分：为人

2、工流产和自然流产为人工流产和自然流产4n流产病因流产病因|遗传基因缺陷：遗传基因缺陷：在早期流产时，染色体异常，在早期流产时，染色体异常， 约占约占505070%70%|母体因素：母体因素：包括母体全身性疾病、生殖器官包括母体全身性疾病、生殖器官 疾病、内分泌功能失调、创伤、疾病、内分泌功能失调、创伤、 不良习惯等不良习惯等|免疫因素免疫因素|环境因素环境因素5n流产病理流产病理胚胎死亡 底蜕膜出血 胚胎与蜕膜层分离 排出6n流产的临床表现流产的临床表现 流产的主要症状是阴道出血及腹痛，根据流产流产的主要症状是阴道出血及腹痛，根据流产发生的时间不同，症状不一样。发生的时间不同，症状不一样。|早

3、期流产：早期流产：先阴道出血后腹痛先阴道出血后腹痛|晚期流产：晚期流产：先腹痛后阴道出血先腹痛后阴道出血7n流产的类型流产的类型|先兆流产：先兆流产：少量阴道出血，轻微下腹痛，无肉样出；少量阴道出血，轻微下腹痛，无肉样出； 查体和查体和B B超：宫口未开，胎儿胎心良好超：宫口未开，胎儿胎心良好|难免流产：难免流产：在先兆流产的基础上，阴道流血量增多或阴在先兆流产的基础上，阴道流血量增多或阴 道流液、腹痛加剧，流产已不可避免道流液、腹痛加剧，流产已不可避免。|不全流产：不全流产：难免流产继续发展，使部分胚胎组织排出体外，还难免流产继续发展，使部分胚胎组织排出体外，还 有部分组织残留于宫腔内嵌于子

4、宫颈口，影响子宫有部分组织残留于宫腔内嵌于子宫颈口，影响子宫 收缩，容易引起大量出血甚至导致失血性休克。收缩，容易引起大量出血甚至导致失血性休克。|完全流产：完全流产： 先有流产症状，然后胎儿胎盘完整排出先有流产症状，然后胎儿胎盘完整排出|稽留流产：稽留流产：胚胎或胎儿已死亡滞留于宫腔内尚未排出者胚胎或胎儿已死亡滞留于宫腔内尚未排出者|习惯性流产习惯性流产|反复性流产|流产感染：流产感染：指流产合并生殖器官局部或全身感染指流产合并生殖器官局部或全身感染8n反复性自然流产反复性自然流产|定义：指自然流产连续或不连续发生指自然流产连续或不连续发生2 2次或次或2 2 次以上者次以上者, ,约占总妊

5、娠数的约占总妊娠数的0.5%0.5%3.0%3.0% |英文：recurrent or repetitiue dpontaneous abortion，RSAn习惯性流产习惯性流产（habitual abortion） 连续流产连续流产3 3次或以上者次或以上者9n流产复发率流产复发率 既往流产次数既往流产次数 再次妊娠流产率（）再次妊娠流产率（）至少至少1个成活婴儿的妇女个成活婴儿的妇女 1 20-24 2 26-30 3 32-35 4 40-45没有没有1个成活婴儿的妇女个成活婴儿的妇女 2 40-4510nRSA病因（病因（1）|解剖因素：解剖因素：12121515的妇女子宫畸形、宫的

6、妇女子宫畸形、宫 腔粘连、子宫肌瘤、子宫腺肌病、腔粘连、子宫肌瘤、子宫腺肌病、 宫颈机能不全等宫颈机能不全等|内分泌因素内分泌因素：10102020的妇女黄体功能不的妇女黄体功能不 全、多囊卵巢综合征、高泌乳素全、多囊卵巢综合征、高泌乳素 血症、甲状腺疾病等血症、甲状腺疾病等|遗传因素：遗传因素：3 38 8的夫妇染色体异常；自的夫妇染色体异常；自 然流产中然流产中70%70%胚胎存在染色体异常胚胎存在染色体异常11nRSA病因（病因（2）|感染因素：感染因素：占占50。明确诊断需要进行血清。明确诊断需要进行血清 或分泌物或分泌物TORCH、支原体、衣原、支原体、衣原 体等病原微生物的检测体等

7、病原微生物的检测 |男方因素：男方因素：染色体异常、酗酒、吸烟等因素染色体异常、酗酒、吸烟等因素 可影响精子质量，进而引起可影响精子质量，进而引起RSA |免疫因素：免疫因素：原因不明原因不明RSARSA约占约占40%40%60%60%，其中，其中 80%80%与免疫因素有关。与免疫因素有关。 免疫因素在自然流产中的作用倍受关注免疫因素在自然流产中的作用倍受关注 12|自身免疫性自身免疫性 约约13与自身抗体特别是与自身抗体特别是抗磷脂抗抗磷脂抗 体（体（APL）有关，另外还可能与存在有关，另外还可能与存在 抗精子抗体、血型不合等有关。抗精子抗体、血型不合等有关。 强烈的凝血活性强烈的凝血活性

8、 血栓形成血栓形成 APL 直接造成血管内皮细胞损伤直接造成血管内皮细胞损伤 流产流产 抑制滋养细胞的功能抑制滋养细胞的功能 影响胚胎着床影响胚胎着床 |同种免疫性同种免疫性 主要是主要是 13自身免疫性自身免疫性同种免疫性同种免疫性14n封闭抗体的概念封闭抗体的概念|是人类白细胞抗原、滋养层及淋巴细胞交叉是人类白细胞抗原、滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原等刺激母体免疫系统，所产生的一反应抗原等刺激母体免疫系统，所产生的一类类IgG型抗体。型抗体。| antiphospholipid antibody，APLA| blocking antibodies，BA nAPLA产生机制产生机制|由于由于H

9、LA基因的遗传多态性，个体之间细胞基因的遗传多态性，个体之间细胞膜表面的膜表面的HLA抗原分子相容性概率很低，构抗原分子相容性概率很低，构成了同种免疫。成了同种免疫。 |母体对妊娠胚胎作为异体抗原的辨识，能刺母体对妊娠胚胎作为异体抗原的辨识，能刺激母体产生足够以维持妊娠所需的激母体产生足够以维持妊娠所需的APLA。15nAPLA功能 保护和刺激胎盘细胞生长、分化。保护和刺激胎盘细胞生长、分化。 nAPLA 类型类型|抗温抗温B细胞抗体细胞抗体|抗冷抗冷B细胞抗体细胞抗体|抗特异性抗体抗特异性抗体|抗滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原抗体抗滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原抗体|抗抗Fc受体的抗体受体的抗体

10、|抗父体的补体依赖性抗体抗父体的补体依赖性抗体16n正常母正常母-胎免疫状态胎免疫状态 父源性父源性HLAHLA抗原抗原 母体免疫系统母体免疫系统 封闭抗体封闭抗体 妊娠成功妊娠成功 母母- -胎耐受胎耐受 nRSA母母-胎免疫状态胎免疫状态|识别低下型：识别低下型：封闭抗体缺乏为主要特征封闭抗体缺乏为主要特征|识别过度型识别过度型 |识别紊乱型识别紊乱型nRSA母母-胎免疫紊乱结局胎免疫紊乱结局|封闭抗体形成不足封闭抗体形成不足 滋养细胞伪装无效滋养细胞伪装无效|滋养细胞不能生长、分化滋养细胞不能生长、分化 滋养细胞死亡滋养细胞死亡|激活激活IIII、IIIIII、IVIV、V V免疫紊乱免

11、疫紊乱17nAPLA在机体中的作用在机体中的作用|APLA中和同种异体抗原，防止辅助中和同种异体抗原，防止辅助T细胞识别胎儿细胞识别胎儿抗原而不使胎儿受到排斥抗原而不使胎儿受到排斥|APLA封闭同种抗原刺激淋巴细胞产生巨噬细胞移动封闭同种抗原刺激淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子抑制因子|APLA直接作用于具有免疫能力的细胞如直接作用于具有免疫能力的细胞如:CTL细胞、细胞、NK细胞等，抑制淋巴细胞反应（细胞等，抑制淋巴细胞反应（MLR）|APLA直接结合到靶细胞的抗原上，从而降低它们对直接结合到靶细胞的抗原上，从而降低它们对受体细胞参与的免疫反应的敏感性。受体细胞参与的免疫反应的敏感性。 18

12、 总之，总之， APLA封闭母体淋巴细胞对滋养层的细封闭母体淋巴细胞对滋养层的细胞毒作用，阻止母亲免疫系统对胚胎的攻击，胞毒作用，阻止母亲免疫系统对胚胎的攻击， 是人是人 类成功妊娠不可缺少的重要前提（保护性抗体）。类成功妊娠不可缺少的重要前提（保护性抗体）。 若若APLA产生不足产生不足，母体对胎儿产生强烈的排，母体对胎儿产生强烈的排斥现象，发生于孕早期可出现反复自然流产，孕晚斥现象，发生于孕早期可出现反复自然流产，孕晚期则可出现妊娠高血压疾病、胎儿宫内生长受限、期则可出现妊娠高血压疾病、胎儿宫内生长受限、甚至出现胎死宫内等。甚至出现胎死宫内等。因此，反复自然流产患者检测因此，反复自然流产患

13、者检测APLA非常必要！非常必要！19n封闭抗体的检测方法封闭抗体的检测方法| 细胞毒试验细胞毒试验| ELISA法法| 流式细胞术流式细胞术20n标本： 患者不抗凝全血、丈夫抗凝和不抗凝全血各1管n方法 1、对照管：丈夫抗凝血100+丈夫血清丈夫血清50l+CD 3 、 CD 4 、CD 8 单克隆抗体20l 2、测定管：丈夫抗凝全血100+患者血清患者血清50l+CD 3 、 CD 4 、CD 8 单克隆抗体20l 孵育30min，加入红细胞溶解液3ml，PBS洗涤1次； 流式分析对照管和测定管CD +3/CD +4 /CD +8 细胞比例n计算公式 封闭效率（%）= 对照管 - 测定管C

14、D比例n结果判断 1、三项中只要有一项出现负值，提示封闭抗体缺乏 2、封闭抗体阳性：三项全部正值，提示正常21222324n淋巴细胞免疫治疗概况淋巴细胞免疫治疗概况 （Lymphoeyte immunology therapy, LIT）|1970-1979年年 Beer开始开始LIT的实验动物研究的实验动物研究|1978年年 用于用于RSA妇女妇女|流产次数越多或流产次数越多或IVF失败次数越多，免疫紊乱失败次数越多，免疫紊乱越严重越严重 | 自身免疫问题（自身免疫问题（APL阳性，阳性，ANA阳性），使阳性），使LIT的有效性减少的有效性减少60 。25nLIT治疗适应症治疗适应症|对于对

15、于RSA、多次、多次IVF失败失败的患者，首先应排除的患者，首先应排除解剖、内分泌、感染、遗传、自身免疫等因素解剖、内分泌、感染、遗传、自身免疫等因素|男方未感染乙肝、丙肝、爱滋、梅毒等传染病男方未感染乙肝、丙肝、爱滋、梅毒等传染病 |对该类患者进行对该类患者进行封闭抗体检查封闭抗体检查，如果患者封闭，如果患者封闭抗体为阴性，则可选用丈夫淋巴细胞主动免疫抗体为阴性，则可选用丈夫淋巴细胞主动免疫疗法进行治疗。疗法进行治疗。26n治疗流程（治疗流程（1）|门诊医师在接诊后要仔细询问病史，对患者门诊医师在接诊后要仔细询问病史，对患者进行了各项检查后，决定是否采用该方法。进行了各项检查后，决定是否采用

16、该方法。|与患者进行沟通，取得夫妇双方同意。与患者进行沟通，取得夫妇双方同意。|在治疗前，需检测男方是否感染乙肝、丙肝、在治疗前，需检测男方是否感染乙肝、丙肝、爱滋、梅毒等传染病，结果正常才能做免疫爱滋、梅毒等传染病，结果正常才能做免疫治疗；抽血与免疫注射需避开女性月经期。治疗；抽血与免疫注射需避开女性月经期。|男方按预约早晨空腹抽血男方按预约早晨空腹抽血2030ml，严格无菌操作下分离提取淋巴细胞，调整淋巴细胞浓度；当日下午女方接受淋巴细胞免疫治疗。当日下午女方接受淋巴细胞免疫治疗。27n治疗流程（治疗流程（2）|嘱咐夫妇双方于嘱咐夫妇双方于 34周后，再按预约时间周后，再按预约时间接受免疫

17、治疗，接受免疫治疗，3次为一个疗程。次为一个疗程。|一个疗程结束后，复查封闭抗体。医师根据一个疗程结束后，复查封闭抗体。医师根据封闭抗体水平决定是否安排妊娠，或进入下封闭抗体水平决定是否安排妊娠，或进入下一疗程治疗；治疗期间应避孕。一疗程治疗；治疗期间应避孕。|如封闭抗体仍为阴性，则需继续注射治疗，如封闭抗体仍为阴性，则需继续注射治疗，直至转为阳性后再考虑受孕，妊娠后继续一直至转为阳性后再考虑受孕，妊娠后继续一个疗程。个疗程。28nLIT后的局部表现后的局部表现|第一次注射部位可有红、肿、痒等反应，可第一次注射部位可有红、肿、痒等反应，可3838|第二次注射部位的反应比第一次轻。第二次注射部位的反应比第一次轻。n有效维持时间有效维持时间|通常维持终生通常维持终生 |免疫后半年如果未能妊娠，检测淋巴细胞抗体，阴性免疫后半年如果未能妊娠，检测淋巴细胞抗体，阴性 或不足者再次强化。或不足者再次强化。|8080