第四章 药物定量分析与分析方法验证

1、 药物定量分析药物定量分析 与分析方法验证与分析方法验证 基 本 要 求 熟悉含卤素与含金属药物的结构特点与前处理方法之间的关系 掌握有机破坏方法(氧瓶燃烧法、湿法破坏及干法破坏）的特点及应用 掌握定量分析方法(容量分析、光谱分析及色谱分析）的特点及其应用 熟悉药品质量标准分析方法的验证 第一节 定量分析方法特点一、容量分析法 1.特点 容量分析法是药物分析中最为常用的一种分析方法。其优点是精密度好、准确度高、操作简单快速，是原料药含量测定的首选方法。 它的缺点是专属性不强、灵敏度不高。 2.计算(1)滴定度(T)(2)滴定液浓度校正因素(F)(3)原料药百分含量计算 A.直接滴定法 B.回滴

2、定法(剩余滴定法) 做空白试验时的计算方法 不做空白试验时的计算方法滴定度（滴定度（T）：指每）：指每1ml某摩尔浓度的某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。滴定液所相当的被测药物的重量。dDcCbBaA(mg/ml)MabCTB滴定度的计算滴定度的计算：被测药物（被测药物（B）与滴定液（）与滴定液（A）之间）之间按一定的摩尔比进行反应：按一定的摩尔比进行反应：原料药含量测定结果的计算原料药含量测定结果的计算A、直接滴定法 %100%WFTV含量V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml） F浓度校正因子 例取苯巴比妥取苯巴比妥0.4045g，加入新制的，加入新制的碳酸钠试液碳酸钠试液16ml

3、使溶解，加丙酮使溶解，加丙酮12ml与水与水90ml，用硝酸银滴定液，用硝酸银滴定液（0.1025mol/L）滴定至终点，消）滴定至终点，消耗硝酸银滴定液耗硝酸银滴定液16.88 ml，求苯巴，求苯巴比妥的百分含量（每比妥的百分含量（每1ml0.1mol/L硝酸银相当于硝酸银相当于23.22mg的的C12H22N2O3）？（）？（99.3%） 例取盐酸麻黄碱取盐酸麻黄碱0.1532g0.1532g，精密称定，精密称定，加冰醋酸加冰醋酸10ml10ml溶解后，加醋酸汞试液溶解后，加醋酸汞试液2ml2ml与结晶紫指示液与结晶紫指示液1 1滴，用滴，用HClO4HClO4滴滴定至绿色，用去定至绿色，

4、用去0.1022mol/L0.1022mol/L的高氯的高氯酸滴定液酸滴定液7.50m17.50m1，空白试验消耗高氯，空白试验消耗高氯酸滴定液酸滴定液0.08ml0.08ml。已知每。已知每1ml1ml高氯酸高氯酸滴定液（滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）当于）当于20.17mg20.17mg的的C10H15ONHClC10H15ONHCl。试计算盐酸麻黄碱。试计算盐酸麻黄碱的百分含量？（的百分含量？（99.8099.80）B、剩余滴定法 T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的 mg 数 V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml） V0滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）F浓度校正因

5、子 w供试品的质量 标准实测ccF %100)V%0WFTVb（含量司可巴比妥钠的含量测定：司可巴比妥钠的含量测定： 精密称定本品精密称定本品0.0992g，置，置250ml碘瓶碘瓶中，加水中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴，振摇使溶解，精密加溴滴定液（滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸，再加盐酸5m1，立即密塞并振摇，立即密塞并振摇1min，在暗处静置，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10m1，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（钠滴定液（ 0.1mol/L，F0.981）滴定，）滴定，消耗消耗1

6、4.76ml。另做空白试验，消耗硫代。另做空白试验，消耗硫代硫酸钠滴定液硫酸钠滴定液22.84ml。已知司可巴比妥。已知司可巴比妥钠分子量为钠分子量为260.23.，计算司可巴比妥钠的，计算司可巴比妥钠的百分含量？百分含量？I22Na2S2O32NaINa2S4O6+Br2（定量过量）CO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaCO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaBrBrBr22KI2KBrI2 1.紫外-可见分光光度法 （1）特点 灵敏度较高 准确度较好 仪器价格较低 应用较广泛（主要用于制剂的含量测定以及含量均匀度和溶出度的检查）（2

7、）计算公式 定量依据：朗伯-比尔定律 A = ELCA适宜范围0.30.7 含量测定方法： 对照品比较法（ 美国药典多用该法） 吸收系数法（ 中国药典多用该法） 计算分光光度法 (用于复杂及有干扰的多组分测定)2. 紫外分光光度法（1）吸收系数法 100)g/ml()g/100ml(1%1cm1%1cm%1cm1lEAclEAcclEA%100100%11WDlEAcm含量含量计算公式：含量计算公式：%1 . 0%1001 . 0100 . 25%1005SVCL对乙酰氨基酚的含量测定：取本品40mg，精密称定，置250mg量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量

8、取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度为0.572，按C8H9NO2的吸收系数为715计算，求其百分含量？（2）对照法 对供对供对供对供对供对供AAccccAAlcElcEAA%1cm1%1cm1含量计算公式：含量计算公式：%100%WDC供含量 3比色法比色法标准曲线法标准曲线法条件前提：固定仪器和测定CACKA样样同上条件固定条件查得测定样品曲线分别测定配制标准系列过程：CAACA示例示例 芦丁含量测定芦丁含量测定mLmgmLmLmLmg250 . 32550/200. 0样品标样分别移取三、色谱分析法

9、色谱法由于其具有很强的分离能力，因而在药物分析中占有越来越重要的地位。它主要用于制剂及复方制剂的含量测定，特别适合那些结构类似，有相关杂质或附加成分干扰或各组分之间互相干扰的品种，其中以高效液相色谱法应用最为广泛。1.分离原理 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱吸附色谱 根据填充剂吸附活性对样品的吸收系数不同而分离充填剂：硅胶分配色谱根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱两者的区别如下图所示： 固定相流动相正相分配极性非极性反相分配非极性极性分配色谱 充填剂：多孔聚合物离子交换色谱 是根据固定相的离子交换基和样品成分中的离子性基进行交换来分离的 凝胶色谱 凝胶色

10、谱分离方法是利用分子振动效应，根据样品分子的大小而进行分离。所以又称为排斥色谱 充填剂多采用：一定孔径的多孔性聚合物 2.高效液相色谱系统条件(1) 固定相 常用的固定相有硅胶和化学鍵合相，首选十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）、辛基硅烷键合硅胶(C8)，氰基或氨基键合硅胶也有使用。 （2）流动相 首选甲醇-水系统。 （3）检测器 多用紫外检测器，并应注意考察溶剂的紫外吸收对待测组分吸收度的影响。 用内标法定量时，内标物质应选择容易获得并对测定方法不产生干扰的物质。 3.色谱系统适用性试验 色谱系统适用性试验系指用规定的对照品或原料药的精制品（纯度99.5%）对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求

11、；或在规定的分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子应达到规定的要求。(1)色谱柱的理论板数（n） 在选定的色谱条件下，注入供试品溶液或规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（Wh/2），按n=5.54n=5.54（t tR R/W/Wh/2h/2）2 2 计算色谱柱的理论板数。 如果测得理论板数低于规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱填充的优劣等），使理论板数达到要求。 (2)分离度(R) 在定量分析时，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。除另有规定

12、外，分离度应大于1.5。 分离度（R）的计算公式见下式： 21122WWttRRR 分离度图(3)重复性 取对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。 也可按各品种校正因子测定项下，制备相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，制成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应不大于2.0%。(4)拖尾因子(T) 为保证测量精度，特别是采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。除另有规定外，T应在0.951.05之间。 拖尾因子计算公式为：

13、式中，W0.05h为0.05峰高处的峰宽；d1为峰极大值至峰前沿之间的距离。 拖尾因子图4.色谱定量分析方法 用色谱法定量分析时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法。测定主成分含量时，常采用以下两种方法： (1)内标法加校正因子测定供试 品中主成 分含量 按规定的方法，精密称（量）取对照品和内标物质，分别制成溶液，精密量取各溶液，制成校正因子测定用的对照品溶液。量取一定量注入色谱仪，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： 校正因子（f）= 式中AS为内标物质的峰面积或峰高， AR为药物对照品峰面积或峰高：CS为内标物质的浓度 ；CR为药物对照品的浓度。 R

14、RSSCACA/ 再取含有内标物质的供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： 含量（CX）= f 式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供试品的浓度 。SSXCAA/丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每每lmL中约含中约含1mg的溶液。精密量取该溶液的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（和内标溶液（16mg/ml苯丙酸诺龙甲醇溶苯丙酸诺龙甲醇溶液）各液）各5ml，置，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇

15、匀，取刻度，摇匀，取10l注入液相色谱仪，记录注入液相色谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，内标法色谱图。另取本品适量，同法测定，内标法计算含量。已知对照品溶液为计算含量。已知对照品溶液为1052mg/ml，样品溶液为样品溶液为1032mgmL，测得对照液中，测得对照液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为54678和和61258，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为积分别为52213和和61228计算丙酸睾酮的含计算丙酸睾酮的含量量(2)外标法测定供试品中主成分含量 外标法可分为标准曲线法和外标一点法： 标准曲线法 取纯物质配制

16、成一系列不同浓度的标准溶液，分别取一定量注入色谱仪，测量峰面积或峰高，以峰面积或峰高对浓度作标准曲线。得回归方程或回归曲线。然后在同样条件下，注入供试品溶液，测得待量组分的峰面积或峰高。根据标准曲线或回归方程，计算出待测物的含量。 外标一点法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，分别制备对照品溶液和供试品溶液。分别精密取一定量，注入色谱仪，记录色谱图，测量对照品和供试品中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量： 含量（CX）= CR 式中， CX为供试品的浓度，AX为供试品的峰面积或峰高；CR为对照品的浓度，AR为对照品的峰面积或峰高。RXAA中国药典规定紫外测定中，溶液的吸

17、收度应控制在A、0.002.00范围 B、0.31.0范围 C0.20.8范围 D0.11.0范围 E0.30.7范围 高效液相色谱法用于含量测定时，对系统性能的要求A 理论板数越高越好理论板数越高越好 B 依法测定相邻两峰分离度一般须依法测定相邻两峰分离度一般须1 C 柱长尽可能长柱长尽可能长 D 理论板数，分离度等须符合系统适理论板数，分离度等须符合系统适用性的各项要求，分离度一般须用性的各项要求，分离度一般须1.5 E 由于采用内标法，对照品法，系统由于采用内标法，对照品法，系统的性能无须严格要求的性能无须严格要求 第二节 定量分析样品的前处理方法 一、分子结构式特点与前处理关系 在分析

18、含卤素或含金属有机药物时，通常要进行适当前处理，使卤素或金属元素转变为适于分析的状态。由于卤素或金属原子在药物分子中的结合状态不同，因而其预处理方法也不同。下面分别介绍；1、含卤素有机药物 含卤素有机药物是指分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，它不包括某些有机药物的卤酸或氢卤酸盐。 含卤素有机药物的分子结构特点是所含卤素原子结构直接与碳原子相连，但不同药物中卤素所处的位置不同，则与碳原子结合的牢固程度就有差异。如果卤素与脂肪链的碳原子相连，则结合不牢固，如三氯叔丁醇等。如果卤素直接与芳环相连，则结合牢固，如泛影酸等。 例如：三氯叔丁醇 (卤素与脂肪链碳原子相连)H3CCCCl3OHCH

19、31/2H2O例如：泛 影 酸(卤素与芳环碳原子相连)COOHINHCOCH3IIH3COCHN 2、含金属有机药物含金属有机药物分两种类型： 一是金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，称为含金属的有机药物。如酒石酸锑钾等，其分子结构特点是金属原子结合不够牢固，在水溶液中即可离解出金属离子。 酒石酸锑钾(含金属的有机药物)OCHCHCCOOOOOSbOCCHCHCOOOOOSb2K . 3H2O 二是金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢，称为有机金属药物。 如卡巴胂等，在溶液中其金属一般不能解离成离子状态。 卡巴胂(有机金属药物)NHCONH2AsHOOHO

20、二、不经有机破坏的分析方法 1.直接测定法 原理 本法适合于含金属有机药物或某些C-M键（金属原子直接与碳原子相连）结合不牢固的有机金属药物。由于其结合不牢，在水溶液中可以电离，因而不需经有机破坏，可直接测定。 示例 中国药典（2010年版）富马酸亚铁的含量测定： OCCHOFeHCCOO 取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫酸铈滴定液（0.1mol/L)相当于16.99mg的C4H2FeO4。 讨论 本品在水中几乎不溶，但能溶于热稀矿酸

21、（如稀硫酸），同时分解释放出亚铁离子，可选用硫酸铈滴定法。 加入的水应为新沸过的冷水。 本法指示剂为邻二氮菲，可与亚铁离子形成红色配位化合物，等当点后被氧化成浅蓝色。 2.经水解后测定 原理 本法是将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法（Volhard法）进行测定。 示例(直接回流后测定) 中国药典（2010年版）测定三氯叔丁醇的方法： 取本品约0.1g 精密称定, 加乙醇5ml溶解后, 加20%氢氧化钠溶液5ml, 加热回流15min ,放冷至室温, 加水20ml与硝酸5ml, 精密

22、加硝酸银滴定液(0.1mol/L)30ml, 再加邻苯二甲酸二丁酯5ml , 密塞，强力震摇后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于6.216 mg的C4H7Cl3O 1/2H2O。 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3(1.5610 10 )(1.010 -12 )滴定反应：(过量)(剩余) 讨

23、论: 加入乙醇作溶剂 滴定应在强的硝酸溶液（加入5ml浓HNO3） 中进行滴定，以防Fe3+水解。 加入邻苯二甲酸二丁酯作凝聚剂，其目 的是包裹氯化银沉淀，以防沉淀转化。 指示剂为硫酸铁铵指示液(佛尔哈德法)。 3.经氧化还原后测定 当卤素药物与芳环相连时，由于卤元素结合较牢，需在碱性条件下加锌粉还原（碱性还原法）或在酸性条件下加锌粉还原（酸性还原法），使其共价键断裂，形成无机卤化物，然后用银量法测定其含量，如泛影酸、胆影酸等。利用游离金属离子的氧化性测定其含量，如葡萄糖酸锑钠、酒石酸锑钠、枸橼酸铁铵等。 三、经有机破坏的分析方法 该法适合于药物结构中金属原子、卤素与碳原子结合牢固者，当用其它

24、方法难以将其转变为无机的金属化合物及卤素有机化合物时，可以采用本法进行有机破坏。有机破坏方法可分为: 1.湿法破坏 硝酸-高氯酸法 本法适合于血液、尿样、组织等生物样品的破坏。但对于含氮杂环类药物，由于不易破坏完全，宜选用干法进行破坏。 本法的特点是破坏能力强，反应比较激烈，破坏后所得的无机金属离子一般为高价态。硝酸-硫酸法 本法适合于大多数有机药物的破坏，但不适合于含碱土金属的有机药物。因为碱土金属易与硫酸形成不溶性硫酸盐，使被测金属离子被沉淀吸附而造成结果偏低。 本法的特点是破坏后所得的无机金属离子均为高价态。 硫酸-硫酸盐法 本法多用于含砷或含锑的有机药物的破坏分解，最后得到低价态的三价

25、砷或锑离子。破坏所用的硫酸盐一般多采用硫酸钾。加入硫酸盐既可以提高硫酸的沸点使样品破坏完全，又可以防止硫酸在加热过程中过早分解为三氧化硫而损失。 本法的特点是破坏所得的金属离子多为低价态。为保证在破坏低碳化合物时，金属离子都能转变为低价态，需添加适量的淀粉等多碳化合物。 2.干法破坏 干法破坏是指将样品置入坩埚中先小心加热使样品炭化，然后高温炽灼,使其灰化的一种有机破坏方法。 本法适合湿法不易破坏完全的或某些不能用硫酸破坏的有机药物（如含氮杂环类）。对于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物也不宜采用本法。 干法破坏时应注意： 加热或灼烧时，应控制温度在420以下，以防某些被测金属化合物挥发。

26、破坏时应灰化完全，否则影响测定结果的准确性。 经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，此时切勿弃去。 3.氧瓶燃烧法 （Oxygen Flask Combustion Method ) 氧瓶燃烧法是指将含有卤素或含有硫、氮、硒等元素的有机药物置于充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧，并选用合适的吸收液吸收燃烧产生的各价态待测离子来进行分析的方法。 该法的特点是快速简便，不需要特别的设备就可使样品完全破坏，被各国药典广泛采用。 仪器装置 燃烧瓶为磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞应严密、空心,底部熔封铂丝一根，铂丝下端做成网状或螺旋状，如右图所示： 样品包装 称取固体样品时，取适量研细，精密称定，置于无灰滤纸中心

27、，按药典附录规定方法包好后测定。 称取液体样品时，将待测样品滴在用透明胶纸和无灰滤纸做成的纸袋中，精密称定其重量。 燃烧操作 将样品固定于铂丝下端的网内或螺旋处，在燃烧瓶中加入规定的吸收液，小心急速通入氧气，随即点火燃烧。待燃烧完毕后，充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中。 吸收液 吸收液可使样品经燃烧后所产生的元素定量地被吸收或使其转变为一定便于测定的价态，以适应所选择的分析方法。 B. 吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶

28、液硝酸溶液 注意事项 燃烧要完全（应无黑色碎片） 测定氟化物时，应选用石英燃烧瓶。 操作过程中，要注意安全（应戴防护 面具）。 98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 磨口软质玻璃锥形瓶C. 铂丝D. 铁丝E. 铝丝96：133选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 铂丝C. 普通滤纸D. 氢气 E. 无灰滤纸99：76氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A. H2O2溶液B. H2O2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼饱和液E. NaOH硫酸肼饱和液99：134. 氧瓶燃烧法可用于A. 含卤素有机药物的含量测定B. 醚类药物的含量测

29、定C. 检查甾体激素类药物中的氟D. 检查甾体激素类药物中的硒E. 芳酸类药物的含量测定 第三第三 节节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 药品质量标准分析方法药品质量标准分析方法验证的目的验证的目的是证明采用是证明采用的方法是否适合于相应检测要求。的方法是否适合于相应检测要求。 验证的分析项目验证的分析项目有：鉴别试验、杂质检查、含有：鉴别试验、杂质检查、含量测定以及药品的溶出度、释放度等。量测定以及药品的溶出度、释放度等。 验证内容验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、间精密度和重现性）、专属

30、性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。线性、范围和耐用性。 一、准确度一、准确度 (accuracy) 准确度指用该方法测定的结果与准确度指用该方法测定的结果与真实值或参考值相接近的程度，一般真实值或参考值相接近的程度，一般以回收率（以回收率（% %）表示。准确度应在规定）表示。准确度应在规定的范围内建立。的范围内建立。（一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1.原料药的回收率计算法原料药的回收率计算法 取已知纯度的对照品或样品取已知纯度的对照品或样品( (加入量加入量) )，按本法进行测定（实测值），或用本法按本法进行测定（实测值），或用本法测定的结果与已建立准确度的另一方法

31、测定的结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较测定的结果进行比较. .回收率回收率% = 实测值实测值 加入量加入量100%2.制剂的回收率计算法制剂的回收率计算法 （1）空白回收试验）空白回收试验 在在空白辅料空白辅料中加入中加入已知量的被测已知量的被测物物( (对照品对照品) )进行测定进行测定 ，同时还应作，同时还应作单独辅料的空白测定。单独辅料的空白测定。 （2）加样回收试验）加样回收试验 在已知准确被测物量（在已知准确被测物量（P P）的制剂样）的制剂样品中，加入已知量的被测物（品中，加入已知量的被测物（A A）进行）进行测定，得被测物的量测定，得被测物的量(M)(M)。 其计

32、算公式是：其计算公式是：回收率回收率% = M P A100%注意事项注意事项: : 1. 生物样品生物样品 及中药制剂及中药制剂大多数采用加样回收率大多数采用加样回收率试验。还可与准确度可靠的其它方法进行比较，以试验。还可与准确度可靠的其它方法进行比较，以确立本法的准确度。确立本法的准确度。 2. 回收率试验中回收率试验中,要求要求至少测定高、中、低三个至少测定高、中、低三个不同浓度的样品不同浓度的样品，每个浓度测定，每个浓度测定3次，共用次，共用9 次测定次测定数据进行评价。数据进行评价。 3. 回收率的回收率的RSDRSD通常要求在通常要求在2.0%2.0%以内以内，对测定方，对测定方法

33、复杂或待测成分含量较低的，可放宽到法复杂或待测成分含量较低的，可放宽到90%-110%90%-110%。 二、精密度（二、精密度（precision） 精密度系指在规定的测试条件下，精密度系指在规定的测试条件下，对同一个均匀样品，经多次取样测定对同一个均匀样品，经多次取样测定,所得结果之间的接近程度。所得结果之间的接近程度。 精密度一般以偏差精密度一般以偏差(d)，相对偏差，相对偏差（RD），标准偏差），标准偏差(SD)或相对标准或相对标准偏差偏差(RSD)表示。表示。1. 1.偏差偏差(deviation, d)相对偏差相对偏差(RD) = 偏差偏差 平均值平均值100% (2)相对偏差相对

34、偏差(relative deviation , RD ) (1)偏差偏差(d) = 测定值测定值 -平均值平均值 = Xi X 2.2.标准偏差标准偏差 （standard deviation, SD或或S）S =( Xi X ) 2 n 1 3. 3.相对标准偏差相对标准偏差( (或变异系数或变异系数) ) （relative standard deviation , RSD）RSD =标准偏差标准偏差平均值平均值100% =SX100%容量分析法的RSD一般不大于0.2 %；UV法的RSD一般不大于1 %；HPLC法的RSD一般不大于2 %。4. 4. 重复性重复性 在相同条件下，由在相同

35、条件下，由一个分析人员一个分析人员测测定所得结果的精密度称为重复性。定所得结果的精密度称为重复性。 在规定范围内在规定范围内 ，至少用至少用9 9次测定结次测定结果进行评价果进行评价 ，如制备，如制备3 3个不同浓度的个不同浓度的样品，各测定样品，各测定3 3次次 , ,或把被测物浓度当或把被测物浓度当作作100% 100% ，用至少测定，用至少测定6 6次的结果进行次的结果进行评价。评价。5. 5. 中间精密度中间精密度 在同一个实验室，在同一个实验室，不同时间不同时间由不同分析人员用不同设备由不同分析人员用不同设备测定测定结果的精密度，称为中间精密度。结果的精密度，称为中间精密度。 用于考

36、察随机变动因素对精用于考察随机变动因素对精密度的影响密度的影响。变动因素为不同日变动因素为不同日期、不同分析人员和不同设备。期、不同分析人员和不同设备。6. 6. 重现性重现性 在在不同实验室由不同分析人员不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。测定结果的精密度，称为重现性。 用于用于建立法定标准时采用建立法定标准时采用，如，如建立药典分析方法时，通过协同建立药典分析方法时，通过协同检验得出重现性结果。检验得出重现性结果。不同分析方法对精密度的要求不同分析方法对精密度的要求: : 滴定法的滴定法的RSDRSD不得超过不得超过0.3%0.3%； 重量法的重量法的RSDRSD不得超过

37、不得超过0.5%0.5%； 氮测定法的氮测定法的RSDRSD不得超过不得超过1%1%； 仪器分析法的仪器分析法的RSDRSD不得超过不得超过3% 3% 。三、三、专属性专属性(specificity) 专属性专属性系指在其他成分（如杂质、系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。的方法能准确测定出被测物的特性。 鉴别反应、杂质检查、含量测定方鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。如方法不够专法，均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。属，应采用多个方法予以补充。 应能将可能共存的物

38、质或应能将可能共存的物质或结构相似的化合物区分开来；结构相似的化合物区分开来；不含被测组分的样品以及结不含被测组分的样品以及结构相似的其他组分，均应呈构相似的其他组分，均应呈负反应负反应。 鉴别反应鉴别反应 四、检测限四、检测限 （limit of detection ,LOD） 检测限系指试样中的被测物在规检测限系指试样中的被测物在规定的实验条件下能被检测出的最低浓定的实验条件下能被检测出的最低浓度或最低量。它无需定量测定，只要度或最低量。它无需定量测定，只要指出高于或低于规定的浓度或最低量指出高于或低于规定的浓度或最低量即可。即可。 1. 1.非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度的

39、被测物用已知浓度的被测物, ,试验出能被可靠试验出能被可靠地检测出的最低浓度或最低量。地检测出的最低浓度或最低量。 2.2.仪器分析时的测定法仪器分析时的测定法 (1) (1) 采用采用UVUV或或FLFL法时法时 一般以多次空白试验的背景响应值的标一般以多次空白试验的背景响应值的标准差乘以准差乘以3 3作为检测限的估计值。应用时，作为检测限的估计值。应用时，要使计算得到的要使计算得到的LODLOD值与实际测得的值与实际测得的LODLOD值值相一致，还需用校正系数进行校正。相一致，还需用校正系数进行校正。 (2) (2) 采用采用GCGC或或HPLCHPLC法时法时 用已知低浓度样品测出的信号

40、与空用已知低浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比信噪比(S/N)(S/N)为为3 3 或或2 2 时相应的浓度或时相应的浓度或注入仪器的量来确定检测限。注入仪器的量来确定检测限。五五.定量限定量限（limit of quantitation, LOQ） 定量限系指样品中的被测物能被定量限系指样品中的被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应符定量测定的最低量，其测定结果应符合准确度与精密度的要求。杂质和降合准确度与精密度的要求。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。定定量限。 定量限常用信噪比法确定，一般以定量限常用信噪比法确定，一般以信噪比（信噪比（S/NS/N）为）为10 10 时相应的浓度或时相应的浓度或注入仪器的量来确定。注入仪器的量来确定。定量限与检测限的不同点: 定量限规定的最低测得浓度应该符合一定的精密度和准确度的要求。 确定定量限的方法也因所用方法不同而异。当用非仪器分析方法时，它与检测限的确定方法相同；如用仪器分析方法时，则往往将多次空白试验测