ZEISSLSCM780使用注意事项

1、ZEISS LSCM 780使用注意事项开机：(之前必须镜检，确保样本无误，开机后才发现样本不能实验者，取消两次实验资格)1. 开三相稳压电源 (注意：先开稳压电源后面的黑色扳手开关，再按下稳压电源前面的绿色按钮)。如果出现报警声，请马上关闭稳压电源，并报告负责教师。2. 两分钟以后依次打开电源控制板上的三个开关：先打开主开关MAIN SWITCH，再依次打开SYSTEMS/PC和COMPONENTS开关。注意：各个开关不要同时按下，开机时仪器会进行自检，每按下一个开关，请等待相应的部件自检完毕后再开下一个开关。3. 打开电脑开关。点击图标 ，进入桌面，当看到桌面右下角图标 时，方可点击桌面中

2、央的软件图标 ， 然后点击Start System开启软件。注意：当桌面右下角显示图标 时，不可启动软件。这时把电脑左边那台仪器的盖子掀开，按一下Reset按钮，等待显示图标 。 注意：如需使用458nm或488nm或514nm激光线，则在开启软件后再打开氩离子(Ar+)激光器。不需要使用这三种激光线，则不需要打开氩离子激光器。氩离子激光器的打开顺序：先打开氩离子激光器正面的开关ON ，再顺时针旋转钥匙至“”的方向，等待绿色指示灯亮起方可开启光路(大约5-10min)。注意：氩离子激光器在启动后，需要1h左右的预热时间才能进入稳定状态。如果它的闲置时间在1h以上，可将激光器扳钮由“laser

3、run”位置扳至“idle power”处，保护激光器，延长使用寿命。找细胞： 在明场下(用Transmitted light)找目标:点击、注意：如果实验只使用空气镜，放置样品后，建议先选择低倍物镜找细胞，再换用高倍物镜微调即可。切记调焦和移动前后、左右的滑竿时，不要太快太猛，以免物镜顶到样品或载物台，这会严重磨损和划花镜头，甚至碰碎镜头！切记显微镜左、右两边的粗准焦螺旋上方各有5个按钮，实验人员不要碰触，否则可能无法用眼睛找细胞。水、油镜使用：如需使用水镜或油镜，水、油不要滴太多，以免从镜头边缘流入物镜内部污染镜头。换细胞前后不要反复擦拭镜头，擦拭过多容易磨花镜头，降低透过率，一般两三个样

4、本后再追加一滴水或油即可。实验结束后先用擦镜纸将油擦尽，再用无水乙醇清洁。在荧光下(用Reflected light)找目标: 先打开汞灯电源，然后点击上图片中的、注意：一、除非实验转染的荧光蛋白效率低（镜检时发光的目标不多，但仍然可以进行试验），否则一般不要开汞灯，寿命有限。二、经镜检确定需要使用汞灯的标本应集中观察, 节省时间,保护光源，样本放置好后后再打开汞灯电源。切记：不可频繁开关汞灯，汞灯点燃后至少15分钟汞蒸汽才完全蒸发，因此打开汞灯后至少要30分钟后才可以关闭汞灯电源，汞灯关闭后不能马上再次打开使用，至少一小时以后等灯泡完全冷却后再开。激光扫描图像获取：用眼睛找完细胞以后，要切换

5、到激光扫描模式来获取图像。依次点击上图片中的：、按钮切记：从找细胞切换到图象扫描，一定要记得点击，否则容易损坏仪器。光路选择设定： 一、新设置光路：点击下图上的Smart Setup按钮，选择自己所用的荧光探针，设定所需的颜色，然后点击Best signal， 点击Apply按钮。注意：如果使用Ar+激光器,点击 Apply前,先确定激光器上的绿色指示灯亮起二、使用原来的光路： 在File中open之前实验所得的一张图片，点击页面最下方的Resue按钮，此时软件的一切参数均是打开的那张图片的参数。同样注意：如果使用Ar+激光器,点击 Apply前,先确定激光器上的绿色指示灯亮扫描参数设定：光路

6、设定后，点击上图中的Live按钮预览找目标，此时可以移动样品，微调焦，调图像荧光亮度，调透射图T-PMT亮度，调针孔大小等。 调好图像后，点击Live处的红色Stop按钮，再点击Snap按钮拍照。切记：预览结束后一定要先Stop，再点击Snap,否则立刻就会死机。激光器输出功率的调节要注意：激光器的输出功率越高，荧光图像和透射图图像就越亮，但会造成荧光样品的光漂白，长时间扫描或对荧光性质不稳定的染料尤其明显，所以实验中尽量不要把激光器的输出功率调的太高。调节激光器的输出功率时要逐步调节，不要一下子将光标拖到需要的功率，否则容易损坏激光器或AOTF(声光调节滤光片)。Pinhole的调节要注意：

7、Pinhole越小，图象的分辨率越高，但探测器收集到的荧光也越少，图像亮度就越小，一般先选1AU，如果图像过暗可适当增加。使用多通道（多Track）时,应使每个Track里设置的pinhole大小一致(optical slice一致)，以保证不同通道探测的都是细胞同一层面的荧光； 增益Gain (Master)的调节要注意：Gain (Master)的设置不宜太高，原则上增益不要超过800，同时Gain设置太高也会导致背景过高，降低图象的信噪比。如果信号太弱，可以适当调高放大器的增益（Digital Gain），其默认值为1，例如可以调高到1.5左右（不要超过2）。背景Digital offs

8、et的设定原则: 图象最亮点不超过饱和值256（显示红色），图象背景处的蓝色雪花点不宜太多（蓝色表示信号强度为零）。注意：准备样品的时候，请将探测通道先关闭（即将Track前的符号“”去掉），这样高压包上没有加电压，可以起到保护高压包延长寿命的作用。关机（与开机顺序相反）：1关汞灯：如果使用了汞灯，先把汞灯强度调到最小，再关闭开关OFF。2.关激光器：如果使用了氩离子激光器，在实验完成后，先将氩离子激光器正面的钥匙逆时针旋转至“”的方向，等待排风扇停止工作(大约5-10min)，再关闭开关OFF。 其它激光器直接在软件（Laser）中关闭。3. 退出系统软件。4.关闭电脑。5.依次关闭电源控制板上的三个开关：COM