实验4琼脂糖凝胶电泳检测DNA2010

1、会计学1实验实验4琼脂糖凝胶电泳检测琼脂糖凝胶电泳检测DNA2010关于电泳关于电泳CC DNALDNAOCDNA电泳方向：即溴化乙锭，它能够插入：即溴化乙锭，它能够插入DNADNA分子中的碱基分子中的碱基对之间而与对之间而与DNADNA结合。由于结合。由于EBEB分子的插入，在紫外分子的插入，在紫外光的照射下，凝胶电泳中的光的照射下，凝胶电泳中的DNADNA条带呈现出红色荧条带呈现出红色荧光，易于检测。可以检测光，易于检测。可以检测10ng 10ng 的的DNADNA注意：注意：EBEB是一种诱变剂，操作时一定要注意安全是一种诱变剂，操作时一定要注意安全，必须戴塑料或乳胶手套，必须戴塑料或乳

2、胶手套 : :是一种可代替是一种可代替EBEB的新型核酸染料，采的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测用琼脂糖电泳检测DNADNA时，时，GoldViewGoldView与核酸结合后与核酸结合后能产生很强的绿色荧光信号，其灵敏度与能产生很强的绿色荧光信号，其灵敏度与EBEB相当，相当，使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNADNA呈呈现绿色荧光，而且也可用于染现绿色荧光，而且也可用于染RNARNA。DNADNA的染料的染料琼脂糖凝胶的百分浓度分离线性DNA片段分离的有效范围(kb)0.360 50.620 10.710 0.80.97 0.51.26

3、0.41.54 0.22.03 0.1在在pHpH值为值为8.0-8.38.0-8.3时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带核酸分子带，在电泳时向正极移动，在电泳时向正极移动。采用适当浓度的琼脂糖凝胶介质作为电泳支持物，在。采用适当浓度的琼脂糖凝胶介质作为电泳支持物，在作用下，作用下，使分子大小和构象不同使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌入离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌入荧光染料荧光染料（如（如EBEB）后，在紫外灯下）

4、后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。可观察到核酸片段所在的位置。 实验原理实验原理溶解琼脂糖分离质粒DNA片段检测质粒DNA片段电泳样品DNA相对分子质量标准物电泳缓冲液沉降DNA并起指示作用电泳支持介质嵌入DNA中，在紫外灯下显色每班每班4组，约组，约30人人每组每组7人：人：1套琼脂糖凝胶电泳系统（电泳槽、套琼脂糖凝胶电泳系统（电泳槽、电泳仪、制胶板、有机玻璃槽、电泳仪、制胶板、有机玻璃槽、8孔梳子），孔梳子），20L或或10L移液枪移液枪1支，冰盒支，冰盒1个，个，50mL锥锥形瓶形瓶1个（贴上个（贴上EB标签）。标签）。每班配每班配2台电炉，线手套台电炉，线手套2副。副。1 倒胶

5、时把握好胶的温度，不要高于倒胶时把握好胶的温度，不要高于60 ，否则温度太高会使，否则温度太高会使制板变形制板变形2 胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏点样孔坏点样孔3 点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不要太多点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不要太多4 EB有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，胶勿乱扔有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，胶勿乱扔5 紫外线照射不要太久紫外线照射不要太久注注 意意凝胶电泳槽凝胶电泳槽：即溴化乙锭，它能够插入：即溴化乙锭，它能够插入DNADNA分子中的碱基分子中的碱基对之间而

6、与对之间而与DNADNA结合。由于结合。由于EBEB分子的插入，在紫外分子的插入，在紫外光的照射下，凝胶电泳中的光的照射下，凝胶电泳中的DNADNA条带呈现出红色荧条带呈现出红色荧光，易于检测。可以检测光，易于检测。可以检测10ng 10ng 的的DNADNA注意：注意：EBEB是一种诱变剂，操作时一定要注意安全是一种诱变剂，操作时一定要注意安全，必须戴塑料或乳胶手套，必须戴塑料或乳胶手套 : :是一种可代替是一种可代替EBEB的新型核酸染料，采的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测用琼脂糖电泳检测DNADNA时，时，GoldViewGoldView与核酸结合后与核酸结合后能产生很强的绿色荧光信号，其灵敏度与能产生很强的绿色荧光信号，其灵敏度与EBEB相当，相当，使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNADNA呈呈现绿色荧光，而且也可用于染现绿色荧光，而且也可用于染RNARNA。DNADNA的染料的染料琼脂糖凝胶的百分浓度分离线性DNA片段分离的有效范围(kb)0.360 50.620 10.710 0.80.9