养心草及其制剂的化学成分研究

1、养心草及其制剂的化学成分研究专 业：中药学研究生：张娜 导 师：郭素华 教授摘 要一、 论文综述：养心草的药学研究进展本文从临床及民间使用、药理学研究、生药学研究、化学成分、制剂及质量标准研究等方面对养心草的药学研究进行综述，为养心草进一步研究的开展提供参考。二、 养心草中槲皮素成分的HPLC-MS/MS分析用HPLC-MS/MS法定性确定养心草中含有黄酮类化合物槲皮素。用柱色谱洗脱养心草提取物，并用HPLC-MS/MS法测定槲皮素标准品和洗脱物，洗脱物中主要含有槲皮素，其保留时间是3.06，M+H峰为m/z303.4，质谱特征与标准品具有高相似度，验证了样品中含有槲皮素。三、 养心草的质量标

2、准研究描述了养心草的药材性状特征，并对其根、根茎、茎、叶的组织构造、解离组织、粉末进行显微鉴别。采用薄层定性鉴别药材粉末中槲皮素并用HPLC测定养心草中槲皮素的含量。选用SHIM-PACK VP C18（250mm*，10um）色谱柱，流动相为甲醇-0.4%磷酸（55：45），流速为1.0ml/min，检测波长为370nm。结果：槲皮素在1.21612.16ug范围内呈良好的线性关系，平均回收率为102.08%，RSD为2.71%。本法简便、快速、灵敏、准确、重现性好。制订养心草药材的质量标准，从而有效的控制养心草药材的质量。四、 养心草挥发油化学成分气相质谱联用技术分析分析研究养心草挥发油的

3、主要化学成分。用气质联用技术和标准质谱数据库检索技术分离鉴定各化学成分，用离子流色谱峰面积归一法计算各化学成分的相对含量。结果分离了44个化学成分峰，并鉴定出其中的17种化学成分和计算各组分的相对含量，其主要成分为2-十一酮、醋酸冰片酯、环氧石竹烯、十六酸等。五、 养心草胶囊的制备工艺及其研究 以槲皮素为对照品，用分光光度法测定养心草中总黄酮含量，检测波长430nm。样品经NaOH碱水浸泡提取，65乙醇沉淀，定容、显色后测定。槲皮素标准曲线线性范围112ug/ml相关系数r为0.9991。并用正交设计，研究养心草的最佳工艺条件六、 养心草胶囊的质量标准和初步稳定性研究 制定养心草胶囊的薄层鉴别

4、，专属性强，重现性好;制定了药品有效成分槲皮素为指标成分的含量测定方法，同时制订了养心草中槲皮素成分的含量限定。质量标准能有效地控制药品的质量。 为考察样品的稳定性，初步推测本品的有效期，并且考察包装材料对药品质量及稳定性的影响，将瓶装药品在室温六个月和温度3740、相对湿度75%条件下加速试验三个月，结果显示在正常室温稳定性和加速稳定性规定的考察期内样品各项质量检查指标均符合规定;表明样品稳定性良好，包装材料对样品亦无不良影响;推测本品的有效期为两年。关键词养心草；费菜；质量标准；挥发油；气质联用；槲皮素；高效液相色谱-质谱法；高效液相色谱法；含量测定；分光光度法；黄酮类；正交实验；药学研究

5、；进展The search of chemical component from Sedum aizoon L. and Yang Xin Cao capsuleMajor：chinese medicinePostguaduate：zhang naTutor：Prof.guo su huaABSTRACTPart one： Research on quality standard of Sedum aizoon.L.The histological characters of the root, rhizome, stem and leaf of the plant were reported

6、. The characters of the isolated tissue and powder were also involved. the content of Quercetin were identified by TLC.A HPLC method was established for the determination of quercetin in the Sedum aizoon.L.The SHIM-PACK VP C18(250nm*4.6nm,10um)column was used.The mobile phase was consisted of methan

7、ol-0.4% Phosphoric acid solutions(55:45).The detection wavelength was 370nm.The calibration curve of quercetin was in good linearity over the range of 1.216-12.16ug , and regression equation was Y=40386X-14138(r=0.9991). The average recovery rate was 102.08%,with RSD=2.71%.The results showed that th

8、e method is quick , sensitive,reproduciblel. The quality control is feasible and can be applied to control Sedum aizoon.L.Part two :Studies on Preparation technology of Yang Xin Cao capsuleThe contents of total flavonoids in Sedum aizoon.L.were determined by ultraviolet spectrophotometry, and compar

9、ed with Quercetin as control. The wavelengh was set at 430nm.Samples were extracted with water ,with 65%ethylalcohol, then dissolved and determined after color development .The result showed that the linear range of standard curve was 1-12ug/ml,r=0.9998.The recovery rate was 98.58%.By performing the

10、 orthogonal test,we studied the optimum technology condition.Part three:The Analysis of Volatile Oil from Sedum aizoon.L.by GC-MSOur study was to analyze the chemical constituents of volatile Oil from Sedum aizoon.L. The volatile Oil was extracted from the Sedum aizoon.L.by using the steam distillat

11、ion .The components were identified by gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS)and elucidated on the standard mass spectral data.The percentage of relative contents was demonstrated by Area Normalization Method,The resuils showed that forty-four components were separate,seventeen of which were id

12、entified and the percentage of relative components were demonstrated. The main components are undecan-2-one,Bornyl acetate, Caryophyllene oxide ,hexadeccanoic acid and etc.Part four:Analysis of quereetin in Sedum aizoon.L.byusing HPLC-MS/MS determination of quercetin in the Sedum aizoon.L. This pape

13、r described the determination of quercetin in Sedum aizoon.L.by using HPLC-MS/MS technique Comparing with standard sample,quercetin exists in the plant was confirmed.And the fragmentation mechanism was elicited by MS/MS method(daughter ion scan).Part five: Research on quality standard and preliminar

14、y pharmaceutical stability of Yang Xin Cao capsulewere identified by TLC, the content of Quercetin which is the effective element in the preparation and the medicinal material was determined as the index by HPLC. The quality control is feasible and can be applied to control the products from mass pr

15、oduction.It can be ensured the stability of the product's qualitIn order to examine the stability of medicine, and then infer the expiration data and test the effect of packing materials to the quality of the medicine. Put the sample into the plastic bottle in the indoor temperature for 6 months

16、, then do the accelerating experiment under the condition that the temperatureis 37-400C,and the relatively humidityis 75% for 3 months.All the results shows that the stability in the indoor temperature and the accelerating condition are according with the index of quality control in the limited dat

17、a, the packing materials has no reverse effect to the medicine, so it is can be inferred that the expiration data is two yearsPart six：Document review:Progress in Pharmic Studies of Sedum aizoon.L.In this paper ,we also sunarized the progress of the research of Sedum aizoon.L.in clinic and civilian

18、ueing ,pharmacology ,pharmacognosy,chemical consitituents,preparation and quality standard et al.It is a reference to futher study on Sedum aizoon.L.KEY WORDS： yangxincao； Sedum aizoon L.；quality standard； Volatile oil；GC-MS；quercetin； HPLC-MS/MS； HPLC； determination； total flavonoids； spectrophotom

19、etry； orthogonal experiment； Pharmic Research；progress.前言养心草，又名土三七，费菜，为景天科多年生草本植物，即是花卉又是药用植物，为我省药物志所收载。在福建省连城县民间有长期用药习惯，并已大量人工栽培，其味甘淡微酸，具清热凉血、平肝宁心的功效，尤其对心脏病有特效，被群众称为“救心草”。养心草在福建省连城县有零星的分布，但不多见，民间沿习用于防治心脏病屡见效验，因此有人又称“心脏病草”、“救心草”。连城县科学技术局的同志在连城县朋口兰花开发有限公司的协助下，在生态条件十分优越的朋口环保农民城建圃，对养心草进行规模技术开发，目前已建有苗圃基地

20、30亩，且全县约有300余户人利用庭院进行了小面积的种植，现在他们拟进行更大规模的人工栽培，因此此草药具有良好的民间用药基础及极具潜力的药用资源，值得大力开发研究，既是为治疗心血管疾病寻找一个良好的药物，又将为地方经济创造新的增长点，具有可观的社会与经济效益。据文献报道，该草药单用对心脏病、中风、咯血、衄血均有良好疗效，并可用于复方治疗多种相关疾病。目前对该植物的组织培养、野生转家种的栽培多有报道，对其化学成份的研究，国内外也有部分报道。但是对其进行系统的品质研究、临床上以明确指标确定其药用价值，对其剂型及工艺的研究，毒理学、药效学研究、有效部位的研究，尚无相关报道。本课题针对养心草具有良好的

21、民间用药基础及极具潜力的药用资源的现状，对其进行系统的药用价值研究及三类新药的基础研究。首先从降血脂方面对其治疗心脏病的功能进行临床指标确证。并对其剂型工艺进行研究，在毒理学、药效学研究的基础上，寻找其有效药用部位或成分。为申报新药打下基础。将为连城县的地方经济创造新的增长点，为开发山区资源、脱贫致富开发新路，具有良好的社会、经济效益。血脂异常(dyslipidemia)是血液脂质代谢异常的简称，指血中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)超过正常范围及(或)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低下，通常又称为高脂血症(hyperlipidemia)。血脂异常在动脉

22、粥样硬化(AS)的发生发展及其引起的心血管事件中起非常重要的作用，被认为是AS和冠心病（CHD）发病的重要脂类危险因素1,2。随着我国老龄化社会的到来，人民生活水平的提高，膳食结构的改变及体力劳动的减少，人群血脂水平已呈上升趋势，其引发的AS、CHD和脑血管意外等疾病的发病率和死亡率已进入上升阶段。从80年代初至90年代末的心血管主要危险因素变化趋势研究表明，我国各类中年人群高TC现患率在男女均显示有不断上升趋势，且上升幅度明显；9组可比性资料显示，男性平均上升了88%，女性平均上升了65%3。而心脑血管疾病死亡占总死因构成已从1957年的12.07上升至1997年的404。国际上著名的多危险

23、因素干预实验（MRFIT）的研究结果表明5，血清TC若>6.48mmol/L，其5年冠心病死亡率比TC<6.48mmol/L者高2倍以上，因此积极调节脂质代谢紊乱，防治高脂血症对于维护人类健康与长寿具有深远的意义。自20世纪60年代起，多个国家进行了一系列旨在降低胆固醇以期降低冠心病发生率和死亡率的临床干预实验6，研究显示有效的降脂治疗可稳定粥样斑块，减少斑块破裂，防止血栓形成，改善内皮功能，降低冠心病及其他心脑血管疾病发病率和死亡率。降脂治疗除改善饮食习惯和生活方式以外，调脂西药主要包括：3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂；烟酸及其衍生物；贝特类；胆酸螯合

24、剂；多不饱和脂肪酸类等等7,8。治疗高脂血症的西药降脂快速、显效，但多数药物存在不同程度的胃肠道反应或肝肾功能损害或肌病、横纹肌溶解症等其他的毒副作用，有部分药物尚未得到长期使用安全性的评价，仍有待大规模的临床验证8,9。截至目前，尚无完全满意的能够纠正脂质代谢异常的药物。祖国医学中多数学者认为高脂血症是一个以“肝、脾、肾三脏之虚为本，痰浊、瘀血为标”的病证，在中医药治疗上以痰瘀学说为理论依据，按本虚标实两大证施治，当以滋养肝肾，调理脾胃治本，祛痰化浊，活血化瘀治标的综合治疗为大法1012。中药成分复杂，其降脂能调节脏腑功能，增强机体代谢以澄源治本，又疗效较稳定持久，且药源丰富，在预防或减轻疾

25、病上是多途径多环节的，因此在中医药学这个宝库中寻找疗效高、稳定持久、毒副作用甚小的中草药显得具有十分重要的意义。近十几年来，中医药学对降脂药物研究十分广泛。目前国家法定标准明确提出降脂作用，且作用较单一的的单味中药及有效成分如山楂、月见草油、女贞叶乙醇提取物等和复方制剂如血脂康、脂必妥等具有良好的调节脂质紊乱13,14。发现养心草在福建民间用于治疗心血管疾病有良好效果。现代药理研究表明养心草对肝脏脂肪的升高、对肝脏病理有保护作用，其含有阿魏酸类似结构的羟基桂皮酸，有降血脂增强代谢呈现“适应原”的作用。本课题组通过前期实验研究已初步证实养心草胶囊可明显降低高脂血症小鼠的胆固醇及甘油三酯水平，为探

26、讨养心草胶囊的进一步调节血脂的作用，本实验采用高脂乳剂复制高脂血症大鼠模型，观察养心草胶囊对大鼠血脂的影响，初步探讨养心草胶囊调血脂的作用机理，并观察养心草胶囊急性毒性与长期毒性反应情况，以评价该药的有效性及安全性，为进一步开发成一种安全、有效的调脂新药，提供一定的实验依据，同时对于我省地道药材的开发应用和寻找防治高脂血症的有效新药具有重要的现实意义。第一章： 养心草的药学研究进展养心草，又名费菜、土三七、吐血草等，来源主要为景天科植物费菜（Sedum aizoon L. ）和横根费菜（Sedum kamtschaticum Fisch.）的根及全草。前者在我国广为分布，后者主要分布于我国北方

27、的河北、山西、内蒙古等地43。品种考证最早出自救荒本草44，植物名实图考也将其作为土三七品种之一加以描述43。功类三七，故名景天三七、土三七、见血散43。我国各地药物书籍还有记其异名为：八仙草、血山草、马三七、白三七、胡椒七、晒不干、见血散、活血丹、墙头三七、回生草、七叶草、九头三七等。各地植物志上，原植物费菜（Sedum aizoon L.）还有称作六月淋、收丹皮、石菜兰、九莲花、长生景天、细叶费菜、乳毛土三七，多花景天三七、还阳草、金不换、豆瓣还阳、六月还阳、汉三七等，横根费菜（Sedum kamtschaticum Fisch.）还有称作堪察加景天，石板菜、黄菜子、金不换、北景天等71。

28、其中费菜（Sedum aizoon L.）为景天三七的主流药材，在全国许多省份都有流通销售，横根费菜，又名堪察加景天，只在少数地区自产自销，产量较少43。费菜作为地方药物被江苏省中药材标准所收载45。近年来，费菜作为一种新兴的保健蔬菜得到人们的重视和推广，并有制养心茶和费菜汁、酿酒、烤胶46,47等加工利用。据网上资料显示，费菜及横根费菜在欧洲、俄罗斯及远东地区、日本、韩国都有栽培及分布，主要作为园艺花卉植物，而费菜在日本和韩国有一定民间药用，我国部分粗加工产品外销日本等地。但景天三七的深加工及药物开发尚处起步，其系统的功效及成分研究尚不多见，本文对景天三七的药学研究进行综述，为景天三七进一步

29、研究的开展提供参考。1 临床及民间使用景天三七味甘、微酸、性平，归心、肝经，有散瘀止血，宁心安神、解毒等功效71。临床常用于治疗多种病症：1.1 止血活血：具有良好的止血效果，主治吐血、衄血、咯血、便血、尿血、崩漏等。尤其对各类咯血症状有显著疗效，并对紫斑、外伤出血、跌打损伤有一定疗效43。1971年报道三七糖浆、鲜汁与针剂对白血病、再障、血小板减少性紫癜、支气管扩张咯血、肺结合咯血、消化道出血等疾患的出血有效，并认为它有升血小板作用，可用于各种血小板减少症状并可外用止血48。用新鲜叶片滤汁治疗肺癌患者大咯血、鼻衄血20例，出血均一次根治，不再复发49。1.2 养血安神：临床上用于治疗神经衰弱

30、、失眠、烦燥不安等，多与其它药物配伍使用43。1.3 解毒消肿：用于疮疔痈肿、虫蝎咬伤、烫火伤及妇女白带等。刘云50报道了他用民间验方“景天三七鲜叶捣烂外敷”治疗蜂螫五十例，均获痊愈，认为有良好的解毒消肿、止痛作用。郑长宏报道51鲜景天三七捣烂后，用醋或酒精调敷治疗患病不同时间的急性单纯性关节扭伤180例，获得良好效果。1.4 防治心脏病、降血压：在浙江、福建等地称其为养心草，长期作为菜蔬及药物用来防治心血管疾病，林金水报道了民间使用治疗风湿性心脏病的病例，并认为其除可防治心脏病，对老年人的血管硬化、高血脂、高血压等病症也有缓解作用，并提供了用鲜全草炖猪心治癔病的方子52。陈伟超报道了几年来采

31、用景天三七鲜草治疗老年性中风，中风患者服药后可在24小时至48小时内恢复知觉，认为本品有明显的促进血液循环、化瘀压降作用53。有人解释为费菜味酸，性平，酸能滋阴养血，故能治心血耗损的心悸怔忡（心律失常，阵发性心动过速）；酸还能入肝，养肝阴，性平不燥，所以有平肝潜阳治疗高血压的功效。并举例蜂蜜水调服鲜费菜治高血压，心烦面红者的处方54。1.5 其它用途：民间认为可强壮身体，治疗虚弱等43。2 药理学研究 1974年国外药理研究翻译报道，费菜的浸剂在对家兔和蛙进行的试验中，有加速血液凝固，收缩血管和兴奋心脏的作用，费菜的提取液还有镇静和降压作用，并能减低苯丙胺的毒性和扩张冠状动脉血管的作用55。

32、以费菜制得的景天三七注射液（水提醇沉法制得），景天三七白色结晶注射液（可能为有机酸）给小鼠（腹腔）、兔（静脉）注射，可使血凝时间（毛细管法）缩短27%和54%，糖浆给兔灌胃也能缩短血凝时间（60%）及出血时间（37%）56。3 生药学研究31原植物形态费菜在地理分布上从北到南跨幅极大，饶广远指出费菜在这属植物中形态变异最大，特别是在叶形、叶齿和茎有无分枝上，都是适应不同生存环境的结果，认为植物在喜好的环境下常能长出腋生枝条，茎的生长点遭破坏也会分枝所以他将多花景天（Sedum floriferum）和兴安景天（Sedum hsinganicum）都作为费菜的异名处理57。谢宗万在论著58中讲述

33、土三七的品种时，包括了费菜和横根费菜，并以两者的原植物作了比较描述，差别主要体现在是否常绿过冬，根茎形态，叶形，花色及有无花梗，果色及地理分布上。32显微组织乌克兰学者ILYINSKA 对景天属的费菜（Sedum aizoon L.）、横根费菜（Sedum kamtschaticum Fisch.）及Sedum hybridum L.的茎和叶作了解剖学的研究报道59，认为解剖学上的差别和外形上的差别息息相关，前两者在解剖学特征上更相似，第三种更独立，这一观察支持了它们现存的分类学上的位置，作者还描述了每一种不同于其它的特征，其中费菜叶表皮有变型异细胞（amoebic idioblasts），在

34、叶肉细胞、茎的基本皮层组织及中柱中央均无含鞣质的细胞；横根费菜的叶中，叶肉细胞、上皮细胞珠状加厚的垂周壁均略有差别，茎表皮所有的细胞均含鞣质。程艳芹等人60对采自湖北神农架林区的费菜进行了形态组织学研究，描述了药材性状特征，并对根、根茎、叶和花的组织构造以及解离组织和粉末特征进行了研究。郑艳61在对12种安徽产的景天属植物的花粉作的电镜观察，发现费菜的花粉立体形状为近球形，赤道观为宽椭圆形，极面观为深三裂三解形。花粉粒大小为13.36(13.36-13.70)×12.73(12.06-13.24)um. P/E值为1.05。三孔沟，角萌发孔，沟中央较两端宽，沟边缘粗厚，孔呈云雾状，内

35、孔不规则。外壁两层，内、外层约等厚，厚度，表面具清晰的条网纹饰。韩国的Kim Jeong Hee62也对包括费菜在内的20种景天属的花粉进行了电镜观察，认为该属花粉变化很大，在不同种甚至在同一标本的同一花序上，萌发孔的数目和形态及表面饰纹都可能有多种类型存在。郑艳在对景天属植物叶表皮进行电镜研究63的过程中，认为景天属的叶表皮气孔为不等细胞型，气孔大小、气孔器分布特征、气孔密度、表皮毛等种间差异较大；费菜气孔长25.42m,宽5.42m ,长宽比，分布特征是多个聚集成群，中脉处几无气孔分布，气孔分布密度为m2,气孔指数。 33鉴别研究 丁毅等人64采用薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳方法，分别测定了

36、费菜和轮叶景天不同营养器官的同工酶谱，并根据电泳后所显示的酶带数计算出品种间的相似性系数，分析同为景天科的两种植物存在的差异及原因，结果表明：造成这种差异的根本原因在于两种植物基因间的差异。药材上，吴维春报道费菜曾在东北一些地区作为高山红景天的混淆品种植使用，并作植物和药材的形态比较，认为种子从外观上不易区别，但植物形态上差异很大，药材性状上主要是粗细及分枝多少的不同65。鲍锋海等人在对内蒙古赤峰地产柴胡的原植物的调查及鉴定过程中，发现有以费菜根系掺伪的现象66。34栽培及组织培养1987年，芮和恺等人67就以MS为基本培养基，加BA 2诱导愈伤组织和芽分化，以费菜嫩叶产生愈伤组织，最后形成完

37、整植株。罗林会等人也以去叶后只带一个节的嫩枝茎段，诱导芽后生成小苗的方法，实现了离体快速繁殖68。安铁生报道,景天三七野生转家种栽培技术及开发研究通过鉴定，并通过对不同部位、不同扦插期、不同基质、不同生长激素的处理，后又对生长密度、肥料、不同采收期和加工方法的试验，得到了4个高产品种及总结出整套栽培加工技术69。4 化学成分krasnov 1971年发现费菜根含齐墩果酸、-谷甾醇、熊果酸和熊果苷43，1973年用光谱法对景天属的一些植物中的熊果苷作了测定70。费菜的地上部分中含有葡萄糖、果糖、蔗糖和2种7碳糖，并且用同位素观察其中芳香物质生成过程中发现景天庚糖，并认为可能含生物碱55。Kras

38、nov于1977年对景天属中生物碱作了研究，发现了费菜中有消旋-甲基异石榴皮碱、左旋景天宁和消旋景天胺71。Gnedkov 对景天科一些种类包括费菜的化学成份比较时，发现Sedum属的10个种中有柠檬酸、苹果酸、琥珀酸和酢浆草酸，并有槲皮酮和Kaempferol72。Revina对生长在托木斯克的景天属植物生物特性和化学成份研究发现包括费菜在内的三种植物地上和地下部分均含复杂酚类成分，有机酸和多元酚的含量在开花时最高73。1996年波兰学者Maria W对费菜的地上部分的多元酚成份作了系统研究，从分离出没食子酸、没食子酸甲酯、槲皮酮、槲皮苷、杨梅黄酮、杨梅苷和新的酰化黄酮类成分： 槲皮酮-3-

39、(2-没食子酰基)鼠李糖甙。以化学和光谱的方法测定了这些化合物的结构。并对香豆素和酚酸类成份作了色谱研究74。 横根费菜中，Zapesvchnaya 发现了杨梅素-3-葡萄糖苷、杨梅素-3-半乳糖苷、杨梅素-3-O-D-（6”-O-没食子酰基）-葡萄糖苷和杨梅素-3-O-D-（6”-O-没食子酰基）-半乳糖苷43。 Gill Stanislaw发现其中有熊果苷和氢醌75。 KimJeong Hee等人对亚洲景天属包括横根费菜在内的三个组植物叶的生物碱进行研究，在横根费菜叶中未发现生物碱76。此外，Shnyakina对十六种Sedum属中酚性成分检测，发现杨梅酮及苷和槲皮苷是包括两者在内的Aiz

40、oon组的优势成分77。 此外，费菜每百克嫩茎叶含水分87g,蛋白质，脂肪，碳水化合物8g，热量千焦耳，粗纤维,灰分，钙315mg，磷39mg，铁3.2mg,胡萝卜素2.54mg,维生素B10.05mg,维生素B2，维生素PP0.9mg,维生素C90mg.尤其含钙量很高，因此费菜嫩茎叶作菜有一定的营养价值82。5 制剂及质量标准研究宋金斌等人通过景天三七栽培品和野生品比较热空气杀青后干燥、自然干燥、硫黄熏蒸后干燥以及热水浸烫后干燥等加工方法，以药材样品的水溶性浸出物、醇溶性浸出物、总生物碱及薄层色谱等的分析比较，认为相同加工方法的栽培品和野生品药材质量无显著差，扩大了可用药源，但不同加工方法对

41、质量有一定影响，并认为不宜用硫黄熏蒸和热水浸烫杀青的方法73。 陈华珍等以芦丁为对照品，用分光光度法分别测定了费菜中不同器官中的总黄酮含量，结论是含量高低依次为：老叶、嫩叶、花和茎；并用聚酰胺片对药材中槲皮素进行了薄层层析的鉴别72。 费菜作为药材收入江苏省中药材标准。制剂有景天三七糖浆及养心片。景天三七糖浆曾收载于77版药典一部，现部颁标准中收载，为单味景天三七带根全草的糖浆制剂，以没食子酸为对照品，氯仿：醋酸乙酯：甲醇：甲酸（2：1：0.6:0.7）为展开剂进行薄层鉴别。养心片为景天三七为主，加上枸杞子、珍珠母、蜂皇浆的提取浸膏压制的片剂，收入浙江省药品标准。郭素华以槲皮素为对照品，用分光

42、光度法对自制养心草胶囊进行了总黄酮的含量测定，检测波长430nm,样品经70%乙醇回流提取，正丁醇萃取，定容，显色后测定。槲皮素标准曲线线性范围112g，相关系数r为0.998，加样回收率为98.58%,并用正交设计，研究养心草的最佳工艺条件31。 景天三七是一个药食两用的药物，在民间有很广泛的应用基础，它对心血管方面的作用近些年在民间被普遍注意，并被认为可以降血脂和降血压，在现在心血管类疾病日趋增加的今天，这个过去被认为是止血良药的草药，开发其成为心血管方面的药物以及其它保健类产品，具有良好的市场前景。本文综述为进一步研究景天三七提供依据。希望此文能抛砖引玉，兴起更多对它的观注和研究，使其能

43、为造福人类作出新的贡献。第二章：养心草中槲皮素成分的HPLC-MS/MS分析养心草，国内研究尚无其有效成分的相关报道，国外文献中，从波兰产的同种植物中分离出含槲皮素等的黄酮类成分和其它酚酸类成分。槲皮素具有多种生理活性。其中降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等活性，对冠心病及高血压患者有辅助治疗作用。为了进一步开发养心草的药用价值，选取控制质量的指标性成分，为了确定闽产养心草中是否含有槲皮素，我们采用柱色谱分离，高效液相色谱质谱法进行验证。一、 养心草中槲皮素成分的分析1 仪器与试剂仪器： Waters LC-MS/MS分析仪； 旋转蒸发仪（R

44、E52-99DLSB5/2型） 上海亚荣生化仪器厂药品与试剂 槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号00819304） 养心草（福建连城兰花公司提供，经本院中药鉴定教研室车苏容老师鉴定，品种定为Sedum aizoon L.） 甲醇为色谱纯；石油醚，乙酸乙酯，乙醇等试剂均是分析纯。2 实验方法液相色谱条件：色谱柱：Symmetry，×150mm，3m；流动相：甲酸，乙腈，梯度洗脱。质谱条件：仪器：Quattro Premier三重四级杆串联谱仪；电离方式：ESI选项性正离子检测；扫描方式：Full Scan，Daughter Scan（全程扫描，子离子扫描）2.3 供试品溶液的制

45、备将养心草药材剪碎用95乙醇回流次，两次。合并浓缩，烘干硅胶伴样装硅胶柱，石油醚和乙酸乙酯梯度洗脱得到石油醚：乙酸乙酯（5：5）部分过聚酰胺柱，分别用水，40，70乙醇洗脱，70部分即为供试品溶液。3 实验结果3.1 在本文所建立的色谱方法中，槲皮素和其他杂质成分分离度高，再加上选择性正离子检测的专属性和灵敏度过，使得分析结果的准确度，精密度和检测限得以保证。测得槲皮素对照品（A）,养心草提取样品（B）的典型色谱见图10。槲皮素的保留时间是3.06min，m/z303.4，相应的柱效理论塔板大于5000。A 槲皮素标准品的总离子流图（TIC）B:养心草供试品总离子流图（TIC）图10 槲皮素标

46、准品和养心草供试品的总离子流图3.2 测得槲皮素对照品（A）在保留时间为3.05和供试品（B）保留时间为3.06相对应的质谱图（见图11）。图9 槲皮素标准品和养心草供试品对应的质谱图2 结论AB图11 槲皮素标准品和养心草供试品对应峰的质谱图4 结论标准品（A）中槲皮素和供试品（B）对应峰MS谱图产生6个主要的特征性碎片离子m/z285、273、239、229、211（见图2），m/z303.4为槲皮素的M+H峰。配合离子扫描的数据，验证了样品中含有槲皮素存在。第三章：养心草的质量标准研究 养心草为我省民间使用药物，又名土三七。药用全草，具活血化瘀、止血之功效。临床用于治疗跌打损伤、劳伤、吐

47、血、便血、外伤出血等症。近年来，该植物在我省民间防治心脏病方面广泛应用，被用于降血脂、降血压及其它相关心脏疾病，并被称为“救心草”或“救心菜”。为进一步开发利用该药用资源，我们从显微，鉴别，含量测定几个方面对其进行研究，从而确定养心草的质量标准。1实验仪器与材料实验仪器LEICA旋转石蜡切片机；尼康E200三目显微镜；尼康Coolpix5100数码相机。尼康SUMSING显微描绘器。岛津SPD-10A VP高效液相色谱仪SPD-10A VP 紫外检测器，CMB-102色谱工作站（岛津），微孔滤m）1.2 实验材料槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号00819904，纯度为99.88）养心

48、草（原植物采自福建连城梅花山栽培品种，移栽本校药圃，标本保存在福建中医学院标本室。干燥药材为带根全草，由福建连城朋口兰花有限公司提供）。2实验方法与结果21药材性状描述取养心草全草药材，对形状、大小、色泽、表面特征、质地、及气味等性状进行描述。本品为带根茎及根的全草，叶极易脱落而不见。根茎粗短膨大不分枝，直径约2-3cm-1cm,粗细不一，表面棕有褐色表皮，下部易脱落露出灰黄色内表面，茎节上具有明显叶片脱落后的痕迹。质坚脆，易折断，上半部断面中空。叶多皱缩成线条状，灰绿色至褐绿色，易脱落，展开后，叶片长披针，顶端钝尖，基部楔形，叶上半部边缘具有锯齿。气微味淡，泡水后略带油香气。22显微鉴别22

49、1组织构造观察：取新鲜全草，对根中部、茎下部木栓化部位及茎中上部未木栓化部位、叶片前端宽阔处中段及楔形基部中段作横切面的徒手切片及石蜡永久切片，采用显微摄影后透视描绘墨线图及用显微描绘器描绘。2211 根的横切面木栓层由数列棕黄色细胞组成，木栓细胞切向延长，常有部分脱落。皮层较宽广，约占横切面直径的1/2，由十几列圆形、类圆形或椭圆形细胞组成，壁薄，排列疏松。形成层明显，韧皮部约占直径的1/4，在于木质部的外方排列成环，筛管群成群散在。木质部约占直径的1/4，全部木化，由导管和木薄壁细胞组成。图1 养心草根横切面简图（×20）1木栓层 2侧根迹 3皮层 4韧皮部5 木质部2212根茎

50、横切面木栓层由数列棕黄色细胞组成，木栓细胞切向延长，常有部分脱落。皮层约占横切面直径的1/3，由十几列圆形、类圆形或椭圆形细胞组成，壁薄，排列疏松。形成层明显成环。韧皮部成环，筛管群散在于形成层外方。木质部束约有10-13个，排列成环，导管群呈T字型排列成U字型或W字型环列，髓位于根茎横切面的最内方，约占横切面直径的1/3，由类圆形或圆形薄壁细胞排列而成，细胞大小不一，排列疏松。图2养心草根茎横切面简图（×20）1木栓层 2皮层 3韧皮部4形成层 5导管群 6髓2213茎横切面横切面略成五边形。最外层为一层切向延长的椭圆形表皮细胞，外表面角质化增厚。表皮下2-3层细胞较小，细胞间角质

51、化增厚。皮层宽约占直径的1/2，内皮层明显可见，形成层成环，约成五边形，维管束10至13个成环状排列。中部髓宽广，多为类圆形的薄壁细胞，排列疏松。图3 养心草茎横切面简图（×5）1表皮 2皮层 3内皮层 4韧皮部5木质部 6髓 7木质部2213叶片横切面观察上下表皮细胞各一列，细胞呈类圆形或圆形，排列紧密，大小不一，细胞壁角质化增厚，上下表皮均具气孔。叶肉细胞圆形、椭圆形或不规则型，排列疏松，无栅栏组织与海绵组织的分化。主脉仅有一个维管束，维管束外韧型，木质部位于上方；韧皮部位于下方，筛管成群分布形成半月形。叶片中部横切，上表面平坦，下表面主脉处明显向下凸出；叶片基部横切，主脉处的上

52、表面略向下凹陷，下表面明显向下凸出。图4 养心草叶横切面简图A叶片中部横切 B叶片基部横切1上表皮 2叶肉组织 3维管束 4下表皮222 药材粉末及组织解离观察茎的粉末中导管多为螺纹导管和环纹导管, 直径15.045.0微米，根茎和根的粉末中尚可见少量孔纹导管和具缘纹孔导管。木纤维呈淡黄色，两端梭形或渐尖，长85.0165.0微米，直径25.055.0微米，壁厚7.510.0微米，有的纤维表面可见人字形或点状纹孔。木栓细胞多角形紧密排列，略成裂瓦状，细胞壁木栓化加厚，大小不一，有的内含有红棕色物质。尚可见角质化加厚的表皮细胞，垂周壁呈波状不均匀加厚。图5养心草粉末图（×1000）1导

53、管 2木栓细胞 3表皮厚壁细胞 4纤维23 养心草药材粉末中槲皮素的薄层鉴别 供试品溶液的制备：取养心草药材粉末，放置具塞三角瓶中，加甲醇5ml，密塞，振摇10min，放置10min后过滤，得到样品液。对照品溶液的制备：取槲皮素对照品适量，加甲醇使成1ml含1mg的对照品溶液。薄层层析：将上述两种溶液分别点于同一硅胶G板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（8：2：1）为展开剂15，展距11cm，取出晾干，喷以三氯化铝溶液，于105ºC烘10min后置紫外灯365nm处检视，供试品溶液在对照品槲皮素相应的位置有显相同颜色的荧光斑点（有干扰色），见图6。 图6 甲醇提取液的薄层色谱图 图7 柱层

54、析后的薄层色谱图 注：1药材样品液 3槲皮素对照品液 注：2药材样品液 3槲皮素对照品液硅胶柱分离后的薄层鉴别精密秤取养心草药材粉末3g，分别置于索氏提取器中，加100ml乙醚回流至无色，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，再加70%乙醇100ml，加热回流至无色，提取液浓缩至干，加70%的乙醇溶解，定量转移至50ml的容量瓶，70%乙醇定容，得到粗提液；精密移取10ml至蒸发皿中，挥干乙醇，加水溶解，定量转移至分液漏斗，加正丁醇20ml、15ml、15ml依次萃取三次，合并萃取液，挥干正丁醇，加少量甲醇溶解，用1g硅胶吸附，烘干后得到样品粉末。湿法上柱，先以甲苯50ml洗脱，再以甲苯：乙酸乙酯（8：2

55、）50ml洗脱，洗脱液均弃掉，最后以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（体积比为8：2：1）洗脱，先弃去20ml，再收集15ml洗脱液，得样品液，将样品液和对照品溶液分别点于同一硅胶G板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（体积比为8：2：1）为展开剂15，展距11cm，取出晾干，喷以三氯化铝溶液，于105ºC烘10min后置紫外灯365nm处检视，供试品溶液在对照品槲皮素相应的位置有显相同颜色的荧光斑点（有干扰色），见图7。23 含量测定2. 31实验条件2. 311色谱条件色谱柱：SHIM-PACK VP C18（250mm×，10m）流动相：甲醇0.4磷酸（55：45）；min-1；检测波长

56、：370nm；进样量：20L。2. 312用二极管矩阵检测器分析了槲皮素对照品峰及养心草中所测成分相应色谱峰的紫外光谱，结果紫外光谱基本一致，均在370nm处有一最大吸收。2. 32 对照品溶液的配制精密称取对照品3.04mg，置50ml容量瓶中，加入gmL-1的对照品溶液。2. 33 供试品溶液的配制精密称取养心草药材粉末1g，置索氏提取器中，加100mL甲醇加热回流至无色，回收甲醇至40mL，将提取液转移至50mL量瓶中，定容，摇匀。精密吸取20mL，加入10mL20的盐酸溶液，10mL甲醇水解1h，冷却，转移至50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤（m），即得。2. 34 养心草药材水解时间的确定养心草生药材经干燥粉碎后，精密称取2g，置索氏提取器中，加150mL甲醇加热回流至无色，回收甲醇至约90mL，将提取液转移至100mL量瓶中，定容，摇匀，作为总样储备液。从总样储备液中精密吸取20mL样品液，共3份，加入10mL20的盐酸溶液，10mL甲醇分别水解，A：0.5h；B1.0h；C1.5h。冷却，将水解液转移至5