菠菜基因组 DNA 提取方法与条件的研究

1、菠菜基因组菠菜基因组DNADNA提取方法与条件的研究提取方法与条件的研究丛 娟, 李晓玲, 宫 莉, 李连贵 长春工业大学学报(自然科学版)前前 言言实实 验验 部部 分分结果与讨论结果与讨论结结 论论本研究以菠菜叶片为材料,分别采用 CTAB(十六烷基三甲 基溴化铵)法、SDS法、高盐低pH法提取其基因组DNA, 研究了不同提取方法和条件对DNA提取效率和纯度的影响,并对CTAB法提取条件进行了 正交实验优化,得出了菠菜中基因组DNA提取的适宜条件。分子生物学实验和研究多是以提取研究对象的基因组DNA为起点。但由于植物材料有坚固的细胞壁,核酸含量又较少，而多糖物质和色素含量却较高,且核酸酶活

2、性较高, 这就给植物DNA的提取带来了困难。 AC1一、前言一、前言1、实验材料：、实验材料：新鲜洁净的菠菜幼叶AC二、实验部分二、实验部分2 2、DNADNA提取提取液氮研磨液氮研磨菠菜叶片菠菜叶片氯仿氯仿- -异戊醇异戊醇离心离心提取缓冲液提取缓冲液水浴水浴取上清取上清异丙醇异丙醇沉淀沉淀DNADNATETE缓冲液溶解缓冲液溶解3 3、确定纯度、确定纯度4 4、琼脂糖凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳相关计算公式相关计算公式稀释倍数）浓度（LODDNA020. 0ml/g260L-比色杯厚度，一般为1cmOD260-260nm波长处的吸光值0.020- 1mL溶液内含1gDNA钠盐时的光吸收值A26

3、0/A2801.8,A260/A2801.8,说明提取的说明提取的DNADNA中蛋白质基本除尽中蛋白质基本除尽A260/A2302.0A260/A2302.0，说明提取的，说明提取的DNADNA中中RNARNA基本除尽基本除尽AC1三、结果与讨论三、结果与讨论提取液用量对提取液用量对DNADNA得率和纯度的影响得率和纯度的影响水浴时间对水浴时间对DNADNA得率和纯度的影响得率和纯度的影响氯仿氯仿- -异戊醇用量对异戊醇用量对DNADNA得率和纯度的影响得率和纯度的影响异丙醇用量对异丙醇用量对DNADNA得率和纯度的影响得率和纯度的影响正交实验正交实验就CTABCTAB法中提取液用量、水浴时间

4、、氯仿-异戊醇用量、异丙醇用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响进行了L9(34)L9(34)正交试验采用直观分析法对正交实验结果进行计算分析, 得出各指标的优选方案。 A260/A230:A3B3C3D1 A260/A280:A3B1C3D3得 率:A2B2C2D1再采用综合平衡法分析,得出CTAB法优选方案为:A2B3C1D3A2B3C1D3 , 即提取液用量为2.2 mL/g材料、水浴时间为 90 min、氯仿-异戊醇用量为2.4 mL/g材料、异丙醇用量为2.1mL/g材料。结果结果用优化后的CTAB法从菠菜叶片中提取并纯化DNA,进行琼脂糖凝胶电泳1-3泳道为10ng/L的标准Marker(未酶切DNA,其大小为50kb)上样量分别为1L，2L，4L,4-6泳道为提取出的菠菜基因组DNA经TE溶解并稀释500倍,上样量分别为1L,2L,4L(经估算,DNA含量分别约为