人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2培训讲学

1、人血浆人血浆(xujing)(xujing)脂蛋白相关磷脂酶脂蛋白相关磷脂酶A2A2 血管内皮炎症的独立危险因子血管内皮炎症的独立危险因子 促进动脉促进动脉(dngmi)(dngmi)粥样硬化（粥样硬化（ASAS），是新的），是新的ASAS的危险因子的危险因子 能够独立预测能够独立预测ASAS的风险的风险 心脑血管疾病的提示性指标心脑血管疾病的提示性指标 独立预测心脑血管栓塞性疾病独立预测心脑血管栓塞性疾病第一页，共28页。1.1.研发研发(yn f)(yn f)背景背景1.1 1.1 中国主要中国主要(zhyo)(zhyo)疾病死亡率疾病死亡率男性女性恶性肿瘤心脏病脑血管病呼吸系统疾病来源：

2、2010中国(zhn u)卫生统计年鉴第二页，共28页。1.2 1.2 美国美国(mi u)(mi u)主要疾病死亡率主要疾病死亡率SourceSource : :National Center for Health Statistics 20National Center for Health Statistics 201010第三页，共28页。 心脑血管疾病是造成人类死亡的主要疾病，预防检测和治疗心脑血管疾病一直是全世界医学工作者努力不懈的目标。而心脑血管疾病的病理基础就是(jish)动脉粥样硬化，那么，动脉粥样硬化是怎样形成的呢？第四页，共28页。1.3 19761.3 1976年年RR

3、ossRRoss提出提出(t ch)(t ch)了损伤了损伤反应学说反应学说 近年来研究的最大成就是认识到动脉粥样硬化是一种炎性反应性疾病，炎性细胞及其释放的产物已经被认为是最主要的促动脉粥样硬化的因素。 在粥样斑块形成(xngchng)、进展和最终破裂的过程中均有炎性反应介质的参与。第五页，共28页。 因此，寻找一个能够(nnggu)反应这种动态变化过程的介质就尤为重要了，目前国际上已经把脂蛋白相关磷脂酶A2 （Lipoprotein- Associated Phospholipase A2 Lp-PLA2)作为一种新的炎性反应标志物。第六页，共28页。2.作用作用(zuyng)机制及临床意

4、义机制及临床意义2.1 作用作用(zuyng)机制机制 2.2 作用作用(zuyng)示意图示意图 2.3 临床意义临床意义 2.4 目前检查的局限性目前检查的局限性 第七页，共28页。2.1 作用作用(zuyng)机制机制 脂蛋白相关磷脂酶脂蛋白相关磷脂酶A2，英文简写，英文简写Lp-PLA2 又称血小板活化因子乙酰水解酶（又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH） 分子量为分子量为45K Da 由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并 受炎性介质的调节受炎性介质的调节 80%与低密度脂蛋白（与低密度脂蛋白（LDL）结合）结合 能水解低密度脂蛋白上的

5、氧化卵磷脂，生成促能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，生成促 炎物质，因此炎物质，因此(ync)具有促炎症和促动脉粥样硬化具有促炎症和促动脉粥样硬化的的 作用作用 第八页，共28页。Lp-PLALp-PLA2 2水解动脉内水解动脉内膜上的膜上的LDLLDL中的氧化中的氧化卵磷脂（卵磷脂（ox-PCox-PC）溶血卵磷脂（溶血卵磷脂（Lyso-Lyso-PCPC）和游离的氧化）和游离的氧化的脂肪酸（的脂肪酸（ox-FAox-FA）刺激粘附因子和细刺激粘附因子和细胞因子的产生，导胞因子的产生，导致单核细胞向内膜致单核细胞向内膜聚集聚集单核细胞衍生成巨单核细胞衍生成巨噬细胞并吞噬噬细胞并吞噬oxLDL

6、oxLDL变成凋亡的泡沫细变成凋亡的泡沫细胞胞巨噬细胞和泡沫细巨噬细胞和泡沫细胞聚集形成动脉斑胞聚集形成动脉斑块，产生、释放更块，产生、释放更多的多的Lp-PLALp-PLA2 2至循环至循环第九页，共28页。血管血管(xugun)内腔内腔氧化氧化(ynghu)的的 LDL内膜内膜介质介质(jizh)粘附因子粘附因子单核细胞单核细胞细胞因子细胞因子斑块形成斑块形成泡沫细胞泡沫细胞巨噬细胞巨噬细胞溶血卵磷脂溶血卵磷脂氧化游离脂肪酸氧化游离脂肪酸2.2 2.2 作用示意图作用示意图第十页，共28页。 稳定粥样斑块稳定粥样斑块 Lp-PLA2 含量低含量低 可能有严重管腔狭窄可能有严重管腔狭窄 较少

7、的炎症较少的炎症(ynzhng)细胞细胞 不稳定粥样斑块不稳定粥样斑块 Lp-PLA2 含量高含量高 可能轻微的管腔狭窄可能轻微的管腔狭窄 大量的炎症大量的炎症(ynzhng)细胞细胞Source： Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008第十一页，共28页。稳定粥样斑块稳定粥样斑块斑块破裂形成血栓斑块破裂形成血栓不稳定粥样斑块不稳定粥样斑块粥样斑块早期粥样斑块早期(zoq)Source： Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008第十二页，共28页。 动脉粥样硬化的炎症发展到严重程度(chngd)，将要

8、或者已经出现向血管内腔破裂时，Lp-PLA2将会被大量释放入血液，致使其血液内的水平会大幅增高，因此Lp-PLA2在血液中的浓度就能够反映动脉粥样斑块的炎症程度(chngd)。第十三页，共28页。2.3 2.3 临床意义临床意义 通过检测血液中的Lp-PLA2,可以有效地了解动脉粥样硬化(ynghu)斑块的炎症程度及其稳定性。这样就可预警心肌梗死和脑血栓的发生，对预防心脑血管突发事件具有相当重要的意义。 临床意义： 1、预测心脑血管栓塞性疾病的发生。 2、判断心脑血管栓塞性疾病的转归。第十四页，共28页。 2.4 2.4 目前目前(mqin)(mqin)临床检测都存在着一定的局限临床检测都存在

9、着一定的局限 （1）血管造影，可以显示血管的狭窄程度，）血管造影，可以显示血管的狭窄程度，但这是一种有创性检查，不适用于普检、但这是一种有创性检查，不适用于普检、预防和监测。预防和监测。 （2）许多的血液生化检测，比如胆固醇与）许多的血液生化检测，比如胆固醇与低密度脂蛋白升高，体内低密度脂蛋白升高，体内(t ni)脂质代谢脂质代谢异常，还是无法预警动脉粥样斑块的炎症异常，还是无法预警动脉粥样斑块的炎症程度，对判断爆发心脑血管意外危险性的程度，对判断爆发心脑血管意外危险性的特异性不好。特异性不好。第十五页，共28页。（3 3）各种心肌酶的检测，这些酶是发生了心肌梗死以）各种心肌酶的检测，这些酶是

10、发生了心肌梗死以后才出现的指标异常，因而也失去了预防和监测意义。后才出现的指标异常，因而也失去了预防和监测意义。（4 4）CRPCRP在各种急性炎症时出现，其升高幅度与感染在各种急性炎症时出现，其升高幅度与感染的程度呈正相关的程度呈正相关 ，对于动脉粥样硬化炎症缺乏特异性。，对于动脉粥样硬化炎症缺乏特异性。只有只有Lp-PLA2Lp-PLA2的检测能直接准确的反映血管内膜的炎症的检测能直接准确的反映血管内膜的炎症程度，也就是动脉粥样硬化的严重程度，并且它是动程度，也就是动脉粥样硬化的严重程度，并且它是动态态(dngti)(dngti)的变化。的变化。第十六页，共28页。3.3.医学医学(yxu

11、)(yxu)评价评价3.1 3.1 医学正常值医学正常值根据临床试验数据与统计学分析根据临床试验数据与统计学分析(fnx)(fnx)，对，对照组照组Lp-PLA2(ng/ml)Lp-PLA2(ng/ml)检测数据为正态分布，检测数据为正态分布，在在a=0.05a=0.05检验水准下，制定单侧检验水准下，制定单侧95%95%医学正医学正常值为常值为175 ng/ml175 ng/ml。依据这个正常值，检测灵敏度为依据这个正常值，检测灵敏度为93.40%93.40%，特，特异度为异度为92.8%92.8%，准确度为，准确度为97.0%97.0%。第十七页，共28页。3.2 3.2 产品产品(chn

12、pn)(chnpn)评价评价 产品(chnpn)是中国首家，国内第一个上市产品(chnpn)，也是国家863高科技成果。第十八页，共28页。 检测方法简易、快捷(kui ji)（3h）、准确、灵敏度高，重复性好。 价格优势：同类产品在美国普遍应用，临床的检测收费在250美元（人民币1500），天津市物价局批复每人份380元。第十九页，共28页。4.4.适应科室及人群适应科室及人群(rnqn)(rnqn)4.1 4.1 医院科室医院科室 门诊部：内科(nik)、外科。 住院部：心内科(nik)、神经内科(nik)、内分泌科、神经外科、老干科。 急诊部：内科(nik)、外科。 健康管理中心。第二十

13、页，共28页。4.2 4.2 适用人群适用人群 高危人群：冠心病、脑血栓、高血压、高血脂症、高粘血症等患者及肥胖、烟酒过度、缺乏运动(yndng)等人群的门诊常规血液检测。 住院病人的常规血液检测。 40岁以上人群体检的常规血液检测项目。第二十一页，共28页。5.5.样本样本(yngbn)(yngbn)的采集的采集 用肝素或EDTA抗凝管或者不抗凝取血管抽取适应症患者(hunzh)静脉血2-5ml送检即可。第二十二页，共28页。6.ELISA6.ELISA原理原理(yunl)(yunl)6.1 6.1 原理原理(yunl)(yunl)：ELISAELISA是以免疫学反应为基础，是以免疫学反应为

14、基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的新型免疫检测技术。用相结合起来的一种敏感性很高的新型免疫检测技术。洗洗涤涤待测抗原待测抗原第二十三页，共28页。第二十四页，共28页。6.2 6.2 操作操作(cozu)(cozu)流程流程a. a. 将试剂盒从冰箱中取出，在室温中平衡片刻；将试剂盒从冰箱中取出，在室温中平衡片刻；b. b. 加入加入2020微升待测样品（血清或血浆微升待测样品（血清或血浆(xujing)(xujing)）或标准品于反应孔内，然后加入或标准品于反应孔内，然后加入3030微升稀释液混微升

15、稀释液混和后覆膜，和后覆膜，3737温育温育2020分钟分钟( (建议血清样本可按建议血清样本可按比例先在离心管中充分混匀后再取比例先在离心管中充分混匀后再取5050微升加入到微升加入到反应孔内）；反应孔内）；c. c. 加入加入150150微升酶标记物，混和后覆膜微升酶标记物，混和后覆膜3737温育温育120120分钟；分钟；d.d.除去孔内液体，每孔加入除去孔内液体，每孔加入300300微升洗涤液，振荡微升洗涤液，振荡20-3020-30秒后除去洗涤液，重复秒后除去洗涤液，重复4 4次；次；第二十五页，共28页。 e.每孔加入显色液100微升，混匀，37避光温育20分钟； f.加入50微升终止液； g.立即用酶标仪在450纳米波长条件下测定各孔的OD值； h.以吸光度OD值为纵坐标（Y），Lp-PLA2标准品浓度(nngd)为横坐标（X），做得相应的曲