吸光光度法简介-分析化学-07

1、071Analytical ChemistryAnalytical Chemistry7.1.1 光的基本性质光的基本性质7.1.2 物质对光的吸收物质对光的吸收7.1.3 溶液的吸光定律溶液的吸光定律7.2.1 吸光分析的几种方法吸光分析的几种方法7.2.2 吸光分析法的仪器简介吸光分析法的仪器简介要点归纳要点归纳7.3.1 灵敏度的表示方法灵敏度的表示方法7.3.2 影响准确度的因素影响准确度的因素7.3.3 测量条件的选择测量条件的选择7.4.1 酸度的选择酸度的选择7.4.2 显色剂用量的选择显色剂用量的选择7.4.3 其它条件的选择其它条件的选择7.5.1 微量组分的测定微量组分的测

2、定7.5.2 示差光度法示差光度法7.5.3 光度滴定法光度滴定法7.5.4 络合物组成及稳定常数的测定络合物组成及稳定常数的测定7.5.5 弱酸弱碱离解常数的测定弱酸弱碱离解常数的测定7.5.6 双波长分光光度法双波长分光光度法7.5.7 导数分光光度法导数分光光度法7.1.1 光的基本性质光的基本性质吸光光度法吸光光度法 是基于被测物质的是基于被测物质的分子分子 对对光光 具有选择吸收具有选择吸收的特性而建立的分析方法。的特性而建立的分析方法。光的电磁波性质光的电磁波性质 射射线线x射射线线紫紫外外光光红红外外光光微微波波无无线线电电波波10-2 nm 10 nm 102 nm 104 n

3、m 0.1 cm 10cm 103 cm 105 cm可可 见见 光光光的波粒二象性光的波粒二象性波动性波动性粒子性粒子性 E光的折射光的折射光的衍射光的衍射光的偏振光的偏振光的干涉光的干涉光电效应光电效应hchEE：光子的能量（：光子的能量（J, 焦耳）焦耳） ：光子的频率（：光子的频率（Hz, 赫兹）赫兹） ：光子的波长（：光子的波长（cm）c：光速（：光速（2.9979 1010 cm.s-1）h：Plank常数（常数（6.6256 10-34 J.s 焦耳焦耳. 秒）秒）单色光、复合光、光的互补单色光、复合光、光的互补单色光单色光复合光复合光光的互补光的互补单一波长的光单一波长的光由不

4、同波长的光组合而成的光由不同波长的光组合而成的光若两种不同颜色的单色光按一定的强度比若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。为互补色光，这种现象称为光的互补。蓝蓝黄黄紫红紫红绿绿紫紫黄绿黄绿绿蓝绿蓝橙橙红红蓝绿蓝绿物质的颜色与光的关系物质的颜色与光的关系完全吸收完全吸收完全透过完全透过吸收黄色光吸收黄色光光谱示意光谱示意表观现象示意表观现象示意复合光复合光吸收光谱吸收光谱光作用于物质时，物质吸收了可见光，而光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的显示出特征的颜色，

5、这一过程与物质的 性性质及光的性质有关。质及光的性质有关。分子基态的电子组态分子基态的电子组态 hchEEE02h S2S1S0S3E2E0E1E302EEhh h h 1、用原子轨道线性组合法产生出各个分子轨道；、用原子轨道线性组合法产生出各个分子轨道；2、把电子加到每个分子轨道中去，在每个分子轨道中最多、把电子加到每个分子轨道中去，在每个分子轨道中最多加进两个电子（加进两个电子（Pauli原理），由此产生分子的电子组态原理），由此产生分子的电子组态 ；3、把电子对加到最低能量轨道中去（建造原理），从而产、把电子对加到最低能量轨道中去（建造原理），从而产生最低能量的电子组态（基态电子组态）生

6、最低能量的电子组态（基态电子组态）例：甲醛的分子轨道例：甲醛的分子轨道0CO2O2CO2O2CH2CH2O2C2O2)*()()()()()()2()1 ()1 ()OCH(nSSSC最高占有分子轨道最高占有分子轨道最低空轨道最低空轨道2O2CO2)()()OCH(nK电子基态电子基态电子跃迁与电子激发态电子跃迁与电子激发态2O2CO2)()()OCH(nK甲醛的电子基态甲醛的电子基态C OHH. COOn*CO*n*COOn*CO*,n*,22n22n*,n*,n*,*,S2S1S0T2T1电子跃迁类型电子跃迁类型最低激发态和基态的最低激发态和基态的电子组态电子组态最低激发态和基态的最低激发

7、态和基态的电子态电子态COOn*CO22n电子多重态电子多重态h +单重态单重态（自旋配对）（自旋配对）电子跃迁电子跃迁激发单重态激发单重态（自旋（自旋 配对配对）电子跃迁电子跃迁 和和自旋翻转自旋翻转h +单重态单重态（自旋配对）（自旋配对）三重态三重态（自旋（自旋 平行平行）吸收光谱吸收光谱 Absorption SpectrumS2S1S0S3h E2E0E1E3S2S1S0h A h h h 分子内电子跃迁分子内电子跃迁带状光谱带状光谱 A物质对光的选择吸收物质对光的选择吸收 Selected absorption物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构物质的电子结构不同，所

8、能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸收基础。成了物质对光的选择吸收基础。例：例： A 物质物质B 物质物质evEE5 . 201EhcA191034106 . 1)(5 . 21031062. 6ev)(10774. 45cmnm4 .477evEE0 . 201EhcBnm6 .620同理，得：同理，得：1 ev = 1.6 10-19 J.吸收光谱的获得吸收光谱的获得Absorption Spectra测量某物质对不同波长单色光的测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（吸收程度，以波长（ ）为横坐）为横坐标，吸光度（标，吸光度（A）为纵坐标，绘）为纵坐标，绘制吸光度随波长

9、的变化可得一曲制吸光度随波长的变化可得一曲线，此曲线即为吸收光谱。线，此曲线即为吸收光谱。(a)(b)(c)(d) 220 240 260 280 nm A0000(a) 联苯（己烷溶剂）；联苯（己烷溶剂）；一些典型的紫外光谱一些典型的紫外光谱(b) 苯（己烷溶剂）；苯（己烷溶剂）；(c) 苯蒸汽；苯蒸汽；(d) Na蒸汽。蒸汽。定性分析与定量分析的基础定性分析与定量分析的基础定性分析基础定性分析基础定量分析基础定量分析基础物质对光的选择物质对光的选择吸收吸收ABA )(maxA)(maxB在一定的实验条在一定的实验条件下，物质对光件下，物质对光的吸收与物质的的吸收与物质的浓度成正比。浓度成正

10、比。A C增增大大透光率透光率 （透射比）（透射比）Transmittance透光率定义：透光率定义：0IITtT 取值为取值为0.0 % 100.0 %全部吸收全部吸收T = 0.0 %全部透射全部透射T = 100.0 %入射光入射光 I0透射光透射光 It吸收定律的推导吸收定律的推导Lambert Beer LawI0dbbItII-dIdI N IN ：薄层中的吸光粒子数：薄层中的吸光粒子数N = N0 c dS dbN0 ：阿伏加德罗常数：阿伏加德罗常数 dS ：捕获面积，薄层中被光照射的面积。：捕获面积，薄层中被光照射的面积。c：吸光溶液的浓度吸光溶液的浓度N = k c db故故

11、 dI N I = I k c dbdI = - I k c db ,bIIcdbkIdIt00dI / I = - k c dbkcbIIt0ln积分积分得得KcbkcbIIt303. 2lg0或或AKcbTlg得得吸光度吸光度 与透光率与透光率 Absorbance and transmittanceAKcbTlgT ： 透光率透光率A： 吸光度吸光度1.00.50ACA100500T %TKbcAT1010T = 0.0 %A = T = 100.0 %A = 0.0A = 0.434T = 36.8 %吸光系数吸光系数 AbsorptivityKcbA b ：吸光液层的厚度，光程，：吸

12、光液层的厚度，光程， cmc：吸光物质的浓度，吸光物质的浓度， g / L, mol / LK：比例常数：比例常数入射光波长入射光波长物质的性质物质的性质温度温度取值与浓度的单位相关取值与浓度的单位相关c：mol / LK 摩尔吸光系数，摩尔吸光系数， L mol 1 cm -1c：g / LK a吸光系数，吸光系数， L g 1 cm -1cbAacbA c：g / 100 mLK 比比吸光系数吸光系数%11cmEcbEAcm%11MaEcm1010%11相互关系相互关系 Molar AbsorptivityAbsorptivity Specific extinction coefficie

13、ntAC吸光定律吸光定律A或或 吸收光谱吸收光谱A C max吸光的加合性吸光的加合性多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光度具多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光度具有加合性，即有加合性，即iiiiiiiicbbcAA对吸收定律偏离对吸收定律偏离AC主要原因主要原因非单色光非单色光吸光质点的相互作用吸光质点的相互作用非单色光引起的对吸光定律的偏离非单色光引起的对吸光定律的偏离设入射光由设入射光由 1 和和 2 两种波长组成，溶液的吸光质点对两种波长组成，溶液的吸光质点对两种波长的光的吸收均遵从吸收定律两种波长的光的吸收均遵从吸收定律 1 bcIIA11011lgbcII11

14、0011 2 bcIIA 22022lgbcII210022 1 + 2 210201lgIIIIAbcbcIIII211010lg0201020121bcA1或或bcA221bcA1或或bcA2非单色光引起的对吸光定律的偏离非单色光引起的对吸光定律的偏离对吸收光谱而言，对吸收光谱而言，b 和和 c 固定，固定，iKA反映了反映了 随波长变化的情况，单随波长变化的情况，单一波长，一波长， 固定；不同波长，固定；不同波长， 不同。因此，非单色光将导致不同。因此，非单色光将导致对吸光定律的偏离。对吸光定律的偏离。A或或 1 2在实际工作中，入射光通常具有一定的带通。为了避免非单色在实际工作中，入射

15、光通常具有一定的带通。为了避免非单色光带来的影响，一般选用峰值波长进行测定。光带来的影响，一般选用峰值波长进行测定。 1 对应的对应的 1较小较小 2 对应的对应的 2较大较大选用峰值波长，也可以得到较高的灵敏度。选用峰值波长，也可以得到较高的灵敏度。吸光质点间相互作用引起的对吸光定律的偏离吸光质点间相互作用引起的对吸光定律的偏离质点间的静电作用质点间的静电作用质点间的缔合作用质点间的缔合作用质点间的化学反应质点间的化学反应目视比色法目视比色法标准系列标准系列未知样品未知样品特点特点利用自然光利用自然光比较吸收光的互补色光比较吸收光的互补色光准确度低（半定量）准确度低（半定量）不可分辨多组分不

16、可分辨多组分方法简便，灵敏度高方法简便，灵敏度高光电比色法光电比色法分光光度法（紫外分光光度法（紫外-可见分光光度法）可见分光光度法）UV-VISUltraviolet Visual Spectroscopy0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示I0It参比参比样品样品bCTIIAtlglg0入射光入射光 I0透射光透射光 It请注意与定义比较请注意与定义比较未考虑吸收池和溶剂对光子的作用未考虑吸收池和溶剂对光子的作用7.2.2 吸光分析法的仪器简介吸光分析法的仪器简介紫外紫外-可见分光光度计组件可见分光光度计组件光源光源单色器单色器样品池样品池检测器检测器信号输出信号

17、输出氢灯，氘灯，氢灯，氘灯，185 350 nm； 卤钨灯，卤钨灯，250 2000 nm.基本要求：光源强，能量分布均匀，稳定基本要求：光源强，能量分布均匀，稳定作用：将复合光色散成单色光作用：将复合光色散成单色光棱镜棱镜光栅光栅玻璃，玻璃， 350 2500 nm, 石英，石英，185 4500 nm平面透射光栅，平面透射光栅， 反射光栅反射光栅玻璃，光学玻璃，石英玻璃，光学玻璃，石英作用：将光信号转换为电信号，并放大作用：将光信号转换为电信号，并放大光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄像管（多道分析器）像管（多道分析器）表头、记录仪、屏幕、数字显示

18、表头、记录仪、屏幕、数字显示单波长单光束分光光度计单波长单光束分光光度计0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示单波长双光束分光光度计单波长双光束分光光度计比值比值光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示光束分裂器光束分裂器要要 点点hchEEE022、物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构、物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸收基础。成了物质对光的选择吸收基础。3、在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。、在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。KbcAT1010AKcbTlg吸光定律

19、吸光定律c：mol / L摩尔吸光系数，摩尔吸光系数， L mol 1 cm -1cbAK c：g / LK a吸光系数，吸光系数， L g 1 cm -1acbA 0.575bCTIIAtlglg0灵敏度灵敏度吸光光度法是一种适合于微量组分测定的仪器分析法，吸光光度法是一种适合于微量组分测定的仪器分析法，检测限大多可达检测限大多可达10-3 10-4 g / L 或或 g / mL 数量级。数量级。准确度准确度能满足微量组分测定的要求。一般相对误差能满足微量组分测定的要求。一般相对误差 25 %。例如，。例如，石灰石中微量铁，含量为石灰石中微量铁，含量为 0.067 %，相对误差以，相对误差

20、以 5 %计算，计算，结果为结果为 0.064 0.070 %，绝对误差为，绝对误差为 0.003 %比较常量分析：比较常量分析：铁矿中的铁含量测定，含量为铁矿中的铁含量测定，含量为80%，若相对，若相对 误差以误差以 5 %计算，结果为计算，结果为 84 76 %，绝对误差为，绝对误差为 4 %实际测得的是实际测得的是条件摩尔吸收系数，条件摩尔吸收系数， 对摩尔系数的理解之一对摩尔系数的理解之一3Fe2+3NN+NNFe2+桔红色桔红色 508邻二氮菲邻二氮菲 =1.1 104实际测定实际测定2FebCA摩尔吸收系数是对吸光物质而言，是由吸光摩尔吸收系数是对吸光物质而言，是由吸光物质的结构特

21、征，吸光面积等因素决定。物质的结构特征，吸光面积等因素决定。灵敏度的表示方法灵敏度的表示方法摩尔吸光系数摩尔吸光系数 bCA当当 b = 1 时，时， A = CAC0 对摩尔系数的理解之二对摩尔系数的理解之二对同一种待测物质，不同的方法具有不同的对同一种待测物质，不同的方法具有不同的 ，表明具表明具有不同的灵敏度。有不同的灵敏度。例，分光光度法测铜例，分光光度法测铜铜试剂法测铜试剂法测 Cu 426 = 1.28 104 Lmol-1cm-1双硫腙法测双硫腙法测 Cu 495 = 1.58 105 Lmol-1cm-1一般情况一般情况 105低灵敏度低灵敏度中等灵敏度中等灵敏度高灵敏度高灵敏

22、度灵敏度不同的本质灵敏度不同的本质原因是什么原因是什么？吸光系数吸光系数 a比吸光系数比吸光系数%11cmESandell 灵敏度灵敏度 SS 值表示值表示 光程（光程（path lenth ) 为为1 cm 吸收池测得吸光度为吸收池测得吸光度为 0.001 时，每时，每mL 溶液中待测物质的微克数。单位为溶液中待测物质的微克数。单位为 g cm-2。MS Sandell 灵敏度与灵敏度与 的关系的关系摩尔吸光系数摩尔吸光系数 灵敏度灵敏度灵敏度灵敏度影响准确度的因素影响准确度的因素仪器测量误差仪器测量误差根据误差传递公式，可以推导出浓度测量的相对偏差为根据误差传递公式，可以推导出浓度测量的相

23、对偏差为TAlgTln434.0TTdcdcETrlnT = 0.368 = 36.8 %A = 0.434 为了减少测量误差，控制为了减少测量误差，控制溶液的吸光度溶液的吸光度 A = 0.15 1T = 70 10 %误差公式推导误差公式推导0.368仪器测量误差公式推导仪器测量误差公式推导吸光定律吸光定律cbA根据误差传递公式，有根据误差传递公式，有 cdcAdATAlg又又Tln434.0TdTdA434. 0TTdTAdAlnTTdcdcETrln得得浓度测量的浓度测量的相对偏差相对偏差0)ln(TT令令得得T = 0.368 = 36.8 %A = 0.434 此时，此时，仪器测量

24、误差最小仪器测量误差最小为了减少测量误差，控制溶液的为了减少测量误差，控制溶液的吸光度吸光度 A = 0.15 1T = 70 10 %化学反应的影响化学反应的影响M + L = ML maxbCAML吸光定律吸光定律光度法测定通常在一个较大的浓度范围内作工作曲线，当光度法测定通常在一个较大的浓度范围内作工作曲线，当 或随着浓度的变化而变化，或随着副反应的变化而变化时，或随着浓度的变化而变化，或随着副反应的变化而变化时，就表现出对吸光定律的偏离。就表现出对吸光定律的偏离。bCAM实际计算实际计算例：例： M + L ML , ML2, ML3 1 1 2 2 3 3如果在如果在 1 进行测定，

25、结果如左图所示进行测定，结果如左图所示AC(M) AMLML2ML3 1ML3ML2ML例，聚合引起的对吸光定律的偏离例，聚合引起的对吸光定律的偏离单体：单体：SNH+(CH3)2NN(CH3)22SNH+(CH3)2NN(CH3)2 2 max = 660 nm二聚体：二聚体： max = 610 nmAC max = 660 nmA 660 nm610 nm测量条件的选择测量条件的选择测量波长的选择测量波长的选择无干扰，选择无干扰，选择 max有干扰有干扰A A 待测溶液吸光度的选择待测溶液吸光度的选择控制控制A = 0.15 1 T = 70 % 10% 方法方法选择选择 C选择选择 b

26、1、非单色光非单色光影响小影响小2、灵敏度高灵敏度高参比液的选择参比液的选择原则：原则：扣除非待测组分的吸收扣除非待测组分的吸收以显色反应为例进行讨论以显色反应为例进行讨论M + R = M-R max试液试液 显色剂显色剂 溶剂溶剂 吸光物质吸光物质 参比液组成参比液组成无吸收无吸收无吸收无吸收光学透明光学透明溶剂溶剂基质吸收基质吸收无吸收无吸收吸收吸收不加显色剂的试液不加显色剂的试液无吸收无吸收吸收吸收吸收吸收显色剂显色剂基质吸收基质吸收吸收吸收吸收吸收吸收吸收显色剂显色剂 + 试液试液 + 待待测组分的掩蔽剂测组分的掩蔽剂若欲测若欲测 M-R 的吸收的吸收 maxA （样）（样） = A

27、 （待测吸光物质）（待测吸光物质） + A （干扰）（干扰）+ A （池）（池）A （参比）（参比） = A （干扰）（干扰）+ A （池）（池）显色反应显色反应有机物质有机物质官能团强吸收官能团强吸收直接测定直接测定UV-VIS官能团弱吸收官能团弱吸收衍生化反应衍生化反应UV-VIS显色反应显色反应无机物质无机物质通常通过显色反应生成吸光系数大的有色通常通过显色反应生成吸光系数大的有色物质进行测定，以提高灵敏度物质进行测定，以提高灵敏度3Fe2+3NN+NNFe2+桔红色桔红色 max邻二氮菲邻二氮菲酸度的选择酸度的选择酸度的影响酸度的影响副反应副反应M + nR = MRnOH-H+存在型

28、体的变化存在型体的变化RH = R- + H+ 1 2生成不同配比的络合物生成不同配比的络合物例，磺基水杨酸例，磺基水杨酸 Fe 3+pH = 2 3FeR紫红色紫红色pH = 4 7FeR2橙色橙色pH = 8 10FeR3黄色黄色酸度的选择酸度的选择理论计算理论计算nnRMMRnlglglgRnMMRnnlglglglgR(H)M(OH)RnnnpHR(H)M(OH)，pHlgMMRn以以作图作图可得适宜可得适宜pH范围范围实际工作中，作实际工作中，作 A pH 曲曲线，寻找适宜线，寻找适宜 pH 范围。范围。ApHM + nR = MRnOH-H+显色剂的用量显色剂的用量M + nR =

29、 MRnnnRMMRnlglglgRnMMRnn定量反应定量反应310MMRn3lglgRnnnRnlg3lg实际工作中，作实际工作中，作 A CR 曲曲线，寻找适宜线，寻找适宜 CR 范围。范围。ACR温度的选择温度的选择实际工作中，作实际工作中，作 A T 曲线，寻找适宜曲线，寻找适宜 反应温度。反应温度。ATATATATAT反应时间的选择反应时间的选择实际工作中，作实际工作中，作 A t 曲线，曲线，寻找适宜寻找适宜 反应时间。反应时间。微量组分的测定微量组分的测定单组分的测定单组分的测定多组分的测定多组分的测定介绍一种介绍一种 解联立方程法解联立方程法A XY 1 2根据加合性原则根据

30、加合性原则yxAAA111yyxxbcbc11yxAAA222yyxxbcbc22解联立方程，可求得解联立方程，可求得Cx, Cy 为物质的特征参数，可通过配制标为物质的特征参数，可通过配制标准溶液测得。准溶液测得。请设计一个测定两组请设计一个测定两组分的浓度的实验方案分的浓度的实验方案ACs(x)x1x2纯物质或共存物质不干扰纯物质或共存物质不干扰单组分的测定单组分的测定微量铁的测定微量铁的测定氨基酸的测定氨基酸的测定邻二氮菲法邻二氮菲法茚三酮法茚三酮法蛋白质的测定蛋白质的测定考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法总磷的测定总磷的测定磷钼蓝法磷钼蓝法海水中营养盐的测定海水中营养盐的测定返回返回示差光度法示

31、差光度法方法方法常规法常规法以空白溶剂为参比以空白溶剂为参比xxIIA0lgxbc示差法示差法以浓度为以浓度为 Cs 的标的标准溶液为参比准溶液为参比)(sxccbxsxIIAlg00IIsxIIII00lglgsxAA xcbsxxcccACCxA（Cx Cs）适宜适宜 高高 浓度的测定浓度的测定思考：（思考：（Cx Cs）时情况怎样）时情况怎样？示差法的误差示差法的误差方法方法定量原理定量原理相对误差相对误差常规法常规法xxxTbcAlgsxrIIT 示差法示差法rxcTcbAlgxxTxcTTdcdxlnxrTxcTTdcdxln Tr Tx0IITxx I0 Isxcxccdcdxx有

32、有结论：示差法提高了准确度结论：示差法提高了准确度例题例题例题例题已知已知 dT = 0.01, 样品样品Tx = 2.00 %, 标准标准 Ts = 10.0 %示差法示差法sxrIIT %0 .200 .1000. 2xxTxcTTdcdxln02. 0lg02. 0434. 001. 0%8 .12xrTxcTTdcdxln常规法误差常规法误差示差法误差示差法误差02. 0lg20. 0434. 001. 0%28. 1已知已知 dT = 0.01, 样品样品Tx = 2.00 %, 标准标准 Ts = 5.00 %0IITxr%0 .4000. 500. 2xrTxcTTdcdxln%

33、64. 0sxTT示差法提高准确度的实质示差法提高准确度的实质常规法常规法TxT0 5 1050100 落在测量落在测量误差误差较较 大大 的范围的范围示差法示差法T0 5 1050100TrTsTs 落在测量落在测量误差误差较较 小小 的范围的范围结论：结论：示差法通过提高测量的准确度提高了方法的准确度示差法通过提高测量的准确度提高了方法的准确度光度滴定法光度滴定法光度滴定法是依据滴定过程中溶液的吸光度的突变来确定滴光度滴定法是依据滴定过程中溶液的吸光度的突变来确定滴定终点的滴定分析方法。定终点的滴定分析方法。例例, 滴定反应滴定反应 M + R = MR 随着随着 R 的加入，的加入，MM

34、R滴定曲线随各物质的吸收性质的不同而不同。滴定曲线随各物质的吸收性质的不同而不同。 R = 0, M = 0, MR 0（不考虑滴定体积的变化）（不考虑滴定体积的变化）AVRVsp R 0, M = 0, MR 0AVR R MRVsp R 0, MR 0 R 0, M = 0, MR = 0AVR M MRAVRVspAVRVsp R = 0, M 0, MR = 0 R 0, M 0, MR = 0请同学们自己分析请同学们自己分析络合物的组成及稳定常数的测定络合物的组成及稳定常数的测定摩尔比法测络合比（饱和法）摩尔比法测络合比（饱和法）M + nR = MRnCM, 固定；固定；CR, 从

35、从 0 开始增大开始增大CMRnCR在特定波长测定在特定波长测定 R = 0, M = 0, MRn 0ACR/CMn R 0, M 0, MRn =0ACR/CMn等摩尔连续变化法（等摩尔连续变化法（Job）测络合比）测络合比M + nR = MRnCM+ CR = 常数常数CM / C 从从 0 1在特定波长测定在特定波长测定 R = 0, M = 0, MRn 000.51.0ACM / C0.33n = 1, CM / C =0.5n = 2, CM / C =0.3300.51.0ACM / C R 0, M 0, MRn =0条件稳定常数的测定条件稳定常数的测定00.51.0ACM

36、 / CAA A由于络合物离解引起由于络合物离解引起离解度离解度AAAaMR = R + M总浓度总浓度 C平衡浓度平衡浓度C(1-a)CaCa222)1 ()1 (CaaaCaCK将将AAAa代入上式便可求出络合物的条件稳定常数代入上式便可求出络合物的条件稳定常数HR = H+ + R- HR用光度法可以测定其离解常数用光度法可以测定其离解常数HRRHaKaKppHRHRlg RA HRR HR R用吸光值表征用吸光值表征lgRHR，相对于，相对于pH作图，可求得作图，可求得pKaRHR或或配制一系列不同配制一系列不同pH, 浓度浓度 C 相同的溶液相同的溶液半中和法半中和法pH在在 HR 测吸光度测吸光度ApH RA HRR HRpH pKa+1C = R-pH = pKaHR / R- = 1A2A1测得测得A2测得测得A11122AAAAA对应的对应的pH 即为即为 pKa A