动物营养学讲义Word版

1、研究生课程讲义动物营养学第二版 王 康 宁四川农业大学动物营养研究所二OO二年十月1 / 123目 录第一章 序言 第二章 动物营养研究方法概论第一节 前言1一研究内容1二研究方法1第二节 化学分析法2一饲料成分2二动物组织和血液成分2 三动物粪便及成分2第三节 消化试验2一进展2 二试验要点3第四节 平衡试验4一作用4二能量平衡4 三N平衡7第五节 饲养试验（生长效应法）7一作用7 二原理7 三使用原则7 四试验设计的注意事项7第六节 试验技术9一同位素示踪及同位素稀释技术9二外科造瘘技术及吻合术9第三章 饲料养分营养价值的评定第一节 饲料蛋白质营养价值的评定11一引言11 二评定方法的历史

2、回顾11三AA生物效价的评定12四反刍动物蛋白质质量评定新体系15五国际上推行的反刍动物蛋白质新体系17第二节 矿物元素和维生素生物效价的评定17第三节 饲料能值的评定19一概况19二饲料有效能的实测19三用可消化养分间接推算饲料有效能21四根据饲料化学成分预测饲料有效能24第四章 动物养分需要量的评定第一节 能量需要量的测定30一反刍动物30二猪能量需要量的确定32三禽能量需要量的确定34第二节 蛋白质和氨基酸需要量的评定35一反刍动物蛋白质需要量的评定35二猪蛋白质、氨基酸需要量的评定37三禽的蛋白质、氨基酸需要量的估计43第三节 维生素及矿物元素需要量的评定51饲粮配合的技巧及示范.55

3、一饲粮配合的技巧55二饲粮配方试例55三可以添加合成氨基酸时的配方方法56四合理确定维生素和微量元素添加量56饲料原料价格的合理估计方法56 一估计方法的原理56 二现在我们计算菜籽粕的适宜价格57第一章 序 言一、动物营养学的目的、任务 动物营养动物摄取、消化、吸收、利用饲料中营养物质的全过程，是一系列化学、 物理及生理变化过程的总称。它是动物一切生命活动（生存、生长、繁殖、 产奶、产蛋、免疫等）的基础，整个生命过程都离不开营养；动物营养学研究动物营养的科学；动物营养学的任务研究动物对养分的需求、养分的作用及功能、饲料养分的利用效率形成营养需要或饲养标准；动物营养学的目的以最少的投入获得最大

4、的产出实现高效饲养。二、动物营养学研究的内容1、对营养物质的需求：需要什么营养物质，营养物质的作用及功能，营养不足带来的危害，、确定营养需要量的方法，营养需要量的确定及其影响因素。2、饲料营养价值的评定：饲料中含有哪些动物需要的营养物质，各种营养物质在体内的消化、吸收、代谢特点、效率及其影响因素。3、作为模型动物研究营养物质代谢及调控：从分子水平上（酶、激素和肽）研究营养物质代谢的基本原理及其调控为医学、兽医学、营养学的研究提供基本的参数，为营养的调控提供新的途径和方法。4、向其它学科拓展：与其它学科相结合，如免疫学、微生物学、生态学等，使动物营养学能够协调的发展拓展自己的研究领域。三、本课程

5、主要讲授内容1、动物营养需要及需要量评定方法；2、饲料养分生物效价的评定及评定方法。四、主要参考书1.动物营养学讲义2.动物营养学（杨凤主编,2001）3.Animall Nutrition (Maynard,1979,)4.Nutrition requirements of Poultry(1994，第九版)5. Nutrition requirements of Swine (1998，第十版)6. Nutrition requirements of Dairy Cattle (2001，第7版) 第二章 动物营养研究方法概论第一节 前 言一、 研究内容 能值营养物质的需要量的评定 蛋白质

6、、氨基酸 矿物元素 维生素 能值 养分生物效价的评定 蛋白质、氨基酸 矿物元素 维生素 二、 研究方法1化学分析、物理测试 综合法饲养试验 需要量 析因法平衡试验（屠宰试验） 斜率法2动物试验 饲养试验生长效应法 平行线法 三点法 标准曲线法 体内 消化试验 生物效价 体外 代谢试验 生物效价的几种表示方法：1）表观、真实消化率2）表观、真实利用率3）表观、真实代谢率4）沉积率（扣除周转的净沉积） 同位素示踪法3 外科造瘘无菌技术第二节 化学分析法一 饲料成分1Weender法1860年，Bei Goettingen DM. GE. CP. EE. CF. NFE. Ash；2Van Soes

7、t 1967的纤维分析法CP. EE. OR. Ash. NDF(hemicellulose + cellulose+ADL)、ADF(cellulose + ADL)；NDF分析：100ml AD加1克样品NDF（中性洗涤液）=1升+30g 12烷基硫酸钠+18.6克乙二胺四乙酸二氢钠盐+4.56g Na2HPO4+10ml乙氧基乙醇（或乙二醇乙醚）pH（6.9-7.1）。注意：过滤杯的孔径不要太小，粗孔40-50ml，孵化时加淀粉酶，便于过滤。5-10min煮沸，微沸一小时。ADF分析：要用16烷基甲基溴化胺，易过滤，不必加淀粉酶，测定较NDF容易。3矿物元素、维生素、脂肪酸、抗营养因子、

8、重金属、霉菌毒素、药物残留。二 动物组织和血液成分1各种营养物质2与营养物质有关的功能酶或相关酶以及由此引起的代谢中间产物的积累，尾产物减少，如：Se-GSH-px(glutathione peroxidase)，Zn-血清碱性磷酸酶，Cu-血浆铜蓝蛋白氧化酶，Mo-黄嘌呤氧化酶，B1-磷酸硫胺素（辅酶），B2-谷胱甘肽还原酶，生物素-血浆丙酮酸羧化酶，B6-转氨酶（血浆或红细胞中酪氨酸或天门冬氨酸）、血浆尿素N等。三 动物粪便及成分（1）粪，主要是消化、代谢和平衡试验测能、氮、AA、钙、磷及其它矿物元素和维生素的效价及存留量。（2）尿、能、氮、AA、代谢产物。如： 叶酸缺乏古胺甲基谷氨酸（F

9、IGLV）排泄增加（中间产物） 烟酸缺乏尿中N-甲基烟酰胺减少（尾产物） B6缺乏尿中黄尿酸或犬尿酸的量增加（中间产物）第三节 消化试验一 、进展传统的全收粪法测DE、可消化养分离体消化瘘管技术（测AA消化率、蛋白质降解率）。 体内消化 尼龙袋 离体消化全收粪 指示剂 瘤胃 消化道消化液 人工消化液 小肠肛门 回肠末端 内源 外源二试验要点1影响饲料养分消化率测定的因素：动物种类、年龄、性别、饲喂量、饲粮成分。2动物选择：一般公畜。3头数或只数：一般4头（只）以上，AA消化率可多到16-24只。4预饲期和试验期的长短：取决于动物消化道食糜排空时间的长短。一般大动物长，小动物短；难消化的长，易消

10、化的短。 牛羊 马 猪 家禽 1014 7-10 5-10 3-5天5试验（或被测）饲料或日粮的准备（配合原则）取样均匀，干物质测定准确（注意测定时间），尽可能补充维生素、微量元素等，测氨基酸消化率可补充能量（葡萄糖）。在不影响试验的情况下，尽可能接近全价日粮需要营养水平。强饲饲料应粗一点，能通过20目即可，便于通过强饲管，缩短强饲时间。6粪（便）收粪采用集粪袋，家禽肛门缝合中空的瓶盖，缝合时每针穿的皮肤要深（0.2cm）、宽（0.5-0.8cm）、密一点（4-5个固定点）。猪用皮带或布条固定，注意前腿前和后腿前两圈的固定，背中线，两侧，3根与集粪袋口3根线相连；集粪袋口用0.3cm粗的铁丝，

11、做成直径为12-15cm的圆圈，必要部下凹，铁丝可用塑料包双层，以免铁丝擦伤尾部，长25-30cm，宽12-15cm，下部10cm或三角形。粪样按总量1/10-1/50取，每100g加10%的硫酸（盐酸）5-10ml固定N，甲苯数滴防腐。计算样品量时应扣加入H2SO4的重量和能量。家禽因粪便少可全部用作样品，尽量少用水洗粪袋，也可在粪袋中混交取50-80%样，以减少样品总量和干燥的时间。7消化率计算方法排空强饲法（收集40-48小时排泄物，强饲量为体重的3-5%） 顶替套算法指示剂法8顶替量一般30-50%，适口性很差的不低于15%。9指示剂的回收率一般要求85%以上；内源指示剂注意饲料杂质和

12、均匀度的影响。第四节 平衡试验一作用研究营养物质的收支平衡，获得需要量和利用率等基本参数。二能量平衡研究能量代谢的方法(一)直接法直接测畜体产热，原理简单、设备仪器昂贵。1.绝热式：在水温4时1毫升水上升1为1卡。2.梯度型测热装置：测热的传导速率，即： dH/dt=SL（T1-T0） ：卡/cm秒 S：室的表面积 L：室壁厚度例子：阉牛每日的能量平衡（动物营养学教材表12-3），直接测畜体产热，粪、尿、皮屑、甲烷，增重都测其热量。表2-1阉牛每日的能量平衡（kJ）（引自Maynard, L. A., 1979）项目能量摄入能量支出6988g梯牧草（猫尾草）（timotyh hay）11606

13、5400g亚麻籽758116619g粪596214357g尿506537g皮屑脱落物368142g甲烷7937畜体产热48110机体增重2545合 计123646123646(二) 间接法1.原理：根据呼吸熵 全脂氧化（克分子）：C16H32O2+23O2=16CO2+16H2O 产热10.033MJ全糖氧化（克分子）：C6H12O6+6O2=6CO2+6H2O 产热2.816MJ表2-2不同的呼吸熵所对应的耗O2和CO2生成的产热量（kJ）（引自Maynrad, L. A., 1979）RQ1LO21LCO21gCO20.7017.09628.00814.2590.7519.82826.43

14、913.4600.8020.08725.10812.7820.8520.34723.93712.2130.9020.60222.89111.6520.9520.85721.95411.1751.0021.11721.11710.749表2-3根据24h的耗氧、二氧化碳生成量和尿氮估计产热（引自maynard, L. A., 1979）基础数据耗氧392L二氧化碳生成量310.7L尿氮14.8g蛋白质代谢数据蛋白质氧化量（14.8g×6.25）a92.5g产热（92.5g×18kJ/g）a1665kJO2消耗（92.5g×0.96L/g）a88.8LCO2生成（92

15、.5g×0.77L/g）a71.2L碳水化合物和脂肪代谢数据耗氧（392L-88.8L）303.2L二氧化碳生成量（310.771.2L）239.5L非蛋白RQ（239.5/303.2）b0.79RQ为0.79时消耗303.2L氧产热6079kJ总产热（1665+6079）7744kJ注：a.每克蛋白质体内氧化产热18KJ，消耗0.96L和产生0.77L二氧化碳； b.当RQ为0.79时，每消耗产热是20.05KJ。例方程组： 6O2+6CO2=2.816 23O2+16CO2=10.033解方程组可求得每克分子O2产热0.3609MJ，每克分子CO2产热0.1084MJ。HP（产热

16、·兆焦）=0.3609O2+0.1084CO2如果考虑蛋白质氧化和CH4：HP（产热）=3.866×O2+1.200×CO2+0.518×CH4-1.431×N（千焦） （升） （升） （升） （克）2.仪器(1)密闭式：全密闭，O2计量进入，废气抽出CO2、H2O经H2SO4和碱石灰吸收循环加热再进入。(2)开放式：进入的是加热（与室内平衡）的空气，废气抽出计量，一部分取样分析O2和CO2（也可扣CH4），然后与进入空气O2和CO2比较可算出O2、CO2的变化量。(3)面具式：原理类似开放式测热装置，根据进出气体O2和CO2的含量计算消耗的O

17、2和呼出的CO2。例：根据24小时耗O2和CO2生成量及尿氮估计产热（动物营养学教材174页表12-5）。(三)C、N平衡法1.原理 体内沉积是脂肪和蛋白质，根据每克脂肪和蛋白质的C、N含量和产热量可计算出沉积能，粪、尿、甲烷能可测得，从摄入饲料总能，就可计算出畜体产热。2.方法 用呼吸装置测CO2和CH4产生量，并收集粪尿测C、N含量；然后根据每克脂肪含C76.7%，N为零，产热39.7KJ；每克蛋白质含C52%、N16%，产热23.8KJ，再从C、N沉积量算出沉积能。例：用C、N平衡法测饲料沉积能（动物营养学教材122页，表12-4）。表2-4用碳、氮平衡法估计饲料沉积能（g）（引自Kir

18、chgessner, M., 1987）第一阶段（基础饲粮）C N第二阶段（基础饲粮+被测饲粮）C N饲料25001603600200粪6003570050尿100120130140CH4130-160-CO21570-2110-相差+100+5+500+10一、二阶段相差-+400+5沉积400gC和5gN其能量为： 如果以每克C的脂肪产热51.83KJ，每克N的蛋白质比每克C的脂肪少产热19.40KJ，沉积400gC和5gN的能量可计算如下：51.83×40019.40×5=20635（KJ）（四）屠宰法1.原理 通过屠宰直接测沉积组织的能量，也可推算出畜体产热（维持）

19、。 食入能=粪能+尿能+皮屑能+甲烷能+沉积能+畜体产热2.测定方法 屠宰不放血，心脏或静脉注入麻醉药和凝血剂。除去消化道内容物，冷冻、粉碎（胴体粉碎机），取样测组织燃烧热。凡是CH4产量较高的，用屠宰法估计的畜体产热不准确，应扣除CH4能。一些试验结果表明，此法测得值低于测畜体产热推算的沉积能，有可能是间接推算比直接测沉积能多了一些其它损耗如CH4、皮屑以及胴体多次处理测定带来的误差等。三N平衡主要用于研究蛋白质的代谢。难在进食含N日粮时，维持N（内源N排泄）的测定，不同于维持能可直接测。用同位素稀释技术可以直接测定进食含N日粮时的维持N（内源N排泄），但方法有待完善，测定值还不太可靠。测定

20、方法在消化试验基础上，增加尿N的测定，当然也可测机体沉积N，所以N平衡试验有时也包括屠宰试验。第五节 饲养试验（生长效应法）一作用综合评定养分的需要量和养分的相对生物效价（可利用性）。二原理养分剂量变化对机体增重，组织被测养分含量及有关的各种理化指标，如胫、股骨强度，功能酶，代谢产物异常及缺乏症。 三使用原则1.用于需要量的确定 有过量水平，生长快速期，即愈小愈敏感，当然要根据试验目的确定。2.评定效价（对比法），应低于最大需要量。四试验设计的注意事项1.唯一差异原则 除考察因素外，其它条件完全一致（血缘、性别、体重、年龄、健康、环境温度（局部有效温度）、空气流速及清洁度、饮水、光照、声响等，

21、特别是饲粮组成中的各种对考察因子能产生影响的物质。2.考察因素水平间差异愈小，对条件的一致性要求愈高，重复数要求也愈多，即群体（样本）变大。各处理间和组内间的差异（由于试验动物本身及条件不一致所引起的误差）不能比考察因素产生的真实差异还大。即误差方差的均方与处理间的均方之比（F值）能达到显著标准为宜。因此，条件的控制的严格程度随试验考察因素效应大小（差异大小）而异。原则上是在保证能达到试验目的前提下，愈一致愈好，但太严了难于实现。表2-5方 差 分 析 示 例：变差来源df平方之和均方F各培养液间5847.05169.4114.37*各培养液内24282.9311.79总 的291129.98

22、3.随机分组动物随机（年龄、体重、血缘）分组，再随机到试验场地的具体位置（环境条件的一致）。4.常用试验设计方法多用单因子设计，多做两个小试验比做一个大的复因子试验，即容易控制条件，试验结果也更令人信服，可靠。在动物数量不多，体重差异较大的情况下，为了获得较满意的结果，除了用协方差分析，也可按配对试验的原理进行设计、检验（T检验），只是检验要麻烦一点。慎用旋转通用组合设计考察因素的效果，有加性（叠加）作用的情况下较合理，如考察化学反应的温度、时间、酶（催化剂）。群饲与单个饲养、任食与限食群食有利采食，但对死亡动物摄食的饲料扣除麻烦。单个饲养采食受影响，从而影响增重。但饲料消耗好统计。一般用生长

23、效应确定氧分的需要量，采用任食；评定养分生物效价的消化和代谢试验用限食。5.纯合日粮与实验动物Sem-Purified diet作用（功绩）：确定必需养分 确定最低需要量 毒性试验优点：试验动物（小白鼠、大鼠）血缘纯、周期快、成本低（试验动物）。缺点：费用高，对饲粮纯度要求严。第六节 试验技术一同位素示踪及同位素稀释技术1.同位素示踪技术：标记跟踪物质的代谢过程、流向及流量。2.同位素稀释技术：标记机体物质代谢库，达到全身各部组织含有与标记同样的该物质的标记元素（物质）占该物质总量的比例相同。用于物质代谢速率的测定，内源排泄量的测定。但内源N或氨基酸的测定受肠道微生物和肠粘膜代谢的影响，有悖于

24、稀释的原理。另因同位素用量大，有污染，一般采用稳定同位素N15。但测定稳定同位素需质谱仪。二外科造瘘技术及吻合术1.作用 用于养分消化率的测定，如过瘤胃（通过瘤胃微生物作用）的饲料蛋白的能量（回肠末端氨基酸）消化率的测定。2.方法瘘管种类A简单T型瘘管：可安放在瘤胃、十二指肠，测反刍动物饲料蛋白质的降解率；安放在回肠末端、盲肠测氨基酸消化率。缺点是食糜样品收集缺乏代表性。简单T型瘘管由于安装在回-盲瓣前后的位置不同，有多种形式和叫法。B桥式瘘管：实际上是两个瘘管，一个让食糜流出，取样，取样后剩下的又从另一瘘管送回消化道。样品有代表性，但很繁琐。C可操纵（可移动）回-盲瘘管术：是简单T型瘘管的衍

25、生，即在与回盲瓣相对的对侧盲肠壁和相应的腹壁安一个瘘管，并导入一根尼龙线，线头系一个不锈钢圈，圈的直径比回盲瓣处回肠的内径稍大（约3-3.5cm），并置入回-盲瓣前的回肠内。在回-盲瓣交接处的肠壁外套一直径小于内环的不锈钢圈，放在内环与回盲瓣交接处之间。尼龙线另一头，通过瘘管，引出体外，即瘘管头外，并固定在瘘管头上，以免头缩回腹腔盲肠内。由集食糜烂时，拉紧尼龙线，使回-盲瓣紧贴在瘘管腹壁头端，食糜就可流出瘘管外。回-直肠吻合术将回肠近端，回盲瓣前（5cm左右）切断，靠回-盲瓣端进行荷包缝合；然后将直肠距肛门的2/3-3/4处切断，将回肠断端与近肛门直肠断端吻合，直肠距结肠端同样用荷包缝合封闭，

26、在结肠与直肠交接处肠壁切一口安装瘘管，排泄大肠残留的食糜。回肠与直肠吻合有端-端吻合，也有端-侧吻合，但以端-端吻合效果好，手术成功率高。瘘管也可在直肠近结肠断端直接安装。如果T型瘘管两翼太短，随着肠管的长大，瘘管易脱落。肠端开口易与腹壁粘合，如果大肠残留食糜已排空完，腹壁切口愈合后没有什么危险，对试验也无影响。回-直肠吻合术安装瘘管的另一作用是为了在手术头几周，灌注电解质容液。术后头1-2周对N、AA的消化率无影响，但对矿物元素的影响较大。第一周大多数矿物元素的消化率降低，有资料报导，钠、镁、锰消化率为负值，以后逐渐升高。但锌回升缓慢，到第五周，仍为负值。第三章 饲料养分营养价值的评定第一节

27、 饲料蛋白质营养价值的评定一引言蛋白质营养价值（质量）的评定一直是营养学研究的重点和热点。从1841年法国生理学家（Francois Magendie）发现明胶不能代替肉蛋白以来，营养学家一直没有停止过这方面的研究。但是，由于对蛋白质营养机理的正确认识本身就是一个漫长的过程，对其营养价值的认识和评定方法也经历一个漫长的进化过程，至到理想蛋白模式和可消化氨基酸的提出与实践，使蛋白质营养价值的评价，才真正实现了分子水平的需要和供给的较精确的统一。二评定方法的历史回顾1.N与CP各种蛋白质含氮是15.5-18.0，平均取16，取N×6.25为CP。由于动物和消化利用的是氨基酸或肽的形式，而

28、不是氮，所以平均乘6.25求得的CP也只是蛋白质及含氮化合物的量的一种表示形式，不是生物可利用值。2.DCP（Digestible Crude protein）曾经盛行一时，因不能反映蛋白质是以氨基酸、肽消化吸收的实质，对于评定单胃动物饲料蛋白质的营养价值已无多大意义，但对反刍动物意义较大。3.BV（Biologioal Value）thomas (1909)提出，Michell（1924）修订4. NPU（Net protein utilization）净蛋白利用率，Bender and Miller 1953年提出，其原意为：5.NPV（净蛋白质Net protoin value）NPV=

29、食入N×NPU×6.256.PER（蛋白质效率比 Protein efficiency ratio）Osborne and Mendel 1919年提出，其定义为：PER=体增重/食入CP7.NPR（净蛋白比 Net protein ratio）Bender and Doll 1957年提出，其意义为：式中CP换成N即为NPU8.GPV（总氮价值 Gross protein value）9.RS（斜率比 Slope ratio）Hegsted and Chang 1965年以生长大鼠为实验动物，多用于测定人的食物蛋白质量。又称相对蛋白质价值（Relative protein

30、 value）。10.化学比分（Chemical score）Mitchell and Block 1946提出，其实质是以一种优质的动物蛋白的第一限制氨基酸（如赖氨酸）含量为标准，被检饲料所含此氨基酸相当于它的百分比值。一般是以鸡蛋蛋白为标准。例如玉米蛋白含Lys为2.79、鸡蛋蛋白含Lys为7%，其玉米蛋白对于鸡蛋白的比分为：11.必需氨基酸指数EAAIEssential amino acid index, Oxer（1951）。a：为被测蛋白必需氨基酸，猪为10，鸡为11。b：为标准蛋白必需氨基酸，猪为10，鸡为11。综上所述，上面的所有方法只能比较一种饲料或饲粮蛋白质的好坏。后两种方法

31、虽反映了蛋白质氨基酸的质量情况，其表示方法仍无可加性，因此仍不能与需要量直接挂勾。在50年代确定了动物的必需氨基酸以后，结合限制性氨基酸，既可判别蛋白质量的好坏，也可与需要量挂勾。因此从总氨基酸进入可消化氨基酸，才真正实现了需要与供给较精确的统一。三AA生物效价的评定可消化氨基酸、可利用氨基酸、有效氨基酸都属于AA生物效价，由于评定的方法不同，叫法有所不同，但实际都是以能否被动物消化利用为基础的。可消化氨基酸的最大优点是：1抓住了蛋白质营养的实质，即以AA或肽的形式吸收和构建新的蛋白质。2能够与动物的需要准确挂勾，而且使理想蛋白更具有实际意义。（一）DAA的测定1猪由于大肠微生物干扰较大，使测

32、定值偏多（略高10%），故均采用回肠末端收取食糜的方法。主要有以下几种方法；aT型瘘管（simple-T-cannulas）-由Horszcaruk等（1972）首创，一般将瘘管安在回-盲瓣前3-10cm处。Laplace和Borgida（1976）、Darcy等（1980）认为回-盲瓣后安瘘管对猪生理影响较小。但Moughan和Smith（1987）认为两种T型瘘管对AA消化率的差异无显著影响。最大缺陷是必须用指示剂，因不可能收集全部粪尿，由此也带来取样缺乏代表性，而且较麻烦。b桥式瘘管（重进瘘管）（r-entrant cannulas）1973年由Horszcaruk和Zebrowska首

33、创。有以下几种形式：回-回桥式瘘管（ileo-ileo）回-盲桥式瘘管（ileo-caecal）瓣后回-结肠桥式瘘管（ileo-colic-post-valve）不同部位桥式瘘管测干物质消化率有差异（Den Hartog等，1988）。Darcy等（1980）的研究表明，瓣后回-结肠桥式瘘管对荷术猪的生理影响较小，手术成功率较高。桥式瘘管的缺点是粪样（食糜）取后又要送回消化道，相当繁琐。c回-直肠吻合术（ileo-rectal anastomosis tehnique）1984年Pioard提出，后经演变，由于回-直肠断端的位置和结合方式的不同，又有以下几种形式。端-端吻合（end-to-en

34、d）端-侧吻合（end-to-side）但以端-端吻合手术成功率高些。一般在回盲瓣前切断回肠，在直肠与结肠交结处前的直肠部位切断。回-直肠吻合术的最大优点是收粪简便，而且可收集全部粪样。不足之处是手术较复杂，手术成功率相对较低，但也取决于技术的熟练的程度。术后对猪的护理也较麻烦。d可移动（可操纵）的回-盲瘘管术（steered ileo-caecal valve）Morz（1989）提出，手术具体作法前已叙及。此法的最大优点是手术简单，荷术猪生理影响小。不足之处仍需指示剂。上述各种方法的测值并无太大的差异，加上AA分析测定的误差本身较大，所以很难说那一个方法测值最准确。目前主要是看那种方法最简

35、便，包括取样手术和对术荷猪的影响。相对说来，回-直肠吻合术还较可取，虽手术麻烦，但粪样（食糜）收集简单，而且可做到有代表性。2禽禽饲料氨基酸消化率的测定相对较简单。因禽大肠较短，而且主要是盲肠，所以不必安装瘘管。为减少盲肠的影响，可切除盲肠。但大多数饲料切除盲肠与否对AA消化率无显著影响，只少数饲料，如肉骨粉等切除盲肠AA消化率降低。关于切不切除盲现有争议，一些人认为盲肠在氮代谢中对尿中尿酸的二次利用以及对消除NH3的不利影响有重要作用。未经小肠吸收的氨基酸和短肽也可为盲肠微生物充分利用，因此不宜切除。但盲肠切除与否对大多数饲料AA消化率无影响，盲肠对AA的吸收只有在通过其颈部时才存在极有限的

36、吸收。而且切除盲肠主要是减少微生物的影响，因此切除盲肠只是测定少数饲料（如肉骨粉等）的AA消化率可能更准确，对于大多数饲料切与不切影响不大。由目前AA分析仪的测定值误差较大，必然会影响到饲料氨基酸的消化率测值的准确性，一次试验测得的值很难说准确、可靠，一般取平均值较合理。（二）内源氨基酸的测定方法氨基酸真消化率的准确测定关键在于内源氨基酸的准确测定，特别是近似正常含氮日粮情况下内源氨基酸的准确测定至今还没有理想的方法。1、传统方法饥饿法无氮日粮法 回归法2、 胍基化法（同型精氨酸法）(Moughan等，1990）原理： 该方法通过将日粮中的赖氨酸全部胍基化后转变为同型精氨酸，消化道内的赖氨酸全

37、部为内源氨基酸。同型精氨酸吸收进入机体后可降解成赖氨酸参与机体蛋白质合成，而不影响机体赖氨酸的需要。家禽由于体内缺乏将同型精氨酸转变为赖氨酸的酶，所以导致尿液中有大量的同型精氨酸排出，影响该方法的应用。胍基化其它氨基酸，影响消化率饲喂胍基化蛋白日粮采食量下降胍基化不完全，影响计算准确性。3、 酶解酪蛋白(EHC)/超滤法(Darragh等，1990)原理：以EHC作为唯一氮源，假定分子量（MW）<10KDa可完全被吸收，食糜中排出的N和AA全部为内源。不足处：MW<10KDa作为完全吸收标准证据不够充分。食糜中含有MW<10KDa的内源含N物占总含N的10-27%4、 同位素

38、标记法原理：(1) 标记饲料(Van leeuwen等，1994)食糜外源N/食糜总N=食糜N15丰度/饲料N15丰度食糜内源N=食糜总N-食糜外源N。不足：随食入后时间的延长（7-8h），饲料N经再循环进入消化道。 (2) 内源物标记（动物标记）（de Lange等，1990）原理：血液15N-Leu/血液总Leu=食糜15N-Leu/食糜内源总Leu 食糜15N-Leu食糜内源总Leu= × 血液总Leu 血液15N-Leu不足：(1)N和AA前体池的存在与否及稳定性 (2)肠粘膜利用微生物合成的AA合成蛋白质，并分泌进入肠道，影响其内源N及AA的测定。（3）一次性注射少剂量3H

39、-Leu（姚军虎，2000）原理：根据稀释原理，注射后一定时间，下式可能成立或近似相等。食糜3H-Leu丰度（内源） 血液3H-Leu丰度 = 食糜中Leu 血液中Leu 不足：等式成立的时间难确定准确5、差量法（Ammer man，1957）原理：假设在动物进食正常日粮粗蛋白范围内，内源氮或内源AA的排泄量不随日粮CP水平的升高而变化或者变化很小可忽略不记，下式成立。 前后两次食入量之差前后两次排泄物之差真消化率= 前后两次食入量之差内源N或AA=食入N或AA×（真消化率表观消化率）不足：内源N或AA排泄量较稳定或变化很小的日粮CP水平范围的确定较困难。（三）有效赖氨酸的测定1原理

40、主要是基于美拉德氏或褐变反应（Maillard or browning reactiong）反应后还原糖与肽链中的-NH3结合，使胰蛋白酶无法切开，从而不能被消化吸收，如果糖-赖氨酸、半乳糖-果糖-赖氨酸。因此，有多少游离的-NH3能够被定量测出，就能确定有多少仍可被利用的（有效的）赖氨酸。2方法（1）二硝基氟苯（FDNB）法Carpenter，1957年提出，FDNB与游离的-NH3结合，生成-DNP-赖氨酸，此物再与氯甲酸甲酯络合成可溶于醚的衍生物，再用石油醚提取，然后分别比色测定标准液（E标）、A、B对照管（EA、EB）的消光系数，最后计算: 此法的不足之处是水解24小时，碳水化合物可破

41、坏生成的-DNP-Lys。为此，Kakade and Liener（1969），提出了改进的TNBS（三硝基苯磺酸）法，此法较简单，只水解2小时，但碳水化合物干扰更严重，而且TNBS属危险化学试剂，不易购得。（2）染料结合法（Dye-binding methods）染料有茚三酮、酸性橙-12（A0-12）、金橙、指示剂-。先用丙酸酐将-氨基掩蔽，再与染料结合（染料可与赖、组、精等碱性氨基酸结合），然后与直接用染料结合的样品的吸光度之差，即可算有效赖氨酸的量，即用丙酸酐掩蔽的量。四反刍动物蛋白质质量评定新体系（一）新体系产生的背景（原因）反刍动物蛋白质质量的评定一直是一个难题，由于瘤胃微生物的作

42、用，使饲料蛋白质通过瘤胃后面目全非，以往用可消化蛋白或酸洗涤不溶氮AND（acid dctergent insoluble nitrogen）来衡量其质量的好坏，显然不能反映反刍动物蛋白质消化代谢的实质，而不能准确地指导饲养实践。具体说有以下几点不足：1不能反映日粮CP在瘤胃中的降解和非降解部分；2不能反映日粮降解蛋白转化为瘤胃微生物蛋白的效率及合成量；3不能反映进入小肠的日粮非降解蛋白质和微生物蛋白质的量、氨基酸的量及其真消化率。简单说反映不出进入小肠的真可消化蛋白的质量。（二）新体系的核心和实质核心是饲料蛋白质降解率的测定。实质是将所需CP分为微生物需要CP和宿主需要CP两部分。（三）饲料

43、蛋白质降解率的测定1体内法（1）同位素标记结合瘘管技术原理： 十二指肠非氨氮的测定安装瘘管微生物氮测定用同位素标记内源氮测定估计、实测困难（2）增量法（回归法）基础日粮（能满足微生物氮需要）+不同水平的待测饲料（保持TDN相当），然后以十二指肠非氨氮对待测饲料摄入作回归直线，根据回归直线斜率可计算降解率。2尼龙袋法（自然位置法）原理： 但在实际测定中，饲料中有一部分是速溶的，可不经微生物作用就很快降解，而非速溶部分在微生物作用下，逐步降解。由于瘤胃内降解后又不断在排出，所以外排速度又影响到降解速度；所以在一定时间内的降解率可用下面两式表示：不考虑外排速度 考虑外排速度 随T增加(1-e-(c+

44、k) t)趋于1，故有： a：可溶性蛋白消失量（率）常数b：为降解速率，单位时间能降解多少c：为b的降解速率常数t：孵化时间k：外排速度由于在降解过程中饲料颗粒大小也影响降解速度，所以可进一步考虑大颗粒降解为小颗粒的速度（k2），小颗粒排出瘤胃的速度为k1，则有： NRC（2001）奶牛的标准对饲料中RDP及UDP提出了如下的估计方案。总粗蛋白质酸性洗涤剂硼酸缓冲液中性洗涤剂可溶AB1不可溶B2B3C可溶AB1B2B3可溶AB1B2不可溶B3C不可溶CRDP=A+B1(KdB1/(KdB1+Kp)+B2(KdB2/(KdB2+Kp)+B3(KdB3/(KdB3+Kp)RUP= B1(Kp/(K

45、dB1+Kp)+B2(Kp/(KdB2+Kp)+B3(Kp/(KdB3+Kp)+CKd为潜在降解组分B的降解速率（%，h）KP为外排速率（%，h）RDP=A+B(Kd/(Kd+Kp)RUP= B(KP/(Kd+KP)+C在用尼龙袋技术测定饲料降解率要考虑表中所列因素：项 目推 荐饲粮类型与测定值使用的条件一致，提供原料组成和化学成分（至少应包括DM、CP、NDF和粗灰分）饲喂水平与测定值使用的条件一致，报告DMI和瘤胃pH值饲喂频率自由采食；如果DMI不是自由采食，则每天饲喂2次用于评价的原料化学成分至少提供饲料DM、CP、NDF和灰分含量的数据物理特性经过加工的原料要予以特别说明（如蒸汽压片

46、，密度0.39kg/L；加热150，3h等）取样过程2mm筛孔（Wiley粉碎机）尼龙袋材料聚脂纤维孔径40-60m培养过程动物数量2头，标明体重试验时间2d重复数1预先浸泡推荐的瘤胃中的位置瘤胃底部放入/移走同时培养时间（h）0，2，3，8，16，24和48（粗料时还包括72），提供0时间点的洗涤消化率，以便能够计算延滞期润洗洗衣机洗涤（5次，每次洗涤1min）标准底物按推荐进行微生物校正视需要情况而定数学模型非线性模型3体外法溶解度法，缓冲液或者0.15M的NaCl溶液。 瘤胃液孵化法，39，厌氧。酶解法、注意pH、孵化时间、温度、酶饱和条件及缓冲液组成。五国际上推行的反刍动物蛋白质新体系

47、1英国降解（RDP）和未降解蛋白（UDP）体系1977年由Rog等提出，1980年由ARC公布，1984年和1992年由ARC作了两次修订（Agricalture and Food Research Council）。采用的校正外排速度的尼龙袋法。2法国小肠可消化蛋白体系（PDC）1978INRA（Institur dela Recherche Agronomique）公布，1988年作进一步修订。用体外法测定的，不需校正外排速度。用能量计算的小肠可消化蛋白质为PDIE，根据降解氮计算的小肠可消化蛋白质是PDIN。3瑞士的小肠可吸收蛋白质体系(简称API体系)由Landis（1979）在法国的PDI体系的基础上提出。4北欧的小肠可吸收