染色体分带实验-10.12.22

1、实验二实验二 染色体染色体C-分带分带一、实验目的一、实验目的掌握植物染色体掌握植物染色体C分带技术及带型分析方法。分带技术及带型分析方法。二、实验原理二、实验原理l 染色体分带是染色体分带是20世纪世纪60年代末兴起的一项细胞学新技术。年代末兴起的一项细胞学新技术。l 其基本原理是借助于其基本原理是借助于酸、碱、盐、酶酸、碱、盐、酶等特殊的处理程序，等特殊的处理程序，对植物有丝分裂中期的染色体进行染色，使其在一定部位对植物有丝分裂中期的染色体进行染色，使其在一定部位显示出显示出深浅不同深浅不同的染色带。的染色带。l 各染色体上染色带的各染色体上染色带的数目、部位、宽窄、与深浅数目、部位、宽窄

2、、与深浅具有相对具有相对的的稳定性稳定性，因而为染色体形态鉴别增添了辨认的依据。，因而为染色体形态鉴别增添了辨认的依据。l 染色体带纹的多样性反映了染色体的染色体带纹的多样性反映了染色体的成分、结构、行为和成分、结构、行为和功能功能的复杂性。因此，染色体带型分析为细胞遗传学、染的复杂性。因此，染色体带型分析为细胞遗传学、染色体工程等方面提供了新的研究手段。色体工程等方面提供了新的研究手段。l植物染色体显带技术包括植物染色体显带技术包括荧光荧光分带和分带和吉吉姆萨姆萨分带两大类。分带两大类。l目前在目前在植物上植物上最常用的是吉姆萨分带技最常用的是吉姆萨分带技术，其中术，其中C带和带和N带带较为

3、常用。较为常用。l C带带: Centromere Heterochromatin or constitutive Heterochromatin带。带。l 主要显示着主要显示着丝粒丝粒、端粒端粒、核仁组织区核仁组织区或染或染色体臂某些部位的组成型色体臂某些部位的组成型异染色质异染色质。因其。因其在染色体上的在染色体上的显带部位显带部位不同，不同，分着丝粒带分着丝粒带、端粒带端粒带、核仁组织区带和中间带核仁组织区带和中间带等相应的等相应的名称。名称。植物染色体植物染色体C-带主要包括以下四种带：带主要包括以下四种带：1. 着丝粒带（着丝粒带（Centromeric Band):指着丝粒及其附近

4、的带。指着丝粒及其附近的带。2. 中间带（中间带（Intercalary Band)：分布在着丝粒至末端之间的带。分布在着丝粒至末端之间的带。3. 末端带（末端带（Telomere Band):位于染色体两臂末端的带。位于染色体两臂末端的带。4. 核仁组织区带（核仁组织区带（NOR band): 位于位于NOR区的核仁染色体专一带。区的核仁染色体专一带。1BTriticum timopheevii, AAGG?1122分带前分带前分带后分带后三、实验材料：三、实验材料：黑麦黑麦四、实验仪器及药品：四、实验仪器及药品：实验仪器实验仪器: 显微镜显微镜: 制片、镜检制片、镜检超低温冰箱（干冰或液氮

5、）：冷冻揭片超低温冰箱（干冰或液氮）：冷冻揭片温箱：恒温处理（温箱：恒温处理（Ba(OH)2）恒温水浴锅恒温水浴锅: HCl, 2XSSC定时钟，容量瓶，量筒，烧杯，试剂瓶，染色缸，定时钟，容量瓶，量筒，烧杯，试剂瓶，染色缸，培养皿，载玻片架，载玻片，盖玻片，剪刀，镊培养皿，载玻片架，载玻片，盖玻片，剪刀，镊子，刀片子，刀片, 滤纸等滤纸等.药品药品:无水乙醇无水乙醇: 脱水处理脱水处理冰醋酸（冰醋酸（45%）: 压片压片0.2NHCl: 2NHCl（母液稀释）弱酸处理（母液稀释）弱酸处理Ba(OH)2 ( 7%过饱和过饱和): 弱碱处理弱碱处理2SSC：20SSC(175g NaCl+83.

6、3g Na3C5H6O7- 1L) 1/15M Na2HPO4：23.876克克Na2HPO4.12H2O加蒸馏水加蒸馏水定容至定容至1000ml；1/15M KH2PO4： 9.07克克 KH2PO4，加蒸馏水定容至，加蒸馏水定容至1000ml；Giemsa母液：母液： Giemsa粉粉g+甲醇甲醇66ml甘油甘油66ml五五. 实验方法实验方法1发根发根2预处理预处理3固定固定在在45冰醋酸洋红中浸泡片刻（室温），然后在冰醋酸洋红中浸泡片刻（室温），然后在45冰醋酸冰醋酸压片压片。同实验一同实验一 在显微镜下挑选染色体分散而完整的片子，在显微镜下挑选染色体分散而完整的片子，在片子纵向一侧用

7、铁笔写上编号在片子纵向一侧用铁笔写上编号,置于置于70冰箱或液氮中冻片约冰箱或液氮中冻片约20min，然后用刀片揭开，然后用刀片揭开盖玻片盖玻片,置无水已醇中脱水约置无水已醇中脱水约10分钟分钟.制片置超低温或制片置超低温或液氮液氮（-70C）冰箱）冰箱冰冻揭片冰冻揭片4.冰冻揭片冰冻揭片 5.脱水脱水 100%ETOH 室温室温10分钟分钟6. 弱酸和弱碱处理弱酸和弱碱处理将标本片子在将标本片子在0.2N HCL中中(60)处理处理2.5分钟，分钟，蒸馏水冲洗；蒸馏水冲洗；室温条件下饱和室温条件下饱和Ba(OH)2处理处理7分钟分钟,用水彻底冲用水彻底冲洗干净洗干净;7.温育温育:流水冲洗后

8、置流水冲洗后置2SSC溶液溶液(60)中温育中温育60分钟。分钟。8. 染色染色:经蒸馏水冲洗，甩干后用经蒸馏水冲洗，甩干后用Giemsa 染液染色染液染色 约约10分钟左右分钟左右Giemsa染色至适度染色至适度 1/15M Na2HPO4 : 1/15M KH2PO4 = 2 : 1 20 ml 10ml 加加20-30滴染液滴染液.9. 镜检镜检, 拍照拍照.蒸馏水冲洗干净蒸馏水冲洗干净, 气干气干, 滴上二甲苯滴上二甲苯, 盖盖上盖片上盖片.10. 带型分析带型分析 将已分带的标本，进行显微摄影，冲洗、放将已分带的标本，进行显微摄影，冲洗、放大，按核型分析方法将染色体编号进行带型分析，

9、大，按核型分析方法将染色体编号进行带型分析，要求详细记录各染色体上各带纹的位置、宽窄、要求详细记录各染色体上各带纹的位置、宽窄、着色深浅和形状。最后绘制染色体模式图，在各着色深浅和形状。最后绘制染色体模式图，在各条染色体模式图上标出各条带纹的位置、宽窄、条染色体模式图上标出各条带纹的位置、宽窄、深浅、形状等线条。深浅、形状等线条。 六、染色体六、染色体C-C-分带注意事项分带注意事项: :1.做分带的材料在固定液中的时间不要太做分带的材料在固定液中的时间不要太长，否则会影响染色体形态，最终影响显带长，否则会影响染色体形态，最终影响显带;2.分带前不宜染色，因此镜检时只能用相分带前不宜染色，因此镜检时只能用相差镜头