第八章、荧光分光光度法

1、较高激发态较高激发态基基 态态吸收能吸收能量受激量受激光辐射光辐射退激退激分子在退激过程中以光辐射形式释放能量分子在退激过程中以光辐射形式释放能量荧光荧光荧光分析法荧光分析法磷光磷光磷光分析法磷光分析法 采用高灵敏度的检测系统可大大提高采用高灵敏度的检测系统可大大提高灵敏度，检测限荧光分析法比分光光度法灵敏度，检测限荧光分析法比分光光度法低低24个数量级个数量级激发激发发射荧光发射荧光强强强强光照激发光照激发去激发光去激发光 * * n基态单重态 第一激发单重态 单重态分子具有抗磁性，激发态的平均寿命约为单重态分子具有抗磁性，激发态的平均寿命约为10-8基态单重态基态单重态 第一激发三重态第一

2、激发三重态 自旋平行自旋平行三重态分子具有顺磁性，激发态的平均寿命约为三重态分子具有顺磁性，激发态的平均寿命约为10-41ST1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光S0S1S2VR：振动驰豫：振动驰豫IC：内部转换：内部转换ISC：系间窜跃：系间窜跃发光T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 荧光荧光图图5-1 分子荧光光谱产生过程示意图分子荧光光谱产生过程示意图S0S1S2VR：振动驰豫：振动驰豫IC：内部转换：内部转换ISC：系间窜跃：系间窜跃T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 荧光荧光 磷光磷光图图5-1 分子荧光、磷光光谱产生过程示意图分子荧光、磷光光谱产生过程示意

3、图S0S1S2VR：振动驰豫：振动驰豫IC：内部转换：内部转换ISC：系间窜跃：系间窜跃VR发荧光的分子数发荧光的分子数激发态分子总数激发态分子总数ifffKKK 0.11 205 278 0.29 286 3100.46 365 400苯苯萘萘蒽蒽 350菲菲线状环结构比非线状线状环结构比非线状结构的荧光波长长结构的荧光波长长 芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系，芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系，多数能发生荧光多数能发生荧光 多环芳烃是重要的环境污染物，可用荧光多环芳烃是重要的环境污染物，可用荧光法测定法测定 3，4 - 苯并苯并芘是强致癌物芘是强致癌物ocoo-oo-coo-oo-荧光素

4、：氧桥把两荧光素：氧桥把两个环固定在一个平个环固定在一个平面上，具有平面结面上，具有平面结构，强荧光物质构，强荧光物质酚酞：无氧桥把两酚酞：无氧桥把两个环固定，不能很个环固定，不能很好的共平面，为非好的共平面，为非荧光物质荧光物质反式：平面构型 强荧光体顺式：非平面构型 非荧光体C=CHHC=CHHNOHNOHMOHO_OHH+_例：例： 苯酚苯酚离子化后，离子化后，荧光消失荧光消失pH1有有荧光荧光pH13无荧光无荧光例：例： 苯酚苯酚有荧光有荧光无荧光无荧光OHO_另外，表面活性剂也会影响荧光强度和特性荧光池荧光强度检测器IIA0lg将上式展开! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(3 .

5、 2320AAAIIff! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(3 . 2320AAAIIff当当A0.05时，时，光源第一单色器液池检测器第二单色器检测器放大器及记录器与分光光度计有两点不同与分光光度计有两点不同两个单色器两个单色器检测器与激发光互成直角检测器与激发光互成直角应用最广泛的一种光应用最广泛的一种光源，可发射源，可发射250800nm很强的连续光源很强的连续光源I固定固定获得方法：先把第二单色器的波获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的长固定，使测定的I I固定固定获得方法：先把第一单获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激色器的波长固定，使激发的发的图吸收峰荧光峰磷光峰xCxC)(1QCKIIf后前猝灭剂加入前的荧光强度猝灭剂加入后试液的荧光强度常数猝灭剂浓度)()()(QCMCMQCKf 比较CsCxIIfsfx00ffsffxfsfxIIIICsIICsCx荧光强度减去空白后若有试剂空白，测得的CHHOHOHONNNNHCHCHCH OHCH22OOH CH C33缺VB2会得口角炎、舌炎、唇炎、脂溢性皮炎维生素维生素B2荧 光 形 成 机 制单重态第二激发态第一激发态三重态荧光磷光内转换体系