实验一光学显微镜的使用和动物细胞的形态结构

1、光学显微镜的结构和使用光学显微镜的结构和使用动物细胞的形态结构动物细胞的形态结构生命科学技术学院生命科学技术学院细胞工程教研室细胞工程教研室许重洁许重洁光学显微镜和它拍摄的图片光学显微镜和它拍摄的图片v 熟悉光学显微镜基本结构和用途；熟悉光学显微镜基本结构和用途；v 掌握显微镜维护的基本知识；掌握显微镜维护的基本知识；v 初步掌握低倍镜、高倍镜使用方法；初步掌握低倍镜、高倍镜使用方法；v 掌握标本制备的方法掌握标本制备的方法实验材料与用品材料：生物玻片标本材料：生物玻片标本用品：普通光学显微镜、相差显微镜、暗视用品：普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、擦镜野显微镜

2、、荧光显微镜、倒置显微镜、擦镜纸、乙醚酒精、香柏油。纸、乙醚酒精、香柏油。一、显微镜的使用一、显微镜的使用1.1.显微镜显微镜的结构的结构机械部分机械部分镜座镜柱镜臂镜筒物镜转换器标本推进器标本推进器载物台载物台标本推进器螺旋调焦螺旋光学部分光学部分目镜：目镜：1010（放大倍数）（放大倍数）物镜：物镜：红，4黄，10蓝，40白，100目镜目镜物镜物镜10/0.25: 10/0.25: 放大倍数放大倍数/ /数值孔径（分辨率）数值孔径（分辨率）160/0.17:160/0.17:物镜长度物镜长度/ /允许盖玻片厚度允许盖玻片厚度照明部分照明部分灯光：光源灯光：光源光圈（光阑）：控制光束大小光圈

3、（光阑）：控制光束大小 调节亮度调节亮度光圈光圈灯光灯光聚光镜聚光镜聚光镜：将平行光汇聚在物镜，聚光镜：将平行光汇聚在物镜， 可得均匀亮度可得均匀亮度 升高与降低聚光镜升高与降低聚光镜如何调节观察视野的明暗度？2.2.显微镜的使用方法显微镜的使用方法低倍镜的使用：低倍镜的使用：（1 1）取镜：）取镜：右手握镜臂左手托镜座右手握镜臂左手托镜座，（2 2）置镜：实验台正位偏左，距桌边）置镜：实验台正位偏左，距桌边5cm5cm；（3 3）对光：打开光源，调整粗准焦螺旋，）对光：打开光源，调整粗准焦螺旋，使载物台与物使载物台与物镜分开镜分开，转动物镜转换器将低倍镜，转动物镜转换器将低倍镜对准通光孔对准

4、通光孔，确认，确认聚光镜上升、光圈打开，向目镜观察，看到明亮视野聚光镜上升、光圈打开，向目镜观察，看到明亮视野；（3 3）装玻片标本：移开物镜，将玻片标本放于载物台，）装玻片标本：移开物镜，将玻片标本放于载物台，标本推进器固定，旋转标本推进器旋钮，标本推进器固定，旋转标本推进器旋钮，调整标本目调整标本目标对准聚光镜正上方标对准聚光镜正上方；（4 4）调焦：低倍镜对准标本目标，）调焦：低倍镜对准标本目标，侧面观察并调节粗侧面观察并调节粗准焦螺旋准焦螺旋，至标本与物镜相距，至标本与物镜相距0.5cm0.5cm处停止，再观察处停止，再观察目镜并调整粗准焦螺旋转动载物台下降，直至物像清目镜并调整粗准焦

5、螺旋转动载物台下降，直至物像清晰，可用细准焦螺旋调整。晰，可用细准焦螺旋调整。高倍镜的使用：高倍镜的使用：（1 1）先在低倍镜下找到目标物先在低倍镜下找到目标物，移动至视野中央；，移动至视野中央；（2 2）不动调焦螺旋，从侧面观察物镜不动调焦螺旋，从侧面观察物镜，转动物镜转换器，转动物镜转换器，切换到高倍镜下切换到高倍镜下，使高倍镜对准通光孔；，使高倍镜对准通光孔；（3 3）从目镜下观察，调整视野亮度，）从目镜下观察，调整视野亮度，转动细准焦螺旋转动细准焦螺旋直至直至出现清晰的物像；出现清晰的物像；二、临时制片二、临时制片1.1.人口腔粘膜上皮细胞（涂片）人口腔粘膜上皮细胞（涂片） 漱口漱口擦

6、片（载玻片盖玻片各一张）擦片（载玻片盖玻片各一张）取材取材 涂片（单方向一次性）涂片（单方向一次性） 甲苯胺蓝染色甲苯胺蓝染色（1min1min） 盖片盖片镜检镜检 注意事项：注意事项： 取材注意力度取材注意力度 单方向一次性涂片单方向一次性涂片 盖片应避免气泡产生盖片应避免气泡产生口腔粘膜上皮细胞口腔粘膜上皮细胞人口腔上皮细胞人口腔上皮细胞生物绘图生物绘图1.1.用铅笔（用铅笔（HB/2HHB/2H）硬度稍高）硬度稍高2.2.选择典型结构绘图，特征、选择典型结构绘图，特征、比例等比例等3.3.线、点绘图：线绘制轮廓，线、点绘图：线绘制轮廓，要平滑；点的疏密表示颜色要平滑；点的疏密表示颜色深浅

7、，点要圆，垂直点点。深浅，点要圆，垂直点点。4.4.标注结构，文字标右侧标注结构，文字标右侧5.5.图名称标在图的正下方，标图名称标在图的正下方，标注放大倍数注放大倍数6.6.无需边框无需边框生物绘图注意事项生物绘图注意事项1.1.表现形式只有点和线，不能涂阴影。表现形式只有点和线，不能涂阴影。2.2.对各个部位要加以说明。对各个部位要加以说明。3.3.引线要平行，前端可以不对齐，后端引线要平行，前端可以不对齐，后端 一定要对齐。一定要对齐。4.4.绘图用普通铅笔，不能用彩色铅笔。绘图用普通铅笔，不能用彩色铅笔。2.2.蛙血细胞（推片）蛙血细胞（推片） 擦片（载玻片两张）擦片（载玻片两张）牛蛙

8、处死（双毁髓）牛蛙处死（双毁髓）解剖解剖心脏采血心脏采血滴片滴片推片推片晾干晾干镜镜检检重点：重点： 大小、大小、 位置、角度、速度位置、角度、速度双毁髓法双毁髓法以左手握住蛙，背部向上，用食指压住其头部，使其略向下弯，将毁以左手握住蛙，背部向上，用食指压住其头部，使其略向下弯，将毁髓针自枕骨大孔插入，先左右横断脊髓，再向前伸入颅腔捣毁脑，然髓针自枕骨大孔插入，先左右横断脊髓，再向前伸入颅腔捣毁脑，然后再将毁髓针撤回至枕骨大孔，反向插入脊椎管破坏脊髓，检查蛙四后再将毁髓针撤回至枕骨大孔，反向插入脊椎管破坏脊髓，检查蛙四肢肌肉完全松弛后处死成功。肢肌肉完全松弛后处死成功。细胞膜细胞质细胞核蛙红细胞示意图蛙红细胞示意图3.3.脊髓前角运动神经细胞的制备和观察脊髓前角运动神经细胞的制备和观察 取脊柱取脊柱 剪去多余的肌肉和结缔组织剪去多余的肌肉和结缔组织 掰开脊柱，掰开脊柱， 剪下一小段脊髓剪下一小段脊髓 压片压片 甲苯胺蓝染色甲苯胺蓝染色5 5分钟分钟 盖片盖片 吸去多余染液吸去多余染液 观察观察重点：压片重点：压片 量、力量均匀、不可滑动、云雾状量、力量均匀、不可滑动、云雾状星状细胞星状细胞离体培养的新生老鼠脊髓神离体培养的新生老鼠脊髓神经细胞经细胞(HE(HE染色染色) )作业