2019年普通遗传学第十七章基因组自学自出试题及答案详解第一套

1、一、名词解释1 、蛋白质工程2 、基因组文库3. 多克隆位点4. Southern杂交5. 基因治疗6. 转基因动物7. 显微注射技术8. Klenow 片段9. 荧光定量 PCR10. 基因芯片11 、cDNA 文库12 、基因枪13. 融合蛋白14. 表达载体15. 限制性核酸内切酶16. Northern杂交17. 逆转录 PCR18. 转基因植物19. 体细胞核移植20. DNA 改组21 、多克隆位点：22 、穿梭载体：23. DNA 连接酶：24. 核酸分子杂交：25. 融合蛋白：26. 基因敲除：27. 反义核酸技术：28. 荧光定量 PCR29. 基因治疗30. 显微注射技术3

2、1. 基因组 DNA文库：32. DNA的复性：33. Tm：34. 选择标记基因：35. 基因和基因组 :36. 分子杂交 ：37. 生物技术：38. 载体：39. cDNA文库：40. 转化 :41. 黏性末端42. 重叠基因：43. 基因组文库：44. 同尾酶：45. 酶切位点二、选择题1 、构建 cDNA 文库时，选用下列哪种载体较好？-质粒SV40 病毒Ti 质粒 YAC（酵母人工染色体）2 、在 Northern杂交中，探针主要用什么来进行标记？-同位素 EB（溴化乙锭）染料DNA3 、构建 GST蛋白表达系统的载体是为了是目标蛋白以哪种方式表达？（ ）（ ）-（ ）融合表达分泌表

3、达独立表达包含体表达4 、 PCR反应中 Taq 酶常常没有错配碱基纠错功能，因为它没有-（ ） 5 3 聚合酶活性 5 3 外切酶活性3 5 外切酶活性 3 5 聚合酶活性5 、以下哪种酶需要引物？ -（ ）限制性核酸内切酶末端转移酶逆转录酶 DNA连接酶6、 II 型限制性核酸内切酶的切割位点是-（ ） 识别序列内识别序列 1000bp 以外识别位点下游 24 26bp 处 DNA分子任一位点7 、 Ti 质粒中能插入到植物基因组中的DNA区段是 -（ ）复制远点区毒素蛋白区T-DNA 区冠婴碱代谢区8 、艾滋病病毒 HIV 是通过下列哪个基因编码的产物识别人体T淋巴细胞的？ -（ ）en

4、vpolgag LTR9 、 T4DNA 连接酶能催化下列哪种分子相邻的5 端磷酸基团与 3端羟基末端之间形成磷酸二酯键？ -（ ）双链 DNA 单链 DNAmRNA rRNA10 、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？-（ ）lacZ GFPAmpr ori11、基因治疗的载体采用下列哪种载体比较合适？-（ ）逆转录病毒 Ti 质粒噬菌体 质粒 pBR32212 、采用原核细胞表达系统的优点之一是可以与下面什么过程直接相连-（ ）发酵工程转基因动物转基因植物基因治疗13 、以 mRNA为模板合成 cDNA时，所用的工具酶是 -（ ）DNA聚合酶 I DNA连接酶逆转录酶核酸酶14

5、、YAC是-（ ）酵母人工染色体人工 Y 染色体细菌人工染色体粘粒15、用 Sanger 双脱氧法进行 DNA测序时，凝胶上读出的序列是 -（ ）模板链的模板链的互补链的mRNA的 cDNA 的16、同位素标记探针是指在探针上连接-（ ）32P 生物素荧光素酶17、Southern 杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？-（ ）DNA RNA蛋白质染色体18、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA 与载体 DNA 时，酶切片段不能互相连接的是 -（ ）目的基因与目的基因之间载体DNA与载体 DNA之间目的基因与载体 DNA之间目的基因与 mRNA之间19、pBR322 是一种什么样的载体？

6、-（ ）粘粒质粒噬菌体 人工微小染色体20、PCR引物成对存在，位于目的基因的 -（ ） 5 端3 端C端 N端21、构建 CDNA文库时，选用下列哪种载体较好？-（ ）质粒 SV40 病毒Ti 质粒 YAC（酵母人工染色体）22、 Northern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？-（ ）DNA RNA蛋白质染色体23、以 mRNA为模板合成 CDNA时，所用的工具酶是-（ ）DNA聚合酶 I DNA连接酶逆转录酶 核酸酶24、 BAC是 -（ ）酵母人工染色体人工 Y 染色体细菌人工染色体粘粒25、用酶促合成法进行 DNA测序时，凝胶上读出的序列是 -（ ）模板链的模板链的互补链的mRNA

7、的 cDNA的26、同位素标记探针是指在探针上连接-（ ）32P 生物素荧光素酶27、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体 DNA时，酶切片段不能互相连接的是 -（ ）目的基因与目的基因之间载体DNA与载体 DNA之间目的基因与载体 DNA之间目的基因与 mRNA之间28、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？-（ ）lacZ GFPAmpr ori29、 M13噬菌体是 -（ ）双链噬菌体单链噬菌体质粒 粘粒30 、常规 PCR反应所用到的酶是 -（ ）核酸酶 逆转录酶DNA连接酶 Taq 酶三、填空题1.世界上成功构建的第一个体外重组DNA分子是在（）年完成的。2.

8、质粒载体能够克隆（）大小的 DNA 片段，噬菌体能够克隆（）大小的DNA片段。3. 外源基因在动物的血液中表达，从而可以在动物血液里直接提取外源基因的产物，这种基因产品的生产方式叫（）。4.用琼脂糖凝胶电泳时，DNA片段越大，离点样孔越（），而 DNA片段越小，离点样孔越（）。5. 用化学降解法进行 DNA 测序时，必须具有（ ）个反应系统，用酶促合成法法进行 DNA测序时，必须具有（ ）个反应系统。6. 电转化的原理是在受体细胞上施加短暂的高压电流脉冲后，结果在细胞膜上形成许多（ ），从而使（ ）容易进入到受体细胞内。7. 噬菌体根据接受外源 DNA的方式不同，可以分为（ ）和（ ）两种类型

9、载体。8.互为同裂酶的两种限制性核酸内切酶来源（），产生的粘性末端（）。9.酵母双杂交系统通常含有两个载体，一个载体含有酵母转录因子GAL4 的（），另一个载体必须含有 GAL4 的（ ）。10.目前抗虫转基因植物常常用到的外源基因主要是（），从而达到杀死害虫的目的。11.在转基因植物中，常用的显色或发光标记的报告基因有（），（ ），（）等。12.基因工程诞生于（）年。13.基因工程中外源 DNA与载体 DNA分子所形成的杂合分子叫（）。14. 外源基因在人体表达，使人体能克服某一缺陷或疾病，这种基因工程技术叫（ ）。15.将抗性基因转入农作物中，使之具有某种抗病能力，得到的农作物叫（）。16

10、.用载体制作转基因植物时，最常用的载体是（）质粒。17.粘粒载体能够克隆（）大小的 DNA 片段，人工酵母染色体YAC 能够克隆（ ）大小的 DNA片段。18.DNA自动测序标记的是（），常规 Sanger双脱氧链终止法标记的是（ ）。19.显微注射技术一般是在显微镜下将目的DNA分子注射进入动物受精卵的（）中，从而产生转基因动物。20. 基因工程构建基因重组体是指将（）与（）的进行连接重组。21. 用琼脂糖凝胶电泳时， DNA片段越大，离点样孔越（ ），而 DNA片段越小，离点样孔越（ ）。22. Northern杂交的用途主要是用来检测（）在特定组织的（）情况。23. 粘粒载体是由（ ）和

11、（ ）两部分组成的。24. 质粒载体能够克隆（ ）大小的 DNA 片段，噬菌体能够克隆（）大小的DNA片段。四、判断题1、 基因是不可分割的最小的重组单位和突变单位。2、 B 型双螺旋DNA的稳定因素为氢键和碱基堆砌力。3、 cDNA文库不包含内含子。 （）4、 Western 杂交是 DNA RNA之间的杂交。（）（）（）5、DNA双酶切时，要先低盐缓冲液，后高盐缓冲液。（）6、如果需要得到真核生物基因的完整序列，必须用基因组文库方能达到。（）7、基因是不可分割的最小的重组单位和突变单位。（）8、克隆的本质特征是生物个体在遗传组成上的完全一致性。（）9、假基因不能合成功能蛋白质，是相应的正常

12、基因突变引起的。（）10、 Northern杂交是 DNA-RNA之间的杂交。 （）11、核酸 Tm的高低与 DNA分子中 G+C的含量有关，碱基数相同的情况下，其含量越高，则Tm越高。（）12、 农杆菌介导法和基因枪法是植物转化的主要方法（）13、（）有一些来源不同的限制性内切酶识别的是同样的核苷酸序列，这类酶称为同裂酶。14、检测外源基因的导入时，PCR的准确性要高于Southern 杂交的准确性。 （）15、转基因食品目前存在的最大问题是我们无法检测某种食品到底是不是转基因食品。（）16、转基因生物直接食用的，称为“转基因食品”，而作为加工原料生产的食品，则不能被称为“转基因食品” 。

13、（）17、质粒 DNA进行电泳时，其三种构型中，开环DNA跑的最快，共价闭环形DNA跑得最慢。（）18、在生物技术的五大工程中，生化工程是核心技术，它能带动其他技术的发展。19、 cDNA是以 DNA为起始材料，经过复制得到的互补DNA。（）20、 DNA的复制是全保留不连续复制。（）（）21、基因是一个功能单位，但不是一个不可分割的最小的重组单位和突变单位。22、 Western 杂交可以检测外源DNA的导入与否。（）（）23、生物技术是一门新兴的学科。（）24、生物技术是现实生产力，也是具有巨大经济效益的潜在生产力，它将是21 世纪高技术革命的核心内容。（）25、生物技术是由多学科综合而成

14、的一门新学科。（）26、自 1996 年 11 月我国正式公布实施农业生物基因工程安全管理实施办法以来，我国627、 1977 年，美国首先采用大肠杆菌生产了人类第一个基因工程药物人生长激素释放抑制剂激素。（）28、生物技术是一门新兴学科，它包括当代生物技术和现代生物技术两部分. （）29、生物技术主要包括五项技术（工程）。（）30、现代生物技术是所有自然科学领域中涵盖范围最广的学科之一。（）31、本世纪初，遗传学的建立及其应用，产生了遗传育种学，并于60 年代取得了辉煌的成就，被誉为“第一次绿色革命”。（）32、人类基因组计划英文简称为HGP. （）33、无论用哪种转化方法均可用PBR322

15、作载体（）34、进入细菌的外来DNA之所以被降解，是因为细菌只修饰自身DNA，不修饰外来DNA（）35、只有粘粒端才可以被连接起来（）36、用自身作引物合成的cDNA链，往往cDNA并不完整（）37、所谓半保留复制就是以DNA亲本链作为合成新子链DNA的模板，这样产生的双链DNA分子由一条旧链和一条新链组成。（）38、任何细胞都可用作受体细胞。（）39、克隆子就是重组子。（）40、原核生物细胞是最理想的受体细胞。（）41、目的基因来源于各种生物，其中真核生物染色体基因组是获得目的基因的主要来源。（）42、 E.coli DNA连接酶只能催化双链DNA片断互补黏性末端之间的连接。（）五、简答题1

16、. 碱性磷酸酯酶的主要作用是什么？它有哪些应用？2. 什么是蛋白质的分泌表达？它有什么优缺点？3. 选择 T7 噬菌体 RNA聚合酶 / 启动子的大肠杆菌表达系统有哪些优点？4. 酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？5. 举例说明转基因动物在医药科学中有哪些应用。6. 艾滋病是由于艾滋病病毒 HIV 感染引起。艾滋病的基因治疗可以采取哪些措施？7 什么是荧光定量PCR？它有什么应用？8. 构建 cDNA 文库时需要用到哪些工具酶？9. 简述进行菌落原位杂交的基本过程。10. 基因芯片的主要应用是什么？11. 酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？12、基因工程操作过程的主要步骤有

17、哪些？13、一种理想的用作克隆载体的质粒必须满足的条件是什么？14、 PCR反应系统应包括哪几部分？15、载体 DNA与外源基因片段的连接方法主要有哪几种?16、重组子筛选所用的核酸分析法的内容是什么？17、基因工程研究的理论依据是什么？18、分离目的基因的途径有哪些？19、谈谈你对转基因食品的看法。20、目的基因克隆的基本方法有哪些？。21、请简述PCR技术的原理。22、 cDNA文库和基因组文库的主要差别有哪些？23、简述一项可以授予专利的发明必须满足的条件。24、重组 DNA 导入受体细胞方法25、简述现代生物技术在人类生产生活中的作用六、问答题1.试比较Southern杂交、North

18、ern杂交和Western杂交的相同点与不同点。2. 什么是基因敲除？基因敲除的基本流程是怎样的？3. 试比较 Sanger 双脱氧链终止法 DNA测序与化学降解法 DNA测序的异同点。4. 基因组文库构建的基本步骤是什么？构建基因组文库需要用到哪些载体？5.肿瘤的产生可能是抑癌基因突变或表达失误造成，也可能是原癌基因突变或表达失误造成。对肿瘤患者进行基因治疗时，应该采取哪些策略？6. 有哪些方法可以将外源目的基因转移到植物体内？你认为转基因农作物的潜在的安全隐患主要表现在哪些方面 ?七、论述题1、请介绍用于遗传图谱构建的至少三种DNA分子标记，包括其名称（中英文）、基本原理及优缺点。2、什么

19、是基因组诠释（GenomeAnnotation）？可以从哪几个水平进行？试举例分析其对基因组学研究的意义。3简述研究蛋白质与蛋白质相互作用的方法。4. 基因工程中常用的工具酶通常有哪几类？说明每一类中主要酶的特性或功能。5、重组子的筛选和鉴定方法。答案一、名词解释1 、蛋白质工程基于对蛋白质结构和功能的认识，进行分子设计，通过基因工程途径定向地改造蛋白质或创造合乎人类需要的新的突变蛋白质的理论或实践活动。2 、基因组文库把某种生物的基因组DNA 切成适当大小，分别与载体结合，导入宿主细胞，形成克隆。汇集这些克隆，应包含基因组中的各种 DNA顺序，每种顺序至少有一份代表。这样的克隆片段的总汇，叫

20、基因组文库。3. 多克隆位点一段短的 DNA 序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位点。4. Southern杂交利用硝酸纤维素膜或经特殊处理的滤纸或尼龙膜具有吸附 DNA 的功能，先作 DNA 片段的凝胶电泳，并将凝胶电泳中的 DNA 区带吸附到膜上，然后直接在膜上进行同位素标记核酸探针与被测样品之间的杂交，再通过放射自显影对杂交结果进行检测。5. 基因治疗就是指向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。6. 转基因动物借助基因工程技术把外源目的基因导入动物的生殖细胞、胚胎干细胞或早期胚胎，并在受体染色体上稳定整合，使之经过各种发育

21、途径得到能把外源目的基因传给子代的个体，叫转基因动物。7. 显微注射技术将在体外构建的外源目的基因，在显微操作仪下用极细的微吸管注射到处于原核时期的受精卵原核中，外源基因在受精卵繁殖过程中通过DNA 的复制而整合到动物基因组中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内继续发育，进而得到转基因动物。8. Klenow片段DNA聚合酶的大亚基，具有5 3聚合酶和 5 3 核酸外切酶的作用。9. 荧光定量 PCR通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR 产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析。以实时检测外源基因的表达情况。10. 基因芯片将基

22、因文库的克隆以矩阵的方式排 列在芯片上，利用不同荧光标记不同组织的RNA或cDNA 或基因群，与芯片进行杂交，从而确定不同组织的差异表达基因或特定基因群的方法。11 、cDNA 文库将某一个组织中的全部 mRNA 都反转录成 cDNA ，分别与载体连接形成的克隆的集合体。12 、基因枪基因枪法，也称微粒轰击法，是将 DNA 包被到金粒或钨粒中，然后把这些粒子加速推进靶细胞。13. 融合蛋白融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起融合表达。14. 表达载体含有基因表达调控序列能将目的基因在人工控制下置于生物宿主中大量生产的载体。15. 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶是一类

23、能识别双链 DNA 分子中特异性核苷酸序列并由此特异切割DNA双链结构的水解酶。16. Northern杂交又称为 RNA 印迹法，是将RNA 样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到硝酸纤维素滤膜上，用同位素或生物素标记的DNA 或 RNA 特异探针针对固定于膜上的mRNA进行杂交，洗脱除去非特异性杂交信号，对杂交信号进行分析，以确定目的基因的表达组织。17. 逆转录 PCR以mRNA为模板用逆转录酶进行的PCR反应。18. 转基因植物含有外源目的基因并能稳定遗传的植物体。19. 体细胞核移植将外源目的基因导入能传代培养的动物体细胞（包括动物成体体细胞、胎体成纤维细胞等），以这些动物体细胞为

24、核供体，通过显微操作或电融合方法使核供体与去核的原核胚细胞或去核的成熟卵母细胞核受体进行细胞重组融合，使其不经过有性繁殖过程。然后再对重组的胚胎进行胚胎移植，进而得到带有外源基因的转基因动物。20. DNA改组用 DNAaseI 先将一个 DNA 片段消化成许多小片段，然后不加引物进行消化后 DNA 小段之间重新按多种组合方式连接重组，然后利用原来整片段PCR，使得DNA 两端的引物进行加引物的PCR扩增，以便得到一系列改组后的突变DNA序列。21 、多克隆位点：一段短的 DNA 序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位点。22 、穿梭载体：能够在两种以上的受体细胞中繁殖和

25、扩增的载体。23. DNA 连接酶：DNA连接酶负责双链DNA中相邻 3-OH与 5-磷酸基团之间的磷酸二酯键的形成。24. 核酸分子杂交：主要是根据两条单链DNA（或 DNA与RNA）中互补碱基序列能专一配对的原理进行的。在一定条件下，单链 DNA 或 RNA 能与另一条单链 DNA 上互补的碱基形成氢键，从而使两条单链杂交形成双链 DNA 分子。通常利用已标记的某一 DNA 或 RNA 片段或合成一段寡核苷酸作为探针，探测重组 DNA分子中是否有 DNA片段与探针发生同源性杂交，然后利用放射自显影方法进行检测。25. 融合蛋白：融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起

26、融合表达。26. 基因敲除：利用同源重组的原理，通过载体将外源的失活的基因替换掉内源的正常的基因，从而使基因沉默而不表现突变性状的方法。27. 反义核酸技术：利用反义 DNA或反义 RNA能够与内源 mRNA互补杂交，从而抑制内源基因表达的技术。28. 荧光定量 PCR通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR 产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析。29. 基因治疗就是指向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。30. 显微注射技术将在体外构建的外源目的基因，在显微操作仪下用极细的微吸管注射到处于原核时期的受精卵原核中

27、，外源基因在受精卵繁殖过程中通过DNA 的复制而整合到动物基因组中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内继续发育，进而得到转基因动物。46. 基因组 DNA文库： 将某一种基因 DNA用适当的限制酶切断后， 与载体 DNA重组，再全部转化宿主细胞，得到含全部基因组DNA的种群，称为基因组 DNA文库。47.DNA的复性： 将变性 DNA经退火（低于变性温度约2530的条件下保温一段时间）处理，使其重新形成双螺旋结构的过程，称为DNA的复性。48. 克隆化：获取同一拷贝的过程，即无性繁殖。49.Tm：加热 DNA溶液， 使其对 260nm紫外光的吸收度突然增加，达到其最大

28、值一半时的温度，就是 DNA的变性温度（融解温度， Tm）。50.选择标记基因： 是指该基因的表达产物对选择剂产生抗性，致使转化细胞不受选择剂影响，能正常生长、发育、分化，从而把转化体选择出来的一类基因。51. 基因和基因组 :DNA分子中具有特定生物学功能的片段称为基因。 一个生物体的全部 DNA 序列称为基因组52. 7、分子杂交 ：不同来源的单链核酸 （ DNA或 RNA），只要它们具有大致相同的碱基序列，经过退火处理，就能重新形成杂种双螺旋，这一现象称为分子杂交。53. 8、生物技术：也称生物工程，是人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础科学的科学原理， 按照预先的

29、设计， 改造生物体或加工生物原料， 为人类生产出所需产品或达到某种目的的一门新兴的、综合性的学科。54. 9、载体：把一个有用的目的 DNA片段通过重组 DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖或表达的工具称为载体。55. 10、 cDNA文库：即由 mRNA经过反转录成 cDNA,然后来构建文库，构建的文库不包含内含子。56. 11、转化 : 外源 DNA导入宿主细胞的过程称之为转化。57. 12、黏性末端： 指 DNA分子在限制性内切酶的作用下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新连接起来。58. 13、重叠基因：一个基因序列中，含有另一基因的部分或全部序列。

30、59. 14、基因组文库： 把某种生物基因组的全部遗传信息通过载体贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为这种生物的基因组文库。60. 15、同尾酶：识别位点不同，但切割后产生相同末端的酶，称为同尾酶。61. 16、酶切位点： DNA在限制性内切核酸酶的作用下，使多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置被称为酶切位点。二、选择题1. 2.3.4.5. 6.7. 8.9. 10.11.12.13.14.15.16.17.18. 19. 20.21.22.2 3.2 4. 25.26.2 7.28.2 9. 30.三、填空题 （每空 1 分，共 20分）1. 1972 年2. 10kb, 20kb3.

31、 血液生物反应器或生物反应器4. 近， 远5. 4 个，4个6. 微孔， 外源基因 /DNA7. 插入型 / 置换型 , 插入型 / 置换型8. 不同, 相同/ 相近/ 不同9. 激活结构域 / 结合结构域 , 激活结构域 / 结合结构域10. 毒素蛋白 /Bt/ 毒晶蛋白11. GUS,荧光素酶 , GFP12. 1973 年13. 重组载体 / 重组 DNA分子14. 基因治疗15. 抗虫转基因作物16. Ti 质粒17. 30 40kb, 1-2Mb18. ddNTP,引物19. 雄原核20. 外源基因 /载体，载体 /外源基因21. 近, 远22. 目的基因，表达23. 质粒 /噬菌体

32、，噬菌体 /质粒24. 10kb， 20kb四、判断题1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 五、简答题1. 碱性磷酸酯酶的主要作用是什么？它有哪些应用？碱性磷酸酯酶的作用是从 DNA 或 RNA 的三磷酸核苷酸上除去 5 磷酸根残基。主要用于在 DNA 5 端进行 P32 标记以及用于防止酶切片段及载体酶切片段的粘性末

33、端的自连。2. 什么是蛋白质的分泌表达？它有什么优缺点？是指周质蛋白、细胞内膜与外膜蛋白等以带有N 端信号肽的前体形式首先在细胞质中合成，随后穿膜运送到周质或定位到内、外膜上的分泌过程。穿膜过程中，信号肽被信号肽酶切除。将目的蛋白的基因置于原核蛋白信号肽的序列的下游可能实现分泌型表达。分泌表达的优点：信号肽被切除后的蛋白质N末端的氨基酸序列与天然蛋白是一致的，周质空间中的蛋白酶活性比细胞质中的要低，从而使蛋白质较稳定地存在于周质中，周质中只有少量的细菌蛋白，使分离纯化更容易，周质空间存在一个氧化的环境，使得二硫键更容易形成。分泌表达形式的缺点：相对其它生物细胞而言，大肠杆菌的蛋白分泌机制并不健

34、全。外源真核生物基因很难在大肠杆菌中进行分泌型表达，少数外源基因既便能分泌表达，但其表达率通常要比包涵体方式低很多，因此目前用于产业化的异源蛋白分泌型重组大肠杆菌尽管有，但并不普遍。3. 选择 T7 噬菌体 RNA聚合酶 / 启动子的大肠杆菌表达系统有哪些优点？1 ） T7 噬菌体 RNA聚合酶合成 RNA的速度高于大肠杆菌 5 倍；2）T7噬菌体 RNA 聚合酶只识别自己的启动子序列，不启动大肠杆菌DNA 任何序列的转录；3）T7噬菌体 RNA聚合酶对抑制大肠杆菌 RNA 聚合酶的抗生素有抗性；4）T7噬菌体 RNA聚合酶 / 启动子系统在一定条件下，基因表达产物可占细胞总蛋白的25以上。4

35、. 酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？克服大肠杆菌表达系统的不足，能繁殖快，高密度发酵，可以进行蛋白质翻译后的修饰合加工。缺点：缺乏强有力的启动子，分泌效率差，表达菌株不够稳定，表达质粒易于丢失等。例如甲醇酵母系统，利用甲醇作为唯一碳源。乙醇氧化酶将甲醇氧化为甲醛，乙醇氧化酶的启动子是强启动子，编码乙醇氧化酶的基因是AOX1合 AOX2.AOX1 基因的表达受甲醇严格调控，诱导表达水平可达30 以上。5. 举例说明转基因动物在医药科学中有哪些应用。异种器官移植：猪器官移植到人身上，要克服受体对外源器官的超急性排斥反应（HAP）的障碍，克服措施有：降低或消除补体反应将人的补体调节蛋白因

36、子基因CD55 ，CD59 等通过转基因方法导入器官供体动物，含有 CD55 基因猪的心脏移植到猴体内后，猪心脏跳动了 10 天；通过基因剔除来减少或改变供体器官的表面抗原，降低免疫排斥反应；使供体器官表达人体免疫抑制因子，使得该种猪器官移植后在移植部位持续释放免疫抑制因子，抑制机体对移植物的免疫排斥，形成局部免疫耐受。转基因动物模型作为人类疾病模型、治疗人类疾病的动物模型及新药的筛选模型，如老年痴呆症动物模型的建立：将突变的淀粉样前提蛋白基因通过转基因方法导入小鼠，使其在小鼠脑部过量表达。对转基因鼠的脑皮层和海马部位进行组织切片分析，发现大量的老年斑样结构。6. 艾滋病是由于艾滋病病毒 HI

37、V 感染引起。艾滋病的基因治疗可以采取哪些措施？阻断HIV病毒进入进入细胞的策略就是用过量的CD4 抗原分子和 HIV的包膜糖蛋白 gp120 ，可以阻断和抑制HIV的感染能力，保护未受感染的CD4细胞。将可溶性的CD4 (sCD4)分子的编码基因导入到体外培养的T淋巴细胞中，sCD4分子确实可以阻断HIV 1 的感染。另外，采用单链可变区抗体，负显性抑制蛋白，RNA 诱捕，细胞内自杀或 RNA干涉等方法均可以从不同方面来开展AIDS 的基因治疗。7 什么是荧光定量PCR？它有什么应用？荧光定量 PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对 PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合

38、相应的软件可以对产物进行分析。应用：定量检测基因表达的水平。8. 构建 cDNA 文库时需要用到哪些工具酶？逆转录酶， DNA 聚合酶 I或 Klenow片断，单链核酸酶核酸内切酶， DNA连接酶S1 ，末端转移酶，限制性9. 简述进行菌落原位杂交的基本过程。噬菌斑杂交法的基本步骤是将重组噬菌体感染的宿主菌倒在平皿上，待生成噬菌斑后，将与培养皿一样大小的硝酸纤维素薄膜盖在上面，每个噬菌斑中约 105 个噬菌体就影印转移到膜上。膜揭下后，用碱处理除去蛋白质外壳，使噬菌体 DNA变性并同膜共价结合，然后用同位素标记的探针与之杂交，放射自显影检测。按照膜与培养基上预先做好的方法标记，将阳性噬菌斑挑出

39、来扩增。10. 基因芯片的主要应用是什么？1) 寻找正常样本与异常样本之间在 mRNA表达水平差异的基因 ( 定量和定性 );2) 寻找和研究参与某一特定功能的基因或基因群;3) 确定目的基因表达的时空性 ;4) 测序与点突变的确定。11. 酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？优点：克服大肠杆菌表达系统的不足，能繁殖快，高密度发酵，可以进行蛋白质翻译后的修饰合加工。缺点：缺乏强有力的启动子，分泌效率差，表达菌株不够稳定，表达质粒易于丢失等。例如甲醇酵母系统利用甲醇作为唯一碳源。乙醇氧化酶将甲醇氧化为甲醛，乙醇氧化酶的启动子是强启动子，编码乙醇氧化酶的基因是 AOX1合 AOX2.AOX

40、1 基因的表达受甲醇严格调控，诱导表达水平可达 30 以上。12、基因工程操作过程的主要步骤有哪些？分离或合成基因；通过体外重组将基因插入载体；将重组DNA导入细胞；扩增克隆的基因；筛选重组体克隆；对克隆的基因进行鉴定或测序；控制外源基因的表达；得到基因产物或转基因动物、转基因植物13、一种理想的用作克隆载体的质粒必须满足的条件是什么？（ 1）具有转录复制起始点。（ 2）具有抗菌素抗性基因。（ 3）具有若干限制酶切单一识别位点。（ 4）具有较小的分子量和较高的拷贝数。14、 PCR反应系统应包括哪几部分？PCR反应系统应包括：耐热 DNA聚合酶（ Taq 酶）：模板 DNA：即待分析的目的DN

41、A，两种引物：需要两种引物，分别位于两条互补模板DNA链的 3- 端。四种脱氧核糖核苷酸缓冲溶液；2+ Mg ；超纯水或双蒸水；15、载体 DNA与外源基因片段的连接方法主要有哪几种?粘性末端DNA分子间的连接（包括一种限制性内切酶酶切位点的连接和不同限制性内切酶酶切位点的连接）；平末端 DNA分子间的连接；同聚物加尾法连接；人工接头连接法连接。16、重组子筛选所用的核酸分析法的内容是什么？（一）核酸杂交法菌落印迹原位杂交；斑点印迹杂交； Southern 印迹杂交（二）聚合酶链式反应法（三） DNA测序法17、基因工程研究的理论依据是什么？（ 1）不同基因具有相同的物质基础。（ 2）基因是可切割的（ 3）基因是可以转移的（ 4）多肽与基因之间存在对应关系（ 5）遗传密码是