本微生物感染的检查法第7章

1、1第第7 7章章 细菌与病毒的微生物学检查法细菌与病毒的微生物学检查法p83p83病原生物学与免疫学教研室病原生物学与免疫学教研室 潘凤兰潘凤兰 副教授副教授 联系方式联系方式：81487384 (o)81487384 (o)2病例分析病例分析 某女某女5050岁，咳嗽发烧（岁，咳嗽发烧（3939）入院，诊断为细菌）入院，诊断为细菌感性气管炎，青霉素常规治疗感性气管炎，青霉素常规治疗3 3天病情未有好转，天病情未有好转，后根据检验报告改用红霉素治疗，后根据检验报告改用红霉素治疗， 2 2天病情明显天病情明显好转，好转，5 5天后病人康复出院。天后病人康复出院。 检验科对病人做了什么检验？检验科

2、对病人做了什么检验？3一一 实验室诊断方法实验室诊断方法: :1 1 显微镜显微镜2 2 分离培养分离培养3 3 免疫学技术免疫学技术4 4 分子生物学方法分子生物学方法4二二 标本采集与送检原则标本采集与送检原则1 1 无菌操作无菌操作2 2 选择感染部位、病变明显部位选择感染部位、病变明显部位3 3 最佳时间、适宜标本最佳时间、适宜标本4 4 细菌：使用抗生素前细菌：使用抗生素前 病毒：应加入抗生素病毒：应加入抗生素 5 5 查抗体：急性期查抗体：急性期 恢复期恢复期 升高升高4 4倍倍6 6 及时送检：病毒标本加入含抗生素的及时送检：病毒标本加入含抗生素的50%50%甘油甘油缓冲盐水液中

3、冷藏速送缓冲盐水液中冷藏速送5第一节第一节 细菌感染的微生物检查法细菌感染的微生物检查法一一 细菌学诊断细菌学诊断（一）形态学检查（一）形态学检查Escherichia coliStaphylococcus aureus6（二）病原菌的分离培养（二）病原菌的分离培养7（三）生化试验（三）生化试验8（四）血清鉴定（四）血清鉴定 抗原抗原 + + 抗体抗体9（五）动物实验（五）动物实验 1 1、常用动物、常用动物 豚豚鼠鼠102 2 接种途径接种途径 3 3 内毒素检测：鲎试验内毒素检测：鲎试验11（六）毒力检测（六）毒力检测 体内：体内： LD50 ID50LD50 ID50 体外：体外：Ele

4、kElek平板平板12（七）药物敏感试验（七）药物敏感试验 纸碟法、试管法纸碟法、试管法 13二二 检测病原菌成分检测病原菌成分（一）抗原检测（一）抗原检测 1 1 原理：原理：用已知的特异性抗体，检测未知的用已知的特异性抗体，检测未知的细菌抗原成分。细菌抗原成分。 2 2 方法方法 ：凝集试验：凝集试验 沉淀试验沉淀试验 免疫标记技术免疫标记技术14（二）核酸的检测（二）核酸的检测1 1 核酸杂交技术核酸杂交技术（1 1）原理）原理 （2 2）种类：）种类：SouthernSouthern印迹杂交（印迹杂交（ Southern blotSouthern blot） NorthernNorth

5、ern印迹杂交印迹杂交（Northern blotNorthern blot） 斑点杂交斑点杂交 原位杂交原位杂交 （3 3）优点：快速、敏感（）优点：快速、敏感（0.05pg/0.05pg/ l l）、特）、特异异152 2、聚合酶链反应、聚合酶链反应（ polymerase chain reaction polymerase chain reaction ，PCR PCR ）体外体外DNADNA扩增技术（扩增技术（10106 6），在），在DNADNA扩增仪上进行扩增仪上进行适用于难以培养的细菌引起的疾病如结核、慢性淋病、适用于难以培养的细菌引起的疾病如结核、慢性淋病、梅毒等梅毒等优点：快

6、速、敏感（优点：快速、敏感（pg/pg/ l l）、特异）、特异16三三 抗体的检测（血清学诊断）抗体的检测（血清学诊断） 1 1、取急性期、恢复期双份血清，升高、取急性期、恢复期双份血清，升高4 4倍倍 2 2、常用方法、常用方法 凝集试验、沉淀试验、免疫标记技术凝集试验、沉淀试验、免疫标记技术17第第7 7章章 第二节第二节p88p88 病毒感染的微生物学检查法病毒感染的微生物学检查法18病毒的形态学检查病毒的形态学检查病毒分离培养的方法病毒分离培养的方法病毒的成分检测病毒的成分检测病毒抗体的检测病毒抗体的检测192021 222324细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic eff

7、ect ,CPE) 多数病毒在细胞内增殖多数病毒在细胞内增殖,可引起细胞形态学改变。可引起细胞形态学改变。 细胞圆缩、溶解、脱落甚至死亡细胞圆缩、溶解、脱落甚至死亡 形成多核巨细胞形成多核巨细胞 在细胞核或浆内形成在细胞核或浆内形成包涵体包涵体252627 28 病毒干扰作用病毒干扰作用 某些病毒感染细胞后，不产生某些病毒感染细胞后，不产生CPECPE及其它变及其它变化，但却能阻止后一种病毒在该细胞内的增殖。化，但却能阻止后一种病毒在该细胞内的增殖。 通过此现象可测出一些不引起通过此现象可测出一些不引起CPECPE、血凝或、血凝或血吸现象的病毒。血吸现象的病毒。293031323334方法：红细胞凝集抑制试验方法：红细胞凝集抑制试验351 1、红细胞凝集抑制试验、红细胞凝集抑制试验 检查血凝素抗体检查血凝素抗体2 2、ELISAELISA36371 1、进行病毒病原学检查的组织标本递送要求是、进行病毒病原学检查的组织标本递送要求是 A A、暖箱保存、暖箱保存 B B、室温保存、室温保存 C C、加入防腐剂、加入防腐剂 D D、冷藏速送、冷藏速送 E E