中药化学复习大纲

1、中药化学·重点第一章 绪论1、中药化学：是一门结合中医药基本理论和临床用药经验，主要运用化学的理论和方法及其他现代科学理论和技术等研究中药化学成分的学科。*2、有效成分：中药中具有一定生物活性，能代表中药临床疗效的，能用分子式和结构表示，并有一定物理常数的单体化合物。第二章 中药化学成分的一般研究方法一、中药有效成分的提取方法有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法、升华法等。（一）溶剂提取法*1、溶剂提取法原理：溶剂穿透入药材的细胞膜，溶解可溶性物质，形成细胞内外溶质浓度差，将溶质渗透出细胞膜，达到提取目的。即，渗透扩散细胞内部溶解溶质浓度差浓度平衡2、溶剂按极性可分为亲脂性有

2、机溶剂、亲水性有机溶剂和水三类。*3、常用溶剂极性由弱到强顺序：石油醚四氯化碳苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯正丁醇丙酮甲醇乙醇水。*4、溶剂提取法选择溶剂的依据是：根据相似相溶的原则，以最大限度地提取所需要的化学成分，溶剂的沸点应适中易回收，低毒安全。·乙醇、甲醇是最常用的溶剂；种子类中药材富含油脂，宜先用石油醚或汽油脱脂；氯仿或乙酸乙酯可提出游离生物碱、有机酸、黄酮及香豆素；丙酮或甲醇（乙醇）可提出苷类、生物碱或有机酸盐类；水可提出糖类、氨基酸、蛋白质无机盐类等水溶性成分。*相对密度比水大的溶剂（含Cl），如氯仿、三氯化碳*用有机溶剂重结晶时，不常用的溶剂是乙醇、乙醚、苯、三氯甲烷、石

3、油醚，因其强亲脂性有机溶剂挥发性大。*5、常用的溶剂提取法：（1）煎煮法 ：是在中药材中加入水后加热煮沸，将有效成分提取出来的方法。此法简便，大部分成分可被提取出来。但此法对含挥发性、加热易破坏的成分及多糖类成分含量较高的中药不宜使用。（2）浸渍法：是在常温或温热（6080）条件下用适当的溶剂浸渍药材以溶出其中成分的方法。将中药粗粉装在适当容器中，加入溶剂浸渍药材一定时间，反复数次，合并浸渍液，减压浓缩即可。此法不用加热，适用于遇热易破坏或挥发性成分，或含淀粉或粘液质较多的成分。但此法提取时间长，效率不高。以水为溶剂时，应注意防止提取液霉变。（3）渗漉法：将药材粗粉装入渗漉筒中，用水或不同浓度

4、醇作溶剂，首先浸渍数小时，然后由下口开始流出提取液(渗漉液)，渗漉筒上口不断添加新溶剂，进行渗漉提取。此法在提取过程中由于随时保持浓度差，故提取效率高于浸渍法，但所用时间较长。（4）回流提取法：是用易挥发的有机溶剂加热回流提取中药成分的方法。此法提取效率高于渗漉法，但受热易破坏的成分不宜使用。（5）连续回流提取法：是回流提取法的发展，此法具有溶剂消耗量小、操作较简便、提取效率高的特点。实验室常用索氏提取器来完成本法操作。（二）水蒸气蒸馏法：水蒸汽蒸馏法用于提取能随水蒸汽蒸馏，而不被破坏的难溶于水的成分。这类成分有挥发性，在100时有一定蒸气压，当水沸腾时，该类成分一并随水蒸汽带出，再用油水分离

5、器或有机溶剂萃取法，将这类成分自馏出液中分离。适用于具有挥发性的，能随水蒸气蒸馏而不被破坏，且难溶或不溶于水的成分的提取。（三）超临界流体萃取法*超临界流体萃取法多用CO 作为超临界流体的物质。二、中药有效成分的分离精制方法有有溶剂法、沉淀法、分馏法、膜分离法、升华法、结晶法、色谱分离法。（一）溶剂法*1、溶剂分配法原理：是利用混合物中各组成分在两相溶剂中分配系数不同而达到分离的方法。溶剂分配法的两相往往是互相饱和的水相与有机相。混合物中各成分在两相中分配系数相差越大，分离效果越高。2、分离极性较大成分：正丁醇-水；极性中等成分：乙酸乙酯-水；极性小成分：氯仿（或乙醚）-水（二）沉淀法：*是指

6、基于有些中药化学成分能与某些试剂生成沉淀，或加某些试剂后可降低某些成分在溶液中的溶解度而自溶液中析出的一种方法。1.专属试剂沉淀法利用某些试剂选择性地沉淀某类成分，即为专属试剂沉淀法。如雷氏铵盐等生物碱沉淀试剂能与生物碱类生成沉淀，可用于分离生物碱与非生物碱成分，以及水溶性生物碱与其他生物碱的分离；胆甾醇能和甾体皂苷沉淀，可使其与三萜皂苷分离；明胶能沉淀鞣质，可用于分离或除去鞣质。*2.分级沉淀法：是指在混合组分的溶液中加入与该溶液能互溶的溶剂，通过改变溶剂的极性而改变混合组分溶液中某些成分的溶解度，使其从溶液中析出。如在含有糖类或蛋白质的水溶液中，分次加入乙醇，使含醇量逐步增高，逐级沉淀分子

7、量段由大到小的蛋白质、多糖、多胎；在含皂苷的乙醇溶液中分次加入乙醚或丙酮可使极性有差异的皂苷逐段沉淀出来。*3.盐析法：是指在混合物水溶液中加入易溶于水的无机盐（常用氯化钠）至一定浓度或饱和状态，使某些中药成分在水中溶解度降低而析出，或用有机溶剂萃取出来的一种方法。（三）分馏法：*是指利用混合物中各成分的沸点不同而进行分离的方法。适用于液体混合物的分离。分馏法可分常压分馏、减压分馏、分子分馏等。（四）膜分离法（五）升华法：*固体物质加热直接变成气体，遇冷又凝结为固体的现象为升华。某些中药含有升华性的物质，如某些小分子生物碱、香豆素等，均可用升华法进行纯化。但是，在加热升华过程中，往往伴有热分解

8、现象，产率较低，且不适宜大规模生产。（六）结晶法：化合物由非晶形经过结晶操作形成有晶形的过程称为结晶。初析出的结晶往往不纯，进行再次结晶的过程称为重结晶。目的是进一步分离纯化，是利用混合物中各成分在溶剂中的溶解度不同达到分离的方法。（七）色谱分离法1.吸附色谱原理：利用吸附剂对被分离化合物分子的吸附能力差异，而实现分离的一类色谱。常用的吸附色谱包括硅胶、氧化铝、活性炭、聚酰胺等。氧化铝吸附色谱主要用于碱性或中性亲脂性成分的分离，如生物碱、甾、萜类等成分。活性炭主要用于分离水溶性物质如氨基酸、糖类及某些苷类。聚酰胺色谱以氢键作用为主，主要用于酚类、醌类如黄酮类、蒽醌类及鞣质等成分的分离。

9、3;硅胶吸附剂色谱：利用吸附作用。2.凝胶过滤色谱（排阻色谱、分子筛色谱）原理：主要是分子筛作用，根据凝胶的孔经和被分离化合物分子的大小而达到分离目的。凝胶是具有多孔隙网状结构的固体物质，被分离物质的分子大小不同，它们能够进入到凝胶内部的能力不同，当混合物溶液通过凝胶柱时，比凝胶孔隙小的分子可以自由进入凝胶内部，而比凝胶孔隙大的分子不能进入凝胶内部，只能通过凝胶颗粒间隙。因此，分子大小不同的物质在凝胶过滤色谱中的移动速率出现差异，分子大的物质不被迟滞（排阻），保留时间则较短，分子小的物质由于向凝胶颗粒内部扩散，移动被滞留，保留时间较长，而达到分离。·吸附剂：活性炭、非活性吸附剂3.离

10、子交换色谱：分离子交换树脂、离子交换纤维、离子交换凝胶三种。*原理：阳- 阴-醇化酸性成分4.大孔树脂色谱原理：大孔吸附树脂具有选择性吸附和分子筛的性能。它的吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果，分子筛的性能是由于其本身的多孔性网状结构决定的。被分离物质的极性越大，其Rf值越大，反之Rf值越小。对洗脱剂而言，极性大的溶剂洗脱能力弱，而极性小的溶剂则洗脱能力强，故大孔树脂在水中的吸附性强。*大孔吸附树脂可分为非极性、中等极性与极性三类。5.分配色谱原理：利用被分离成分在固定相和流动相之间的分配系数的不同而达到分离。第三章 糖和苷类化合物一、糖类化合物（一）糖的分类：根据能否被水解和分子量的大小

11、分为单糖、低聚糖和多糖。1、单糖*（1）单糖：糖类物质的最小单位，也是构成其他糖类物质的基本单元，单糖不能被水解，如葡萄糖、鼠李糖和半乳糖。*（2）中药中常见单糖及衍生物：五碳醛糖：D-木糖、D-核糖、L-阿拉伯糖。甲基五碳糖:L-夫糖、D-鸡纳糖、L-鼠李糖。六碳醛糖:D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖。六碳酮糖:D-果糖、L-山梨糖七碳酮糖:D-甘露庚酮糖、D-景天庚酮糖糖醛酸：D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸糖醇：L-卫矛糖、D-甘露醇、D-山梨醇2、低聚糖：又称寡糖，是由29个单糖通过糖苷键聚合而成的糖，天然存在的低聚糖多数由24个单糖基组成。能被水解为单糖，如蔗糖和棉子糖。（1）常见二

12、糖：龙胆二糖、蚕豆糖、芸香糖、蔗糖、麦芽糖和槐糖。*（2）根据是否有游离的醛基或酮基，将低聚糖分为还原糖和非还原糖。常见还原糖为槐糖、芸香糖和麦芽糖等。（3）芸香糖由一分子葡萄糖和一分子鼠李糖构成。3、多聚糖（1）多聚糖：又称多糖，是由10个以上单糖通过糖苷键聚合而成的糖，通常是由几百至几千个单糖组成的高分子化合物，能被水解为多个单糖，如淀粉、纤维素。（2）多糖基本没有单糖的性质，一般无甜味，也无还原性。（3）多糖分为两类：水不溶性多糖，直糖链型，如纤维素、甲壳素； 水溶性多糖，如菊糖、黏液质、果胶、树胶和淀粉。（二）糖的理化性质*1、糖分子中有多个手性碳，故有旋光性。*2、糖的显色反应和沉淀

13、反应（1）a-萘酚反应（Molish反应）：单糖在浓酸作用下，可以失去三分子水，生成糠醛及其衍生物。在此条件下，低聚糖或多糖先水解成单糖，再脱水生成的糠醛及其衍生物可与a-萘酚试剂反应，产生有色缩合物。（2）菲林反应（Fehling反应）：还原糖能与碱性酒石酸铜试剂反应，使高价铜离子被还原成为低价铜离子，因而产生氧化亚铜的砖红色沉淀。（3）多伦反应（Tollen反应）：还原性糖能与氨性硝酸银试剂反应，使银离子还原，生成银镜或黑褐色的银沉淀。（4）碘呈色反应：是碘分子或碘离子排列进入多糖螺环通道形成的有色包结化合物产生的呈色反应，所呈色调与多糖的聚合度有关。如糖淀粉聚合度为300500，遇碘呈蓝

14、色;胶淀粉聚合度为3000左右，遇碘呈紫红色。（三）糖的提取与分离1、提取:糖是极性大的中药成分，能溶于水和稀醇，不溶于极性小的溶剂，一般用水或稀醇提取。多糖以及分子量较大的低聚糖可用水提取，根据多糖具体性质，也可用稀醇、稀碱、稀盐溶液或二甲基亚砜提取。含葡萄糖醛酸等酸性基团多糖的水溶液，可用乙酸或盐酸使成酸性后，再加乙醇，使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。2、分离：单糖或二糖，常用活性炭、大孔吸附树脂和纤维素等进行色谱分离，也可用硅胶及反相硅胶进行色谱分离;多糖，一般采用分级沉淀法纯化后再用色谱法分离;酸性多糖在电场作用下向两极迁移的速度不同，因此可用电泳法；多

15、糖在超离心条件下，由于分子大小不同，其沉积速率不同，故也可用超速离心法分离。（四）糖类检识*1、理化检识（1）a-萘酚反应：样品少许溶于水中，加5%a-萘酚乙醇液3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入浓硫酸1ml，若在两液面间有紫色环产生，说明可能含有糖类化合物。（2）菲林反应：样品少许溶于水中，加新配制的菲林试剂5滴，于沸水浴上加热5分钟，若有砖红色的氧化亚铜沉淀生成，说明存在还原糖。（3）多伦反应：样品少许溶于水中，加新配制的多伦试剂5滴，于沸水浴上加热5分钟，有银镜或黑褐色的银沉淀生成，说明可能存在还原糖。·托伦和菲林反应均可用于检识糖或苷。 （ ）2、色谱检识（1）纸色谱：一般以色谱滤

16、纸上吸附的水为固定相，因为糖的亲水性较强，一般要用含水量大的溶剂系统作移动相展开。常用的溶剂系统有正丁醇-水（4:1:5,上层）、醋酸乙脂-吡啶-水（2:1:2）和水饱和的苯酚等。（2）薄层色谱：可用纤维素薄层色谱或硅胶层色谱。纤维素薄层色谱与纸色谱原理相同，条件相似，但所需时间较短。3、色谱的显色:原理主要是利用糖的还原性或由于形成糖醛后引起的呈色反应。常用的显色剂有苯酚-邻苯二甲酸试剂、对茴香胺-邻苯二甲酸试剂、蒽酮试剂等。二、苷类化合物*苷：又称为甙或配糖体，是糖或糖的衍生物与另一非糖物质通过的端基糖原子交接而成的一类化合物。苷中的非糖部分称为苷元或配基；苷中苷元与糖连接的键称苷键；连接

17、非糖物质与糖的原子称苷原子。（一）苷的结构与分类1、苷类的结构：绝大多数的苷类化合物是糖的半缩醛羟基与苷元上羟基脱水缩合而成的具有缩醛结构的物质。苷类化合物在稀酸或酶的作用下，苷键可以断裂，水解成为苷元。2、苷的分类：（1）根据苷键原子的不同，苷类化合物可以分为氧苷、硫苷、氮苷和碳苷。*氧苷：苷元通过氧原子和糖相连接而成的苷称为氧苷。氧苷是数量最多、最常见的苷类化合物。根据形成苷键的苷元羟基类型不同，又分为醇苷、酚苷、酯苷和氰苷等，其中以醇苷和酚苷为多。·醇苷：是苷元的醇羟基与糖缩合而成的苷。如毛茛中的毛茛苷、大红花景天中的红景天苷。·酚苷：苷元分子中的酚羟基与糖脱水而成的

18、苷。如苯酚苷、萘酚苷、蒽醌苷、香豆素苷黄酮苷、熊果苷、天麻苷、丹皮苷和木脂素苷等。·酯苷：苷元中羧基与糖缩合而成的苷，其苷键既有缩醛性质又有酯的性质，易被稀酸和稀碱水解。如山慈菇苷。·氰苷：主要是指一类具有a-羟基腈的苷，数目不多，但分布广泛。如苦杏仁苷。*硫苷：糖的半缩醛羟基与苷元上巯基缩合而成的苷称为硫基。这类苷为数不多，常存在于十字花科植物中，如萝卜苷和黑芥子苷。*氮苷：是糖上的端基碳与苷元上氮原子相连而成的苷。如腺苷、鸟苷、胞苷、尿苷（核酸的中药组成部分）和巴豆苷。*碳苷：是一类糖基的端基碳原子与苷元碳原子直接相连而成的苷类化合物。组成碳苷的苷元多为黄酮类、蒽醌类化

19、合物等，其中以黄酮碳苷最为多见。碳苷是由苷元酚羟基活化邻位或对位氢成为活泼氢，该活泼氢与糖的端基羟基脱水缩合而成。碳苷类化合物具有水溶性小、难于水解（最），易溶于吡啶的性质，如芦荟苷。（2）根据苷元的化学结构类型，分香豆素苷、蒽醌苷、黄酮苷和吲哚苷。*（3）根据苷在植物体内的存在情况，分原生苷（原存在于植物体内的苷）、次生苷（原生苷水解失去一部分糖后生成的苷）。（4）根据生理作用，分强心苷类。（5）根据特殊物理性质，分皂苷类。（6）根据种类或名称，分去氧苷、葡萄糖苷和木糖苷等。（7）根据所含单糖基的数目，分单糖苷、双糖苷和三糖苷等。（8）根据糖链数目，分单糖链苷、双糖链苷和三糖链苷等。（9）根

20、据植物来源，分人参苷、柴胡皂苷和苦杏仁苷等。（二）苷的理化性质1、苷类化合物均为固体。苷类化合物是否有颜色取决于苷元部分共轭系统的大小和助色团的多少。*2、苷类化合物具有旋光性，多数呈左旋。苷类化合物水解后由于生成的糖是右旋的。3、苷键具有缩醛结构，在稀酸或酶的作用下，苷键可发生断裂，水解成为苷元和糖。苷键裂解主要有酸水解、酶水解、碱水解和氧化开裂等。（1）酸催化水解：苷键易被催化水解，反应一般在水或稀醇中进行，所用的酸有盐酸、硫酸、乙酸和甲酸等（常用稀酸）。酸催化水解的难易与苷键原子上（有利于苷键原子质子化）的碱度、电子云密度以及空间环境有关。*苷类化合物酸水解难易规律：按苷键原子的不同，苷

21、类化合物酸水解速率的顺序为N-苷O-苷S-苷C-苷；呋喃糖苷（果糖苷、核糖苷）较吡喃糖苷（葡萄糖苷、半乳糖苷和鼠李糖苷等）易水解；酮糖苷（多为呋喃糖结构）较醛糖苷易水解；吡喃糖苷中，吡喃糖C 上取代基越大越难于水解。其水解速率的顺序为：五碳糖苷甲基五碳糖苷六碳糖苷七碳糖苷糖醛酸苷。如果接有-COOH，则最难水解；氨基糖苷羟基糖苷去氧糖苷（尤其2-去氧糖苷）；其水解速率的顺序为：2-氨基糖苷2-羟基糖苷6-去氧糖苷2-去氧糖苷2,6-去氧糖苷；芳香族苷（苷元部分有供电子结构）脂肪族苷，某些酚苷，如蒽醌苷、香豆素苷不用加酸，只加热也可能水解成苷元。*二相水解法：为避免酸水解对苷元结构发生变化，在反

22、应混合液中加入与水不相混溶的有机溶剂（苯、氯仿等）。（2）碱催化水解（3）酶催化水解（4）甲醇解反应（5）乙酰解反应（6）氧化开裂水解（三）苷的提取与分离*1、提取·原理：原生苷：抑制和破坏酶活性（注：避免原生苷被酶解）。次生苷：控制和利用酶活性。（2）苷元的提取：苷元多属脂溶性成分，可用极性小的溶剂提取。一般先将中药用酸水解，或者先酶解后再酸水解，使苷类化合物水解生成苷元。水解液用碱中和至中性，然后用氯仿、乙酸乙酯或石油醚提取苷元。或结合树脂吸附法先提取出总苷，将总苷水解为苷元，再用氯仿等极性小的有机溶剂提取苷元。2、分离（四）苷的检识1、理化检识（1）a-萘酚反应（Molish反

23、应）：样品少许溶于水中，加5%a-萘酚乙醇液13滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入浓硫酸1ml，若在两液面间有紫色环产生，说明样品组成中含有糖或苷类化合物。（根据单糖微溶于乙醇或甲醇，而多糖不溶的性质）将样品的醇提取液进行菲林反应，如产生砖红色氧化亚铜沉淀，说明有游离的单糖存在。反应液滤去沉淀，再将除去了游离糖的滤液进行Molish反应，如呈阳性反应，则说明可能存在苷类化合物。（2）菲林反应和多伦反应：样品与菲林试剂或多伦试剂反应产生沉淀，呈阳性，说明存在还原糖。将反应液中的沉淀滤除，滤液酸水解后，用10%的氢氧化钠中和后，再进行菲林或多伦反应，若为阳性，说明可能存在苷类化合物。如果样品与菲林或多伦试

24、剂反应呈阴性，将供试液直接酸水解后再进行菲林或多伦反应，若为阳性反应，说明可能存在苷类化合物。（3）水解反应：样品酸水解后放冷的反应液出现沉淀，则可能存在苷类化合物。苷类化合物水解后产生糖和苷元，苷元一般具有亲脂性，水溶性差，易在水解液中析出沉淀。低聚糖、多糖由于水解后产生单糖是水溶性的而不会有沉淀出现。2、色谱检识（1）薄层色谱（2）纸色谱第四章 醌类化合物一、醌类的结构与分类：*醌类化合物是中药中一类具有醌式结构的化学成分，主要分为苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四种类型。（一）苯醌：苯醌类化合物分为邻苯醌（结构不稳定）和对苯醌（天然存在多数）两大类。·具有苯醌类结构的泛醌类能参与生物体内

25、氧化还原过程，是生物氧化反应的一类辅酶，称为辅酶Q类，其中辅酶Q已用于治疗心脏病、高血压及癌症。（二）萘醌：萘醌类化合物分为a（1，4）、（1，2）及amphi（2，6）三种类型。萘醌类还原后即得到无色的萘氢醌，后者又可重 新氧化得到萘醌，并重新显色。许多萘醌类化合物具有明显的生物活性，如从中药紫草及软紫草中分得的一系列紫草素及异紫草素衍生物，具有止血、抗炎、抗菌、 抗病毒及抗癌作用，与其清热凉血的药性相符，可认为这些萘醌化合物为紫草的有效成分。（三）菲醌：天然菲醌分为邻醌及对醌两种类型。如丹参根中的丹参醌，临床用于治疗冠心病、心肌梗死。（四）蒽醌：蒽醌类成分按母核的结构分为单蒽核及双蒽核两大

26、类。*1、单蒽醌类（1）蒽醌及其苷类根据羟基在蒽醌母核（苯环）上位置不同，分为大黄素型和茜草素型两种。（2）蒽酚或蒽酮衍生物：蒽醌在酸性环境中被还原，可生成蒽酚及其互变异构体-蒽酮。2、双蒽醌类（1）二蒽酮类大黄及番泻叶中致泻的主要有效成分番泻苷A、B、C、D等均为二蒽酮衍生物。大黄及番泻叶中含有的番泻苷A的致泻作用是因其在肠内变为大黄酸蒽酮所致。二、醌类化合物的理化性质（一）物理性质1、醌类化合物母核上随着酚羟基等助色团的引入而呈一定的颜色。取代的助色团越多，颜色越深，有黄、橙、棕红色以至紫色。一般为有色结晶，苯醌、蒽醌多以游离态存在。2、游离醌类化合物一般具有升华性。3、游离蒽醌类极性较小

27、，一般溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水;与糖结合成苷后极性显著增大，易溶于甲醇、乙醇，亦可溶于热水，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等;蒽醌的碳苷难溶于水和有机溶剂，易溶于吡啶。（二）化学性质1、酸碱性：蒽醌类衍生物多具有酚羟基，故具有酸性，易溶于碱性溶剂。醌类衍生物酸性强弱的排列顺序为：含COOH含2个以上-OH含1个-OH含2个以上a-OH含1个a-OH。在分离工作中，常采取碱梯度萃取法来分离蒽醌类化合物。*2、颜色反应（1）Feigl反应：醌类衍生物在碱性条件下经加热能迅速与醛类及邻二硝基苯反应生成紫色化合物。（2）无色亚甲蓝显色反应：无色亚甲蓝溶液（亚甲蓝

28、100mg溶于乙醇100ml中，再加入冰乙酸1ml及锌粉1g，缓缓振摇至蓝色消失后备用）为苯醌类及萘醌类的专用显色剂。此反应可在PC或TLC上进行，样品在PC或TLC上呈蓝色斑点，可与蒽醌类化合物相区别。（3）Borntr ger反应（碱显色反应）：羟基醌类在碱性溶液中发生颜色改变，会使颜色加深。多呈橙、红、紫红及蓝色。如羟基蒽醌类化合物遇碱显红紫红色。（4）Kesting-Craven反应：此反应常被称为与活性亚甲基试剂的反应。苯醌及萘醌类化合物当其醌环上有未被取代的位置时，可在碱性条件下与一些含有活性亚甲基试剂（如乙酰乙酯、丙二酸酯、丙二腈等）的醇溶液反应，生成蓝绿色或蓝紫色。（5）与金属

29、离子的反应：在蒽醌类化合物中，如果有a-酚羟基或邻二酚羟基结构时，则可与Pb 、Mg 等金属离子形成络合物。不同结构的蒽醌化合物与醋酸镁形成的络合物颜色不同，如橙黄、橙红、紫红、紫、蓝色等。（6）对亚硝基二甲苯胺反应：9位或10位未取代的羟基蒽醌类化合物，尤其是1,8-二羟基衍生物，其羰基对位的亚甲基上的氢很活泼，可与0.1%对亚硝基二甲苯胺吡啶溶液反应缩合而产生各种颜色，如紫色、绿色、蓝色及灰色。1,8-二羟基均呈绿色。此反应可作蒽酮化合物的定性检查，常用纸色谱，以吡啶-水-苯（1:3:1）的水层为展开剂，以对亚硝基二甲苯胺的乙醇液作显色剂，在滤纸上发生颜色变化，如大黄酚蒽酮-9在滤纸上开始

30、呈蓝色立即变绿，芦荟大黄素蒽酮-9在滤纸上开始呈绿色很快变蓝。本反应可作为蒽酮类化合物的定性鉴别反应，不受蒽醌类、黄酮类、香豆素类、糖类及酚类化合物的干扰。三、醌类化合物的提取与分离（一）提取1、有机溶剂提取法2、碱提酸沉法：用于提取具有游离酚羟基的醌类化合物。酚羟基与碱成盐而溶于碱水溶液中，酸化后酚羟基游离而沉淀析出。3、水蒸气蒸馏法：适用于分子量小、有挥发性的苯醌及萘醌类化合物。（二）分离1、蒽醌苷类与游离蒽醌分离：蒽醌苷类与游离蒽醌衍生物的极性差别较大，可利用有机溶剂中溶解度不同进行分离。如苷类不溶于氯仿，而游离者可溶。因而常用与水不混溶的有机溶剂萃取或回流提取蒽醌粗提物，可将两者分开。

31、2、游离蒽醌的分离：*（1）pH梯度萃取法·原理：根据酸性不同，采用pH不同的碱水溶液进行萃取（碱性由小到大），蒽醌酸性依次由大到小的顺序萃取出来，再酸化得到沉淀。·如用碱性不同的水溶液（5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、1%氢氧化钠溶液、5%氢氧化钠溶液）依次提取，其结果为酸性较强的化合物（带 COOH或2个-OH）被碳酸氢钠提出；酸性较弱的化合物（带1个-OH）被碳酸钠提出；酸性更弱的化合物（带2个或多个-OH）只能被l%氢氧化 钠提出；酸性最弱的化合物（带1个-OH）则只能溶于5%氢氧化钠。*大黄素提取分离流程图如下：酸性大小为：大黄酸大黄素大黄芦荟酚大黄酚大黄酚甲醚

32、（2）色谱法：常用的吸附剂有硅胶、磷酸氢钙、聚酰胺，一般不用氧化铝，以免 发生不可逆的化学吸附。通常酸性强的蒽衍生物被吸附的能力也强，蒽醌类比蒽酚类易被吸附。3、蒽醌苷类的分离：蒽醌苷类水溶性较强，需要结合吸附及分配柱色谱进行分离，常用的载体有聚酰胺、硅胶及葡聚糖凝胶。（1）溶剂法 （2）色谱法四、醌类化合物的检识（一）理化检识：一般利用Feigl反应、无色亚甲蓝反应和KC反应来鉴定苯醌、蒽醌;利用Borntr ger反应初步确定羟基蒽醌化合物；（二）色谱检识第五章 苯丙素类化合物苯丙素类是指基本母核具有一个或几个C -C 单元的天然有机化合物类群，是一类广泛存在于中药中的天然产物，具有多方面

33、的生理活性。一、简单苯丙素（一）简单苯丙素的结构和分类简单苯丙素是中药中常见的芳香族化合物，结构上属苯丙烷衍生物，依C 侧链的结构变化，*可分为苯丙稀、苯丙醇、苯丙醛、苯丙酸等类型。（二）简单苯丙素的提取与分离1、提取：一般用有机溶剂或水提取2、分离二、香豆素*香豆素类成分是一类具有苯骈a-吡喃酮母核的天然化合物的总称，在结构上可以看成是顺式邻羟基桂皮酸脱水而形成的内酯类化合物。（一）香豆素的结构和分类1、简单香豆素类：是指在苯环一侧有取代，且7位羟基未与6（或8）位取代基形成呋喃环或吡喃环的香豆素类。广泛存在于伞形科植物中的伞形花内酯，秦皮中的七叶内酯和七叶苷，茵陈中的滨蒿内酯，独活中的当归

34、内酯等。2、呋喃香豆素类：香豆素类成分7位羟基和6（或8）位取代基异戊烯基缩合形成呋喃环，即呋喃香豆素类。（1）线性呋喃香豆素：补骨脂内酯（2）角型呋喃香豆素：白芷内酯（3）二氢呋喃香豆素3、吡喃香豆素类（1）线型吡喃香豆素类：花椒内酯。（2）角型吡喃香豆素类：邪蒿内酯。（3）其他吡喃香豆素：5，6-吡喃骈香豆素如别美花椒内酯；双吡喃香豆素如狄佩它妥内酯。4、其他香豆素类：是指a-吡喃酮环上有取代基的香豆素，C-3，C-4上常有苯基、羟基、异戊烯基等取代，如沙葛内酯、黄檀内酯等。（二）香豆素的理化性质1、性状：游离的香豆素多数有较好的结晶，且大多有香味。香豆素中分子量小的有挥发性，能随水蒸气蒸

35、馏，并能升华。2、溶解性：游离的香豆素能溶于沸水，难溶于冷水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿和乙醚；香豆素苷类能溶于水、甲醇和乙醇，难溶于乙醚等极性小的有机溶剂。*3、内酯碱水解：香豆素类分子具有内酯结构，碱性条件下可水解开环，生成顺式邻羟基桂皮酸的盐。顺式邻羟基桂皮酸盐的溶液经酸化至中性或酸性即闭环恢复为内酯结构。但如果与碱液长时间加热，开环产物顺式邻羟基桂皮酸衍生物则发生双键构型的异构化，转变为反式邻羟基桂皮酸衍生物，此时，再经酸化也不能环合为内酯。4、与酸反应*5、显色反应（1）异羟肟酸铁反应：香豆素类成分具有内酯结构，在碱性条件下开环，与盐酸羟胺缩合生成异羟肟酸，在酸性条件下再与Fe 络合而显

36、红色。（2）酚羟基反应：香豆素类成分常具有酚羟基取代，可与三氯化铁溶液反应产生绿色至墨绿色沉淀。若其酚羟基的邻位、对位无取代基，可与重氮化试剂反应而显红色至紫红色。（3）Gibb's反应：香豆素类成分在碱性条件（pH910）下内酯环水解生成酚羟基，如果其对位（6位）无取代基，则能与2，6-二氯（溴）苯醌氯亚胺（Gibb's试剂）反应而显蓝色。利用比反应可判断香豆素分子中C 位是否有取代基存在。（4）Emerson反应：与Gibb's反应类似，香豆素类成分如在6位无取代基，内酯环在碱性条件下开环与Emerson试剂（4-氨基安替比林和铁氰化钾）反应生成红色。此反应也可用于

37、判断C 位有无取代基存在。·Gibbs反应和Emerson反应阳性条件：酚羟基对位有活泼氢（都要求必须有游离的酚羟基，且酚羟基的对位要无取代才显阳性），如7-羟基香豆素就呈阴性反应。判断香豆素的C 位是否有取代基的存在，可先水解，使其内酯环打开生成一个新的酚羟基，然后再用Gibbs或Emerson反应加以鉴别，如为阳性反应表示C-6无取代。同样，8-羟基香豆素也可用此反应判断C-5位是否有取代。6、双键加成反应：香豆素类成分除了C -C 双键外，还可能有呋喃环或吡喃环上的双键，侧链取代基上的双键。在控制条件下氢化，非共轭的侧链双键最先被氢化，然后是和苯环共轭的呋喃环或吡喃环上的双氢化

38、，最后才是C -C 双键氢化。C -C 双键可与溴加成生成3，4-二溴加成衍生物，再经过碱处理脱去1分子溴化氢，生成3-溴香豆素衍生物。7、氧化反应：用于确定香豆素的结构确定。常用氧化剂有高锰酸钾、铬酸、臭氧等。如高锰酸钾使香豆素类C -C 双键断裂而生成水杨酸的衍生物；铬酸一般只氧化侧链，然后是呋喃环或吡喃环上的双键，最后才是C -C 双键。（三）香豆素的提取与分离1、提取（1）溶剂提取法：一般可用甲醇、乙醇、丙醇、乙醚等。其提取方法可采用乙醚等溶剂先提取脂溶性成分，再用甲醇（乙醇）或水提取极性大的成分。也可先用甲醇（乙醇）或水提取，再用溶剂或大孔吸附树脂分为脂溶性部位和水溶性部位。溶剂提取

39、法是香豆素类成分提取的主要方法。利用极性由小到大的溶剂顺次萃取时，各萃取液浓缩后都有可能获得结晶，再结合其他分离方法进行分离。（2）碱溶液沉淀法：由于香豆素类可溶于热碱液中，加酸又析出，故可用05%氢氧化钠水溶液（或醇溶液）加热提取，提取液冷却后再用乙醚除去杂质，然后加酸调节pH至中性，适当浓缩，再酸化，则香豆素类或其苷即可析出。·黄酮类化合物槐米的提取与分离：（1）槐米的有效成分是 芦丁 。（2）为什么会选择碱溶酸沉法提取？（3）提取时应注意哪些事项？（3）水蒸气蒸馏法：小分子的香豆素类因具有挥发性，可采用水蒸气蒸馏法进行提取。2、分离（三）香豆素的检识1、理化检识（1）荧光：香豆

40、素类化合物在紫外光（365nm）照射下一般显蓝色或紫色的荧光。7-羟基香豆素类往往有较强的蓝色荧光，加碱后其荧光加强，颜色变为绿色；羟基香豆素醚化，或导入非羟基取代基往往使荧光强度减弱、色调变紫；多烷氧基取代的呋喃香豆素类一般呈黄绿色或褐色荧光。（2）显色反应：常用异羟肟酸铁反应检识香豆素内酯环的存在与否，利用与三氯化铁溶液的反应判断酚羟基的有无。Gibb's反应和Emerson反应可用来检查C 位是否有取代基。2、色谱检识三、木脂素木脂素是由两分子（少数为三分子或四分子）苯丙素衍生物聚合而成的一类天然化合物，主要存在于植物的木部和树脂中，多数呈游离状态，少数与糖结合成苷。（一）木脂素

41、的结构与分类1、简单木脂素2、单环氧木脂素3、木脂内酯4、环木脂素5、环木脂内酯6、双环氧木脂*7、联苯环辛烯型木脂素：这类木脂素的结构既有联苯的结构，又有联苯与侧链环合成的八元环状结构。如五味子中的五味子醇、五味子素，其结构使五味子具有降转氨酶作用，且其含量与降GPT作用成正比。*8、联苯型木脂素：这类木脂素中两个苯环通过3-3'直接相连而成，其侧链为未氧化型。如厚朴素皮中分到的厚朴酚。9、其他型（二）木脂素的理化性质1、性状：多数木脂素化合物是无色晶体，一般无挥发性，少数具升华性。游离木脂素多具有亲脂性，一般难溶于水，易溶于苯、乙醇、氯仿及乙醇等有机溶剂，具有酚羟基的木脂素类可溶于

42、碱性水溶液中。木脂素苷类水溶性增大。2、光学活性与异构化作用：木脂素常有多个手性碳原子或手性中心，大部分具有光学活性，遇酸易异构化。3、Labat反应：用于鉴别亚甲二氧基 CH -O-CH -。当具有亚甲二氧基的木脂素加浓硫酸后，再加没食子酸，可产生蓝绿色。若4、Ecgrine反应：以变色酸代替没食子酸，并保持温度在708020分钟，可产生蓝紫色。（三）木脂素的提取与分离1、溶剂法2、碱溶酸沉法3、色谱法（四）木脂素的检识1、理化检识木脂素分子中常有一些功能基如酚羟基、亚甲二氧基及内酯结构等，可利用这些功能基的性质和反应进行木脂素的检识，如用三氯化铁反应检查酚羟基的有无；用Labat反应或Ec

43、grine反应来检查亚甲二氧基的有无；2、色谱检识：一般具有较强的亲脂性，常用硅胶薄层色谱，展开剂一般用亲脂性的溶剂，如苯、氯仿、氯仿-甲醇（9:1）、氯仿-二氯甲烷（1:1）、氯仿-乙酸乙酯（9:1）和乙酸乙酯-甲醇（95:5）等。常用的显色剂有1%茴香醛浓硫酸试剂，110加热5分钟。5%或10%磷钼酸乙醇溶液第六章 黄酮类化合物一、黄酮类化合物的结构与分类1、黄酮类化合物原指基本母核为2-苯基色原酮的一系列化合物。现在泛指两个苯环（A与B环）通过三个碳原子相互联结而成的一系列化合物。1、基本碳架：黄酮类化合物是一类重要的中药有效的成分，具有多种多样的生物活性，主要表现在2、根据黄酮类化合物

44、A环和B环中间的三碳链的氧化程度、三碳链是否构成环状结构、3位是否有羟基取代以及B环（苯基）交接的位置（2位或3位）等特点，可将主要的天然黄酮类化合物分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢异黄酮、查耳酮、二氢查耳酮、花色素、黄烷-3-醇、黄烷-3,4-二醇、橙酮（噢口弄）、口山酮（双苯吡酮）、高异黄酮*（一）黄酮类：黄酮类即以2苯基色原酮为基本母核，且3位上无含氧基团取代的一类化合物。如黄酮及其苷类有芹菜素、木犀草素、黄芩苷等。黄酮类颜色与基本骨架和取代基位置有关，如黄酮、黄酮醇为黄色，二氢黄酮为白色，有时为淡黄色，异黄酮也是有淡黄色及白色。黄酮4·、7位有OH，黄色加

45、深。*（二）黄酮醇类：在黄酮基本母核的3位上连接有羟基或其他含氧基团。如黄酮醇及其苷类有山柰、槲皮素、杨梅素、芦丁等。*（三）二氢黄酮类：黄酮基本母核的2、3位双键被氢化而成。如橙皮中的橙色素和橙皮苷、苷草中对消化性溃疡有抑制作用的甘草素和甘草苷。*（四）二氢黄酮醇类：黄酮醇类的2、3位被氢化的基本母核，且常与相应的黄酮醇共存于同一植物体中。如满山红叶中的二氢槲皮素和槲皮素共存、桑枝中的二氢桑色素和桑色素共存、黄柏叶中具有抗癌活性的黄柏素-7-O-葡萄糖苷属于二氢黄酮醇苷类。二氢黄酮醇在碱性条件下可开环变成查耳酮显黄至橙色。（ ）*（五）异黄酮类：异黄酮类母核为3-苯基色原酮的结构，即B环连接

46、在C环的3位上。如豆科植物葛根中所含的大豆素、大豆苷、大豆素-7,4'-二葡萄糖苷、葛根素和葛根素木糖苷等。*（六）二氢异黄酮类：具有异黄酮的2、3位被氢化的基本母核。如中药广豆根中所含有的紫檀素、三叶豆紫檀苷和高丽槐素，均有抗癌活性，其苷的活性强于苷元；如毛鱼藤中所含的鱼藤酮，具有较强的杀虫和毒鱼作用。（七）查耳酮类（八）二氢查耳酮类（九）花色素类：基本母核的C环无羰基。（十）黄烷醇类1、黄烷-3-醇2、黄烷-3,4-二醇（十一）橙酮类（十二）双黄酮类（十三）其他黄酮类二、黄酮类化合物的理化性质（一）性状1、黄酮类化合物多为结晶性固体，少数为无定形粉末。*2、黄酮类化合物多呈黄色，所

47、呈颜色主要与分子中是否存在交叉共轭体系有关，助色团的种类、数目以及取代位置对颜色也有一定影响。如黄酮其色原酮部分本身无色，但在2位上引入苯环后，即形成交叉共轭体系，并通过电子转移、重排，使共轭链延长，因而显现颜色。一般情况下，黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄色黄色，查耳酮为黄橙黄色；二氢黄酮、二氢黄酮醇及黄烷醇因2,3位双键被氢化，交叉共轭中断，几乎为无色；异黄酮因B环接在3位，缺少完整的交叉共轭体系，仅显微黄色。花色素一般pH7时显红色，pH为8.5时显紫色，pH8.5时显蓝色。*（二）旋光性1、游离黄酮类化合物：二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇、二氢异黄酮等类型，由于分子中含有不对称碳原子（2位或

48、2,3位）而具有旋光性。其余无旋光性。2、黄酮苷类：由于结构中含有糖部分，故均有旋光性，且多为左旋。（三）溶解性*1、游离黄酮类化合物：一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等有机溶剂及稀碱水溶液中。其中，黄酮、黄酮醇、查耳酮等为平面型分子，因分子与分子间排列紧密，分子间引力较大，故难溶于水。而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因分子中C环具有近似于半椅式的结构，系非平面型分子，故分子与分子间排列不紧密，分子间引力降低，有利于分子进入，故在水中溶解度稍大。异黄酮类化合物的B环受吡喃环羰基的立体阻碍，也不是平面型分子，故亲水性比平面型分子增加。花色素类虽具有平面型结构，但以离子形式存在

49、，具有盐的通性，故亲水性较强，水溶性较大。黄酮类化合物如果分子中引入的羟基增大，则水溶性增大，脂溶性降低；而羟基被甲基化后，故可与脂溶性杂质分开，但川陈皮素（5,6,7,8,3'，4'-六甲氧基黄酮）却可溶于石油醚。2、黄酮苷类：黄酮类化合物的羟基苷化后，则水溶性增加，脂溶性降低。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿、乙醚等有机溶剂中。苷分子中糖基的数目多少和结合的位置，对溶解度亦有一定影响，一般多糖分苷比单糖苷水溶性大，3-羟基苷比相应的7-羟基苷水溶性大。（四）酸碱性1、酸性：黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显（弱）酸性，可溶于碱水溶液、

50、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。黄酮类化合物的酸性强弱与酚羟基数目多少和位置有关。*如黄酮酚羟基酸性由强至弱的顺序是：7,4'-二OH7-或4'-OH>一般酚羟基5-OH·7,4'-OH8,4'-OH5,7-OH5,6-OH2、碱性：因有孤对电子，故具有弱碱性。*（五）显色反应-黄酮鉴别题鉴别下列物质：A:R =H、R =OH、R =OCH B:R =OH、R =R =H C：R =H、R =R =OH1、还原反应（1）盐酸-镁粉反应：此为鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应。将样品溶于甲醇（或乙醇）1ml中，加入少许镁粉振摇，再滴加几滴浓盐酸，12分

51、钟（微热）即显色。多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显红色紫红色，少数显蓝色或绿色。查耳酮、花色素、橙酮、儿茶素类、异黄酮类（除少数例外）则无该显色反应。（2）钠贡齐还原反应：在样品乙醇溶液中加入钠贡齐，放置数分钟至数小时或加热，过滤，滤液用盐酸酸化，则黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮类显红色，黄酮类显黄淡红色，二氢黄酮醇类显棕黄色。（3）四氢硼钠还原反应：四氢硼钠是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂，故此反应可用于鉴别二氢黄酮类、二氢黄酮醇类和其他黄酮类化合物。此反应可在试管中或滤纸上进行：取样品12mg溶于甲醇中，加四氢硼钠10mg，再滴加1%盐酸；或先在滤纸上喷2%四

52、氢硼钠的甲醇溶液，1分钟后熏浓盐酸蒸气。二氢黄酮类或二氢黄酮醇类被还原产生红紫红色，若A环与B环有一个以上-OH或-OCH 取代则颜色加深，其他黄酮类均为负反应。2、与金属盐类试剂的络合反应：黄酮类化合物分子中若具有3-羟基、4-羰基，或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基，则可以与许多金属类试剂如铝盐、锆盐、锶盐等反应，生成有色络合物或有色沉淀，有的还产生荧光。（1）三氯化铝反应：凡具有3-羟基、4-羰基，或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基结构的黄酮类化合物都可显色。此反应可在滤纸、薄层上或试管中进行，将样品的乙醇溶液和1%三氯化铝乙醇溶液反应，生成黄色络合物，置紫外灯下显鲜黄色荧光，但4'

53、-羟基黄酮醇或7,4'-二羟基黄酮醇显天蓝色荧光。（2）锆盐-枸橼酸反应：利用比反应可鉴别黄酮类化合物分子中3-或5-羟基的存在与否。取样品0.51mg，用甲醇10ml溶解，加2%二氯氧锆（ZrOCl ）甲醇溶液1ml，若出现黄色，说明3-羟基或5-羟基与锆盐生成了络合物。再加入2%枸橼酸甲醇溶液，若黄色不减褪，示有3-羟基或3,5-二羟基；若黄色显著减褪，示有5-羟基，但无3-羟基。因为此反应5-羟基、4-羰基与锆盐生成的络合物不如3-羟基、4-羰基锆络合物稳定，容易被弱酸分离。此反应也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物斑点多呈黄绿色并有荧光。（3）氨性氯化锶反应：黄酮类化合物的分子中

54、如果有邻二酚羟基，则可与氨性氯化锶反应。取少量样品置小试管中，加入甲醇1ml溶解后，再加0.01mol/L氯化锶（SrCl ）的甲醇溶液和被氨气饱和的甲醇溶液各3滴，若产生绿色至棕色至黑色沉淀，则表示有邻二酚羟基。（4）三氯化铁反应：多数黄酮类化合物分子中含有酚羟基，故可与三氯化铁水溶液或醇溶液发生显色反应，依分子中所含的酚羟基数目及位置不同，呈现紫、绿、蓝等不同颜色。3、硼酸显色反应：黄酮类化合物分子中5-羟基黄酮及6'-羟基查耳酮结构，在无机酸或有机酸存在条件下，可与硼酸反应，产生亮黄色。一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光，但在枸橼酸丙酮存在的条件下，只显黄色而无荧光。该反应呈阳

55、性反应，可与其他类型的黄酮类化合物相区别。4、碱性试剂反应：（1）黄酮类在冷和热的氢氧化钠水溶液中能产生黄橙色。查耳酮类或橙酮类在碱液中能很快产生红或紫红色；二氢黄酮类在冷碱中呈黄橙色，放置一段时间或加热则呈深红紫红色，此系二氢黄酮类在碱性条件下开环后变成查耳酮之故。（2）黄酮醇类在碱液中先呈黄色，当溶液中通入空气后，因3-羟基易氧化，即转变为棕色。（3）黄酮类化合物当分子中有3个羟基相邻时，在稀氢氧化钠溶液中往往能产生暗绿色或蓝绿色纤维状沉淀。（4）可将黄酮类化合物与碱性试剂通过纸斑反应，在可见光或紫外光下观察颜色变化情况来鉴别黄酮类化合物。用氨蒸气处理后呈现的颜色变化置空气中随即褪去，但经

56、碳酸钠水溶性处理而呈现的颜色却不褪色。5、与五氯化锑反应：将样品510mg溶于无水四氯化碳5ml中，加2%五氯化锑的四氯化碳溶液1ml，查耳酮类生成红或紫红色沉淀，而黄酮、二氢黄酮及黄酮醇类显黄色至橙色，故此反应可区分查耳酮类与其他黄酮类化合物（注：由于在湿空气及含水溶液中颜色产物不稳定，反应时所用溶剂必须无水）。6、其他显色反应：如Gibb's反应可用于鉴别黄酮类化合物酚羟基对位是否被取代。将样品溶于吡啶中，酚羟基对位未被取代者加入Gibb's试剂后即显蓝或蓝绿色。三、黄酮类化合物的提取与分离（一）提取1、乙醇或甲醇提取法2、热水提取法*3、碱性水或碱性稀醇提取法：4、超临界

57、萃取法（二）分离1、溶剂萃取法2、pH梯度萃取法3、柱色谱法（1）硅胶柱色谱应用范围最广，主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化(或乙醚化)的黄酮及黄酮醇类。（2）聚酰胺柱色谱：聚酰胺吸附属于氢键吸附，极性物质与非极性物质均可选用，但特别适合分离酚类、醌类、黄酮类化合物。·原理：一般认为是“氢键吸附”，即聚酰胺的吸附作用是通过其酰胺羰基与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合而产生的，其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中酚羟基的数目与位置等及溶剂与黄酮类化合物与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。溶剂分子与聚酰胺或黄酮类化合物形成氢键缔合的能力越强，则聚酰胺对黄酮类化合物的吸附作用将减弱。·规律：酚羟基数目越多则吸附力越强。不同类型黄酮类化合物被吸附剂强弱顺序为：黄酮醇黄酮二氢黄酮醇异黄酮叁糖苷双糖苷单糖苷游离黄酮不同溶剂在聚酰胺上的洗脱能力由弱至强的顺序为：水甲醇或乙醇（浓度由低到高）丙酮稀氢氧化钠水溶液或氨水甲酰