微生物检验 第十二章 真菌

1、真真 菌菌真真 菌菌机体内寄生机体内寄生37含动物蛋白含动物蛋白培养基培养基 yeast沙保氏培养基沙保氏培养基2525普通培养基普通培养基2525 mold真菌真菌繁殖结构繁殖结构，一条菌丝可生成一条菌丝可生成 多个孢子多个孢子 孢孢 子子芽芽 胞胞作用作用真菌繁殖结构真菌繁殖结构细菌休眠结构，细菌休眠结构，抵御不良环境抵御不良环境低抗力低抗力 不强，加热不强，加热6070短时间即可死亡短时间即可死亡强 ， 有 的 可 耐强 ， 有 的 可 耐100数小时数小时分生孢子分生孢子叶状孢子叶状孢子孢子囊孢子孢子囊孢子芽生孢子芽生孢子厚膜孢子厚膜孢子关节孢子关节孢子大分生孢子大分生孢子小分生孢子小

2、分生孢子芽生孢子芽生孢子厚膜孢子厚膜孢子关节孢子关节孢子孢子囊孢子注意注意实验室检验实验室检验临床标本临床标本直接检查直接检查检测抗原检测抗原直接镜检直接镜检固定标固定标本染色本染色墨汁负墨汁负染色法染色法KOH法法毛发毛发指甲指甲皮屑皮屑脑脊液脑脊液分离培养分离培养沙氏培养基沙氏培养基2537观察菌落观察菌落分子生物学检测分子生物学检测动物实验动物实验检测抗体检测抗体病理检查病理检查镜检、生化反应镜检、生化反应真菌的致病性真菌的基本特性：菌丝、孢子、培养特性标本采集注意事项常用的检查方法：显微镜检查、分离培养、生化实验1.简述真菌的致病性特点。简述真菌的致病性特点。2.真菌标本采集是有哪些注

3、意事项？真菌标本采集是有哪些注意事项？3.形态学检查和培养在真菌检查中的意义。形态学检查和培养在真菌检查中的意义。（一）掌握毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子丝 菌生物学特性、微生物学检验方法及鉴定。（二）熟悉浅部真菌感染的种类目的要求皮下组织感染真菌皮下组织感染真菌毛癣菌属毛癣菌属表皮癣菌属表皮癣菌属小孢子菌属小孢子菌属表面感染真菌表面感染真菌皮肤癣真菌皮肤癣真菌糠秕马拉色菌 着色真菌孢子丝菌 位置：寄居于人体皮肤和毛干的最表层。因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反应。 嗜脂性酵母样菌 代表：秕糠马拉色菌(Malasseziafurfur) 症状：皮肤表面出现花斑癣（汗斑）1直接显微镜检查直接显微

4、镜检查可采用透明胶带粘贴可采用透明胶带粘贴取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面，取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面，数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁，孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁，芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈腊肠样。腊肠样。2 2分离培养与鉴定分离培养与鉴定 毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门丝孢菌目丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起人和动物的感染。 临床上常见的有 红色毛癣菌(trichoph

5、yton rubrum) 须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌) 许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌) 紫色毛癣菌（T.violaceum） 断发毛癣菌（T.tonsurans）毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色,表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状1标本采集标本采集采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发。近尖端下面甲屑；拔取无

6、光泽病发。2直接显微镜检查直接显微镜检查皮屑皮屑10%KOH液；指甲液；指甲25%KOH/25%NaOH处理处理镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子。镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子。皮肤癣菌感染的毛发皮肤癣菌感染的毛发 三.分离培养 标本 70%乙醇或在青、链霉素混合液内处理5min 生理盐水洗3次 接种沙氏琼脂斜面25培养观察菌落特征。四.其他鉴定试验 毛发穿孔试验 脲酶试验 特殊营养需要试验 将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏水和23滴10酵母浸膏液的平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，置25孵育四周，每周检查一次，每次取数根毛发置载玻

7、片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。对对灰黄霉素、伊曲康唑灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。等药物敏感。 表皮癣菌属（Epidermophyton）目前只有一个种，即絮状表皮癣菌（E.floccosum）, 能引起人类感染。 絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌，可引起皮肤感染如股癣、足癣、体癣、手癣和甲癣。 皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 镜检可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子 培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见球拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中可见厚膜孢子。表皮癣菌：菌落初为表皮癣菌：菌落初为

8、白色鹅毛状白色鹅毛状, ,以后变为以后变为黄绿色粉末状。粗棒黄绿色粉末状。粗棒状薄壁大分生孢子。状薄壁大分生孢子。菌丝球拍状菌丝球拍状 我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏 样小孢子菌和狗小孢子菌等。 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感 染甲。 皮屑和毛发+10%KOH处理 镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌 的鞘包裹着发干。 在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐 色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球 拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚 壁梭形（纺锤形）大分生孢子。小孢子癣菌：菌落为灰色、橘红色或棕黄色，厚壁大分生孢子，菌丝有结节状、梳状和球拍状毛癣菌属表皮癣菌属小孢子癣菌属

9、主要有着色真菌和孢子丝菌 着色真菌感染发生在暴露部位，称着色真菌病。卡氏枝孢霉和裴氏着色芽生菌。 申克孢子丝菌，属腐生性真菌，常因外伤接触带菌的花草等引起感染。此菌可引起孢子丝菌下疳。此菌也可引起深部感染。是一种二相性真菌。分生孢子：分生孢子：树枝型、树枝型、剑顶型、剑顶型、花瓶型：花瓶型：多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干燥或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，燥或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈疣状增殖。呈疣状增殖。直接显微镜检查直接显微镜检查：单个或成群厚壁孢子，有横隔单个或成群厚壁孢子，有横隔或中间十字分隔。或中间十字分隔。培养：

10、培养：沙氏培养基，生长缓慢，菌落从灰黑色至沙氏培养基，生长缓慢，菌落从灰黑色至黑色，有气生菌丝。菌落涂片镜检可见三种类型黑色，有气生菌丝。菌落涂片镜检可见三种类型的分生孢子，有鉴定价值。的分生孢子，有鉴定价值。生化反应生化反应：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化硝酸盐，需维生素化硝酸盐，需维生素B1。对对5-FC、伊曲康唑、氟康唑、伊曲康唑、氟康唑敏感，易产生耐药性敏感，易产生耐药性传染源：人和动物传染源：人和动物传播途径：经破损传播途径：经破损皮肤接触感染。皮肤接触感染。二相性真菌。二相性真菌。(1)直接显微镜检查：卵圆形的孢子。直接显微镜检查：卵圆形的孢子。(

11、2)、分离培养与鉴定：将标本接种于沙、分离培养与鉴定：将标本接种于沙氏培养基上氏培养基上25培养，培养，2-3d开始生长，开始生长，初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为淡咖啡色至深褐色。淡咖啡色至深褐色。37培养培养2-3d，可，可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。（3）、对）、对碘化钾、伊曲康唑、特比萘芬碘化钾、伊曲康唑、特比萘芬等药物敏感。等药物敏感。 脚气是一种常见的真菌感染性皮肤病。 多见于趾间,足底及足缘,有深在性水疱,糜烂及鳞屑,伴有瘙痒等症状.多见于成人,夏秋重,冬春轻,足多汗及常穿胶鞋者易患本病 主要致病菌为红色毛癣菌、

12、石膏样毛癣菌和絮状表皮癣菌。 医学上通常将脚气分三型：糜烂型、水疱型、角化型 本病是由皮肤癣菌所引起的。足部多汗潮湿或鞋袜不通气等都可诱发本病。皮肤癣菌常通过污染的澡堂、游泳池边的地板、浴巾、公用拖鞋、洗脚盆而传染。 1要保持脚的清洁干燥，勤换鞋袜，鞋子要通气良好。 2不要用别人的拖鞋、浴巾、擦布等，不要在澡堂、游泳池旁的污水中行走。 3公用澡堂、游泳池要做到污水经常处理，以防相互传染。 灰黄霉素、伊曲康唑灰黄霉素、伊曲康唑 派瑞松:曲安奈德益康唑乳膏 达克宁:硝酸咪康唑软膏（一）掌握深部感染真菌概念、分类、检验程序；掌握假丝酵母、隐球菌、卡氏肺孢菌微生物学特性、检验方法及鉴定要点。（二）熟悉

13、荚膜组织胞浆菌孢子鉴别要点。（三）了解抗真菌药物分类及临床应用。目的要求目的要求（一）假丝酵母菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（二）隐球菌属；分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（三）曲霉菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（四）组织胞浆菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（五）卡氏肺孢菌：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 教学内容教学内容条件致病：皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿新生隐球菌（墨汁负染色）新生隐球菌（墨汁负染色） 新生隐球菌菌落新生隐球菌菌落w病原性隐球菌

14、在病原性隐球菌在2525和和3737生长，而非病生长，而非病原性隐球菌在原性隐球菌在3737时不生长。培养时不生长。培养25d25d后后观察观察菌落形态特点菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。染色镜检。曲霉结构图曲霉结构图曲霉菌曲霉菌返回返回烟曲霉菌落烟曲霉,光镜 X400黄曲霉菌落黄曲霉,光镜 X200 黑曲霉菌落 黑曲霉,光镜 X200土曲霉菌落 土曲霉，光镜 X200 构巢曲霉菌落 构巢曲霉,光镜 X400杂色曲霉菌落杂色曲霉,光镜 X400返回返回 荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状，镜检可见细长有荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状，镜检可见细长有隔菌丝，菌丝侧面或孢子柄

15、上长有特殊的圆形大隔菌丝，菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮。血分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮。血液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞中有卵圆形或圆形的酵母细胞中有卵圆形或圆形的酵母细胞毛霉科毛霉科根霉属根霉属犁头霉属犁头霉属毛霉属毛霉属根毛霉属根毛霉属少根根霉少根根霉米根霉米根霉毛霉毛霉 根霉根霉 梨头霉梨头霉 马内菲青霉 菌丝相棕红色蜡棕红色蜡样、褶皱，样、褶皱，白色绒毛白色绒毛样菌丝，样菌丝，菌落周围菌落周围培养基背培养基背面变为红面变为红葡萄酒色葡萄酒色马内菲青霉 酵母相脑回样脑回样皱褶，皱褶，浅灰褐浅灰褐色、湿色、湿润的菌润的菌落落假丝酵母菌隐球菌曲霉菌组织胞浆菌卡氏肺孢菌毛霉目真菌马内菲青霉菌镰刀菌深部