海洋药物研究的关键技术zip

1、第三章第三章 海洋药物研究的关键技术海洋药物研究的关键技术第一节第一节 生物活性筛选技术生物活性筛选技术一、什么是生物活性筛选技术？ 通过活性评价模型，判断化合物作用的原理和方法相结合的手段生物活性bioactivity是指能引起细胞正常机理发生改变的能力生物活性化合物，是来自生物体内的对生命现象有影响的微量或少量物质。如：糖类、脂类、多肽类、甾醇类、生物碱、甙类、大环内脂等。二、为什么利用生物活性筛选技术？ 发现生物活性化合物 新药发现的导向和指针 体现着药学和生命科学的最新研究成果三、生物活性筛选技术有哪些特点？ 体现着生理学、病理学和药理学的研究进展 同一种疾病的治疗药物可以通过多种生物

2、活性筛 选方法进行探索 生物活性筛选是多层次和多靶点的 如胆固醇的合成及其相关酶 乙酰基（C2）异戊二烯（C5）鲨烯（C30）胆固醇（C27）A. 乙酰CoA合成异戊烯焦磷酸（IPP） 2分子乙酰CoA经硫解酶催化缩合成乙酰乙酰CoA，由HMG- CoA合成酶催化结合1分子乙酰CoA，生成-羟基-甲基戊二酸单酰CoA（HMG- CoA）， HMG- CoA还原酶（限速酶）催化其生成甲羟戊酸（MVA），消耗2分子NADPH。甲羟戊酸经磷酸化、脱羧三步酶促反应生成活泼的异戊烯焦磷酸（IPP）。B.鲨烯的合成 一种异构酶催化异戊烯焦磷酸转换成二甲烯丙基焦磷酸（DPP）。然后它按照头对尾方式与另一分子

3、异戊烯焦磷酸缩合成10C牻牛儿焦磷酸。再按头对尾方式与另一分子异戊烯焦磷酸缩合成15C焦磷酸法尼酯（FPP），2分子FPP由鲨烯合成酶催化，仍然按头对尾方式缩合成30C的鲨烯。C.鲨烯转换为胆固醇 鲨烯转换为胆固醇的过程很复杂，一个中间产物是羊毛固醇，涉及加氧、环化，形成由四个环组成的胆固醇核的反应。而由羊毛固醇到胆固醇还要经过甲基的转移、氧化、脱羧等约20步反应。胆甾-5-烯-3-醇胆固醇四、生物活性筛选类型Bioactivity Screening 动物水平 细胞水平 分子水平模型特点应用特点常见方法疾病模型动物疾病模型动物天天然或诱导然或诱导预测临床疗效预测临床疗效和药用前景和药用前景肿

4、瘤、血栓、动脉硬化。神经系统疾病动物模型、循环系统疾病动物模型、呼吸系统疾病动物模型、消化系统疾病动物模型。常见人类疾病动物模型的制备方法，北京大学医学出版社环节动物、海胆、海虾、水螅、金鱼、斑马鱼肿瘤细胞肿瘤细胞 细菌细菌肿瘤药物筛选肿瘤药物筛选抗生物质筛选抗生物质筛选HelaHela细胞、细胞、P388P388细胞细胞稻瘟病菌稻瘟病菌酶激动剂或抑制剂酶激动剂或抑制剂受体激动剂或抑制剂受体激动剂或抑制剂抗原抗体反应抗原抗体反应抗肿瘤、抗血栓、抗抗肿瘤、抗血栓、抗糖尿病、抗病毒、抗糖尿病、抗病毒、抗炎、降血压、降血脂炎、降血压、降血脂DNADNA拓扑异构酶、蛋拓扑异构酶、蛋白激酶、乙酰胆碱酯白

5、激酶、乙酰胆碱酯酶等近酶等近800800种种五、典型生物活性筛选方法五、典型生物活性筛选方法含麦角甾醇含麦角甾醇琼脂板琼脂板无麦角甾无麦角甾醇醇琼脂板琼脂板白念珠菌白念珠菌Monilia albican 1.1.琼脂板扩散法琼脂板扩散法海洋生物提取物海洋生物提取物海绵海绵3 3种海绵抗真菌种海绵抗真菌不受麦角甾醇影响不受麦角甾醇影响3 3种海绵减弱种海绵减弱1010种海绵抗真菌种海绵抗真菌(22E,24R)-麦角甾烷-5,7,22-三烯-3-醇2. 2. 抗肿瘤药物筛选方法抗肿瘤药物筛选方法图3-1六、高通量和高内涵筛选六、高通量和高内涵筛选1.什么是高通量筛选？高通量筛选(High thro

6、ughput screening，HTS)技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机分析处理实验数据，在同一时间检测数以千万的样品，并以得到的相应数据库支持运转的技术体系。它具有微量、快速、灵敏和准确等特点。简言之就是可以通过一次实验获得大量的信息，并从中找到有价值的信息。FLIPR (fluorometricimagingreadet)荧光检测法荧光检测法Alpha (Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay) Screen检

7、测法检测法2. 什么是高内涵筛选技术？高内涵筛选（High Content Screening，HCS）是在保持细胞结构和功能完整性的前提下，同时检测被筛样品对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号转导各个环节的影响，在单一实验中获取大量相关信息，确定其生物活性和潜在毒性。从技术层面而言，高内涵筛选是一种应用高分辨率的荧光数码影像系统，在细胞水平上检测多个指标的多元化、功能性筛选技术，旨在获得被筛样品对细胞产生的多维立体和实时快速的生物效应信息。3. 高通量筛选技术和高内涵筛选技术的差别？高通量筛选技术高通量筛选技术 高内涵筛选技术高内涵筛选技术检测检测范围范围化合物活性化合物活性靶点激活、细胞凋亡、分裂指数、靶点激活、细胞凋亡、分裂指数、蛋白转位、细胞活力、细胞迁移、蛋白转位、细胞活力、细胞迁移、受体内化、细胞毒性、细胞周期和受体内化、细胞毒性、细胞周期和信号转导等信号转导等检测检测特性特性数据平均性数据平均性细胞和分子细胞和分子数据丰富性，立体性，多样性数据丰富性，立体性，多样性细胞细胞检测检测特性特性检测分析仪器检测分析仪器荧光显微系统、荧光图像获取系统、荧光显微系统、荧光图像获取系统、检测分析仪器、图像处理分析软件、检测分析仪器、图像处理分析软件、接管分析和数据管理系统接管分析和数据管理系统第二节第二节 分离纯化技术分离纯化技