第三章 方法选择与评价2009

1、本章主要内容第一节 性能评价在临床实验室的应用范围第二节 性能评价与验证的基本方法第三节 室内与室间比对实验n性能评价性能评价 n自行研究或开发了一个检测方法，为了使方法的检测结果符合临床要求，必须对方法的性能作详细而全面的实验，这时的实验是对性能的评价。 n通常是生产厂家完成 n性能验证性能验证 n对他人或厂商的评价资料中的几个主要性能的证实。 n实验室自己完成性能评价在临床实验室的应用范围性能评价在临床实验室的应用范围IFCC根据实验方法的准确度与精密度的不同可以分为决定性方法、参考方法、决定性方法、参考方法、常规方法常规方法三级。 准确度增加准确度增加应用范围增加应用范围增加 不同方法的

2、关系不同方法的关系 参考物，也称标准品或标准物质，是一类具有一种或多种成分、含量均匀确定的物质。 参考物用以校准仪器设备、评价测量方法或给其它物质赋值。 参考物的结果含量一般表示为： 标准值总不确定度 用于常规质量控制，用来控制患者标本的测定误差。 质控物不能用于仪器的校准。决定性方法决定性方法用途：评价参考方法及一级标准品一级标准品一级标准品发展及评价参考方法，校准决定性方法及参考方法，为二级标准品定值参考方法参考方法为二级标准品及质控品定值，评价常规方法二级标准品二级标准品常规方法的标准品，为质控品定值常规方法常规方法临床实验室的常规定量分析 质控品质控品质量保证评价校准校准评价定值评价校

3、准定值各级分析方法与标准品的互相关系各级分析方法与标准品的互相关系测定结果测定控制 量值溯源的目的，是让常规标本的检测结果得到和参考系列相同的测量值。参考方法常规方法患者新鲜标本参考值结果常规测定结果结果一致一级参考校准测定得到三 量值溯源掌握几个基本概念二级参考校准二、量值溯源的概念量值的溯源性 通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。 现实问题是：是否可以让常规的检测系统，对患者标本的检测，得到的测定值和参考实验室相同的检测量值。这就是通过一条连续（不间断）的比较链在一定的误差条件下，使患者标本检测结果与

4、国家或国际的参考系统在参考实验室，使用参考方法、参考品得到的结果联系起来。为此，生产厂商必须对完成检测涉及的检测系统各要素（仪器、试剂、校准品、和操作程序）进行严格的标准化，来实现溯源性。 （厂家提供标准化的检测系统）关于检验结果溯源的解释 临床检验标准化可以简单理解为：为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商和临床实验室的所有努力，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程为标准化。三、标准化检验要有规程，按规程去操作，检验要有规程，按规程去操作，操作要有记录，记录要有分析。操作要有记录，记录要有分析。标准化涉及的内容标准化涉及的内容n严格的质量管理；n训练有素的人员；n良好的必

5、要设备和环境要求；n操作的每个步骤都有具体明确的操作规程；n有详细记录；n每个检测项目都要有一个完整文件资料，证实分析性能、溯源性、操作要求、质量要求等。四、参考物的量值溯源了解大大小小 精密度是指同一样本在一定条件下多次重复测得的一系列单次值之间的接近程度，是表示测定结果中随机误差大小的指标。 精密度一般以变异系数CV%表示 重复性试验是评价精密度的常用方法。 返回节目录返回节目录 1 1系统误差系统误差： 由方法、仪器、试剂或操作的明显恒定误差引起，一系列测定值存在有相同倾向的偏差，表现有恒定系统误差和比例系统误差。其不准确度表示为绝对偏差和相对偏差 。特点：单向性，没有随机性，有一定的大

6、小和方向；找到原因，采取措施后可以基本消除。恒定系统误差比例系统误差比较方法试验方法真值样本均值测定值SERE四、准确度的评价评价方法准确度的常用试验：1. 方法比较试验2. 回收试验3. 干扰试验 （1）比较方法的选择3. 试验要点（2） 测定步骤从经验上讲，若b0.97，或b1.03，已有可能b和1之间有统计上显著性差异。比较方法候选方法比例系统误差恒定系统误差美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准液量（）血清量（）标准液量（mlmlml加入浓度回收浓度100回收率接近100 分析不受基质影响。 无论在纯溶液还是复杂的基质环境中，分析方法的反应能力是一样的。（准确度不受影响）回收率明

7、显偏离100 分析明显受不同的基质影响。 在不同的基质环境下，分析方法的反应能力有明显差异。（准确度受影响）回收率的理解： 精密度是指同一样本在一定条件下多次重复测得的一系列单次值之间的接近程度，是表示测定结果中随机误差大小的指标。 精密度一般以变异系数CV%表示 重复性试验是评价精密度的常用方法。4. 允许误差和性能可接受方式 1988年美国通过了临床实验室修正法规CLIA88，该法规对检验项目规定了允许误差，现成为许多国家和地区临床检验的最低质量指标。我国也已在临床检验中应用该质量指标，用来评估全国或省、市的室间质量评估成绩，评估检测系统性能可接受性。 检测系统性能最重要的是不精密度和不准

8、确度。由重复实验对方法的随机误差作出估计；用方法比较实验得到被评价方法和比较方法结果的均值间偏倚。 医生和患者不关心检验结果的误差是不精密引起的还是由于不准确引起，重要的是它造成的后果有多大。所以判断检测系统或方法性能可否接受，是看总误差的水平。 应用方法决定图（MD图）能以图像的方式表达不精密度和不准确度与总允许误差的比较。 二、如何画方法性能决定图（简介）总允许误差示意图0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.00.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0允许不精密度（%）允许不准确度（%） 最终判断可接受性将依据每个实验室的情况和方法的具体

9、应用。 （1）具有不符要求性能的方法 不能用于常规。除非没有其它方法可以替代。 （2）具有临界性能的方法 若应用在极其稳定、极少有问题的高度控制的仪器系统上；或者由经严格训练、经验丰富的检验人员应用，他们很重视预防性保养，小心地监视仪器性能，熟练精通统计控制图上指示的问题等，还是可以接受的。（固有性能差，要求外加误差要非常小）（3）具有良好性能的方法 一般应是可接受的，但是仍然需要高度的预防性保养和每天质量控制，以确保常规性能。（4）具有优秀性能的方法 是最合适的，在不同总误差指标和需要适当控制检验过程的操作特性间的关系，证实达到了最高要求的水平六、检测限评价 可检测的最低分析物浓度为检测系统

10、的分析灵敏度或称检测限。 分析灵敏度：具有定性含义的 检测低限 具有定量含义的 生物检测限 功能灵敏度 如果空白响应量（吸光度）的波动服从正态分布规律，则95空白响应量：空白均值2s空白 待测样品响应量只有超过空白均值2s空白才被认为样品中有分析物99.7空白响应量：空白均值3s空白 待测样品响应量只有超过空白均值3s空白才被认为样品中有分析物(一) 检测低限空白管的波动原因：试剂空白的稳定性，比色皿的一致性，比色计的稳定性，如：某如：某5 5g/Lg/L分析物的分析物的吸光度吸光度落在落在 检测低限检测低限 5g/L（定性）（定性）（低于（低于5 5g/Lg/L时其吸光度与空白吸光度有重叠，

11、无法分辨）时其吸光度与空白吸光度有重叠，无法分辨） 稍大于检测低限的响应信号说明样品内有分析物，但是，这时还不能正确报告定量结果。因为是单次测定。 对于这个接近检测低限的样品做多次重复测定，按照正态分布规律其响应值范围应该是X2s或X3s，即有50测定结果会“无分析物”，有50的测定结果“有分析物”。 那么多少检测响应量时才能较好地报告定量结果呢？XB-2sB XBXB+2sB(检测低限）5050(二) 生物检测限 对于多个接近检测低限的样品做多次重复测定，按照正态分布规律其响应值范围应该是X2s或X3s，这些较均值小的值就有可能和检测低限（空白响应量的上限）交叉。 因此，这些样品检测响应量的

12、95或99.7单次检测响应量的最低值也应该比检测低限大，从而保证样品在任何情况下，单次检测响应量都不是空白响应量，这些样品具有的分析物浓度才可以定量的报告。空白空白均值均值XB+2sB 生物检测低限的定义： 某样品单次检测可能具有的最小响应量刚大于检测低限响应量，该样品内含有的分析物浓度为生物检测限。（可以定量报告结果的限值）(三) 功能灵敏度 以日间重复测定的CV为20时，对应的检测限样品具有的平均浓度作为检测系统可定量报告的最低浓度。 需要多个检测限浓度的样品来做精密度试验，从中选择CV接近20的对应浓度，作为可定量报告的最低浓度值。分析物浓度越低，精密度实验CV值越大。可报告范围指可以报告的所有结果的范围。 1. 分析测量范围：没有进行任何预处理（稀释，浓缩等）的样本，由方法仪器直接测出的结果范围。 2. 临床可报告范围：对临床诊断、治疗有意义的待测物浓度范围，可以通过稀释、浓缩等方法扩大分析测量范围。基本步骤5个样品各测定4次，结果进行统计分析，检验有无稀释变异，线