DNA重组技术的基本工具(公开课)好

1、基因工程基因工程如果我也能如果我也能捉老鼠就好捉老鼠就好了！了！ 这些定向改造基因的设想能实现吗？基因工程基因工程问题探讨： 苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌普通棉花抗虫棉普通棉花抗虫棉 抗虫棉的抗虫棉的培育有哪些培育有哪些关键步骤？关键步骤？ 1-1 DNA1-1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具以大肠杆菌细胞内获得得以大肠杆菌细胞内获得得ECOR1为例为例 能识别双链能识别双链DNA分子的某种分子的某种特定核苷酸序列特定核苷酸序列，并且准确地在每一条中并且准确地在每一条中

2、特定部位的两个核苷酸特定部位的两个核苷酸之间之间切割。切割。 磷酸二酯键：磷酸二酯键：即连接脱氧核糖、即连接脱氧核糖、磷酸之间的化学磷酸之间的化学键键中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。黏黏性性末末端端平平末末端端黏性末端黏性末端平末端平末端同一种同一种（二）（二）DNA连接酶连接酶 分子缝合针分子缝合针 1、作用部位：磷酸二酯、作用部位：磷酸二酯键键G A A T T C C T T A A G GP AP2、作用：把两条双链把两条双链DNA片段片段 之间的缝隙之间的缝隙“缝合缝合”起来。起来。两两DNADNA片段要具有片段要具有互补互补的黏性末端的黏性末端才能拼起来才能拼起

3、来DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的可把黏性末端之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来起来，T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用类型作用部位：作用部位：（扶手）（扶手）（梯子）（梯子）三、“分子运输车” 基因进入受体细胞的载体载体需要的条件：有1多个限制酶切点(2)导入基因能在受体细胞中复制、表达(3)有某些标记基因，便于筛选常用运载体： 细菌的质粒 噬菌体衍生物或某些动植物病毒 (2)假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？(3)目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现

4、？ 作为分子运输车载体，如果没有切割位点将会怎样？有标记基因的存有标记基因的存在，可用含青霉在，可用含青霉素的培养基鉴别。素的培养基鉴别。有切割位点有切割位点能复制并带着能复制并带着插入的目的基插入的目的基因一起复制因一起复制质粒质粒裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体（即拟核裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有）之外，并具有自我复制能力自我复制能力的很小的双链环状的很小的双链环状DNA分子。分子。最常用运载体最常用运载体质粒质粒 实际上实际上在基因在基因工程操作中，工程操作中，真正被用作载真正被用作载体的质粒，都体的质粒，都是在天然质粒是在天然质粒的基础上进行的基础上进行过人工改造的。过人工改造的。1.下列关于限制酶的说法正确的是 A限制酶广泛存在于各种生物中，但原核生物 中很少B一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端D限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 2下列关于DNA连接酶的叙述中，正确的是 ADNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢 键BDNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上 的磷酸和脱氧核糖CDNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上 的磷酸和核糖D同一种DNA连接酶可以切出不同的黏性末端3在胰岛素的基因与质粒