HLA-B27检测及其临床应用

1、HLA-B27与强直性脊柱炎1强制性脊柱炎强制性脊柱炎ASl强制性脊柱炎强制性脊柱炎（AS）是一种主要累及脊柱，中轴骨和四肢大关节，以椎间盘纤维环及其附近结缔组织纤维化和骨化及关节强直为病变特点的慢性炎症。其特征是病变从骶髂关节开始，逐步上升蔓延至脊柱关节，造成骨性强直。病理变化病理变化l本病早期病理变化为肌腱，韧带骨附着点炎，也可发生一定程度的滑膜炎症，常以骶髂关节发病最早，以后可发生关节粘连，纤维性和骨性强直，组织学改变为关节囊，肌腱，韧带的慢性炎症，伴有淋巴细胞，浆细胞浸润，这些炎性细胞成团分布于较小的滑膜血管周围。l骶髂关节炎骶髂关节炎是强直性脊柱炎的病理标志，也常是其最早的病理表现之

2、一，骶髂关节炎的早期病理变化包括软骨下肉芽组织形成，组织学上可见滑膜增生和淋巴样细胞及浆细胞聚集，淋巴样滤泡形成以及含有IgG，IgA和IgM的浆细胞，骨骼的侵蚀和软骨的破坏随之发生，然后逐渐被退变的纤维软骨替代，最终发生骨性强直，脊柱的最初损害是椎间盘纤维环和椎骨边缘连接处的肉芽组织形成，纤维环外层可能最终被骨替代，形成韧带骨赘，进一步发展将形成X线所见的竹节样脊柱。AS的检查的检查l体格检查 l影像学检查 早期表现为骶髂关节炎，可根据疾病不同时期选择X线，CT,MRI检查。l实验室检查 活动期可有ESR,CRP,PLT和血清IGA升高，类风湿因子阴性 90%患者HLA-B27阳性HLA-B

3、27HLA-B27检测及其临床应用检测及其临床应用什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA，HLA-B27HLA-B27与哪些疾病相关血清阴性脊柱关节病 类型及特点强直性脊柱炎 特点及其与B27关联机制HLA-B27 怎么检测MLCT、FCM、PCR-SSP7HLA相关概念相关概念主要组织相容性抗原主要组织相容性复合体（ MHC 类)：H-2 SLA HLAMHC、HLA复合体基因MHC分子、HLA分子抗原HLA：人类白细胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）8lHLA抗原是人类主要组织相容性复合体（Major Histocompatibity Complex， MHC）

4、的表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。根据HLA抗原结构，功能与组织分布的不同，可分为三类：类分子为HLA-A、-B、-C系列抗原，广泛分布于各组织有核细胞表面，包括血小板和网织红细胞，成熟的红细胞一般不含HLA抗原；类分子为HLA-D/DR、-DP、-DQ系列抗原，主要在B细胞和抗原提呈细胞上表达，这两类抗原都与移植有关，其中类抗原更为重要；类分子为补体成分。lHLA-B27基因属于型MHC基因，基本上表达在机体中所有含核的细胞上，尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量l早在二十多年前，人们就已发现HLA-B27抗原的表达与强直性脊椎炎有着高度相关性

5、，超过90%的强直性脊椎炎患者其HLA-B27抗原表达为阳性，普通人群中仅5-10%的为阳性，而强直性脊椎炎由于其症状与许多疾病相似而难以确诊，因此HLA-B27的检测在病情的诊断中有着重要意义。 HLA-B27相关疾病相关疾病 11疾病HLA-B27阳性率(%)强直性脊椎炎90银屑病性关节炎 55Reiters综合症37反应性关节炎沙门氏菌感染29.7志贺氏菌感染20.7耶尔森氏菌感染17.6淋病双球菌感染14.0正常人群 27HLA-B27相关疾病：强直性脊柱相关疾病：强直性脊柱炎炎患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向；主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱

6、旁软组织）可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！AS不是RA的一种特殊类型！12强直性脊柱炎强直性脊柱炎类风湿性关节炎类风湿性关节炎地区分布种族差异大世界性性别分布男女女男年龄20-3030-50家族史明显不明显类风湿因子（）（）HLA-B27阴性的AS约5-10%的AS患者为HLA-B27阴性AS患者的HLA-B27阳性率达90-95%我国汉族人群HLA-B27阳性率2-7%（3千万-1亿），AS患病率为0.3%（4百万），大部分HLA-B27阳性者并不发生AS。HLA-B27与与AS13HLA-B27与与AS14健康

7、人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异HLAB27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性两种错误认识需纠正：HLA-B27阳性AS！ HLA-B27阳性不会转阴！HLA-B27与与AS的关联机制的关联机制连锁不平衡学说分子模拟学说关节源性肽假说其他：T细胞受体库假说超抗原假说B27修饰因子假说Cys67模型15张谷香医学综述，2012,18(4):498-501HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因处于紧密连锁不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，仅仅是遗传标志。B27抗原与某些G（-）菌之间存在类似的分子结构，能发生分子模拟或交叉反应，机体免疫系统把B27

8、当作病原体抗原产生免疫应答，对机体产生免疫损害。认为关节源性肽只存在于关节组织中，特异性地由HLAB27提呈，正常情况下递呈水平低，反应T细胞处于耐受状态；当某些具有同源结构蛋白的病毒或细菌感染时，则可致敏耐受的T细胞，从而识别以低水平递呈的关节源性肽，引起自身免疫反应而损伤组织。lAS发病原因机制目前尚未完全阐明，大多数学者认为其与遗传，感染，免疫，环境因素等有关。 HLA-B27检测方法检测方法抗原水平微量细胞毒法 流式细胞术法 基因水平PCR-SSP 17微量细胞毒法（微量细胞毒法（MLCT）原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-A

9、b复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。18J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189流式细胞术法流式细胞术法利用荧光标记的H

10、LA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判断准确，为目前较为理想的方法，目前已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。19Levering WH，et al. JCytometry B Clin Cytom，2003,54(1):28-38PCR-SSP通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出现目的条带则表示HLA-B27为阳性。优点：基因水平的检测 直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。缺点：耗时长，需要跑电泳，需要特定的实验仪器及严格的实验条件，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。20Olerup OTissue Antigens，1994,43(4):253-