菌体收集与干燥

1、菌体收集与干燥 将培养到期的培养物（要求生孢率达90%以上）经过纯菌试验，确认无杂菌污染。将上述培养物4000rpm/min转速离心20分钟，弃上清，收获湿菌体。将湿菌体与无水碳酸钙以1：3（重量比）混合搅拌成湿菌粉。在7080条件下干燥，并研磨、过筛制成粉末状菌粉。菌粉的鉴定 5.1 外观 5.2 目的菌检验 5.3 干燥失重 5.4 活菌数测定 采用肉眼观察，应为白色，灰白色或灰黄色粉末。 取少量菌粉加入适量灭菌生理氯化钠溶液或其他适宜稀释液以后，涂布在适宜的琼脂平皿上，在适宜条件下培养，其培养物的生长特性和染色镜检的特征应符合生产用菌种特征。 按仪器方法测定，除另有规定外，芽孢菌制品的减

2、失重量应不得超过7.0%。 无菌称取3.0g菌粉（胶囊取内容物），加入27.0ml稀释液中，充分摇匀，做10倍系列稀释（最终稀释度根据不同的指标要求而定）。取最终稀释度的菌液100l，滴入选择性琼脂培养基平皿上，共做3个平皿，并以玻棒涂布均匀，置适宜条件下培养，到期观察每个平皿菌落生长情况，并计数。当平皿菌落数小于10或大于300时，应调整最终稀释度，重新测定。根据3个平皿菌落总数按下列公式计算活菌数：活菌数（CFU/g）=3个平皿菌落数之和/3*10*最终稀释度活菌数应大于等于200亿个活菌/克【附注】 （1） 活菌数用“CFU”表示，即为细菌集落单位。（2） 稀释液使用灭菌生理氯化钠溶液或

3、其他适宜的稀释液。（3） 选择性琼脂培养基，是指最适宜制剂（或菌粉）中活菌生长的培养基。须经批准后方可使用。胶囊制备 将上述原菌粉与灭菌过筛（筛孔为80目）地乳糖、可溶性淀粉按下述重量比混合：原菌粉2份，乳糖10份、可溶性淀粉88份，并充分搅匀，其中上述菌粉混合物的活菌数控制在1108个活菌数/克。将菌粉混合物置于胶囊灌装机内罐装，压板、包装，制成枯草芽孢杆菌胶囊制剂，其中每粒胶囊为0.25克/粒。成品鉴定 7.1 鉴别试验 7.2 理化检查 （外观、干燥失重、装量差异 、崩解时限） 7.3 活菌数测定 7.4 安全试验 检查成品中所含的目的菌是否符合生产用菌种的特性。即按上述“种子批的检定”

4、方法进行生长特性、染色镜检和生化反应检查，应符合规定。7.2.1 外观 胶囊剂内粉末的粒子大小、色泽应均匀，间有菌粉色斑。7.2.2 干燥失重 按仪器方法测定，除另有规定外，芽孢菌制品的减失重量应不得超过7.0%。 取供试品20粒，分别精密称定质量后，倾出内容物（不能损失囊壳），硬胶囊壳用小刷或其他事宜的用具（如棉签）拭净，再分别精密称定囊壳质量，求得每粒内容物装量与平均装量。每粒装量与平均装量相比，超出限度差异的胶囊不得多于2粒，并不得有1粒超出装量差异限度的1倍。 胶囊剂的装量差异限度：0.3g以下在10以内7.2.4 崩解时限 硬胶囊或软胶囊，除另有规定外，取供试品6粒，按片剂的装置与方法进行检查（使用崩解篮）。硬胶囊应在30分钟内全部崩解并通过筛网（囊壳碎片除外），如有1粒不能完全崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。 见“菌粉”的活菌测定 安全试验是通过动物试验进行的非特异性毒性检查，应根据制品的使用途径和人用剂量确定试验方法。 肠道微生态活菌制品检查 ：称取2g制品，加入8ml生理氯化钠溶液中，混合均匀。用5只体重1822g小鼠，每只小鼠经口灌胃0.