药物分析药物的鉴别实验PPT

1、 第二章第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验一、概述一、概述 药物的药物的鉴别试验鉴别试验（identification test）是根据药物的）是根据药物的分子分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物化学结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物化学方法来判断方法来判断药物的真伪。药物的真伪。二、鉴别实验的项目二、鉴别实验的项目（一）（一） 性状性状 药物的药物的性状性状（description ）反映了药物）反映了药物特有特有的的物理性质物理性质，一般包括一般包括外观、溶解度外观、溶解度和和物理常数物理常数等。等。 1、 外观外观 2、 溶解度溶解度 3、物理常数、物理常数 物理常数物理

2、常数是鉴定药品质量的重要指标。其测是鉴定药品质量的重要指标。其测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。药典收载的物理常数包括：药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋比旋度度、折光率、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数吸收系数。 折光率折光率(20):指光线在空气中进行的速度与供试品指光线在空气中进行的速度与供试品中进行速度的比值中进行速度的比值 比旋度比旋度: :一定波长与温度下，偏振光透过长一定波长与温度下，偏振光透过长1dm1

3、dm且每且每1ml1ml中含有旋光性物质中含有旋光性物质1g1g的溶液时测得的旋光度的溶液时测得的旋光度吸收系数：吸收系数：摩尔吸收系数摩尔吸收系数 （L/molcm ）百分吸收系数：在一定波长下溶液浓度在百分吸收系数：在一定波长下溶液浓度在1%（W/V）, 厚度为厚度为1cm的吸收度的吸收度, (药典药典采用本法采用本法) （ml/gcm ）1%1cmE吸光度吸光度A=bc ：摩尔吸光系数：摩尔吸光系数 b：溶液厚度：溶液厚度 C：溶液摩尔浓度：溶液摩尔浓度1%110cmEM（二）（二） 一般鉴别试验一般鉴别试验 一般鉴别试验一般鉴别试验（general identification tes

4、t）是依据某一类药物的是依据某一类药物的化学结构化学结构或或理化性质理化性质的的特征，通过特征，通过化学反应化学反应来鉴别药物的真伪。对来鉴别药物的真伪。对无机药物是根据其组成的无机药物是根据其组成的阴离子和阳离子阴离子和阳离子的的特殊反应；对有机药物则大都采用典型的官特殊反应；对有机药物则大都采用典型的官能团反应。能团反应。此法只能鉴别为哪一类药物此法只能鉴别为哪一类药物,不能证实是哪一种药物不能证实是哪一种药物. 1、有机氟化物、有机氟化物 2、有机酸盐、有机酸盐 3、芳香第一胺类、芳香第一胺类 4、托烷生物碱类、托烷生物碱类 5、无机金属盐、无机金属盐 6、无机酸根、无机酸根 （三）专属

5、鉴别试验（三）专属鉴别试验 药物的药物的专属鉴别试验专属鉴别试验（specific identification test ）是证）是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。性反应，来鉴别药物的真伪。1、有机氟化物、有机氟化物 氧瓶燃烧法破坏后用碱吸收氧瓶燃烧法破坏后用碱吸收供试品供试品- + 茜素氟蓝试液茜素氟蓝试液 +醋酸钠的醋酸溶液醋酸钠的醋酸溶液pH=4.3+硝酸亚铈试液硝酸亚铈试液-蓝紫色蓝

6、紫色2、有机酸盐、有机酸盐（1）水杨酸）水杨酸供试品供试品+三氯化铁三氯化铁-中性呈红色中性呈红色弱酸性呈紫色弱酸性呈紫色（2）酒石酸）酒石酸供试品（中性）供试品（中性）+ 氨制硝酸银（加热）氨制硝酸银（加热）- 银镜银镜3、芳香第一胺类、芳香第一胺类供试品供试品 + 稀盐酸稀盐酸 + 亚硝酸钠亚硝酸钠 + 碱性碱性萘酚试液萘酚试液 - -橙黄色到猩红色沉淀橙黄色到猩红色沉淀4、托烷生物碱类、托烷生物碱类供试品供试品+ 发烟硝酸（在水浴上蒸干）发烟硝酸（在水浴上蒸干）-黄色殘渣（冷却）黄色殘渣（冷却） 乙醇（2D）+氢氧化钾（1粒） -深紫色深紫色5、无机金属盐类、无机金属盐类（1）钠、钾、钙

7、盐的焰色反应）钠、钾、钙盐的焰色反应铂丝铂丝+盐酸湿润盐酸湿润+蘸取供试品蘸取供试品+无色火焰燃烧无色火焰燃烧钠盐钠盐-鲜黄色鲜黄色钾盐钾盐-紫色紫色钙盐钙盐-砖红色砖红色（2）铵盐）铵盐供试品供试品+氢氧化钠（加热）氢氧化钠（加热）红色湿润石蕊试纸红色湿润石蕊试纸-变蓝变蓝湿润硝酸亚汞滤纸湿润硝酸亚汞滤纸-变黑变黑（1）氯化物）氯化物 氨水氨水 硝酸硝酸供试品供试品+硝酸硝酸+硝酸银硝酸银-白色沉淀白色沉淀-溶解溶解-白色沉淀白色沉淀6、无机酸根、无机酸根 加热加热 湿润碘化钾淀粉试纸湿润碘化钾淀粉试纸供试品供试品+二氧化锰二氧化锰+硫酸硫酸-氯气氯气-变蓝变蓝（2）硫酸盐）硫酸盐 盐酸或硝

8、酸盐酸或硝酸供试品供试品+氯化钡氯化钡-白色沉淀白色沉淀-不溶不溶 醋酸铵或氢氧化钠醋酸铵或氢氧化钠供试品供试品+醋酸铅醋酸铅-白色沉淀白色沉淀-溶解溶解 三、鉴别方法三、鉴别方法 （一）化学鉴别方法（一）化学鉴别方法 1、呈色反应鉴别法、呈色反应鉴别法 2、沉淀生成反应鉴别法、沉淀生成反应鉴别法 3、荧光反应鉴别法、荧光反应鉴别法 4、气体生成反应鉴别法、气体生成反应鉴别法 5、测定生成物的熔点、测定生成物的熔点1、呈色反应鉴别法、呈色反应鉴别法三氯化铁呈色反应：含酚羟基或水解后产生酚羟基三氯化铁呈色反应：含酚羟基或水解后产生酚羟基的药物；的药物；异羟肟酸铁反应：芳酸及酯类、酰胺类；异羟肟酸

9、铁反应：芳酸及酯类、酰胺类；茚三酮呈色反应：脂肪氨基；茚三酮呈色反应：脂肪氨基；重氮化重氮化偶合显色反应，芳伯基或水解后产生芳伯基；偶合显色反应，芳伯基或水解后产生芳伯基；氧化还原显色反应及其它颜色反应。氧化还原显色反应及其它颜色反应。2、沉淀生成反应鉴别法、沉淀生成反应鉴别法（1）与金属离子生成沉淀；）与金属离子生成沉淀；（2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）生成沉淀；）与硫氰化铬铵（雷氏盐）生成沉淀；（3）其它沉淀反应。）其它沉淀反应。3、荧光反应鉴别法、荧光反应鉴别法药物本身发射荧光，与硫酸、溴、间苯二酚反应后发射药物本身发射荧光，与硫酸、溴、间苯二酚反应后发射荧光；荧光；4、气体生成反应鉴别法、

10、气体生成反应鉴别法 药物与化学物质在加热条件下生成气体；药物与化学物质在加热条件下生成气体；5、测定生成物的熔点法、测定生成物的熔点法:应用较少应用较少（二）（二） 光谱鉴别法光谱鉴别法 1、紫外紫外光谱鉴别法光谱鉴别法（UV）：测结构中共轭系统；）：测结构中共轭系统；优点：多数的药物分子含有特征吸收光谱的基团，可优点：多数的药物分子含有特征吸收光谱的基团，可作为鉴别的依据，可进行简单的定性分析，鉴定共作为鉴别的依据，可进行简单的定性分析，鉴定共轭发色团，推断未知物骨架，可进行定量分析及测轭发色团，推断未知物骨架，可进行定量分析及测定配合物配位比和稳定常数定配合物配位比和稳定常数缺点：不同的有

11、机化合物具有不同的吸收光谱，但吸缺点：不同的有机化合物具有不同的吸收光谱，但吸收光谱较简单，必须采用多规定参数法提高专属性收光谱较简单，必须采用多规定参数法提高专属性示例一、二、三示例一、二、三2、红外红外光谱鉴别法光谱鉴别法 红外光谱法是一种专属性很强、应红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用主要用于组分单一、结构明确的原料药、特别适用于用其他方于组分单一、结构明确的原料药、特别适用于用其他方法不易区分的同类药物，法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类药品。成抗生素

12、类药品。 3、质谱（、质谱（MS） 通过带电粒子碎片按质荷比大小排列的谱图通过带电粒子碎片按质荷比大小排列的谱图是唯一可以确定分子式的方法；是唯一可以确定分子式的方法；4、核磁共振（、核磁共振（NMR） 原子核在磁场中选择性吸收电磁波，从基态跃迁到激原子核在磁场中选择性吸收电磁波，从基态跃迁到激发态，吸收的电磁波的频率不同，产生共振吸收的位置发态，吸收的电磁波的频率不同，产生共振吸收的位置不同，表现为化学位移不同，从而表征不同的分子结构不同，表现为化学位移不同，从而表征不同的分子结构H核或核或C核的化学位移核的化学位移(三三)X射线粉末衍射法射线粉末衍射法提供晶体的空间结构信息提供晶体的空间结

13、构信息（四）色谱鉴别法（四）色谱鉴别法 1、薄层薄层色谱鉴别法色谱鉴别法 瑞士瑞士CAMAG SCANNER 3 CAMAG SCANNER 3 薄层扫描仪薄层扫描仪岛津岛津CS-9000CS-9000双波长薄层扫描仪双波长薄层扫描仪1、薄层色谱、薄层色谱 将吸收剂或支持剂均匀铺在玻璃板上（或聚酯薄将吸收剂或支持剂均匀铺在玻璃板上（或聚酯薄膜塑料或铝箔上），把要分离分析的样品点在薄层膜塑料或铝箔上），把要分离分析的样品点在薄层色谱板上，用溶剂展开，在日光或紫外光下观察所色谱板上，用溶剂展开，在日光或紫外光下观察所获得的斑点，从而达到分离、分析、鉴定目的。获得的斑点，从而达到分离、分析、鉴定目的

14、。例例: 药物中特殊杂质的检查药物中特殊杂质的检查(醋酸可的松中其他甾体的检查醋酸可的松中其他甾体的检查)(1)布板布板(2)点样点样(3)显色显色(4)鉴定鉴定（1）常用吸附剂或支持）常用吸附剂或支持硅胶硅胶G(Type60)含含15%石膏石膏(Type60指硅胶颗粒孔径为指硅胶颗粒孔径为60)硅胶硅胶H不含石膏不含石膏硅胶硅胶HF254不含石膏不含石膏,含在含在254nm波长紫外光有强吸收波长紫外光有强吸收的荧光粉的荧光粉硅胶硅胶60HR纯硅胶纯硅胶,不含任何粘合剂量不含任何粘合剂量,用于定量测定用于定量测定硅胶硅胶HF254+366硅胶硅胶GF254含有无机荧光性物质，在短波紫外线照射含

15、有无机荧光性物质，在短波紫外线照射下，产生绿色荧光下，产生绿色荧光 氧化铝氧化铝G(Type60/E) E:制备氧化铝方法代号制备氧化铝方法代号含石膏含石膏碱性氧化铝碱性氧化铝H (Type60/E)不含石膏不含石膏碱性氧化铝碱性氧化铝HF254(Type60/E) 原点至色谱斑点中心的距离原点至色谱斑点中心的距离(2)比移值比移值Rf = - 原点至展开剂前沿的距离原点至展开剂前沿的距离供试品的供试品的Rf值与标准品的值与标准品的Rf值比较值比较,由此确定供试品的由此确定供试品的成份成份.例例:硫酸阿米卡星的薄层色谱法鉴别试验硫酸阿米卡星的薄层色谱法鉴别试验(P35)(1)布板布板:硅胶硅胶

16、H(2)配溶液配溶液(供试品供试品)(3)硫酸阿米卡星标准品溶液硫酸阿米卡星标准品溶液(4)点样点样标准品与供试品分别点样标准品与供试品分别点样(5)展开展开: 氯仿氯仿:甲醇甲醇:浓氨水浓氨水:水水=1:4:2:1展开展开-晾干晾干(6)显色显色: 喷喷0.2%茚三酮的正丁醇溶液茚三酮的正丁醇溶液-100加热加热10min-出现斑点出现斑点(7)对比对比: 分析标准品和供试品斑点颜色和位置是否相同分析标准品和供试品斑点颜色和位置是否相同.2、高效液相高效液相色谱鉴别法色谱鉴别法 气相气相色谱鉴别法色谱鉴别法 3 3、纸色纸色谱鉴别谱鉴别法法（五）生物学法（五）生物学法（六）药物鉴别方法新动向

17、（六）药物鉴别方法新动向 1、仪器方法用于药物的鉴别数量大大增加，、仪器方法用于药物的鉴别数量大大增加，尤其尤其是红外光谱法和高效液相色谱法是红外光谱法和高效液相色谱法。 2、制剂广泛采用、制剂广泛采用IR法法鉴别。鉴别。 3、鉴别条目简练，选择专属的方法进行鉴别，、鉴别条目简练，选择专属的方法进行鉴别，平均每个品种收载平均每个品种收载2条左右。条左右。 四、四、 鉴别试验条件鉴别试验条件 鉴别试验的目的鉴别试验的目的是判断药物的真伪。是判断药物的真伪。 （一）溶液的浓度（一）溶液的浓度:必须严格规定必须严格规定 （二）溶液的温度：加快速度（二）溶液的温度：加快速度 （三）（三） 溶液的酸碱度

18、：保持活性溶液的酸碱度：保持活性 （四）试验的时间：有机物需一定的反应时间（四）试验的时间：有机物需一定的反应时间 （五）干扰成分的存在：分离干扰（五）干扰成分的存在：分离干扰 五、鉴别试验的灵敏度五、鉴别试验的灵敏度（一）反应灵敏度和空白试验（一）反应灵敏度和空白试验 在一定的条件下，能在在一定的条件下，能在尽可能稀尽可能稀的溶液中观测出的溶液中观测出尽可能少尽可能少量量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的反应的灵敏度灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量，即）。它以两个相互有关的量，即最低检出量最低检出量（min

19、imum detectable quantity ）（又称检出限量）和）（又称检出限量）和最低检最低检出浓度出浓度（minimum detectable concentration ）（又称界限浓度）（又称界限浓度）来表示。来表示。 所谓所谓空白试验空白试验，就是，就是在供试品鉴别试验完全相同的条件下，在供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其他试剂均同样加入而进行的试验除不加供试品外，其他试剂均同样加入而进行的试验。（二）提高反应灵敏度的方法（二）提高反应灵敏度的方法 1、加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集、加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集 2、改进观测方法、改进观测方法作业：作

20、业：1、药典收载的物理常数包括哪些？、药典收载的物理常数包括哪些？2、吸收系数有几种表示方法？中国药典收载的是哪种、吸收系数有几种表示方法？中国药典收载的是哪种形式？形式？3、何谓空白试验？、何谓空白试验？4、如何鉴别钠、钾、钙、铵盐？、如何鉴别钠、钾、钙、铵盐？5、如何鉴别氯化物、硫酸盐、有机氟化物？、如何鉴别氯化物、硫酸盐、有机氟化物？6、如何鉴别水杨酸、酒石酸盐？、如何鉴别水杨酸、酒石酸盐？7、如何鉴别芳香第一胺类、托烷生物碱类？、如何鉴别芳香第一胺类、托烷生物碱类？ 附附一、折光率测定法一、折光率测定法 定义：定义： 利用测定物质的折光率来进行定性定量的分利用测定物质的折光率来进行定性

21、定量的分析方法，叫折光法。析方法，叫折光法。 折光率是用折光计来测定的，常用阿贝折光计测定。折光率是用折光计来测定的，常用阿贝折光计测定。（一）折光的一般原理：（一）折光的一般原理： 光线自一种透明介质进入另一个透明介质的时候，光线自一种透明介质进入另一个透明介质的时候，由于两种介质密度不同，光进行的速度发生变化，所以，由于两种介质密度不同，光进行的速度发生变化，所以，光线就发生如图折射：光线就发生如图折射：i光疏物质（）光密物质（）界面法线入射线折射线i i为入射角为入射角 为折射角为折射角v1为为在在（ ）中中的传播速度的传播速度V V2 2为在（为在（ ）中的传播速度中的传播速度折光的一

22、般原理n=_=_SinSin v1v2i i= =90900 0 c c法线入射线折射线临界角阿贝折射仪的原理阿贝折射仪的原理n=_= _1Sin c cSin900Sin c（四）、折光法在药物分析中的应用（四）、折光法在药物分析中的应用1、鉴别与纯度检查鉴别与纯度检查2、定量定量1）、）、标准曲线法标准曲线法2 ）、）、折光率测定法折光率测定法C =（n - n。）。）/ FC 药物溶液的浓渡（药物溶液的浓渡（g/ml，%）;n 一定温度下（通常为一定温度下（通常为20）测得的折光率）测得的折光率;n。为同温度下水的折光率为同温度下水的折光率;（20时时 n。= 1.3330 ）F 为折光

23、率因素为折光率因素-药物溶液的浓度每增减药物溶液的浓度每增减1 %时，时， 其折光率的增减数。其折光率的增减数。0n1n2n3n4n5nxc1c2c3c4c5cx折光率测定法：标准曲线法标准曲线法增高增高6 时折光率减少了：时折光率减少了：0.0001 6 = 0.0006故故20 时折光率为时折光率为1.3460 + 0.0006 =1.34661.3466 1.3330C = _= 10.38= 10.380.00131答: KI溶液的浓度为10.38% 4 4 5 5 x x 3 3 2 2 1 10 0C C1 1 c c2 2 c c3 3 c c4 4c cx xc c5 5 c

24、c 旋光法的定量方法-标准曲线法习题二1、 （ ）。A.百分吸收系数B.比旋度C.折光率D.熔点E.沸点tDnCDAABE2、在药物比旋度的计算公式 tD=（100）/（LC）中（ ）A.t 是25，C的单位是g/100mL，L的单位是cmB.t 是25，C的单位是g/mL，L的单位是cmC.t 是20，C的单位是g/mL，L的单位是cmD.t 是20，C的单位是g/100mL，L的单位是cmE.t 是20，C的单位是g/mL，L的单位是cm3、药品质量标准中的鉴别试验是判断（ ）A、已知药品的真伪 B、未知药品的真伪 C、药品的纯度D、药品的疗效 E、药品的稳定性4、物质的折光率与下列因素有关（ ）。 A.光线的波长 B.透光物质的温度 C.光路的长短 D.物质对光的敏感度 E.杂