药化原理-酶与酶的抑制或失活

1、酶和酶的抑制或失活酶和酶的抑制或失活v酶酶v酶催化作用酶催化作用v辅酶的催化作用辅酶的催化作用v酶治疗酶治疗v酶的可逆性抑制剂酶的可逆性抑制剂v酶的不可逆性抑制酶的不可逆性抑制酶酶v受体：膜蛋白，与配体形成复合物，引发生物效应，受体：膜蛋白，与配体形成复合物，引发生物效应，配 体 释 放 。 识 别 配 体 ， 生 物 效 应 。配 体 释 放 。 识 别 配 体 ， 生 物 效 应 。v酶：溶解于细胞质，与底物形成复合物，催化反应，酶：溶解于细胞质，与底物形成复合物，催化反应，产生产物。识别底物，酶催化底物形成产物。产生产物。识别底物，酶催化底物形成产物。v酶催化功能：降低过渡态或活泼中间体

2、的能量以及酶催化功能：降低过渡态或活泼中间体的能量以及提高基态的能量，过渡态的寿命短（提高基态的能量，过渡态的寿命短（10-13秒，相当秒，相当于一次键振动的时间）于一次键振动的时间）,目前无法用光谱方法直接目前无法用光谱方法直接检测酶促反应的过渡态结构。检测酶促反应的过渡态结构。v酶催化的作用假说：酶催化的作用假说：21种之多，共同点在于形成酶种之多，共同点在于形成酶-底物复合物。锁和钥匙假说、诱导契合假说、过底物复合物。锁和钥匙假说、诱导契合假说、过渡态假说渡态假说酶酶催化的特异性和加速性催化的特异性和加速性酶催化的特异性和加速性酶催化的特异性和加速性酶催化的特异性和加速性酶催化的特异性和

3、加速性v酶有多种途径实现催化作用，稳定化过渡态（降酶有多种途径实现催化作用，稳定化过渡态（降低过渡态能量）、低过渡态能量）、ES复合物的去稳定化（提高基复合物的去稳定化（提高基态能量）、中间体的去稳定化和产物释放态能量）、中间体的去稳定化和产物释放酶催化的机理酶催化的机理v趋近作用：趋近作用：MM3计算也表明，当亲核试剂和亲电试计算也表明，当亲核试剂和亲电试剂紧密排列，范德华力适当时，活化能由于反应焓剂紧密排列，范德华力适当时，活化能由于反应焓的降低而降低，反应速度提高。的降低而降低，反应速度提高。v共价作用：以亲核催化作用机理为典型的酶促反应共价作用：以亲核催化作用机理为典型的酶促反应各种蛋

4、白水解酶、丝氨酸蛋白酶（如弹性蛋白酶），半胱氨酸蛋白酶（如木瓜蛋白酶）酶催化的机理酶催化的机理v 广义的酸碱催化作用：广义的酸碱催化作用：酶催化的机理酶催化的机理v如果在一定的如果在一定的pH和离子强度下，反应速率随着和离子强度下，反应速率随着缓冲溶液的增加而加快，催化反应的是出氢离子缓冲溶液的增加而加快，催化反应的是出氢离子或氢氧根离子外的酸碱，即发生广义的酸碱催化或氢氧根离子外的酸碱，即发生广义的酸碱催化反应。通常的化学反应不能同时利用酸碱来催化。反应。通常的化学反应不能同时利用酸碱来催化。v酶可以同时利用酸和碱来催化，这与溶液反应酶可以同时利用酸和碱来催化，这与溶液反应不同。不同。酶催化

5、的机理酶催化的机理v基团的靠近和活性位点残基的柔性协调作用，使基团的靠近和活性位点残基的柔性协调作用，使得在溶液中几乎不反应的反应得以进行。得在溶液中几乎不反应的反应得以进行。v静电作用静电作用v去溶剂作用去溶剂作用v张力或变形作用张力或变形作用酶的抑制酶的抑制v降低酶催化活性或阻止酶的催化作用的药物即酶降低酶催化活性或阻止酶的催化作用的药物即酶抑制剂药物。抑制剂药物。v脑内脑内-氨基丁酸（氨基丁酸（GABA）的浓度减少导致癫痫）的浓度减少导致癫痫发作，抑制发作，抑制GABA分解酶，即分解酶，即GABA氨基转移酶，氨基转移酶，就可以产生抗惊厥效果。就可以产生抗惊厥效果。v尿酸过量产生痛风，黄嘌

6、呤氧化酶是催化黄嘌呤尿酸过量产生痛风，黄嘌呤氧化酶是催化黄嘌呤转化成尿酸的酶，抑制该酶可降低尿酸水平。转化成尿酸的酶，抑制该酶可降低尿酸水平。v大多数情况下，是对现有抑制剂的改进，已知药大多数情况下，是对现有抑制剂的改进，已知药物酶抑制作用机理。物酶抑制作用机理。v在未知酶的抑制机理下，设计酶抑制剂。在未知酶的抑制机理下，设计酶抑制剂。酶的抑制酶的抑制v知道疾病过程的病理生理学，也要知道其代谢产知道疾病过程的病理生理学，也要知道其代谢产物，这些代谢产物对正常功能或功能紊乱很重要，物，这些代谢产物对正常功能或功能紊乱很重要，也是设计酶抑制剂提供线索。也是设计酶抑制剂提供线索。v酶的纯化相对受体简

7、单，可以用于初筛和阐明活酶的纯化相对受体简单，可以用于初筛和阐明活性部位结构，有利于利用性部位结构，有利于利用CAD技术。技术。v酶的底物和产物的结构相似性大，与受体拮抗剂酶的底物和产物的结构相似性大，与受体拮抗剂或激动剂的结构相差大不同。或激动剂的结构相差大不同。v利用宿主和外来物酶的底物特异性设计选择性酶利用宿主和外来物酶的底物特异性设计选择性酶抑制剂药物。抑制剂药物。肽聚糖的合成过程肽聚糖的合成过程v肽聚糖合成分三个阶段肽聚糖合成分三个阶段 第一个阶段：第一个阶段：在细胞质中合成N-乙酰胞壁酸五肽（“Park”核苷酸） 第二个阶段：在细胞膜上由N-乙酰胞壁酸五肽与N-乙酰葡萄糖胺合成肽聚

8、糖单体双糖肽亚单位。 第三个阶段：已合成的双糖肽插在细胞膜外的细胞壁生长点中，并交联形成肽聚糖。革兰阳性菌肽聚糖聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥第一阶段第一阶段v在细胞质中合成N-乙酰胞壁酸五肽（“Park”核苷酸）。 v这一阶段起始于N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸，它是由葡萄糖经一系列反应生成的；v自N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸开始，以后的N-乙酰葡萄糖胺、 N-乙酰胞壁酸，以及胞壁酸五肽，都是与糖载体UDP结合的；第二阶段第二阶段v 在细胞膜上由N-乙酰胞壁酸五肽与N-乙酰葡萄糖胺合成肽聚糖单体双糖肽亚单位。v 这一阶段中有一种称为细菌萜醇(bactoprenol,Bcp)脂质载体参与，这是一种由

9、11个类异戊烯单位组成的C35 类异戊烯醇，它 通过两个磷酸基与N-乙酰胞壁酸相连，载着在细胞质中形成的胞壁酸到细胞膜上，在那里与N-乙酰葡萄糖胺结合，并在L-Lys上接上五肽(Gly)5 ,形成双糖亚单位。v 这一阶段的详细步骤如图所示。其中的反应与分别为万古霉素和杆菌肽所阻断。第三阶段第三阶段v 已合成的双糖肽插在细胞膜外的细胞壁生长点中，并交联形成肽聚糖。v 这一阶段分两步：v 第一步：是多糖链的伸长双糖肽先是插入细胞壁生长点上作为引物的肽聚糖骨架（至少含68个肽聚糖单体分子）中，通过转糖基作用（transglycosylation)使多糖链延伸一个双糖单位；v 第二步：通过转肽酶的转肽

10、作用（transpeptitidation)使相邻多糖链交联转肽时先是D-丙氨酰-D-丙氨酸间的肽链断裂，释放出一个D-丙氨酰残基，然后倒数第二个D-丙氨酸的游离羧基与相邻甘氨酸五肽的游离氨基间形成肽键而实现交联。肽聚糖单体的合成肽聚糖单体的合成G - M - P - P -类脂 M - P - P - 类脂UDPUDP- G UDPUDP - M P -类脂Pi P - P -类脂杆菌肽万古霉素5 甘氨酰-tRNA 5 tRNAG - M - P - P - 类脂NH2D-AlaD-AlaL-LysD-GluL-AlaOOOOOHHOHOAcHNOOOHOAcHNHOAcHNOHOOHOAc

11、HNOOD-AlaD-AlaL-LysD-GluL-AlaOPOO-OPOO-OOOHOHOAcHNOHOOHOAcHNOD-AlaD-AlaL-LysD-GluL-AlaOPOO-OPOO-OOOOOOHHOHOAcHNOOOHOAcHNOL-LysHOAcHNOHOOHOAcHNOD-GluL-LysD-AlaNHD-AlaD-AlaL-LysD-GluL-AlaOOOOOHHOHOAcHNOOOHOAcHNHOAcHNOHOOHOAcHNOOD-AlaD-AlaL-LysD-GluL-AlaL-AlaD-GluL-LysD-AlaD-AlaTransglycosylationTransp

12、eptidationMature peptidoglycanImmature peptiglycan万古霉素的作用机制Nature, 2000, 406(6797):775-781 细菌对万古霉素产生耐药性的作用机制 OOHHOOHOONHOOHNNHHNOHOHHHNONHOHNHOHOClHOHOOHHOOCHOHHONH2CH3HHClOCH3H3CHONH2OHCH3H3CNHH3CXOOHOOX=NH D-Ala-D-Ala X=O D-Ala-D-Lac / D-Ala-D-Ser Ann. Rev. Microbiol, 1984, 38:339-357.由转座子Tn1546编码

13、的各种与万古霉素耐药性有关的蛋白。图图 与万古霉素耐药性基因和相关蛋白与万古霉素耐药性基因和相关蛋白Fig. 1-3 Genes and relevant proteins related to vancomycin resistanceVanSVanRVanHVanAVanXVanYVanZ转座酶解离酶涉及到万古霉素耐药性的基因：VanS为一探测器，VanR为一响应调节器，二者涉及到万古霉素耐药性的诱导和表达VanH为产生D-Lac的脱氢酶。VanA为连接D-Ala和D-Lac的连接酶。VanX为降解D-Ala-D-Ala的降解酶VanZ功能尚不明确VanY为降解末端氨基酸如D-Ala的羧肽

14、酶，使细胞壁前体成为四肽v 选择性化学修饰的第二代糖肽抗生素不仅把抗菌谱从革兰氏阳性菌扩选择性化学修饰的第二代糖肽抗生素不仅把抗菌谱从革兰氏阳性菌扩展到革兰氏阴性菌，并且对万古霉素的耐药菌也有较好活性。对糖肽展到革兰氏阴性菌，并且对万古霉素的耐药菌也有较好活性。对糖肽抗生素的结构修饰除了对七肽结合区域修饰可以提高与目标肽抗生素的结构修饰除了对七肽结合区域修饰可以提高与目标肽DAlaDAla或或DAlaDLactate的亲和力，也可以通过其他作用的亲和力，也可以通过其他作用机理提高活性，如在二糖部分增加亲脂侧链可以与细胞膜相互作用，机理提高活性，如在二糖部分增加亲脂侧链可以与细胞膜相互作用，或用

15、其他的糖基取代万古糖胺又或在或用其他的糖基取代万古糖胺又或在6-氨基酸位置增加糖基，这些修氨基酸位置增加糖基，这些修饰可以有助于形成二聚物，从而增加糖肽抗生素对耐糖肽抗生素革兰饰可以有助于形成二聚物，从而增加糖肽抗生素对耐糖肽抗生素革兰氏阳性菌的活性。对糖肽抗生素进行药物拼合的修饰也是一个不错的氏阳性菌的活性。对糖肽抗生素进行药物拼合的修饰也是一个不错的选择。选择。v 对糖肽抗生素的修饰研究仍有获得新抗生素的良好前景。对糖肽抗生素的修饰研究仍有获得新抗生素的良好前景。糖肽类抗生素的修饰位点 OOHHOCH2OHOONHOOHNNHHNOHOHHHNONHHNHOHOClHOHOOHHOOCHO

16、HHH2NOCH3HHClOHOH3CH2NCH3OHO疏水基团疏水基团基团修饰基团修饰添加氨基糖添加氨基糖酯化酯化酰胺化酰胺化疏水氨基疏水氨基酸替代酸替代亮氨酸亮氨酸衍生化衍生化还原还原氢化氢化万古糖胺（万古糖胺（vancosamine）的修饰）的修饰 OONHHNNHNHHNHNNHHOClClOHOHOOOOOOHNOOOOHOHOOHOHNONOOHOHOHHOClHOOHOOOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNHNOHOHOHOOHHNOHClClOHOHHOOOOOOHOOOClOH2NHOOOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNHNOHHOHOHOOHHNOHClClO

17、HOHHOOOOOOHOOONHNHOONHHNNHNHHNHNNHOClClOHOHOOOOOOHOOOOOHOHOOHHNOOOHOHOHHOClHOOHOOHOHOOHNHOPOHO OHOritavancinTelavancinTeicoplaninDlabavancin二聚体的形式发挥抗菌作用与脂质体底物结合，抑制肽聚糖的合成第二代糖肽抗生素的脂基直接结合并抑制转糖基酶，抑制细菌脂质的合成或者是直接作用于细胞膜 添加疏水性取代添加疏水性取代基可维持其抗基可维持其抗MRSA 活性，且活性，且恢复抗恢复抗VRE活性活性葡萄糖（葡萄糖（glucose）6-羟基的修饰羟基的修饰 OOONHH

18、NNHNHHNOH2NOOOHNHNOHHOHOHNOHNH2OHClClOHOHHOOOOOOHOOOOOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNHNOHHOHOHOOHNH2OHClClOHOHHOOOOOOHOOOOOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNNOHHOHOH2NOHHNOHClClOHOHHOOOOOOOOOOOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNNOHHOHOOOHHNOHClClOHOHHOOOOOOOOOAlocAlocAllylRAlocAlocAllylabSOOcClH2CH2C2a R=2b R=Reagents and conditions:(a) i

19、. Aloc-NHS, NaHCO3, H2O/acetone; ii. allyl bromide, NaHCO3,DMSO; iii. mesitylenesulfonyl chloride, pyridine. (b) i. NaN3, DMF. ii. PPh3, THF/H2O. (c) i. RCHO, NaCNBH3, DMF, rt; ii. Bu3SnH, AcOH/DMF, (Ph3P)2PdCl2.J. Am. Chem. Soc. , 2000, 122(50):12608-12609 Tetrahedron, 2002, 58(32):6585-6594 改变糖基位置

20、或者替换糖基的修饰改变糖基位置或者替换糖基的修饰 OOOHNHHNNHNHHNOH2NHNHNOHHOClClOHOHHOOOOOOHOOOAGV(Aglucovancomycin)OOONHHNNHNHHNOH2NOOHHNHNOHHOHOHOOHClClOHOHHOOOOOOHOOODVV(desvancosaminyl vancomycin)OONHHNNHNHHNOH2NOOHNHNOHHOOHNH2ClClOHOHHOOOOOOHOOOROOONHHNNHNHHNOH2NHNHNOHOClOHOHHOOOOOOHOOOOOHOHOHOOOHOH2NHOH2NEremomycin3a

21、R=CH33b R=HJournal of Antibiotics, 1993, 46(8):1181-1195 CN1867638 J. Am. Chem. Soc., 2005, 127(30):10747-10752 1-氨基酸N-末端的修饰 OOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNN+OHHOHOHOOHNH2OHClClOHOHHOOOOOOHOOOR2R1R3Vancomycin: R1=R2=H; R3=CH3A51568A: R1=R2=R3=HM43D: R1=H; R2=R3=CH3M43A; R1=R2=R3=CH3OOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNNOHH

22、OHOHOOHHNOHClClOHOHHOOOOOOOOR3R1HNHOOR2OOONHHNNHNH2HNOH2NOOOHNOHHOHOHOOHNH2OHClClOHOHHOOOOOHOOO4a: R1=OCH3R2=R3=4b: R1=OCH3R2=4c: R1=R2=R3=4d: R1=R2=R3=HR3=HDamaged vancomycin (4e)OOONHHNNHNH2HNOH2NOOOHNOHHOHOHOOHHNOHClClOHOHHOOOOOHOOOClDamaged vancosaminyl-chlorobiphenyl vancomycin (4f)J. Am. Chem.

23、 Soc. , 2000, 122(50):12608-12609. Tetrahedron, 2002, 58(32):6585-6594 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2005, 15(9):2325-2329. FEMS Microbiology Letters, 2000, 183(2):209-214. Chem. Eur. J. , 2001, 7(17):3798-3823 7-氨基酸C-末端羧基位置的修饰 OOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNHNOHHOHOHOOHNH2OHClClOHOHHOOOOOOR1OONSC

24、lH2NHNSNOOOO-N+(R)mOOOONHHNNHNHHNOH2NHNHNOHOClOHOHHOOOOOOR2OOOOHOHOHOOOHOH2NHOH2NHNNN C10H21N5a R2=5b R2=5c R2=R1=THRX-1179OOONHHNNHNHHNOH2NHNHNOHOClOHOHHOOOOOOHOOOOOHOHOHOOOHOH2NHOH2NaCN1781916 CN1568325Journal of Antibiotics, 2000, 53(3):286-2933-天冬酰胺的修饰 OOONHHNNHNHHNNCOOOHNHNOHHOHOHOOHNH2OHClClOH

25、OHHOOOOOOHOOOOOOHNHHNNHNHHNNCHNHNOHHOClClOHOHHOOOOOOHOOOOOONHHNNHNHHNR5OOOHNNOR1R1OR1OR1OOR1HNOR1ClClOR1OR1R1OOOOOOR2OOOR3R4A R1=TBS, R2=Me, R3=R4=Cbz, R5=CONH2 B R1=TBS, R2=Me, R3=R4=Cbz, R5=CN C R1=H, R2=Me, R3=R4=Cbz, R5=CN D R1=H, R2=Me, R3=R4=H, R5=CNReagents and conditions:(a) TFAA, pyridine (

26、87%); (b) Bu4NF-HOAc 1:1 (48%); (c) H2, 10% Pd-C, CH3OH (60%).Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2002, 12(9):1319-1322 7-氨基酸苯环的4-H位置的修饰v 添加疏水性取代基可维持其抗添加疏水性取代基可维持其抗MRSA 活性，且恢复抗活性，且恢复抗VRE活性活性v 改变了其吸收、分布、代谢及排泄等改变了其吸收、分布、代谢及排泄等特性，导致其清除半衰期延长及组织特性，导致其清除半衰期延长及组织内蓄积增加内蓄积增加 v 为了恢复药物良好的体内分布，减少为了恢复药物良好的体

27、内分布，减少肝肾蓄积，增加尿排泄，同时维持抗肝肾蓄积，增加尿排泄，同时维持抗菌活性，连接一个亲水基团菌活性，连接一个亲水基团 OOONHHNNHNHHNOH2NHNHNOHOClOHOHHOOOOOOHOOOOOHOHOHOOOHOH2NHOH2NR R=NHNHNHOHO R= R=OOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNHNOHHOHOHOOH HNOHClClOHOHHOOOOOOHOOONHNHPOHOHOTelavancinJournal of Antibiotics, 1997, 50(6):509-513 Journal of Antibiotics, 2004, 57(5)

28、:326-336 氯原子的修饰 OOONHHNNHNHHNOH2NHNHNOHOYOHOHHOOOOOOHOOOOOHOHOHOOOHOH2NHOH2NXA82846A (LY264825): X=H,Y=ClA82846B (LY264826): X=Cl,Y=ClA82846C (LY264827): X=H,Y=HOrienticin A: X=Cl,Y=HJournal of Organic Chemistry, 1989, 54(4):983-986. Antimicrob. Agents Chemother., 1991, 35(4):605-609 J. Am. Chem. So

29、c., 1993, 115(1):232-237 糖肽抗生素是以形成二聚体的形式发挥抗菌作用 NMR谱图显示2-氨基酸残基的氯原子在形成二聚体时占据糖肽二聚物表面的一个凹洞 OOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNHNOHHOHOHOOHNH2OHClClOHOHHOOOOOOHOOOCH3Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2005, 15(9):2325-2329 Journal of Antibiotics 1998, 51(8):750-756 阎虎尘曾液相还原烷基化N-去甲万古霉素，主要合成了N端为亮氨酸烷基化的衍生物，N端烷基化衍生

30、物，结合常数下降 ，对Staphylococcus aureus 的活性也相应地降低 OOONHHNNHNHHNOH2NOOOHNNH2OHHOHOHOOHNH2OHClClOHOHHOOOOOOHOOO“国产万古霉素” 1959年李群等，从贵州土壤中分离出一株近似S.orientalis的放线菌万-23号 1967年，N-去甲万古霉素经华北制药厂生产，并在中国用于临床 酶的可逆性抑制酶的可逆性抑制v抑制剂与酶作用，可用抑制剂与酶作用，可用Ki和和IC50表示。表示。vIC50=(1+S/Km)Kiv抑制剂既可以与底物结合部位作用抑制，也可在抑制剂既可以与底物结合部位作用抑制，也可在不是底物结

31、合部位作用抑制。不是底物结合部位作用抑制。v靶酶的底物通常是设计酶抑制的先导物，因此酶靶酶的底物通常是设计酶抑制的先导物，因此酶抑制剂通常是竞争性抑制剂。抑制剂通常是竞争性抑制剂。v简单竞争性抑制剂简单竞争性抑制剂v底物替代抑制剂底物替代抑制剂v过渡态类似物抑制剂过渡态类似物抑制剂I. 慢的紧密结合抑制剂慢的紧密结合抑制剂简单竞争性抑制剂简单竞争性抑制剂简单竞争性抑制剂简单竞争性抑制剂vAsp-Arg-Val-Tyr-IIe-His-Pro-Phe-His-Leu-Val-IIe-His-Asn 血管紧张素原血管紧张素原vAsp-Arg-Val-Tyr-IIe-His-Pro-Phe-His-

32、Leu 血管紧血管紧张素张素I（血管紧张素转化酶（血管紧张素转化酶ACE）vAsp-Arg-Val-Tyr-IIe-His-Pro-Phe 血管紧张素血管紧张素IIv升高血压、促使释放甾体激素醛固酮，促使钾离升高血压、促使释放甾体激素醛固酮，促使钾离子排泄和钠离子及水潴留而调节体液，使得血压子排泄和钠离子及水潴留而调节体液，使得血压升高。升高。vACE:升高血压的物质血管紧张素升高血压的物质血管紧张素II和和III的生成、的生成、刺激另一种升高血压物质醛固酮的释放、破坏舒刺激另一种升高血压物质醛固酮的释放、破坏舒张血管和降低血压的缓激肽张血管和降低血压的缓激肽简单竞争性抑制剂简单竞争性抑制剂v

33、 1965年发现南美花纹毒蛇的毒液里有一种肽类混合物，可以抑制缓激年发现南美花纹毒蛇的毒液里有一种肽类混合物，可以抑制缓激肽酶的活性来增强缓激肽的作用。还发现可以抑制血管紧张素肽酶的活性来增强缓激肽的作用。还发现可以抑制血管紧张素I转化转化成成II.其中有一个五肽其中有一个五肽Pyr-Lys-Trp-Ala-Pro,随后不断发现有多肽能抑随后不断发现有多肽能抑制体外制体外ACE活性，其中替普罗肽活性，其中替普罗肽Pyr-Trp-Pro-Arg-Pro-Gln-IIe-Pro-Pro活性最强。活性最强。v 大量多肽作为竞争性抑制剂的筛选发现，大量多肽作为竞争性抑制剂的筛选发现，N-乙酰化的三肽也

34、是乙酰化的三肽也是ACE的的有效底物，表明制备口服有效的有效底物，表明制备口服有效的ACE抑制剂是可能的。抑制剂是可能的。C端是脯氨酸端是脯氨酸、接着是丙氨酸。在、接着是丙氨酸。在SK公司筛选的同时，公司筛选的同时，ACE还没有被纯化出来。还没有被纯化出来。从从EDTA可以抑制可以抑制ACE的现象，得出的现象，得出ACE酶是一种金属酶，发现有酶是一种金属酶，发现有Zn离子，推测是与羰基氧配位作用，增加羰基的亲电性；另再与一分子离子，推测是与羰基氧配位作用，增加羰基的亲电性；另再与一分子水配位，增加水分子的亲和性。水配位，增加水分子的亲和性。这两种分子经与锌离子的配位结合，降低了水分子进攻可断裂的肽键的活化能，但由于酶结构未知，不能判断哪一种肽结构更好地抑制酶。简单竞争性抑制剂简单竞争性抑制剂v设想与羧肽酶类似。设想与羧肽酶类似。v羧肽酶是一种含锌的肽酶，有羧肽酶是一种含锌的肽酶，有X射线衍射晶体结射线衍射晶体结构。羧肽酶和多肽之间有三个重要的结合部位：构。羧肽酶和多肽之间有三个重要的结合部位：v与羧酸结合的基团与羧酸结合的基团v和和C端氨基酸侧链结合的基团端氨基酸侧链结合的基团v能和倒数第二个肽