肝纤维化的检测

1、Contents 化学发光技术简介化学发光技术简介 肝纤维化综述肝纤维化综述 肝纤维化的检测方法肝纤维化的检测方法 血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值 其他血清学检测指标简介其他血清学检测指标简介 肝纤维化诊断现状肝纤维化诊断现状 肝纤四项检测常见问题肝纤四项检测常见问题化学发光技术简介化学发光技术简介 化学发光免疫诊断技术是临床诊断领域最有前景的化学发光免疫诊断技术是临床诊断领域最有前景的技术之一。其利用鲁米诺在酶促下发出的光子信号技术之一。其利用鲁米诺在酶促下发出的光子信号(以以及其他发光方式及其他发光方式)，放大抗原抗体反应，对体内的各种，放大抗原抗体反应，

2、对体内的各种微量标志物进行检测，从而对各种疾病进行早期、特异微量标志物进行检测，从而对各种疾病进行早期、特异和定量化的诊断。和定量化的诊断。 其特点在于灵敏度高、测定范围宽、快速、简便，其特点在于灵敏度高、测定范围宽、快速、简便，并且在测试中不使用有害的试剂，无污染。并且在测试中不使用有害的试剂，无污染。化学发光技术简介化学发光技术简介方法中国欧美放射免疫法（RIA）1.1.兴起于兴起于2020世纪世纪7070年代，现仍普年代，现仍普遍使用于县级以上医院；遍使用于县级以上医院；2.2.产品处于衰退期；产品处于衰退期；3.3.厂商试剂与仪器共同开发，试厂商试剂与仪器共同开发，试剂基本系列化。剂基

3、本系列化。 1.1.兴起于兴起于2020世纪世纪6060年代，现已基年代，现已基本退出临床应用；本退出临床应用；2.2.产品生命周期已终结；产品生命周期已终结；3.3.厂商试剂和仪器共同开发，试厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化剂基本系列化 酶联免疫法（ELISA）1.1.兴起于兴起于2020世纪世纪8080年代，现普遍年代，现普遍使用于各级临床机构，为我国临使用于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基本方法；床免疫诊断的基本方法；2.2.产品产品处于成熟期；处于成熟期；3.3.厂商试剂和仪器共同开发，试厂商试剂和仪器共同开发，试剂尚未系列化。剂尚未系列化。 1.1.兴起于兴起于2020世纪

4、世纪7070年代，现仍在年代，现仍在临床应用；临床应用；2.2.产品处于衰退期；产品处于衰退期；3.3.厂商试剂和仪器共同开发，试厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化。剂基本系列化。 化学发光免疫法（CLIA） 1.1.导入于导入于2020世纪世纪9090年代，逐步进年代，逐步进入各大中医院；入各大中医院；2.2.产品处于快速成长期；产品处于快速成长期；3.3.正逐步实现正逐步实现试剂和仪器共同开试剂和仪器共同开发，试剂逐步系列化发，试剂逐步系列化 1.1.兴起于兴起于2020世纪世纪8080年代，现已被年代，现已被临床普遍使用，成为临床免疫诊临床普遍使用，成为临床免疫诊断的支柱方法；断的支

5、柱方法；2.2.产品处于成熟期；产品处于成熟期；3.3.厂商试剂与仪器共同开发，仪厂商试剂与仪器共同开发，仪器自动化程度高，试剂系列化状器自动化程度高，试剂系列化状态好。态好。 化学发光技术简介1） 化学发光技术简介 2）化学发光技术简介3）化学发光技术简介化学发光技术简介 肝纤维化（肝纤维化（hepatic fibrosis）是指肝细胞发）是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏内纤维结缔组织异常增生坏死及炎症刺激时，肝脏内纤维结缔组织异常增生的病理过程。生的病理过程。 是慢性肝病的共同病理学基础，随着各种不同是慢性肝病的共同病理学基础，随着各种不同的慢性肝脏疾病的进展可逐渐形成肝纤维化的慢性肝

6、脏疾病的进展可逐渐形成肝纤维化 。 轻轻肝纤维化重肝纤维化重肝硬化肝硬化 （不同之处（不同之处肝小叶结构是否完整）肝小叶结构是否完整） 引起肝纤维化的病因消除后引起肝纤维化的病因消除后早期肝纤维化早期肝纤维化可完全恢复，肝硬化则不易复原。可完全恢复，肝硬化则不易复原。 肝纤维化综述肝纤维化综述Part1.肝纤维化的概念肝纤维化的概念 肝纤维化严重时可引起门脉高压肝纤维化严重时可引起门脉高压纤维化组织纤维化组织压迫门静脉分支，门静脉阻力升高。压迫门静脉分支，门静脉阻力升高。 从生理角度看，肝损伤时肝内纤维结缔组织增生从生理角度看，肝损伤时肝内纤维结缔组织增生是一种对损伤的正常修复反应。是一种对损

7、伤的正常修复反应。 肝小叶结构紊乱，肝细胞数量肝小叶结构紊乱，肝细胞数量过度增生过度增生 减少，肝功能降低减少，肝功能降低 肝脏萎缩变硬，肝硬化失代偿肝脏萎缩变硬，肝硬化失代偿 肝纤维化是慢性肝病最重要的病理特征，也是慢肝纤维化是慢性肝病最重要的病理特征，也是慢性肝炎、肝硬化进一步发展、恶化的重要原因。性肝炎、肝硬化进一步发展、恶化的重要原因。肝纤维化综述Part2.肝纤维化的病理生理学肝纤维化的病理生理学肝纤维化综述慢性乙型肝炎慢性乙型肝炎慢性丙型肝炎慢性丙型肝炎脂肪性肝炎（酒精或非酒精性）脂肪性肝炎（酒精或非酒精性）药物药物免疫性肝病免疫性肝病胆汁淤积等胆汁淤积等肝纤维化综述Part3.肝

8、纤维化的病因学肝纤维化的病因学过度纤维化会导致肝脏萎缩变硬，直到引起肝硬化过度纤维化会导致肝脏萎缩变硬，直到引起肝硬化或肝衰竭，进而导致患者完全丧失生活能力和死亡。或肝衰竭，进而导致患者完全丧失生活能力和死亡。据统计，目前我国乙肝病毒携带者据统计，目前我国乙肝病毒携带者1.2亿，慢性乙肝亿，慢性乙肝患者约患者约3500万，加上慢性丙肝、脂肪肝、血吸虫病、万，加上慢性丙肝、脂肪肝、血吸虫病、免疫性肝病等，构成了庞大的潜在的肝纤维化患者群。免疫性肝病等，构成了庞大的潜在的肝纤维化患者群。调查显示，肝硬化占据国际上疾病死亡病因的第六调查显示，肝硬化占据国际上疾病死亡病因的第六位。位。早期发现并积极治

9、疗肝纤维化，使之逆转或延缓其早期发现并积极治疗肝纤维化，使之逆转或延缓其发展，对提高患者生活质量，改善患者预后，有十分发展，对提高患者生活质量，改善患者预后，有十分重要的作用。重要的作用。 肝纤维化综述Part4.肝纤维化的流行病学肝纤维化的流行病学 肝纤维化是肝硬化发展的必经阶段，肝纤维化是肝硬化发展的必经阶段，各种因素导致的肝损伤，都可继发肝纤维各种因素导致的肝损伤，都可继发肝纤维化形成进而发展为肝硬化。化形成进而发展为肝硬化。 早期肝纤维化可完全恢复，肝硬化则早期肝纤维化可完全恢复，肝硬化则不易复原。不易复原。 肝纤维化综述Part5.小结小结 肝活检肝活检病理学检查仍病理学检查仍是诊断

10、肝纤维化的是诊断肝纤维化的金标准金标准，是明确诊断、衡量炎症活动是明确诊断、衡量炎症活动度、纤维化程度以及判定药度、纤维化程度以及判定药物疗效的重要依据。目前一物疗效的重要依据。目前一般采用半定量计分系统。但般采用半定量计分系统。但是，由于肝纤维化在肝内分是，由于肝纤维化在肝内分布不均匀，而且肝穿刺组织布不均匀，而且肝穿刺组织仅占全肝的五万分之一，可仅占全肝的五万分之一，可造成诊断误差。因此强调肝造成诊断误差。因此强调肝活检标本至少活检标本至少15 mm，并，并包含包含6个以上汇管区。个以上汇管区。Part1.病理学检查病理学检查肝纤维化的检测方法肝纤维化的检测方法肝纤维化的检测方法 现代影像

11、学手段如现代影像学手段如B型超声、型超声、CT、磁共振成像（、磁共振成像（MRI）等可以等可以发现肝纤维化的某些征象，如肝发现肝纤维化的某些征象，如肝脏轮廓、大小、及肝实质信号强脏轮廓、大小、及肝实质信号强弱的改变，肝脏血管内径及血流弱的改变，肝脏血管内径及血流方向、速度的改变，脾脏大小的方向、速度的改变，脾脏大小的改变等。彩色多普勒超声检查或改变等。彩色多普勒超声检查或放射性核素扫描可以测定肝脏动放射性核素扫描可以测定肝脏动脉和门脉的血流量及功能性门体脉和门脉的血流量及功能性门体分流情况。但是，目前这些影像分流情况。但是，目前这些影像学检查尚学检查尚不能对纤维化做出确诊不能对纤维化做出确诊和

12、鉴别诊断，更难于准确判断肝和鉴别诊断，更难于准确判断肝纤维化的严重程度纤维化的严重程度，故只能作为，故只能作为一种辅助诊断。一种辅助诊断。 Part2.影像学检查影像学检查肝纤维化的检测方法细胞外基质细胞外基质(ECM)及代谢及代谢产物产物ECM代谢相关代谢相关酶类及抑制剂酶类及抑制剂胶原蛋白胶原蛋白 例如：例如：PNP PIP Col Col VI非胶原糖蛋白非胶原糖蛋白 例如：例如：LN FN FNR UN TN糖胺多糖糖胺多糖 例如：例如：HA蛋白多糖蛋白多糖 胶原酶及其抑制剂胶原酶及其抑制剂 例如：例如：MMPs TIMPs脯氨酰羟化酶（脯氨酰羟化酶（PH）赖氨酰氧化酶赖氨酰氧化酶细胞

13、因子细胞因子多肽类生长因子多肽类生长因子 例如：例如：TGF-白细胞介素白细胞介素 例如：例如：IL-1肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子 例如：例如：TNF-干扰素干扰素 例如：例如：IFN-Part3.血清学检查血清学检查肝纤维化的检测方法检测方法检测方法 准确性准确性 安全性安全性 方便性方便性 诊断意义诊断意义 病理学诊病理学诊断断 准确性准确性高高 存在一定存在一定的损伤性的损伤性和危险性和危险性 需要专业需要专业人员和器人员和器材，很难材，很难反复取材反复取材 诊断可靠，但诊断可靠，但不便于动态观察不便于动态观察肝纤肝纤维化的情况。维化的情况。 影像学诊影像学诊断断 辅助作辅助作用用 无危险

14、性无危险性 方便方便 只能在只能在肝纤维化晚期才能出现异常肝纤维化晚期才能出现异常图像，因此图像，因此不可能作为早期诊断不可能作为早期诊断。检查可以发现肝纤维化的某些征象，检查可以发现肝纤维化的某些征象，但不能对纤维化做出确诊，更难于但不能对纤维化做出确诊，更难于准确判断肝纤维化的严重程度。准确判断肝纤维化的严重程度。 血清学诊血清学诊断断 准确性准确性较高较高 无危险性无危险性 取材方便、取材方便、容易复查容易复查 可以对肝组织纤维化可以对肝组织纤维化不同阶段不同阶段做出做出相对准确的诊断。了解肝脏纤维化相对准确的诊断。了解肝脏纤维化的发展变化情况，也可的发展变化情况，也可监测监测抗纤维抗纤

15、维化的治疗的化的治疗的临床效果临床效果。 Part4.不同方法的对比不同方法的对比肝纤维化的检测方法 透明质酸（透明质酸（hyaluronic acid，HA）主要由纤）主要由纤维母细胞细胞合成，通过淋巴系统进入血循环，并维母细胞细胞合成，通过淋巴系统进入血循环，并由肝脏快速清除。肝内皮细胞是由肝脏快速清除。肝内皮细胞是HA摄取、降解的场摄取、降解的场所。由于体内存在有效的所。由于体内存在有效的HA清除机制，正常人血清清除机制，正常人血清中仅有低水平的中仅有低水平的HA。多种原因导致的肝病可使血清。多种原因导致的肝病可使血清HA水平上升，主要与肝脏清除功能下降、肝脏内成水平上升，主要与肝脏清除

16、功能下降、肝脏内成纤维细胞（肝星状细胞）合成增加有关。在肝纤维纤维细胞（肝星状细胞）合成增加有关。在肝纤维化时，肝星状细胞合成化时，肝星状细胞合成HA水平大大升高，且内皮细水平大大升高，且内皮细胞清除胞清除HA能力亦有下降，双重原因导致肝纤维化中能力亦有下降，双重原因导致肝纤维化中HA水平上升。水平上升。血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值Part1.透明质酸透明质酸 HA又称又称“小肝穿小肝穿”，测定具有以下作用：，测定具有以下作用：1.反反映肝脏纤维化形成；映肝脏纤维化形成；2.反映肝脏纤维化程度；反映肝脏纤维化程度；3.反反映肝细胞功能；映肝细胞功能；4.反映

17、肝脏炎症性病变；反映肝脏炎症性病变；5.无论是无论是无症状性病毒感染或严重病毒感染、酒精性肝病、无症状性病毒感染或严重病毒感染、酒精性肝病、胆汁性肝硬化，胆汁性肝硬化，HA均是有效指标，可用于药物疗效均是有效指标，可用于药物疗效观察及病情的动态观察。观察及病情的动态观察。 就目前临床研究而言：就目前临床研究而言：HA是目前众多纤维化是目前众多纤维化生化指标中最为敏感和特异的指标（生化指标中最为敏感和特异的指标（80%以上）以上） 。在慢性肝病肝纤维化组织学在慢性肝病肝纤维化组织学-血清对照研究中发现，血清对照研究中发现，HA是是4项细胞外间质成分中最为敏感和特异的指标，项细胞外间质成分中最为敏

18、感和特异的指标，HA的诊断准确性为的诊断准确性为82.9%，特异性为，特异性为93%，敏感性，敏感性为为56%。血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值Part2.层粘连蛋白层粘连蛋白 层粘蛋白（层粘蛋白（laminin，LN）是基底膜成分中的）是基底膜成分中的主要大分子糖蛋白，在肝脏内与主要大分子糖蛋白，在肝脏内与型胶原共同分布，型胶原共同分布，大量沉积则引起肝窦毛细血管化，直接影响肝窦血大量沉积则引起肝窦毛细血管化，直接影响肝窦血流阻力。流阻力。 LN有十几个亚型，有报道显示肝纤维化过程中有十几个亚型，

19、有报道显示肝纤维化过程中肝脏内大量合成肝脏内大量合成1和和1链，有人研究老鼠肝纤维化链，有人研究老鼠肝纤维化时说大量合成的是时说大量合成的是2型而非型而非1型。但到目前，在肝纤型。但到目前，在肝纤维化过程中研究最多的是维化过程中研究最多的是1型。型。 血清血清LN的测定通常是测定其的测定通常是测定其LN-P1片断。片断。 LN-P1主要反映的是肝纤维化形成中的纤维化活性，其主要反映的是肝纤维化形成中的纤维化活性，其血清值被认为是反映基底膜更新率的指标，可提示血清值被认为是反映基底膜更新率的指标，可提示肝窦的毛细血管化和汇管区纤维化。肝窦的毛细血管化和汇管区纤维化。 LN在肝纤维化中的诊断价值：

20、在肝纤维化中的诊断价值：与肝纤维化与肝纤维化形成的病因密切相关，形成的病因密切相关，LN水平在酒精性肝硬化明显水平在酒精性肝硬化明显高于病毒性肝硬化和胆汁性肝硬化，高于病毒性肝硬化和胆汁性肝硬化，LN水平可反映水平可反映酒精性肝病是否存在门脉高压及门脉高压程度，但酒精性肝病是否存在门脉高压及门脉高压程度，但在非酒精性肝硬化，在非酒精性肝硬化，LN则不能用于门脉高压的诊断。则不能用于门脉高压的诊断。 目前，有关目前，有关LN对诊断肝纤维化的价值仍有争对诊断肝纤维化的价值仍有争议，其诊断敏感性不及议，其诊断敏感性不及Col 和和PNP。血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价

21、值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值 PNP是是PC在细胞外形成原胶原前，被相关在细胞外形成原胶原前，被相关酶切下后进入血循环的氨基端尾肽。完整的酶切下后进入血循环的氨基端尾肽。完整的PNP主要通过窦状隙内皮细胞受体介导的内吞作用被清主要通过窦状隙内皮细胞受体介导的内吞作用被清除，故除，故胶原代谢活跃及肝功能损伤时，血清胶原代谢活跃及肝功能损伤时，血清PNP升高，升高，PNP被视为肝纤维化生成的血清学指标。被视为肝纤维化生成的血清学指标。 Part3. 型前胶原型前胶原N端肽端肽血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值 PNP的含量可以有效

22、地区别轻型与中的含量可以有效地区别轻型与中/重型慢重型慢性肝炎性肝炎，提示活动性肝纤维化，是反映慢性肝纤维，提示活动性肝纤维化，是反映慢性肝纤维化活动性和程度的指标。化活动性和程度的指标。长期随访血清长期随访血清PNP含量含量能判定慢性肝病的预后能判定慢性肝病的预后。对原发性胆汁性肝硬化、。对原发性胆汁性肝硬化、慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、自身免疫性肝慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、自身免疫性肝炎进行炎进行210年随访，无论药物治疗与否，原发性肝年随访，无论药物治疗与否，原发性肝硬化者血清硬化者血清PNP总是升高，接受肝移植后恢复正总是升高，接受肝移植后恢复正常；慢性迁延性肝炎常；慢性迁延

23、性肝炎PNP含量在正常上限；发展含量在正常上限；发展成肝硬化的慢性活动性肝炎其血清成肝硬化的慢性活动性肝炎其血清PNP持续升高，持续升高，转入缓解期则血清转入缓解期则血清PNP正常。唯自身免疫性肝炎正常。唯自身免疫性肝炎例外，血清值一直不升高。例外，血清值一直不升高。 血清血清PNP可评估慢性肝病，特别是慢性活动可评估慢性肝病，特别是慢性活动性肝炎纤维化过程，其临床性肝炎纤维化过程，其临床判断预后价值已被公认判断预后价值已被公认，但总体敏感性、特异性不高。有报道，血清但总体敏感性、特异性不高。有报道，血清PNP含量判别肝纤维化的敏感性和特异性分别是含量判别肝纤维化的敏感性和特异性分别是76%和

24、和71%。但。但PNP正常或轻微升高不能排除已经存在正常或轻微升高不能排除已经存在但正在缓慢进展中的纤维化。但正在缓慢进展中的纤维化。 此外，值得提出的是，在年幼的儿童，生长导此外，值得提出的是，在年幼的儿童，生长导致全身间质胶原的更新可使血清致全身间质胶原的更新可使血清PNP水平明显升水平明显升高，故高，故对儿童肝纤维化没有诊断价值对儿童肝纤维化没有诊断价值。血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值 型胶原型胶原是构成基底膜的主要成分。肝纤维化是构成基底膜的主要成分。肝纤维化时肝内时肝内型胶原合成增多并大

25、量沉积，致使肝窦毛型胶原合成增多并大量沉积，致使肝窦毛细血管化。细血管化。型前胶原由氨基端三螺旋即型前胶原由氨基端三螺旋即7S胶原、胶原、羧基端球形区即羧基端球形区即NCl及主三螺旋区组成。在血清中及主三螺旋区组成。在血清中可出现这三种主要的降解片断，可出现这三种主要的降解片断，3者均是反映者均是反映型胶型胶原降解的指标，即具有相同的临床意义，差别在于原降解的指标，即具有相同的临床意义，差别在于不同成分的检测敏感度不同。由于胶原降解的增加不同成分的检测敏感度不同。由于胶原降解的增加常伴有更多的再合成，因此，确切地说，它们常伴有更多的再合成，因此，确切地说，它们是反是反映基底膜胶原更新的指标映基

26、底膜胶原更新的指标。Part4. 型胶原型胶原 研究表明，研究表明，型胶原成分的检测对判断肝纤维型胶原成分的检测对判断肝纤维化和肝硬化具有较高的敏感性（化和肝硬化具有较高的敏感性（79%）和特异性）和特异性（82%）。有文献报道在慢性活动性丙肝患者中组）。有文献报道在慢性活动性丙肝患者中组合利用合利用型胶原与凝血酶原时间（型胶原与凝血酶原时间（PT)可明确地诊断可明确地诊断为肝硬化。为肝硬化。血清学肝纤维化四项诊断的应用价值血清学肝纤维化四项诊断的应用价值 血清甘胆酸血清甘胆酸(Cholyglycine, CG) 是胆酸与甘氨酸结合二是胆酸与甘氨酸结合二次的结合型胆酸之一，在肝细胞内，胆固醇经

27、过及其复杂的次的结合型胆酸之一，在肝细胞内，胆固醇经过及其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸(CA)和鹅去氧胆和鹅去氧胆酸（酸（CD-CA）。胆酸的类固醇核上有三个羟基）。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12），侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合，分子量为），侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合，分子量为462u。 CG正常代谢途径为肠正常代谢途径为肠肝循环，肝循环，CG由肝细胞合成，经由肝细胞合成，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物消化。物消化。95%胆酸在回肠末端重

28、吸收，经门静脉再回肝脏，胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在，由肝细胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在，溢入体循环的总量小于溢入体循环的总量小于1 %。在正常情况下。在正常情况下,外周血中胆酸含外周血中胆酸含量甚微量甚微,正常成人无论空腹或餐后正常成人无论空腹或餐后,其血清其血清CG浓度稳定在低水浓度稳定在低水平。平。其他血清学指标简介其他血清学指标简介Part1. 甘胆酸甘胆酸其他血清学指标简介其他血清学指标简介 当肝细胞受损时，肝细胞摄取当肝细胞受损时，肝细胞摄取CG能力下降，致使血中能力下降，致使血中CG含量增高；胆汁郁滞时

29、，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血液循环的液循环的CG含量增高，也使血含量增高，也使血CG含量增高。因此，用含量增高。因此，用RIA（radioimmunoassay放射免疫测定法）法检测血清甘胆酸放射免疫测定法）法检测血清甘胆酸（SCG）是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感）是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。指标之一。 临床意义临床意义（1）急性肝炎急性肝炎、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、肝硬化、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、肝硬化、慢迁肝患者血慢迁肝患者血 CG均明显高于正常人，且均明显高于正常人，且呈递性增高呈递性

30、增高。（2）胆石症伴黄疸患者胆管、胆囊排泄功能障碍引起血）胆石症伴黄疸患者胆管、胆囊排泄功能障碍引起血清清CG显著升高。显著升高。（3）肝硬化、梗阻性肝病、肠）肝硬化、梗阻性肝病、肠肝循环障碍血清肝循环障碍血清CG水水平高于正常人。平高于正常人。 Part2. 纤维连接蛋白及其受体纤维连接蛋白及其受体 纤维连接蛋白纤维连接蛋白(FN)及其受体及其受体(FNR)：FN在体内有在体内有2种形种形式，即细胞型和血浆型。血浆型式，即细胞型和血浆型。血浆型FN绝大部分由肝细胞合成。绝大部分由肝细胞合成。在肝脏，在肝脏，FN 与胶原、与胶原、LN等共同组成基底膜成分。肝纤维化等共同组成基底膜成分。肝纤维化

31、及肝硬化时，肝组织中细胞型及肝硬化时，肝组织中细胞型FN含量明显增加，但血浆含量明显增加，但血浆FN水水平则明显降低，后者反映了肝细胞合成蛋白质功能的减退。平则明显降低，后者反映了肝细胞合成蛋白质功能的减退。故故血清血清FN对肝纤维化的判断价值尚不能肯定对肝纤维化的判断价值尚不能肯定。运用。运用ELISA法法研究慢性肝病病人血清研究慢性肝病病人血清FNR(FN受体受体B亚单位亚单位)，发现慢性活动，发现慢性活动性肝炎、肝硬化、酒精性肝病和肝细胞癌病人血清性肝炎、肝硬化、酒精性肝病和肝细胞癌病人血清FNR水平水平显著升高，并与血清显著升高，并与血清PNP水平相关；血清水平相关；血清FNR水平与组

32、织水平与组织学肝纤维化程度的相关性，比与组织学上坏死、炎症的相关学肝纤维化程度的相关性，比与组织学上坏死、炎症的相关性更为密切，而血清性更为密切，而血清PNP则相反。表明血清则相反。表明血清FNR在反映肝在反映肝纤维化方面优于血清纤维化方面优于血清PNP，认为其是反映肝纤维化的，认为其是反映肝纤维化的1种有种有价值的指标价值的指标.其他血清学指标简介其他血清学指标简介Part3.型前胶原羧基端肽和氨基端肽型前胶原羧基端肽和氨基端肽 型前胶原羧基端肽型前胶原羧基端肽(PCP)和氨基端肽和氨基端肽(PNP)： 型型胶原的生物合成过程与胶原的生物合成过程与型胶原不同的是，型胶原不同的是，型前胶原形成

33、型前胶原形成原胶原过程中，其原胶原过程中，其PCP被完全切除。因此，理论上讲，被完全切除。因此，理论上讲，PCP可直接反映胶原生成。然而，研究表明，血清可直接反映胶原生成。然而，研究表明，血清PCP对区别酒精性肝炎和酒精性脂肪肝的准确性不如血清对区别酒精性肝炎和酒精性脂肪肝的准确性不如血清PNP；血吸虫病患者早期血清血吸虫病患者早期血清PCP增高的幅度大于晚期，而晚期增高的幅度大于晚期，而晚期患者血清患者血清PNP仍持续增高；肝外间质组织仍持续增高；肝外间质组织(如骨、皮肤如骨、皮肤)富含富含型胶原，在生长年龄对血清含量影响较大，故目前已较少型胶原，在生长年龄对血清含量影响较大，故目前已较少采

34、用。血清采用。血清PNP检测的意义和价值与检测的意义和价值与PCP相似。相似。其他血清学指标简介其他血清学指标简介 肝纤维化的诊断依赖于肝活检病理诊断，这种创伤性检查具肝纤维化的诊断依赖于肝活检病理诊断，这种创伤性检查具有许多明显不足，如具有创伤性、难以反复活检、有一定的并发有许多明显不足，如具有创伤性、难以反复活检、有一定的并发症（症（1/3的患者有疼痛；的患者有疼痛；0.3的患者出现严重并发症，包括出血，的患者出现严重并发症，包括出血，气胸，结肠和胆囊穿孔等；还有气胸，结肠和胆囊穿孔等；还有0.03的死亡率）、病变在肝脏的死亡率）、病变在肝脏内不均匀、存在观察者自身和观察者之间的差异（半定

35、量分期系内不均匀、存在观察者自身和观察者之间的差异（半定量分期系统可误差统可误差1-2期）、标本长度不够（长度期）、标本长度不够（长度20mm和和10个汇管区）个汇管区）等易出现低估以及标本破碎及肝包膜下纤维化可造成假象。因此等易出现低估以及标本破碎及肝包膜下纤维化可造成假象。因此临床上迫切需要寻找简单、易推广的非创伤性诊断方法来诊断和临床上迫切需要寻找简单、易推广的非创伤性诊断方法来诊断和评估肝纤维化。多年来，人们一直在试图寻找无创的血清学指标评估肝纤维化。多年来，人们一直在试图寻找无创的血清学指标来评估慢性肝病的肝纤维化，包括常规生化、纤维化、细胞因子、来评估慢性肝病的肝纤维化，包括常规生

36、化、纤维化、细胞因子、免疫功能等，免疫功能等，但迄今为止，还没有任何单项指标能足够敏感、准但迄今为止，还没有任何单项指标能足够敏感、准确地反应肝纤维化程度确地反应肝纤维化程度。近十多年来，国外建立了多个以综合多。近十多年来，国外建立了多个以综合多项临床、生化指标及影像学为基础的肝纤维化非创伤性诊断预测项临床、生化指标及影像学为基础的肝纤维化非创伤性诊断预测模型。模型。 现在公认的是这四项：现在公认的是这四项：HA、LN、PNP、 C 。诊断肝纤。诊断肝纤的灵敏度为的灵敏度为60-70%，特异性为，特异性为90%以上。以上。肝纤维化诊断现状肝纤维化诊断现状肝纤四项检测常见问题肝纤四项检测常见问题

37、问题一：问题一：肝纤维化血清学检测有什么临床意义？肝纤维化血清学检测有什么临床意义？ 解释：解释：肝纤维化检测的方法常规的有三种，即病理学检测、肝纤维化检测的方法常规的有三种，即病理学检测、影像学检测和血清学检测。目前，病理学检测依然是肝纤维影像学检测和血清学检测。目前，病理学检测依然是肝纤维化检测的化检测的“金标准金标准”，而影像学和血清学作为辅助诊断的项，而影像学和血清学作为辅助诊断的项目。虽然病理学检测的认可度最高，但是因为具有创伤性，目。虽然病理学检测的认可度最高，但是因为具有创伤性，并且技术难度和风险度都很高而致使其应用受到限制，特别并且技术难度和风险度都很高而致使其应用受到限制，特

38、别是不能够监测患者的病情。影像学的发展对肝纤维化的诊治是不能够监测患者的病情。影像学的发展对肝纤维化的诊治非常地有意义，但是目前市场上产品的分辨率普遍偏低，这非常地有意义，但是目前市场上产品的分辨率普遍偏低，这对早期肝纤维化的发现和诊治失去价值，从而使病人失去肝对早期肝纤维化的发现和诊治失去价值，从而使病人失去肝纤维化治疗的宝贵时间。血清学检测则是对病理学检测和影纤维化治疗的宝贵时间。血清学检测则是对病理学检测和影像学检测最有效的补充，不仅可以监测病人病情，而且对早像学检测最有效的补充，不仅可以监测病人病情，而且对早期肝纤维化的发现和治疗非常有价值。期肝纤维化的发现和治疗非常有价值。肝纤四项检

39、测常见问题肝纤四项检测常见问题问题二：问题二：肝纤维化检测的血清学指标非常多，为什么国内多肝纤维化检测的血清学指标非常多，为什么国内多采用透明质酸、层粘连蛋白、采用透明质酸、层粘连蛋白、型前胶原型前胶原N端肽和端肽和型胶原型胶原联合检测来诊断肝纤维化？联合检测来诊断肝纤维化？ 解释：解释：尽管肝纤维化发生时，许多血清学指标可能都会升高，尽管肝纤维化发生时，许多血清学指标可能都会升高，但是目前在血清学检测肝纤维化领域，还没有任何单项指标但是目前在血清学检测肝纤维化领域，还没有任何单项指标具有较高的敏感度和特异性，单项检测的意义也需要结合患具有较高的敏感度和特异性，单项检测的意义也需要结合患者自身

40、的其他情况综合分析。所以现在研究者都在寻求最佳者自身的其他情况综合分析。所以现在研究者都在寻求最佳的检测指标组合模式以提高检测的敏感度和特异性。但是由的检测指标组合模式以提高检测的敏感度和特异性。但是由于肝纤维化的病因很多，学术方面还没有找到适合所有肝纤于肝纤维化的病因很多，学术方面还没有找到适合所有肝纤维化病因的血清学指标组合方案。肝纤维化四项产品是针对维化病因的血清学指标组合方案。肝纤维化四项产品是针对 国内患者人群的现状开发出的具有相对较高临床敏感度和临国内患者人群的现状开发出的具有相对较高临床敏感度和临床特异性的产品。床特异性的产品。问题三：问题三：肝纤维化四项检测的应用范围有哪些？肝

41、纤维化四项检测的应用范围有哪些？ 解释：解释： 主要适用于：主要适用于： 1）门诊上肝病病人的常规检查，如慢性乙肝患者、脂肪）门诊上肝病病人的常规检查，如慢性乙肝患者、脂肪肝患者（包含酒精肝患者）、慢性丙肝患者等等；肝患者（包含酒精肝患者）、慢性丙肝患者等等； 2）临床上对病人病情的监测及对病人治疗效果的观察。）临床上对病人病情的监测及对病人治疗效果的观察。 3）抗纤维化药物的临床研究。例如森隆药业的药品安络）抗纤维化药物的临床研究。例如森隆药业的药品安络化纤宣传资料上就推荐使用化纤宣传资料上就推荐使用 “小肝穿小肝穿”的的HA判断肝纤维化判断肝纤维化的程度和观察药物的疗效。的程度和观察药物的

42、疗效。肝纤四项检测常见问题肝纤四项检测常见问题问题四：问题四：为什么肝纤维化四项有些项目测定值非常高，而其他几项指为什么肝纤维化四项有些项目测定值非常高，而其他几项指标正常？标正常？ 解释：解释：肝纤维化四项检测在国内由来已久，虽然是国内公认的检测肝纤维化四项检测在国内由来已久，虽然是国内公认的检测肝纤维化比较敏感和特异的血清学指标，但是单个项目检测肝纤维化肝纤维化比较敏感和特异的血清学指标，但是单个项目检测肝纤维化的敏感度和特异性却有很大差异。主要有两个原因：的敏感度和特异性却有很大差异。主要有两个原因：1）肝纤维化的）肝纤维化的病因不同导致的差异；病因不同导致的差异；2）肝纤维化发展为不同

43、时期导致的差异。目）肝纤维化发展为不同时期导致的差异。目前对于这个问题学术还没有非常详尽的解释，对于第二种原因我们通前对于这个问题学术还没有非常详尽的解释，对于第二种原因我们通过一些临床试验发现四项指标都高的多是肝硬化、重肝和肝癌病人；过一些临床试验发现四项指标都高的多是肝硬化、重肝和肝癌病人；在肝纤维化早期透明质酸和在肝纤维化早期透明质酸和型前胶原型前胶原N端肽的敏感度更高；肝纤维端肽的敏感度更高；肝纤维化发展为肝硬化前的中晚期时层粘连蛋白和化发展为肝硬化前的中晚期时层粘连蛋白和型胶原快速升高；而处型胶原快速升高；而处于治疗阶段的病人随着病情的好转某些指标会转为正常，尤其是透明于治疗阶段的病

44、人随着病情的好转某些指标会转为正常，尤其是透明质酸和质酸和型前胶原型前胶原N端肽，它们对于肝纤维化病情的监测效果更佳。端肽，它们对于肝纤维化病情的监测效果更佳。需要提起需要提起注意注意的是：四项指标检测肝纤维化没有固定的模式，因病因、的是：四项指标检测肝纤维化没有固定的模式，因病因、因病情、因病人会有差异，需要结合单个项目的临床意义和病人的其因病情、因病人会有差异，需要结合单个项目的临床意义和病人的其他检测指标及相关症状分析病人病情，只通过结果的阴阳性判定肝纤他检测指标及相关症状分析病人病情，只通过结果的阴阳性判定肝纤维化是不科学的。维化是不科学的。肝纤四项检测常见问题肝纤四项检测常见问题问题

45、五：问题五：问什么层粘连蛋白和问什么层粘连蛋白和型胶原采用夹心两步法？型胶原采用夹心两步法？ 解释：解释：LN系生物大分子，不仅存在二十种左右的亚型，而且在血清系生物大分子，不仅存在二十种左右的亚型，而且在血清内被降解至少内被降解至少7个片段以上，理论上无法对其进行最准确的定量。由个片段以上，理论上无法对其进行最准确的定量。由于这个原因，竞争法测定时，由于抗原降解时片段增多，而抗原位阻于这个原因，竞争法测定时，由于抗原降解时片段增多，而抗原位阻减小，从而导致结果大大偏高（如放免类试剂），夹心一步法测定结减小，从而导致结果大大偏高（如放免类试剂），夹心一步法测定结果则由于片段干扰标记抗体结合在固

46、相上而导致不同程度地偏低，可果则由于片段干扰标记抗体结合在固相上而导致不同程度地偏低，可以说相关性很差，我们在研发过程中发现某些重症肝硬化患者一步法以说相关性很差，我们在研发过程中发现某些重症肝硬化患者一步法测定结果整体偏低证实这个现象，这样的结果肯定无法应用于病情监测定结果整体偏低证实这个现象，这样的结果肯定无法应用于病情监测。而我们最终确定的两步法模式，则最大程度克服了这个问题，使测。而我们最终确定的两步法模式，则最大程度克服了这个问题，使测定结果和病人病情有很高的相关性，从而可以应用于病情的监测。测定结果和病人病情有很高的相关性，从而可以应用于病情的监测。 在最初研究在最初研究C项目时，

47、曾发现血清稀释一倍后，发光值成更大项目时，曾发现血清稀释一倍后，发光值成更大比例地降低，通过查阅文献，推测血清内应存在大量的单体形式或降比例地降低，通过查阅文献，推测血清内应存在大量的单体形式或降解形式，因为只有这样，才会造成测定结果受到极大的干扰。所以，解形式，因为只有这样，才会造成测定结果受到极大的干扰。所以，采用竞争法和夹心一步法测定采用竞争法和夹心一步法测定C，结果一定不准确。我们采用两步，结果一定不准确。我们采用两步法操作，斜率在法操作，斜率在1左右，最大程度消除了单体及降解片段的干扰，结左右，最大程度消除了单体及降解片段的干扰，结果更可信，对于患者的病情监测更有意义。果更可信，对于

48、患者的病情监测更有意义。肝纤四项检测常见问题肝纤四项检测常见问题问题六：问题六：肝纤维化四项操作时要特别注意的问题有哪些？会导肝纤维化四项操作时要特别注意的问题有哪些？会导致什么后果？致什么后果？ 解释：解释：操作时需要特别注意的问题有：操作时需要特别注意的问题有：1）所有项目尽量减小加样误差，建议采用贴壁的加样方法，）所有项目尽量减小加样误差，建议采用贴壁的加样方法，为了防止为了防止HA和和PNP产品加样时污染，可采用加标本时贴微产品加样时污染，可采用加标本时贴微孔下壁，加孔下壁，加HA结合蛋白溶液或结合蛋白溶液或PNP抗体溶液时贴微孔上壁抗体溶液时贴微孔上壁的方法，或者加完标本时把板子水平

49、转动的方法，或者加完标本时把板子水平转动180度再加度再加HA结合蛋结合蛋白溶液或白溶液或PNP抗体溶液。当加样不准时会导致误差加大，污抗体溶液。当加样不准时会导致误差加大，污染则导致测定错误。染则导致测定错误。2）温育时使用水浴最佳，也可采用在水浴锅内放入试管架或）温育时使用水浴最佳，也可采用在水浴锅内放入试管架或医用托盘，上面铺上湿纱布，反应时将板子放在纱布上的做法，医用托盘，上面铺上湿纱布，反应时将板子放在纱布上的做法，还可以采用在温箱中放入铺有湿纱布的医用托盘的做法。以上还可以采用在温箱中放入铺有湿纱布的医用托盘的做法。以上建议的温育方法主要是为了消除边缘效应，提高测定的准确性，建议的温育方法主要是为了消除边缘效应，提高测定的准确性，使可重复性增强。如果直接把微孔板放在铁架子上，会使边缘使可重复性增强。如果直接把微孔板放在铁架子上，会使边缘微孔受热过快，发光值偏高，从而导致操作误差加大。微孔受热过快，发光值偏高，从而导致操作误差加大。肝纤四项检测常见问题肝纤四项检测常见问题问题七：问题七：通常胶原类蛋白免疫原性差