灭活剂和佐剂wangPPT学习教案

1、会计学1灭活剂和佐剂灭活剂和佐剂 wang第一页，共84页。一、灭活与灭活剂一、灭活与灭活剂第1页/共84页第二页，共84页。第2页/共84页第三页，共84页。第3页/共84页第四页，共84页。第4页/共84页第五页，共84页。热灭活：容易发生热灭活：容易发生(fshng)(fshng)菌体蛋白质变性菌体蛋白质变性超声波灭活：应放在冰浴中间断进行超声波灭活：应放在冰浴中间断进行紫外线灭活：不够好紫外线灭活：不够好射线照射灭活：根据被照射物的容量大小选射线照射灭活：根据被照射物的容量大小选择照射距离和照射强度。择照射距离和照射强度。第5页/共84页第六页，共84页。第6页/共84页第七页，共84

2、页。第7页/共84页第八页，共84页。1、甲醛、甲醛(ji qun)第8页/共84页第九页，共84页。甲醛的水溶液福尔马林(f r m ln) (含甲醛3640%) 灭活机理：还原作用 氨基氨基(nj) (nj) 甲基胺甲基胺 羧基羧基(su j) (su j) 亚甲亚甲基二醇单酯基二醇单酯 巯基巯基 亚甲基二醇亚甲基二醇 甲醛甲醛 醛基醛基 羟基羟基 羟基甲酚羟基甲酚第9页/共84页第十页，共84页。灭活浓度：需氧细菌灭活浓度：需氧细菌0.10.2，厌氧细，厌氧细菌菌0.40.5，病毒，病毒0.050.4。 灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的

3、。灭活目的。 必要必要(byo)时可在灭活后加入焦亚硫酸时可在灭活后加入焦亚硫酸钠，以中断其反应。钠，以中断其反应。第10页/共84页第十一页，共84页。N-乙酰乙烯亚胺（乙酰乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘、缩水甘油醛（油醛（GDA）灭活机制：灭活机制： 1. 烷化烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构的结构(jigu)而破坏其功能，妨碍而破坏其功能，妨碍RNA的合成，从而的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。抑制细胞的有丝分裂。 2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰

4、核酸代谢。与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。2. 烷化剂（烷化剂（Alkylating agent）第11页/共84页第十二页，共84页。优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而失感染力，而 不损害不损害(snhi)其蛋白衣壳，保其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。留其保护性抗原。 第12页/共84页第十三页，共84页。（1）N-乙酰乙烯亚胺（乙酰乙烯亚胺（AEI）淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。任意混合。04可保存可保存1年，在年，在-20可保存可保存2年。年。AEI功能基团是乙烯亚胺

5、基，可用于口蹄疫灭功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。活苗。口蹄疫病毒液口蹄疫病毒液: 终浓度终浓度(nngd)0.05，308h, 加加2硫代硫酸钠阻断硫代硫酸钠阻断第13页/共84页第十四页，共84页。（2）二乙烯亚胺（）二乙烯亚胺（BEI）市购商品为市购商品为0.2的的BEI溶液，在溶液，在04可保存可保存1个月个月;口蹄疫病毒口蹄疫病毒(bngd)悬液：终浓度悬液：终浓度0.02%, 加入加入2硫代硫酸钠中断灭活。硫代硫酸钠中断灭活。第14页/共84页第十五页，共84页。大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。醛。本品易挥发，水溶液

6、含量本品易挥发，水溶液含量(hnling)为为1531mg/ml。04 保存保存3个月后含量个月后含量(hnling)渐下降，约渐下降，约半年失效；半年失效；20只能保存只能保存10 d。 （3）缩水）缩水(su shu)甘油醛甘油醛（GDA）第15页/共84页第十六页，共84页。第16页/共84页第十七页，共84页。兰氏阳性菌生长繁殖受阻。第17页/共84页第十八页，共84页。第18页/共84页第十九页，共84页。第19页/共84页第二十页，共84页。第20页/共84页第二十一页，共84页。第21页/共84页第二十二页，共84页。第22页/共84页第二十三页，共84页。第二节第二节 佐剂佐剂

7、第23页/共84页第二十四页，共84页。佐剂是免疫学和生物制品学中的一个(y )重要内容 对增强对增强(zngqing)(zngqing)机体对抗机体对抗原的免疫应答，提高生物制品的原的免疫应答，提高生物制品的免疫效应发挥着重要作用免疫效应发挥着重要作用第24页/共84页第二十五页，共84页。什么(shn me)是 “佐剂”呢？第25页/共84页第二十六页，共84页。一、佐剂概念与作用一、佐剂概念与作用(zuyng)特点特点第26页/共84页第二十七页，共84页。 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫(miny)应答。 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足够的免疫(miny)应答。作

8、用作用(zuyng)特点：特点：第27页/共84页第二十八页，共84页。二、二、 研究研究(ynji)历史历史 1、起始(q sh)阶段 1916年年Moignar最早用羊毛脂与石蜡油制成伤最早用羊毛脂与石蜡油制成伤寒沙门氏菌乳剂苗；继后寒沙门氏菌乳剂苗；继后Prevet用羊毛脂加琼脂用羊毛脂加琼脂为佐剂制出炭疽菌苗。为佐剂制出炭疽菌苗。 1925年，年，Gaston Ramon证明证明(zhngmng)了明了明矾的佐剂作用。矾的佐剂作用。第28页/共84页第二十九页，共84页。2、1950年代年代(nindi) 为提高兽医(shuy)生物制品的免疫效果，在兽医(shuy)领域对佐剂进行了广泛

9、的研究。 用氢氧化铝胶吸附再加油佐剂制成的猪丹毒菌苗，用氢氧化铝胶吸附再加油佐剂制成的猪丹毒菌苗，免疫乳猪后的免疫力可持续免疫乳猪后的免疫力可持续(chx)9个月，比铝胶佐剂个月，比铝胶佐剂苗提高苗提高1倍。倍。第29页/共84页第三十页，共84页。3、1960年代年代(nindi)以后以后矿物油佐剂的研究(ynji)发展迅速l 布氏杆菌油佐剂苗（布氏杆菌油佐剂苗（1966）l 魏氏梭菌油佐剂苗（魏氏梭菌油佐剂苗（1966）l 流感流感(li n)油乳剂苗（油乳剂苗（1977）l 禽支原体禽支原体+新城疫油乳剂二联（新城疫油乳剂二联（1978）l 链球菌链球菌+葡萄球菌乳剂二联苗（葡萄球菌乳剂

10、二联苗（1984）第30页/共84页第三十一页，共84页。4、我国的佐剂的研究、我国的佐剂的研究(ynji)佐剂的研究和佐剂苗的生产(shngchn)，始于1950年代。 1958年曾用羊毛脂和液体石蜡油制造猪丹毒年曾用羊毛脂和液体石蜡油制造猪丹毒油乳剂苗，但效果不理想。油乳剂苗，但效果不理想。 1980年代年代(nindi)以来，对白油佐剂的研究和以来，对白油佐剂的研究和应用发展极快，尤以禽病白油佐剂疫苗的种类应用发展极快，尤以禽病白油佐剂疫苗的种类更多，使用效果也比较满意。更多，使用效果也比较满意。第31页/共84页第三十二页，共84页。WHO认为(rnwi)佐剂除具有免疫增强效应外，尚必

11、须具备下列标准，否则不得用作佐剂。三、佐剂标准三、佐剂标准(biozhn)第32页/共84页第三十三页，共84页。1、无致癌或辅助、无致癌或辅助(fzh)致癌性致癌性不能诱导或促进不能诱导或促进(cjn)肿瘤形肿瘤形成。成。2、安全、安全(nqun)无毒性无毒性通过通过肌肉、皮下、静脉、腹腔、滴鼻、口服肌肉、皮下、静脉、腹腔、滴鼻、口服等等各种途径进入动物体后无任何副作用。各种途径进入动物体后无任何副作用。3、纯度高、杂质少、纯度高、杂质少杂质往往是副作用的诱发物。因此，佐剂必需杂质往往是副作用的诱发物。因此，佐剂必需符合质量标准。符合质量标准。第33页/共84页第三十四页，共84页。4、应有

12、一定、应有一定(ydng)的吸的吸附力附力 最好吸附力强最好吸附力强5、在动物体内易降解、在动物体内易降解 不宜长时期不宜长时期(shq)留存而诱发组留存而诱发组织损伤织损伤6、不含与动物有交叉的抗原、不含与动物有交叉的抗原 以避免诱发自身以避免诱发自身(zshn)免疫反应，防止免疫反应，防止发生自身发生自身(zshn)免疫性疾病。免疫性疾病。第34页/共84页第三十五页，共84页。7、不应诱发、不应诱发(yuf)自身超敏性自身超敏性 也不应与抗体结合形成有害的免疫复合也不应与抗体结合形成有害的免疫复合物。物。8、应性质稳定、应性质稳定(wndng) 佐剂抗原混合物储存佐剂抗原混合物储存1年以

13、上，必须不年以上，必须不分解、不变质和不产生不良物质。分解、不变质和不产生不良物质。第35页/共84页第三十六页，共84页。四、免疫佐剂作用四、免疫佐剂作用(zuyng)机理机理 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原；改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性；性； 延长抗原在组织内的贮存延长抗原在组织内的贮存(zhcn)时间，使抗原缓慢降时间，使抗原缓慢降解和缓释，并发挥免疫系统的细胞间协同作用（巨噬细胞解和缓释，并发挥免疫系统的细胞间协同作用（巨噬细胞与与T细胞，细胞，T细胞与细胞与

14、B细胞）。细胞）。 作用作用(zuyng)方式方式第36页/共84页第三十七页，共84页。 抗原抗原(kngyun)递呈（递呈（antigen presentation） 抗原抗原(kngyun)寻的（寻的（antigen targeting） 免疫调节（免疫调节（immune modulation） 作用作用(zuyng)机机理理第37页/共84页第三十八页，共84页。抗原递呈：抗原递呈： 指抗原分子递呈给指抗原分子递呈给T细胞的方法细胞的方法(fngf)。佐剂与疫。佐剂与疫苗联合使用，有助于抗原性物质在胞内被加工，被苗联合使用，有助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异分子特异性的结合

15、、保护、运输并递呈给效应细胞。性的结合、保护、运输并递呈给效应细胞。第38页/共84页第三十九页，共84页。 抗原寻的（抗原寻的（antigen targeting） 指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括吸引巨噬细胞到达组织部位、活化包括吸引巨噬细胞到达组织部位、活化(huhu)吞吞噬细胞、促进抗原与细胞受体的结合等。噬细胞、促进抗原与细胞受体的结合等。第39页/共84页第四十页，共84页。 免疫调节（免疫调节（immune modulation） 是指任何是指任何(rnh)可以修饰的免疫效应细胞对抗原或可以修饰的免疫效应细胞对抗原或表位进行

16、加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答的本质或强度。免疫应答的本质或强度。T细胞有细胞有Th1和和Th2两个亚类。两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用能够引起不同的免疫反应。同一抗原和不同佐剂一起使用能够引起不同的免疫反应。因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确的免疫因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确的免疫应答的目的。应答的目的。 第40页/共84页第四十一页，共84页。1. 按佐剂物理性质按佐剂物理性质 颗粒型佐剂颗粒型佐剂 非颗粒型佐剂非颗粒型佐剂2. 按佐剂的生物学性质（即按佐剂的生物学性质（即Ballanti分类法）

17、分类法） 微生物及其组分佐剂微生物及其组分佐剂 非微生物物质佐剂非微生物物质佐剂3. 按佐剂在体内存留按佐剂在体内存留(cn li)的时间的时间 贮存型佐剂（贮存型佐剂（depot type adjuvant） 非贮存型佐剂（非贮存型佐剂（non-depot type adjuvant）五、佐剂的分类五、佐剂的分类(fn li)(fn li)第41页/共84页第四十二页，共84页。六、常见六、常见(chn jin)的兽用免疫佐剂的兽用免疫佐剂1、矿物质类佐剂、矿物质类佐剂 矿物质佐剂是传统矿物质佐剂是传统(chuntng)佐剂中的一类。佐剂中的一类。 在兽用疫苗的制备中广泛使在兽用疫苗的制备中

18、广泛使用。用。氢氧化铝氢氧化铝(qn yn hu hu)(qn yn hu hu)胶胶磷酸铝胶磷酸铝胶第42页/共84页第四十三页，共84页。特点 主要诱导体液免疫应答，可刺激机体(jt)迅速产生持久的高抗体水平。 比较安全。第43页/共84页第四十四页，共84页。缺点 皮下注射时常有肿胀或结块；不能有效刺激(cj)保护性T细胞免疫。 第44页/共84页第四十五页，共84页。2、油类佐剂、油类佐剂主要主要(zhyo)(zhyo)有有弗氏佐剂弗氏佐剂弗氏不完全弗氏不完全(wnqun)(wnqun)佐佐剂剂弗氏完全弗氏完全(wnqun)(wnqun)佐佐剂剂白油佐剂白油佐剂第45页/共84页第四十

19、六页，共84页。 是指一类由油类物质、水溶液和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂。 该类佐剂主要在抗原寻的过程中起作用，使抗原在注射部位保持稳定，为抗原在淋巴系统中转运提供载体，增加单核细胞的形成和积聚。 油乳剂疫苗的免疫(miny)效力高低，直接与乳化作用的好坏及油、乳化剂质量有关。 油乳佐剂油乳佐剂第46页/共84页第四十七页，共84页。分为分为(fn wi)(fn wi)单相单相(dn xin)(dn xin)乳化佐剂乳化佐剂双相乳化双相乳化(rhu)(rhu)佐剂佐剂第47页/共84页第四十八页，共84页。单相单相(dn (dn xin)xin)乳化佐乳化佐剂剂（1）油包水（）油包水（ W

20、/O） 较粘稠，在机体内不易较粘稠，在机体内不易(b y)分散；但分散；但佐剂活性优良，为生物制品所采用的主要剂佐剂活性优良，为生物制品所采用的主要剂型型第48页/共84页第四十九页，共84页。（2）水包油）水包油 （O/W） 较稀薄，在机体较稀薄，在机体(jt)内易于分散；但佐剂内易于分散；但佐剂活性很低，生物制品中不采用。活性很低，生物制品中不采用。第49页/共84页第五十页，共84页。双相乳化双相乳化(rhu)(rhu)佐佐剂剂又分为(fn wi)水包油包水和油包水包油 型 粘度小，注射局部(jb)反应轻微， 易吸收和佐剂效应高 第50页/共84页第五十一页，共84页。 一种液体或粉末微

21、粒（分散相或内相）借助乳化一种液体或粉末微粒（分散相或内相）借助乳化剂、机械剂、机械(jxi)力的作用，分散悬浮于另一种不相溶的力的作用，分散悬浮于另一种不相溶的液体（连续相或外相）中从而形成稳定的分散体系。液体（连续相或外相）中从而形成稳定的分散体系。油乳佐剂原理油乳佐剂原理(yunl)第51页/共84页第五十二页，共84页。乳化剂乳化剂 指油乳剂中内相与(xingy)外相间的界面活性物质，具有促进和稳定两种互不相溶物形成乳剂。 如羊毛脂、如羊毛脂、Span-80、Arlacel-80、Tween-80、AtlsG-1471等。等。第52页/共84页第五十三页，共84页。乳化乳化(rhu)原

22、原理理 降低分散物的表面(biomin)张力，在微滴表面(biomin)上形成薄膜或双片层，以阻止微滴(粒)的相互凝结。第53页/共84页第五十四页，共84页。佛氏佛氏(f sh)(f sh)不不完全佐剂完全佐剂 是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂组成是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂组成(z chn)的一种贮藏性佐剂。的一种贮藏性佐剂。佛氏佛氏(f (f sh)sh)完全佐剂完全佐剂 在不完全佐剂的基础上加一定量的分支杆菌而在不完全佐剂的基础上加一定量的分支杆菌而成。成。 虽然具有一定的副作用，但其佐剂活性是其它物质虽然具有一定的副作用，但其佐剂活性是其它物质难于相比的。难于相比的。第54页

23、/共84页第五十五页，共84页。佛氏佛氏(f sh)佐剂佐剂的特点的特点 可使在正常状态下缺乏免疫原性的物质成为免疫原。 先作用于Th1细胞，后是Th2细胞，并能启动(qdng)细胞免疫而发挥作用。第55页/共84页第五十六页，共84页。国外常用国外常用(chn yn)白油：白油：Drakocel-6VR、Marcol-52和和Lipolul-4国内常用国内常用(chn yn)白油：白油：7号或号或10号白油号白油质量标准质量标准: 无色无味；无色无味； 50运动粘度运动粘度7m2s左右；左右； 紫外吸收值（紫外吸收值（250-350）0.1，紫外消光系数，紫外消光系数12108； 单环芳烃与

24、双环芳烃含量低于单环芳烃与双环芳烃含量低于0.5，无多环芳烃；，无多环芳烃； 小鼠腹腔注射小鼠腹腔注射0.5ml 观察观察160d 或家免皮下注射或家免皮下注射2.0ml白油观察白油观察60d，表现正常。，表现正常。白油佐剂白油佐剂第56页/共84页第五十七页，共84页。第57页/共84页第五十八页，共84页。（1）剂在水中法：）剂在水中法： 将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生成加入，可直接生成O/W乳剂。若欲得乳剂。若欲得W/O型，可型，可继续加入油，直到发生变型。该法通常用匀浆继续加入油，直到发生变型。该法通常用匀浆(yn jin)器

25、或胶体磨，高速搅拌而得到较好的器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。乳剂。油乳佐剂乳化油乳佐剂乳化(rhu)方法方法第58页/共84页第五十九页，共84页。（2）剂在油中法：）剂在油中法： 将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得O/W，如水相直接加入油相，得到，如水相直接加入油相，得到W/O型，如欲得型，如欲得O/W，继续加入至变型。该法制成的乳剂，继续加入至变型。该法制成的乳剂(rj)，一般，一般均匀颗粒直径在均匀颗粒直径在0.5m左右，比较稳定。左右，比较稳定。第59页/共84页第六十页，共84页。免疫实验动物用的佐剂配制免疫实验动物用的佐剂配制:

26、 (1)弗氏佐剂：矿物油弗氏佐剂：矿物油75%85，乳化，乳化剂剂1525%，混合后经除菌过滤而成为，混合后经除菌过滤而成为FIA；如向其中加入；如向其中加入0.5mgm1死结核杆死结核杆菌即为菌即为FCA。使用时，将含抗原的水相，。使用时，将含抗原的水相，与上述任一佐剂等量混合，用力振摇即与上述任一佐剂等量混合，用力振摇即可成为均匀的乳剂。可成为均匀的乳剂。(2) 白油佐剂：白油佐剂：9份油和份油和1份份Span-80混合混合后加后加2Tween-80和和12%硬脂酸铝，硬脂酸铝，经高压灭菌后备用，注射前将配好的油经高压灭菌后备用，注射前将配好的油佐剂与抗原水相佐剂与抗原水相1：1混合，强力

27、振摇，混合，强力振摇，可配制成性状良好可配制成性状良好(lingho)的乳剂疫苗。的乳剂疫苗。第60页/共84页第六十一页，共84页。大量生产白油乳剂疫苗大量生产白油乳剂疫苗: 油相油相: 94白油、白油、6Span-80、1%2硬脂酸铝，灭菌即可；硬脂酸铝，灭菌即可； 水相：抗原液加水相：抗原液加24% Span-80; 乳化：将油相与水相按乳化：将油相与水相按3：12：1比例配比例配制，先缓速混合，再通过胶体磨充分制，先缓速混合，再通过胶体磨充分(chngfn)乳化，可获得稳定的油包水乳乳化，可获得稳定的油包水乳剂苗。或者将粘稠的剂苗。或者将粘稠的W/O乳剂疫苗，再加乳剂疫苗，再加2 Tw

28、een-80 生理盐水，通过搅拌或胶体生理盐水，通过搅拌或胶体磨乳化，可制成双相乳剂疫苗。磨乳化，可制成双相乳剂疫苗。 第61页/共84页第六十二页，共84页。（1）粘度测定：流出法、Saybolt粘度计法吸管内口直径为1.2 mm，室温下吸满l ml乳剂，垂直放出0.4 ml所需时间作为粘度单位(dnwi)。以 2-6 S为合格，不得多于10-15 S。（2）乳剂稳定性测定： 加速老化法：疫苗于37贮存10-30 d不破乳。 离心加速分层法：于半径10 cm离心管装油乳剂，3000 rpm离心15 min不分层，相当于保存1年以上不破乳。油乳佐剂检验油乳佐剂检验(jinyn)第62页/共84

29、页第六十三页，共84页。3、蜂胶佐剂、蜂胶佐剂 是一种优良的天然药物； 具有广泛的生物活性和药理作用（抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎）； 具有免疫增强作用：能保持抗原(kngyun)特性，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的产生，提高机体的特异性和非特异性免疫力。 第63页/共84页第六十四页，共84页。（1）蜂胶的处理：）蜂胶的处理： 蜂胶（蜂胶（4以下贮存）以下贮存） 粉碎过筛粉碎过筛 按按1：4（W/V）加）加95乙醇乙醇 室温浸泡室温浸泡2448h 冷却冷却 过滤或离心取上清过滤或离心取上清 透明栗色纯净透明栗色纯净(chnjng)蜂胶蜂胶浸液浸液 4以下保存备用以下保存备用 除去干渣计算出

30、浸液除去干渣计算出浸液中含蜂胶量。中含蜂胶量。（2）蜂胶佐剂疫苗的制备：）蜂胶佐剂疫苗的制备： 灭活菌液或病毒液，加入蜂胶乙醇浸液，使每毫灭活菌液或病毒液，加入蜂胶乙醇浸液，使每毫升菌液中含蜂胶升菌液中含蜂胶10mg，边加边摇荡，成为乳浊状，边加边摇荡，成为乳浊状，即可。即可。 蜂胶佐剂疫苗制备蜂胶佐剂疫苗制备(zhbi)方法：方法：第64页/共84页第六十五页，共84页。1 1、细胞因子类佐剂、细胞因子类佐剂 细胞因子的概念细胞因子的概念 是机体的各种细胞在其生命周期中所释放是机体的各种细胞在其生命周期中所释放的具有不同生物学效应的物质，是免疫的具有不同生物学效应的物质，是免疫(miny)细

31、胞间相互作用的调节信号。该类物质相互诱细胞间相互作用的调节信号。该类物质相互诱生，相互影响，构成一个巨大的细胞因子网络生，相互影响，构成一个巨大的细胞因子网络（cytokine network）系统，各种细胞借助自己）系统，各种细胞借助自己所释放的细胞因子完成各自的功能，在免疫所释放的细胞因子完成各自的功能，在免疫(miny)应答中发挥作用。应答中发挥作用。七、新型七、新型(xnxng)(xnxng)佐剂佐剂第65页/共84页第六十六页，共84页。细胞因子的分类（根据生物活性）细胞因子的分类（根据生物活性）经典的细胞因子：经典的细胞因子： 淋巴毒素（淋巴毒素（LT）、肿瘤坏死因子（）、肿瘤坏死

32、因子（TNF）、）、干扰素（干扰素（INF）2. 对体液对体液(ty)免疫和细胞免疫具有调节作用的免疫和细胞免疫具有调节作用的因子：因子： 白细胞介素（白细胞介素（IL）和集落刺激因子（）和集落刺激因子（CSF）第66页/共84页第六十七页，共84页。第67页/共84页第六十八页，共84页。1作为免疫佐剂，提高疫苗的免疫效果作为免疫佐剂，提高疫苗的免疫效果2作为免疫治疗剂，预防和治疗某些病原感染作为免疫治疗剂，预防和治疗某些病原感染3通过基因通过基因(jyn)重组，构建新型基因重组，构建新型基因(jyn)工程工程疫苗疫苗 IL-2-AIV-HA重组痘病毒重组痘病毒细 胞 因 子 的 应 用细

33、胞 因 子 的 应 用(yngyng)(yngyng)第68页/共84页第六十九页，共84页。几种几种(j zhn)(j zhn)重要的重要的细胞因子细胞因子 白细胞介素白细胞介素-2（IL-2） 白细胞介素白细胞介素-4（IL-4） 白细胞介素白细胞介素-12（IL-12） -干扰素（干扰素（IFN-）第69页/共84页第七十页，共84页。 刺激物为抗原(kngyun)或促有丝分裂原（ConA）； T细胞分泌； 无抗原(kngyun)特异性。 糖蛋白，含133aa ，分子量15-35kDa； 70 30 min及pH值2-9范围内稳定。IL-2第70页/共84页第七十一页，共84页。刺激物：

34、抗原或丝裂原；由刺激物：抗原或丝裂原；由Th细胞产生细胞产生分子量分子量1520kDa，有，有23个糖基化部位个糖基化部位(bwi)，140个氨基酸个氨基酸一种强有力的佐剂候选因子一种强有力的佐剂候选因子IL-4第71页/共84页第七十二页，共84页。n 是目前发现的唯一主要由B细胞产生的细胞因子，与IL-2有协同作用，所以(suy)曾被称为细胞毒淋巴细胞成熟因子（CLMF）和天然杀伤细胞刺激因子（NKSF）。n 糖蛋白，分子量75kDa，由40kDa（P40）和35kDa（P35）两个亚单位构成，两个亚单位完全由不同的基因所编码，只有结合为一个完整的分子时才能发挥生物学活性。n IL-12活

35、性高于IL-2和IFN，在极低浓度时就有显著活性，对灭活疫苗、肿瘤和寄生虫抗原具有有效的佐剂活性。n IL-12诱导产生的Th1应答反应尤为引人注目，可望用于主要诱导细胞免疫应答的疫苗佐剂。 IL-12第72页/共84页第七十三页，共84页。 由致敏T细胞在活的或灭活的病毒等干扰素诱生剂和某些细胞因子作用下所产生； 有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和免疫佐剂等免疫生物学活性。 主要诱导MHC-II的表达。 目前IFN-与抗原杂合的融合分子的研究是个热点，期待其成为一个(y )有效的佐剂。IFN-第73页/共84页第七十四页，共84页。2、CpG DNA CpG DNA：指含有非甲基化：指含有非甲基化

36、CpG（胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸）基序（胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸）基序的脱氧核糖核酸的脱氧核糖核酸DNA。 CpG基序（基序（ motif）：指以非甲基化的）：指以非甲基化的CpG为基元构成的回文序列，为基元构成的回文序列，其碱基排列大多为其碱基排列大多为5-Pur-Pur-CpG-Pyr-Pyr-3，具有，具有(jyu)较强免疫较强免疫活性，称为免疫刺激序列（活性，称为免疫刺激序列（ISS，immunostimulatory DNA sequences）。）。 CpG OND：含有非甲基化：含有非甲基化CpG基序的寡聚脱氧核苷酸基序的寡聚脱氧核苷酸 。第74页/共84页第七十五页，共84页。细胞细胞

37、(xbo)因子的分泌和细胞因子的分泌和细胞(xbo)的分化的分化CpGDNA的免疫刺激效应的免疫刺激效应(xioyng)（作用机制）（作用机制）温度温度(wnd)能量能量酸化内体小泡酸化内体小泡DNA-PKTLR-9胞质内受体蛋白胞质内受体蛋白有丝分裂原蛋白激酶和有丝分裂原蛋白激酶和转录因子等信号通路转录因子等信号通路第75页/共84页第七十六页，共84页。 引起引起B细胞分化，分泌细胞分化，分泌(fnm)IL-6、IL-10等细胞因子和表达等细胞因子和表达MHCII、B7-1、B7-2等表面分子，并阻止等表面分子，并阻止B细胞的凋亡。细胞的凋亡。 直接激活单核细胞、巨噬细胞和树突细胞，分泌直

38、接激活单核细胞、巨噬细胞和树突细胞，分泌(fnm)IL-12、INF-r等等Thl样为主的细胞因子，并刺激样为主的细胞因子，并刺激MHCII、B7-1、B7-2的表达。的表达。CpG DNA对多种免疫细胞有激活对多种免疫细胞有激活(j hu)作用作用 第76页/共84页第七十七页，共84页。在在IL-12协同下激活协同下激活NK细胞，杀伤活性增强，并分细胞，杀伤活性增强，并分泌泌IFN-r，IFN-r反过来进一步促进单核细胞、巨噬反过来进一步促进单核细胞、巨噬细胞和树突细胞的激活。细胞和树突细胞的激活。 协同刺激抗原特异性协同刺激抗原特异性B细胞和细胞和T细胞分化，在细胞分化，在Thl细细胞因子的作用下，显著增强获得性细