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1、第三章:氨基酸、肽类、蛋白质化学一、填充题1 组成蛋白质氨基酸的结构通式是()。2 具有紫外吸收能力的氨基酸有()、()和(),其中以()的吸收最强。3 脯氨酸是()氨基酸,与苛三酮反应生成()色物质。4()和()是相对分子质量小且不含硫的氨基酸,在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。5 范斯莱克(VanSlyke)法测定氨基氮主要利用()与()作用生成()。6 实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应,然后用碱来滴定()上放出的()。7 赖氨酸带三个解离基团,它们的 pK 分别为 2.18,8.95 及 10.53。赖氨酸的等电点为()。8 肽链的 N 末端可以用()法、()
2、法、()法和()法测定,而()法和()法是测定 C 末端氨基酸最常用的方法。)。9 蛋白质分子的 a-螺旋结构,每圈螺旋包含()个氨基酸残基,螺距为()nm,每个氨基酸残基沿轴上升高度为()nm。天然蛋白质分子中的 a-螺旋大多属于()手螺旋。二、是非题1 某化合物和苛三酮反应呈蓝紫色,因而可以断定它是氨基酸或是蛋白质。()2 亮氨酸疏水性比缴氨酸强。()3 氨基酸在水溶液或在晶体状态时都以两性离子形式存在。()4 合成的多聚谷氨酸在 pH7 时,其丫-竣基电离为-COO-,由于静电相斥,分子较松散,在pH4 时并不电离,容易形成螺旋结构。()5 溶液的 pH 可以影响氨基酸的 pI 值。()
3、6 组氨酸是人体的一种半必需氨基酸。()7 蛋白质分子中个别氨基酸的取代未必会引起蛋白质活性的改变。()8 二硫键和蛋白质的三级结构密切有关,因此没有二硫键的蛋白质就没有三级结构。()9 凝胶过滤法可用于测定蛋白质的分子量,分子量小的蛋白质先流出柱,分子量大的后流出柱。()10 蛋白质在小于等电点的 pH 溶液中,向阳极移动,而在大于等电点的 pH 溶液中,将向阴极移动。()三、选择题1 下列哪种氨基酸溶液不能引起偏振光的旋转()A 丙氨酸 B 甘氨酸 C 亮氨酸 D 丝氨酸2 下列氨基酸在生理 pH 范围内缓冲能量最大的是()AGlyBHisCCysDAsp3 分子中含有两个不对称碳原子的氨
4、基酸是()AProBTyrCThrDArg4 氨基酸不具有的化学反应是()A 双缩月尿反应 B 苛三酮反应 CDNFB 反应 DPITC 反应5 用纸层析分离丙氨酸、亮氨酸和赖氨酸的混合物,则它们之间 Rf 的关系应为()AAlaLeuLysBLysAlaLeuCLeuAlaLysDLeuLysAla7 下列哪种氨基酸有米伦(Millon)反应()ATrpBTyrCPheDArg8Pauly 试剂是将对氨基苯磺酸的重氮化合物喷洒到滤纸上,定性检测蛋白质的试剂,在蛋白质的地方显橘红色。它的生色反应是发生在蛋白质内的()A 色氨酸的口引味环 B 半胱氨酸的疏基C 组氨酸的 a 氨基 D 酪氨酸的酚
5、羟基9 在组蛋白的组氨酸侧链上进行()以调节其生物功能。A 磷酸化 B 糖基化 C 乙酰化 D 羟基化11 如果要测定一个小肽的氨基酸顺序,下列试剂中选择一个你认为最合适的()A 苛三酮 BCNBrC 胰蛋白酶 D 异硫鼠酸苯酯13 蛋白质可与碱共热水解,虽然这个过程会破坏一些氨基酸,但它却被常用来定量蛋白质的()ASerBCysCThrDTrp14 在 pH7 的水溶液里,在典型的球状蛋白分子中,处于分子的内部的氨基酸残基经常是()AGluBPheCThrDAsn16 胰蛋白酶专一水解多肽键中()A 碱性残基 N 端 B 酸性残基 N 端C 碱性残基 C 端 D 酸性残基 C 端17 竣肽酶
6、 C 专门水解 C 端倒数第二位是哪个氨基酸形成的肽链()AArgBLysCCysDPro18 下列蛋白质中,()不是糖蛋白A 免疫球蛋白 B 溶菌酶 C 转铁蛋白 D 胶原蛋白19 血红蛋白的氧合曲线向右移动是由于()AO2分压的减少 BCO2分压的减少CCQ 分压的增加 DpH 值的增加20SDS 凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量是根据各种蛋白质()A 在一定 pH 值下所带净电荷的不同B 分子大小不同 C 分子极性不同D 溶解度不同四、问答及计算题1 试命名下列氨基酸(均存在于蛋白质中)(1)用强酸或强碱处理能转变成存在于蛋白质中的另一种氨基酸。(2)空气中即可氧化为存在于蛋白质中的另一
7、种氨基酸。(3)能在 279nm 强烈吸收紫外光,易为强酸所破坏。(4)在 pH*pH8 内有缓冲能力。(5)与苗三酮反应生成一种黄色产物。(6)其水溶液无旋光性。2 分析下列 4 个肽的混合物,在 Dowex-1(一种阴离子交换树脂)的离子交换柱上以从 pH10-1.0 连续变化的缓冲系统作洗脱,试说出每种肽洗脱的相对次序。A 赖-甘-丙-甘 B 赖-甘-丙-谷C 谷-甘-丙-谷 D 组-甘-丙-谷3 某一条肽经酸水解组成分析含 5 种氨基酸,其 N 端非常容易环化。经 CNBr 处理后得一游离碱性氨基酸, Pauly 反应阳性。 若用胰蛋白酶作用则得两个肽段; 其一为坂口反应阳性, 另一在
8、 280nm有强的光吸收,并呈 Millon 氏阳性反应。求此肽段氨基酸排列顺序,并指出它的等电点应该是大于、等于或小于 pH7。4 蛋白质化学中常用的试剂有下列一些:CNBr;尿素,3-疏基乙醇,胰蛋白酶,过甲酸,丹磺酰氯,6mol/LHCl,苛三酮,异硫鼠酸苯酯和胰凝乳蛋白酶等。为完成下列各项试验,请回答每项的最适试剂是什么?(1)一个小肽的氨基酸顺序的测定(2)多肽链的氨基末端的测定(3)一个没有二硫键的蛋白质的可逆变性(4)芳香族氨基酸残基的竣基一侧肽键的水解(5)甲硫氨酸的竣基一侧肽键的裂解(6)通过氧化途径将二硫键打开参考答案二、是非题27 对 28 对 29 错 30 错三、选择
9、题四、问答及计算题2)半胱氨酸(3)色氨酸(4)组氨酸(5)脯氨酸(6)甘氨酸24 个肽被洗脱下来的先合顺序依次为 AfB-D-C。3 该五肽的顺序为:谷氨酰-精氨酰-酪氨酰-甲硫氨酰-组氨酰。此肽段的等电点大于 7。4(1)异硫氟酸苯酯(2)丹磺酰氯(3)尿素(4)胰凝乳蛋白酶(5)CNBr(6)过甲酸。第三章:酶化学对 15 错3 对 4 对 5 错 6 对 7 对 8 错 9 错 10 错16 对 17 错 18 对 19 错 20 对11 错 12 错 13 对 1421 错 22 错 23 错 24 对 25 对 26 错1B2B3C4A5C6C7B14B15C16C17D18B8D
10、9A10C11D12A19C20B21B22D23D13D24A25C26D27A28B29C30A31B32A33D34A35D1(1)谷氨酰胺或天冬酰胺(1 全酶是由()组成,在催化反应时,二者所起的作用不一、填充题二、是非题1 与非酶反应相比,酶反应能使更多的底物变成为产物。()2 酶影响它怕催化反应的平衡的到达时间。()3 辅基与辅酶的区别只在于它们与蛋白质结合的牢固程度不同,并无严格的界限。()4 氧化酶都含有细胞色素。()5 酶反应最适 pH 只取决于酶蛋白本身结构。()6 在极低底物浓度时,酶促反应初速度与底物浓度成正比。()7 做为辅因子的金属离子,一般并不参与酶活性中心的形成
11、。()8 底物与酶的活性中心靠共价键结合,以提高催化效率。()9 测定反应的最适温度时,先将酶在不同温度下保温一段时间,然后在 30c 下测定酶活性。()10Km 值是酶的一种特征性常数,有的酶虽可以有几种底物,但其 Km 值都是固定不变的。三、选择题1 在测定酶活力是,用下列哪种方法处理酶和底物才合理()A 其中一种用缓冲液配制即可 B 分别用缓冲液配制,然后混合进行反应C 先混合,然后保温进行反应D 分别用缓冲液配制,再预保温两者,最后混合进行反应2 假定一种酶只有当某一特定的组氨酸残基侧链未被质子化时,酶分子才具有活性,降低pH 对于该酶会发生下列哪一种类型的抑制作用。()A 反竞争性
12、B 非竞争性 C 竞争性 D 混合型3 酶的纯粹竞争性抑制具有下列哪种动力学效应()AVmax 不变,Km 增大 BVmax 不变,Km 减少CVmax 增大,Km 减小 DVmax 增大,Km 不变4 酶与底物分子间的关系可以恰当地表述成()A 一种临时性结合 B 通过共价键的一种稳定结合C 酶在其中发生永久性改变的一种结合同,其中()决定酶的专一性和高效率,子或化学基团的作用。)起传递电子、原2 酶活性中心往往处于酶分子表面的(物之间的作用加强。)中,形成()区,从而使酶与底3T.R.Cech 和 S.Altman 因各自发现了()而共同获得 1989 年的诺贝尔化学奖。4 金属离子对酶的
13、激活作用有两种,一是作为(),二是作为()。5 乳酸脱氢酶有()种()个亚基组成。体内有()种乳酸脱氢酶的同工酶,在临床诊断上有应用价值。6 胰蛋白酶的专一性就是在()残基右侧的肽键上水解;竣肽酶 B 专一性地从蛋白质的竣厥切下()氨基酸。7 同一种酶有 n 个底物,就有()个 Km 值,其中 Km 值最(便为该酶的最适底物。)的底物,8 测定酶活力时,底物浓度应(),反应时间应在反应的(),反应温度应选在()期进行。),反应 pH 选在9 表不酶量的多少常用()表不。D 随机的非互补结合5 已知胰凝乳蛋白酶的转换数是 100s1,DNA 聚合酶是 15s-1。下列说法正确的是()A 胰凝乳蛋
14、白酶的底物结合常数高于 DNA 聚合酶B 胰凝乳蛋白酶反应速度比 DNA 聚合酶反应速度更大C 在一定的酶浓度和饱和底物水平下胰凝乳蛋白酶反应速度比 DNA 聚合酶在相同条件下更低D 在饱和底物水平下,胰凝乳蛋白酶的反应速度大约是 DNA 聚合酶反应速度的 6.7 倍四、问答及计算题1 何为酶的活力和比活力?测定酶活力时应注意什么?为什么测定酶活力时以测定初速度为宜,并且底物浓度远远大于酶浓度?2 已糖激酶溶液在 45C,12min 内会丢失 50%活性。但是当有大量底物葡萄糖存在时,该酶在 45c 只丢失 3%活性。试解释此现象。9 甘油醛-3-磷酸脱氢酶,相对分子质量为 4 万,由 4 个
15、相同亚基组成,每个亚基上有一个活性位点,在最适条件下,5ug 纯酶制品每分钟可以催化 2.8umol 甘油醛-3-磷酸转化为甘油酸-3-磷酸。请计算酶的比活力和单个活性位点的转换数。10“-糜蛋白酶(Mr24000)可以水解苯甲酰-L-酪氨酸乙酯。比活为 45.0umol/min/mg 酶。已知“-糜蛋白酶只有一个活性位点。求转换数。11(1)对于一个遵循米氏动力学的酶而言,当S=Km 时,若 u=35umol/min,Vmax 是多少 umol/min?u=40umol/min,这个酶的 Km 是多少?KI=4X10-5mol/L,当S=3x10-2mol/L 和I=3x10-5mol/L1
16、2 在不同底物浓度的反应体系中,分别测有无抑制剂存在时的 u,数据如下:有 I(2.2X10-4mol/L)v(pmol/min)Vmax和 Km(K,m),并判断这种抑制剂是什么类型的抑制剂。13称取 25mg 蛋白酶粉配制成 25mL 酶溶液,从中取出 0.1mL 酶液,以酪蛋白为底物,用Folin-酚比色法测定酶活力,得各每小时产生 1500ug 酪氨酸。另取 2mL 酶液,用凯氏定氮法测得蛋白氮为 0.2mg。 若以每分钟产生 1ug 酪氨酸的酶量为 1 个活力单位计算, 根据以上数据, 求出:(1)1mL 酶液中所含蛋白质量及活力单位;(2)比活力;(3)1g 酶制剂的总蛋白量及总活
17、力。S无 Imol/L(X10-4)v(gol/min)1.028171.536232.043295.065507.57461(2)当网=2X10-5mol/L,(3)若 I 表示竞争性抑制剂,时,U 是多少?求有无抑制剂存在时的参考答案一、填充题11 绝对立体 12T/Km1/Vmax13 亚基解离14 正碳离子五价磷过渡态 Zn2+-活化水四面体肽键氧阴离子活化水15 无酶时不反应被靶酶专一性激活与靶酶反应必须比解离更为迅速,即 K1Kdis16 最慢的第一步反应 17 酶活性中心 18 别构酶共价调节酶齐变序变19 丝氨酸 20 蛋白激酶蛋白磷酸酯酶21 糖基化乙酰化丫-竣基化 ADP-
18、核糖基化 22 天冬氨酸组氨酸23 腺昔酰化脱腺甘酰化 24 比活力总活力 25 增大变小二、是非题1 错 2 对 3 对 4 错 5 错 6 对 7 错 8 错 9 错 10 错 11 对 12 对 13 错 14 对15 错 16 错 17 错 18 错 19 对 20 对 21 对 22 错 23 对 24 错 25 对26 对 27 错 28 错 29 错 30 对三、选择题1D2B3A4A5D6D7D8B9A10C11C12B13A14B15A16B17B18B19C20D四、问答及计算题1 酶活力指酶催化某一化学反应的能力,可以用一定条件下所催化的化学反应的反应速度来表不。酶比活力
19、指一定量的酶,例如 1mg 或 1g 等,所具有的总的活力。由于酶催化的反应只在反应初始阶段具有恒定的速率,因此测定酶的活力以测定初速度为宜。由于酶的活性受到测定环境如底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等影响,因此酶活力测定要选择最适条件,包括最适 pH 最适温度、最适底物浓度、最适离子强度等。由于酶活力与酶量是成正比的,为保证所有的酶都能结合底物,参与反应,底物浓度要远远大于酶浓度。2 已糖激酶能催化葡萄糖与 ATP 反应,使葡萄糖磷酸化。在无 ATP 时,葡萄糖与已糖激酶结合,能稳定游离酶分子,抵抗酶变性。由于无 ATP,不会发生上述反应。9 比活力=2.8U/5x10-3mg=560U
20、/mg转换数/活性位点=2.8umol/min+(5ug/40000ug/umolX4)=5600/min=93.3/s10 转换数=45.0 x10-6x1000 x24000=1080/min11 答:(1)Vmax=70umol/min(2)Km=1.5x10-5mol/L(3)因为,SKm,I,所以,u=Vmax=70umol/min12 答:先分别求出 1/S,1/V,1/V,作 1/Vs1/S,1Ns1/S图,从图中求出:1/Vmax=0.01min/molVmax=100gol/min-1/Km=-3.7X103L/molKm=2.7x10-4mol/L1 酶蛋白辅酶因子酶蛋白4
21、 酶的辅助因子直接的激活剂8 远远超过酶浓度最适温度辅酶因子52最适凹穴5疏水 3 核酶(具有催化作用的 RNA)6 碱性氨基酸9 酶的活力单位数碱性 7n1081-1/Km=-2.0X103L/molKm=5X10-4mol/L因为 Vmax不变,Km 增大,所以是竞争性可逆抑制。13 答:(1)0.625mg 蛋白质;250U(2)400U/mg 蛋白质(3)0.625g;2.5X105U第五章:核酸化学一、填充题1、核酸完全的水解产物是()、()和()。其中()又可分为()碱和()碱。2、体内的喋吟主要有()和();喀咤碱主要有()、()和()。某些 RNA 分子中还含有微量的其它碱基,
22、称为()。3、喋吟环上的第()位氮原子与戊糖的第()位碳原子相连形成()键,通过这种键相连而成的化合物叫()。4、体内两种主要的环核甘酸是()和()。5、写出下列核甘酸符号的中文名称:ATP();dCDP()。6、RNA 的二级结构大多数是以单股()的形式存在,但也可局部盘曲形成()结构,典型的 tRNA 结构是()结构。7、tRNA 的三叶草型结构中有()环,()环,()环及()环,还有()。8、tRNA 的三叶草型结构中,其中氨基酸臂的功能是(),反密码环的功能是()。9、其中一股链为5ATGCC3的双螺旋 DNA 的互补链顺序是()。二、是非题1 稀有碱基是指细胞中含量很少的游离喋吟或喀
23、咤。()2 如果 DNA 样品 A 的 Tm低于 DNA 样品 B 的 Tm,那么样品 A 含有的 A-T 碱基对高于样品 B。()3 由于 DNA 是多阴离子,所以它的熔点随盐物质质量浓度增加而增加。()4 超速离心测定 DNA 相对分子质量时待测 DNA 溶液应具有较高浓度。()5“荷载的tRNA 指结合有氨基酸的 tRNA。()6 包括核糖体在内的所有 RNP,蛋白质是其主要的功能成分,核酸则作为结构成分。()7 用碱水解核酸,可以得到纯的 3/-核甘酸的混合物。()8 对于提纯的 DNA 样品,测得 OD260/OD280V1.8,则说明样品中有蛋白质残留。()9 真核生物成熟 mRN
24、A 的两端均带有游离的 3,-OH。()10rRNA 在蛋白质合成中只起到装配者作用,而 tRNA 不但具有携带氨酸功能并有解译作用。三、选择题1、自然界游离核甘酸中,磷酸最常见是位于()A 戊糖的 C-5 上 B 戊糖的 C-2 上C 戊糖的 C-3 上 D 戊糖的 C-2 和 C-5上2、可用于测量生物样品中核酸含量的元素是()A 碳 B 氢 C 氧 D 磷3、下列哪种碱基只存在于 RNA 而不存在于 DNA()A 尿喀咤 B 腺喋吟 C 胞喀咤 D 胸腺喀咤4、核酸中核甘酸之间的连接方式是()A2;3 磷酸二酯键 B 糖昔键C2;5 磷酸二酯键 D35 磷酸二酯键5、核酸对紫外线的最大吸
25、收峰在哪一波长附近()A280nmB260nmC200nm6、 DNA 变性是指()A 分子中磷酸二酯键断裂 B 多核甘酸链解聚CDNA 分子由超螺旋-双链双螺旋 D 互补碱基之间氢键断裂7、 DNATm 值较高是由于下列哪组核甘酸含量较高所致()AG+ABC+GCA+TDC+T8 某 DNA 分子中腺喋吟的含量为 15%,则胞喀咤的含量应为()A15%B30%C40%D35%9、寡聚 dT-纤维素柱层析用于()。A 从总 DNA 中分离纯化质粒 DNAB 从总核蛋白中分离出 DNPC 从总 RNA 中纯化 mRNAD 除去杂蛋白10、双链 DNA 热变性后()A 黏度下降 B 沉降系数下降 C 浮力密度下降 D 紫外吸收下降四、问答题1DNA 勺 Walson-Crick
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