关于液相色谱的定量分析

1、定量分析是在定性分析的基础上，需要纯物质作为标准样品。液相色谱的定量是相对的定量方法，即：由已知的标准样品推算出被测样品的量。液相色谱法定量的依据被测组分的量（W）与响应值（A）（峰高或峰面积）成正比,W=fXA。定量校正因子（f）:是定量计算公式的比例常数，其物理意义时单位响应值（峰面积）所代表的被测组分的量。由已知标准样品的量和其响应值可以求得定量校正因子。测定未知组分的响应值，通过定量校正因子即可求得该组分的量。定量分析常用术语:样品（sample）：含有带测物，供色谱分析的溶液。分为标样和未知样。标样（standard）：浓度已知的纯品。未知样（unknow）：浓度待测的混合物。样品量

2、（sampleweight）:待测样品的原始称样量。稀释度（dilution）:未知样的稀释倍数。组分（componance）:欲做定量分析的色谱峰，即含量未知的被测物。组分的量（amount）:被测物质的含量（或浓度）。积分（integerity）:由计算机对色谱峰进行的峰面积测量的计算过程。校正曲线（calibrationcurve）:组分含量对响应值的线性曲线，由已知量的标准物建立，用于测定待测物的未知含量。常用的定量方法1外标法标准曲线法，分为外标法和内标法。外标法在液相色谱中用的最多。内标法准确但是麻烦，在标准方法中用的最多。用被测化合物的纯品作为标准样品，配制成一系列的已知浓度的标

3、样。注入色谱柱的到其响应值（峰面积）。在一定范围内，标样的浓度与响应值之间存在较好的线性关系，即W=fXA，制成标准曲线。在完全相同的实验条件下，注入未知样品，得到欲测组分的响应值。根据已知的系数f,即可求出欲测组分的浓度。外标法的优点操作、计算简单，是一种常用的定量方法；无需各组分都被检出、洗脱；需要标样；标样及未知样品的测定条件要一致；进样体积要准确。外标法缺点实验条件要求高，如检测器的灵敏度，流速、流动相组成的不能发生变化；每次进样体积要有好的重复性。2内标法操作：将已知量的内标样加入标准样品，制成混合标样，并配制一系列的已知浓度的工作标样。混合标样中标样与内标样的摩尔比不变。注入色谱柱

4、，以（标样峰面积/内标样峰面积）为响应值。根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系，即W=fXA，制成标准曲线。将已知量的内标样加入未知样品，注入色谱柱，得到欲测组分的响应值。根据已知的系数f,即可求出欲测组分的浓度。内标法的特点：操作过程中样品和内标是混合在一起注入色谱柱的，因此只要混合溶液中被测组分与内标的量的比值恒定，上样体积的变化不会影响影响定量结果。内标法抵消了上样体积，乃至流动相、检测器的影响，因此比外标法精确。案例分析案例分析一我做的是苯酚羟基化反应，产物中有苯酚，苯二酚（邻，对），苯醌，焦油，用安捷伦1100液相色谱分析，外标法计算选择性和转化率。但一直以来，计算出的结果老是

5、差强人意。偶尔算出一个好的结果，但是一重复又不行了，有时候重复做几次都不一样，很是郁闷。最近又老算出来选择性超过100%。开始怀疑稀释误差的问题（样品是稀释以后去测的），但现在操作的时候非常小心了，怀疑标准曲线的问题，但是重新做了好几条了。结果就是很奇怪，自己想了想：1. 因为液相色谱仪是公用的，所以特意买了专用的色谱柱。但经常测的时候发现柱压不一样，是不是因为这个影响了峰面积，进而影响了结果？柱压的影响这么大么？2. 是不是外标法就不准确？该用单点校正法？之前觉得每次测样前都配一个标样有点麻烦，所以没用。3. 还是别的什么原因？补充：用的柱子是ZORBAXSB-C18,用的甲醇：水=3：7,

6、每个峰都分的很开。取样后离心去掉催化剂，再定量稀释然后去测的。网友七嘴八舌：- 有时候确实柱压不同会对结果有影响，但这是柱压差别很大的情况才会发生。是不是柱子没冲洗好，或者需要看是否进气泡了，因为这都可能导致结果不准。-如果柱压的差别很大的话，比如30bar已经很大了，平时用的时候，有柱温箱，一般都控制温度恒定的，基本同意条件不会有这么大的变化，最多10bar上下浮动，通常小于5bar。- 是不是走过缓冲盐的流动相？用水低流速长时间冲洗，再换乙腈冲洗试试看。是不是有些不物残留在柱子中没有及时冲洗导致柱压偏高，可以尝试用异丙醇试试。- 柱压变化主要会影响保留时间，对峰面积影响不大。你所说的重复性

7、不好，是液相进同一个样品重复不好还是不同的样品。如果不同的样品那是你反应的问题。至于选择性超过100%？是否是计算方法错误？-简单来说，计算苯二酚的选择性：假设对苯峰面积代入标准曲线得浓度C1(g/ml)；邻苯峰面积对应浓度C2,苯酚峰面积对应浓度C,溶液总体积V,稀释倍数20,初始苯酚加入量m(g),如下- 计算公式如果没错,可以看看是否自己没有做过空白以及反应投料时的组分测试。- 至于单点还是外标法？单点校正比较简单,如果要求不是很严格的话,单点校正可以满足要求。单点标准浓度如果在被测样品浓度附近,结果比外标法更准确。做考核样时,我们一般先用外标法定出大致浓度范围,再以单点法定量。单点一般适用于线性曲线截距在100%浓度点2%以下的。高于20%不能采用单点校正和外标外标法对照和拱式样品浓度应一致,校正曲线线性符合即可。案例分析二我想用液相色谱进行定量分析,使用外标法。问题是：标准曲线是不是每次测定样品时都要做一次？我有200个样品,但不是一次能做好,每次我可以测20个样品。难道我每次测定前都要先做一下标准曲线？我是同一台仪器,同一条件。网友七嘴八舌：从严格意义上来讲应该是每天做一条标准曲线。如果你做的东西要求不是太严格(不需要报批),可以考虑隔几天做一天标曲。不可否认的是,每天都做标准