动物肝脏中DNA的提取

1、实验课程：动物肝脏中DNA的提取学生姓名：学级学长学号：560311xxxx专业班级：食科xxx班2017年5月2日实验背景：DN砸取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫匐酸服法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。真核生物基因组DNAT泛应用在动植物的遗传育种、基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系统演化等方面的研究中.无论是基因工程，还是蛋白质工程，核酸分子都是这些技术应用所涉及的主要对象，所以DNA的分离与提取是分子生物学研究中重要的基本技术.哺乳动物DNA的分离通常是在存在EDTA

2、及SDS去污剂条件下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提蛋白质而实现的一、实验目的学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。二、实验原理核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在0.14M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离成DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。DNA遇二苯胺（沸水浴）会生成蓝色物质，因此可用二苯胺鉴定DNA。实验仪器和材料1、实验仪器量筒离心机离

3、心管移液枪恒温水浴锅研钵电子天平2、实验试剂和材料新鲜猪肝0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠溶液95%乙醇NaCl固体5%SD珞液V（氯仿）：V（异戊醇）20:1的混合液四、实验步骤1、称取2.2g质量的猪肝，加入2倍肝重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液弁用碾碎磨碎；将匀浆倒入两个10毫升离心管中，在4000r/min下离心10min,沉淀中再加入8ml缓冲液于4000r/min离心5min；弃上清，取沉淀。2、向沉淀中加入檬酸钠缓冲液至10ml,摇匀后将溶液平均分装到2个10毫升离心管中。每个管分别加入2.5ml氯仿-异戊醇混合液、0.5mlSD

4、S,振荡30mi;然后缓慢分别加入固体NaCl0.45g,使其最终浓度为1mol/L；在4000r/min离心5min,用移液枪取上清水相，记录体积。3、在上述水相溶液中加入等体积的冷95叱醇，边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇即得DNAS品。取1ml溶液于试管中，加入等量二苯胺溶液进行DN濯定，观察颜色变化。五、实验结果1、数据记录：称取猪肝2.2g,DNA夜体积7.8ml.2、实验现象离心后分为三层滴加冷乙醇时，溶液出现白色悬浮物，用玻璃棒搅拌后，棒上出现白色絮状物（DNA。加入二苯胺后，DNA容液呈现蓝色六、误差分析和思考题1、误差分析(1)猪肝较滑，难以研磨充分；(2)离心液倒出时可能损失部分DNA;(3)部分DNA研磨或摇晃时被损坏、断裂2、思考题实验中的乙醇、SDS、氯仿-异戊醇、NaCl、柠檬酸分别有什么作用？答：加盐溶解RNP,使得DNP留在沉淀物中。力口SDS使蛋白质变性。加氯仿-异戊醇使得蛋白质和DNA分离。力口NaCl调节浓度使得DNA溶解