产前实验室技术

1、产前实验室技术产前实验室技术张红国张红国吉林大学第一医院产前诊断中心吉林大学第一医院产前诊断中心电话：电话-mail: 一、产前实验室相关技术一、产前实验室相关技术二、唐氏筛查申请单填写注意事项二、唐氏筛查申请单填写注意事项三、我们实验室开展的项目三、我们实验室开展的项目产前实验室相关技术产前实验室相关技术卫生部卫生部产前诊断技术管理办法产前诊断技术管理办法要求：要求：产前诊断实验室能够开展： 生化免疫；细胞遗传；分子遗传具体包括：具体包括： 唐氏筛查唐氏筛查 染色体核型分析染色体核型分析 羊水细胞培养染色体分析羊水细胞培养染色体分析 脐带血染色体核型分析脐带血染色体

2、核型分析 绒毛染色体核型分析绒毛染色体核型分析 分子遗传学基因诊断分子遗传学基因诊断 荧光原位杂交荧光原位杂交 无创染色体非整倍体产前检测无创染色体非整倍体产前检测1、唐氏筛查、唐氏筛查可筛查：唐氏综合征（唐氏综合征（21-三体综合征）三体综合征）18-三体综合征三体综合征开放性神经管缺陷（1）实验室检测的母体血清标记物方案）实验室检测的母体血清标记物方案， 选择下列任一种： a) 二联法：二联法：血清甲胎蛋白（AFP）+血清人绒毛膜促性腺激素游离亚基（Free -HCG ）或者AFP+血清人绒毛膜促性腺激素（HCG） b)三联法：AFP+ Free -HCG+血清游离雌三醇（血清游离雌三醇（

3、uE3）或者 AFP+HCG+uE3 或者AFP+ Free -HCG+抑制素A（InH-A） c)四联法： AFP+ Free -HCG+uE3+ InH-A或者AFP+ HCG+uE3+ InH-A中孕期母血清学产前筛查标准中孕期母血清学产前筛查标准（2）结果的判别）结果的判别 筛查结果分为高风险和低风险： a)唐氏综合征筛查结果可采用1/270为阳性切割值为阳性切割值（临界值），即筛查结果风险率1/270者为高风险妊娠； b)18-三体综合征筛查结果可采用1/350为阳性切割值为阳性切割值，筛查结果风险率1/350者为高风险妊娠； c)开放性神经管缺陷宜以母血清母血清AFP 2.0-2.

4、5MOM，为阳性切割值，筛查结果AFP 2.0-2.5MOM者为高风险妊娠。（3）产前筛查的检出率要求）产前筛查的检出率要求 二联法： T21 60% 假阳性率8% T18 80% 假阳性率5% ONTD 85% 假阳性率5% 三联法： T21 70% 假阳性率5% T18 85% 假阳性率5% ONTD 85% 假阳性率5% 四联法： T21 80% 假阳性率5% T18 85% 假阳性率1% ONTD 85% 假阳性率5%时间分辨荧光免疫法时间分辨荧光免疫法 时间分辨荧光免疫测定：是一种非同位素免疫分析技术。用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同

5、时检测波长和时间两个参数进行信号分辨。n 特异性好。n 发光时间长。n 由于蛋白质等本底物质所发出的荧光发光时间较短，因此可以通过延长时间去除本底干扰，提高准确性。n 稳定。抽母体外周血，检测AFP、 -hCG、uE3，结合孕妇年龄、 孕周、等信息，评估孕唐氏儿 的风险值。 时间分辨荧光免疫分析仪时间分辨荧光免疫分析仪、 三联筛查假阳性率小于5%时， 检出率70%（4）我院的检测方法）我院的检测方法筛查出的高风险孕妇需要进一步诊断。筛查出的高风险孕妇需要进一步诊断。21-三体高风险三体高风险18-三体高风险三体高风险 羊水穿刺羊水穿刺 染色体核型分析染色体核型分析NTD高风险高风险 超声诊断超

6、声诊断2、细胞遗传学检查、细胞遗传学检查染色体检查、染色体核型分析取取样样方方法法n绒毛穿刺取样绒毛穿刺取样n羊膜腔穿刺取样羊膜腔穿刺取样n脐带血穿刺取样脐带血穿刺取样n外周血取样外周血取样产前诊断产前诊断u有自然流产史、死胎、葡萄胎、女性原发不孕、继发不孕的夫妇；u生过遗传病患儿及先天畸形患儿的父母；u男性少精、弱精、畸精、死精症及婚后不明原因不育的夫妇；u两性畸形及性器官发育异常的患者；u原发闭经、继发闭经的妇女；u染色体异常的患者及患者的父母和同胞；染色体检查适应证：染色体检查适应证： u原因不明的智力低下及生长发育迟缓的患者；u本人及家系成员患有某种遗传疾病或先天畸形的患者；u未婚青年

7、的相恋对方或其家属患有某种遗传病或先天畸形的患者；u长期接触不良环境因素的婚龄、育龄的男女青年；u常规检查或常见遗传病筛查发现异常者；u青年男女的婚（孕）前检查与咨询。A：正常二倍体细胞核内 有2 个21号染色体信号 B：21-三体患者细胞核内有3个 21号染色体信号3、荧光原位杂交、荧光原位杂交 以21号染色体的相应片段序列作探针，进行原位杂交，可快速、准确进行诊断。 21-三体综合征患儿的细胞中呈现3个21号染色体的荧光信号。 FISHFISH具有其不可比拟的优点：具有其不可比拟的优点：1.操作简便，探针标记后稳定，一次标记后可使用二年。2.方法敏感，能迅速得到结果。3.在同一标本上，可同

8、时杂交几种不同探针。4.不仅可用于分裂细胞染色体数量或结构变化的研究，而且还可用于静止期细胞的染色体数量及基因改变的研究。目前羊水目前羊水FISHFISH产前诊断：产前诊断： 可快速诊断胎儿可快速诊断胎儿1313、1818、2121、X X、Y Y染色体数目的异常染色体数目的异常。4、无创染色体非整倍体产前检测、无创染色体非整倍体产前检测母体外周血含有的cffDNA，几乎全部来源于胎盘滋养层细胞怀孕4周可检出，8周后含量上升并稳定存在母体外周血中的cffDNA含量在5%-50%之间。孕周越大外周血中胚胎DNA的含量越高胎儿游离DNA：cell-free fetal DNA（cffDNA）Lan

9、cet.1997 无创：10ml外周血，无须空腹 风险小：无流产、感染风险 孕12周以上即可检测 DNA水平检测，准确率99%以上 检测周期短，10个工作日出检测结果无创DNA产前检测技术与传统诊断技术相比具有如下优势： 嵌合体和多胎目前不能检 影响因素：孕妇染色体异常孕妇近期接受过异体输血、移植手术、干细胞治疗胎儿其他染色体异常样本自然溶血或因个体差异造成的cffDNA含量过低孕周计算不准确抽血时孕妇体重超过100kg局限性和风险：局限性和风险： 一、产前实验室相关技术一、产前实验室相关技术二、唐氏筛查申请单填写注意事项二、唐氏筛查申请单填写注意事项三、我们实验室开展的项目三、我们实验室开展

10、的项目唐氏筛查申请单填写项目唐氏筛查申请单填写项目n 中孕期唐氏综合征血清学筛查检测的孕周范围为孕周范围为15-2015-20周周6 6天天，早孕期唐氏筛查检测的孕周范围为孕周范围为9-139-13周周6 6天天。请开单医生严格把关。n 孕妇的电话号码孕妇的电话号码一定要如实填写，以便核实信息、高风险通知和日后随访。n 采血日期应填写采血当日日期采血日期应填写采血当日日期（公历）。n 出生日期应为孕妇的实际出生日期出生日期应为孕妇的实际出生日期（公历）。如农历生日应换算成公历后再填写或在申请单上清晰标注。n 体重单位为公斤，填写时需注意体重单位为公斤，填写时需注意。唐氏筛查风险评估软件中体重的

11、检测范围为4040-120-120公斤公斤，如不在此范围内，将按最接近的临界值计算（如孕妇体重为38公斤，软件将按40公斤计算），因此在采样时须告知孕妇，得到知情同意后方可送检，并在申请单上标注。n 体重可以对孕妇血清中AFP， free-hCG，uE3三个指标进行校正，以避免因体重的增加，使其在血液中浓度降低。n 唐氏筛查的风险评估软件默认规则的月经周期为默认规则的月经周期为28-3028-30天天，超出此范围均为不规则，不能应用末次月经来推算孕周，因此必须提供一份超声信息因此必须提供一份超声信息。n 单双胎必须填写单双胎必须填写。因为如为双胎，血清学指标会较单胎时偏，因此高风险评估软件会对

12、结果进行校正。（从（从20132013年年4 4月月7 7日开始，我中心不再对双胎做中期筛查）日开始，我中心不再对双胎做中期筛查）n 怀孕方式应注明自然怀孕或辅助生殖自然怀孕或辅助生殖，如为IVF，应填写取卵日期和植入卵日期和植入日期，并提供超声信息日期，并提供超声信息。软件同样会进行校正。n 每一位受检孕妇均应提供一份超声信息，超声信息以孕早期超声头臀长头臀长（CRLCRL）为最佳，如没有孕早期超声，至少应提供一份包括胎儿双顶径数值（BPD）或超声当日提示孕周，二者至少应有一项的超声结果，并注明超声日期。n 怀孕过程中是否有阴道流血的现象应如实填写是否有阴道流血的现象应如实填写，请开单医生在

13、问诊时注意。n 异常妊娠史异常妊娠史主要包括不明原因流产、死胎等现象。如孕妇曾生育过如孕妇曾生育过21-21-三三体综合征、体综合征、18-18-三体综合征，应直接建议孕妇做产前诊断，不建议做唐氏三体综合征，应直接建议孕妇做产前诊断，不建议做唐氏筛查。筛查。如孕妇特别要求，应交代清楚后再送检，并在申请单上标注清楚。n 胰岛素依赖型糖尿病及吸烟史应如实填写胰岛素依赖型糖尿病及吸烟史应如实填写，且为必填项目。n 因为有胰岛素依赖型糖尿病病史的孕妇血清中hAFP 低10%；uE3 低7%；free hCGb 低11%。而吸烟的孕妇血清中free-hCG较正常孕妇降低3%，AFP较正常升高3%。n “

14、中孕期母血清学产前筛查知情同意书知情同意书”应按照知情选择、孕妇自愿的原则，医务人员应事先告知孕妇或其家属产前筛查的性质，孕妇及医生同时孕妇及医生同时签字签字，不可由他人代签。n 年龄在35岁及35岁以上的孕妇，建议直接做遗传咨询。一、产前实验室相关技术一、产前实验室相关技术二、唐氏筛查申请单填写注意事项二、唐氏筛查申请单填写注意事项三、我们实验室开展的项目三、我们实验室开展的项目早孕期唐氏筛查早孕期唐氏筛查中孕期唐氏筛查中孕期唐氏筛查羊水细胞培养染色体产前诊断羊水细胞培养染色体产前诊断脐带血细胞培养染色体产前诊断脐带血细胞培养染色体产前诊断外周血染色体核型分析外周血染色体核型分析羊水荧光原位

15、杂交（羊水荧光原位杂交（FISH）产前诊断）产前诊断流产绒毛组织荧光原位杂交（流产绒毛组织荧光原位杂交（FISH）先天性心脏病先天性心脏病FISH产前诊断产前诊断开展项目开展项目早孕期筛查：早孕期筛查：（1）血清学筛查，是在孕）血清学筛查，是在孕9-13周周6天进行，抽血检测孕妇血清天进行，抽血检测孕妇血清中生化指标（中生化指标（PAPP-A和和Free- hCG），结合孕妇的年龄、体），结合孕妇的年龄、体重、孕周等进行综合风险评估，得出胎儿患重、孕周等进行综合风险评估，得出胎儿患21-三体、三体、18-三体三体综合征的风险。综合征的风险。（2）一站式筛查，是在孕）一站式筛查，是在孕11周周-

16、13周周6天做超声天做超声NT扫描，确定扫描，确定孕周在孕周在11周周-13周周6天内，然后抽血进行早孕期血清学指标检测，天内，然后抽血进行早孕期血清学指标检测，将将NT指标与血清学指标、孕妇年龄、体重、采血日期等进行结指标与血清学指标、孕妇年龄、体重、采血日期等进行结合，评估胎儿罹患合，评估胎儿罹患21-三体、三体、18-三体的风险。三体的风险。早孕期筛查的优势：早孕期筛查的优势：（1）早孕期筛查把产前筛查的孕周窗提前，使孕妇更）早孕期筛查把产前筛查的孕周窗提前，使孕妇更早掌握胎儿罹患早掌握胎儿罹患21-三体、三体、18-三体的风险，尽早进行相三体的风险，尽早进行相关产前诊断。关产前诊断。（

17、2）早孕期筛查还可以与中孕期筛查进行整合，提高）早孕期筛查还可以与中孕期筛查进行整合，提高21-三体、三体、18-三体的检出率。三体的检出率。流产绒毛组织流产绒毛组织FISHFISH快速检测快速检测n 发生率：发生率：50%以上的早期流产是由胚胎染色体异常引起，以上的早期流产是由胚胎染色体异常引起，且大多数为染色体数目异常。且大多数为染色体数目异常。n 原理：原理：FISH快速检测使用快速检测使用13、16、18、21、22、X、Y探针，检测探针，检测7个染色体的非整倍体。个染色体的非整倍体。n 检测：取流产绒毛组织少许，浸泡生理盐水中送到产前检测：取流产绒毛组织少许，浸泡生理盐水中送到产前诊

18、断中心诊断中心4楼前台，进行荧光原位杂交检测。楼前台，进行荧光原位杂交检测。先天性心脏病先天性心脏病FISHFISH产前诊断产前诊断n 发生率：活产婴儿中占发生率：活产婴儿中占8，每年新增，每年新增15-20万例。万例。n 原因：遗传因素原因：遗传因素心脏调节基因的遗传突变。心脏调节基因的遗传突变。 环境因素环境因素药药物、感染、母亲患病等。物、感染、母亲患病等。n 检测：检测： 妊娠妊娠11-14周进行周进行B超检查，测量胎儿颈背透明带厚度。超检查，测量胎儿颈背透明带厚度。 中期中期18-22周用胎儿超声心动图检测。周用胎儿超声心动图检测。 22q11荧光原位杂交检测。荧光原位杂交检测。 22q11荧光原位杂交检测荧光原位杂交检测合作开展项目合作开展项目1、无创染色体非整倍体产前检测项目、无创染色体非整倍体产前检测项目2、Array-CGH技术项目技术项目3、单基因遗传病检测项目、单基因遗传病检测项目1.无创染色体非整倍体产前检测无创染色体非整倍体产前检测可筛查可筛查13、18、21染色体三倍体染色体三倍体 （发报告）（发报告） 还可观测到其他染色体的