超高效液相色谱法测定鸡组织中二硝托胺及其代谢产物残留量

1、超高效液相色谱法测定鸡组织中二硝托胺及其代谢产物残留量摘要建立了超高效液相色谱同时测定鸡组织中二硝托胺及其代谢产物(3amino5nitrootoluamide，anot)的方法。样品用酸性磷酸盐缓冲液提取两次，离心后合并提取液，并调至ph7.0,过hlb固相萃取小柱，用0.1%甲酸溶液乙措(80：20,v/v)洗脱，洗脱液过滤膜后进行超高效液相色谱分析，二极管阵列检测器检测，外标法定量。二硝托胺和anot的检出限分别为25和55?symbolmag/kg在添加浓度15009000?symbolmag/kg范围内，二硝托胺和anot的平均添加回收率为79.2%88.1%,批内相对标准偏差(rs

2、d)在2.7%5.2%之间，批间rsd在4.1%6.9%之间。峰面积与样品浓度在202000?symbolmag/l范围内呈良好的线性关系，二硝托胺和anot的线性回归系数均大于0.9998。关键词鸡组织；超高效液相色谱法；二硝托胺；代谢产物二硝托胺是1960年由法国dow公司开发的硝苯酰胺类抗球虫药1：我国丁1989年批准生产使用，二硝托胺因其毒性小，防治球虫效果好而得到普遍应用，但长期高浓度使用会造成药物残留，对人体健康造成潜在危害。我国农业部235号公告中规定二硝论文发表专乐一m国学朮发叢网www,qikanwang.n巳t托胺的最大残留限量以亲体和代谢产物（3amino5nitroot

3、oluamide!anot）总量计，鸡肉和鸡肝中分别为3000和6000?symbolmag/kg2.目前尚缺乏和应的残留分折物标准方法，因此有必要开展测定鸡组织中二硝托胺和anot残留量的分析方法研究。对于饲料和动物组织二硝托胺和anot的残留量分析的方法主要为薄层色谱法3和高效液和色谱法47，但多数方法的分析对象仅为亲体或仅为代谢产物。陈慧华等采用hplcms方法检测了动物组织中22种同化激素8但是动物组织中二硝托胺的分析方法仅见sn/t245320109分析对象仅为二硝托胺，未见有其代谢产物anot的分析方法报道。本研究根据二硝托胺和anot的化学性质，建立了缓冲溶液提取同相萃取净化相结

4、合的前处理步骤，采用超高效液相色谱分析，方法具有高灵敏度、准确、稳定的特点。2实验部分2.1仪器与试剂waters超高效液相色谱仪（美国waters公司），配二极管阵列检测器；acquitybhec18色谱柱100mmx2.1mm,1.7?symbolmam）；同和萃取仪羌国supelco公司）;hlb小柱（3ml,60mg,waters公司）；sigma离心机；ultratyrraxt25型匀质器（德国）。论文发表专宅、m国学朮发叢网www,qikanwangn砒二硝托胺和anot标准品（dr.ehrenstorfer公司）；甲醇和乙腈（色谱纯，merck公司）；甲酸（色谱纯，tedia公司

5、）；kh2po4和k2hpo43ho2（分析纯，上海化学试剂公司）；磷酸盐缓冲液（ph6.0和4.0）。2.2色谱分离条件流动相：a为0.1%甲酸，b为乙腈。梯度洗脱：01.0min,80%a;1.04.0min,80%30%a;4.05.0min,30%a;5.05.1min,30%80%a;5.17.0min,80%a。流速0.2ml/min，进样量10?symbolmaI,检测波长317nm;柱温30C。2.3样品处理准确称取2g试料于50ml离心管中，在鸡肉和鸡肝中分别加入ph7.0和ph4.0的磷酸盐缓冲液10ml，以10000r/min速度匀质1min，再以8000r/min离心5min，收集上清液；在残渣中再加入10ml磷酸盐缓冲液，同样步骤操作后合并上清液；取4ml上清液调至ph7.0，再以8000r/min离心5min，上清液加入到已经被3ml甲醇和3ml水活化的hlb小柱中，待净化液液面到