第三节电子传递和氧化呼吸链

1、第三节第三节 电子传递和氧化呼吸链电子传递和氧化呼吸链 主要内容主要内容：重点讨论线粒体电重点讨论线粒体电子传递体系的组成、电子传递机理子传递体系的组成、电子传递机理。一、生物氧化概述一、生物氧化概述 糖类、脂肪、蛋白质等有机物质在细胞中进行氧糖类、脂肪、蛋白质等有机物质在细胞中进行氧化分解生成化分解生成CO2和和H2O并释放出能量的过程称为并释放出能量的过程称为生物生物氧化氧化（biological oxidation），），其实质是需氧细胞在其实质是需氧细胞在呼吸代谢过程中所进行的一系列氧化还原反应过程。呼吸代谢过程中所进行的一系列氧化还原反应过程。（一）生物氧化的特点（一）生物氧化的特点

2、 在活的细胞中在活的细胞中（pH接近中性、体温条件下），接近中性、体温条件下），有机物的氧化在一系列酶、辅酶和中间传递体参与有机物的氧化在一系列酶、辅酶和中间传递体参与下进行，其途径迂回曲折，有条不紊。下进行，其途径迂回曲折，有条不紊。 氧化过程中氧化过程中能量逐步释放，其中一部分由一些高能化合物（如能量逐步释放，其中一部分由一些高能化合物（如ATP）截获，再供给机体所需。在此过程中既不会截获，再供给机体所需。在此过程中既不会因氧化过程因氧化过程中能量骤然释放而伤害机体，又能使释中能量骤然释放而伤害机体，又能使释放的能量尽可能得到有效的利用。放的能量尽可能得到有效的利用。v生物氧化生物氧化和有

3、机物在和有机物在体外氧化（燃烧）体外氧化（燃烧）的实质相同，都是脱氢、失电子或与氧的实质相同，都是脱氢、失电子或与氧结合，消耗氧气，都生成结合，消耗氧气，都生成CO2和和H2O，所，所释放的能量也相同。但二者进行的方式释放的能量也相同。但二者进行的方式和历程却不同：和历程却不同：细胞内温和条件（常温、常压、细胞内温和条件（常温、常压、中性中性pH、水溶液）、水溶液）高温或高压、干燥条件高温或高压、干燥条件一系列酶促反应一系列酶促反应 无机催化剂无机催化剂逐步氧化放能，能量利用率高逐步氧化放能，能量利用率高能量爆发释放能量爆发释放释放的能量转化成释放的能量转化成ATP被利用被利用转换为光和转换为

4、光和 热，散失热，散失（二）（二）CO2的生成的生成 方式方式：糖、脂、蛋白质等有机物转变成含羧：糖、脂、蛋白质等有机物转变成含羧基的中间化合物，然后在酶催化下基的中间化合物，然后在酶催化下脱羧脱羧而生成而生成CO2。 类型类型：-脱羧和脱羧和-脱羧脱羧 氧化脱羧和单纯脱羧氧化脱羧和单纯脱羧CH3COSCoA+CO2CH3-C-COOH O丙酮酸脱氢酶系丙酮酸脱氢酶系NAD+ NADH+H+CoASH例：例：+CO2H2N-CH-COOHR氨基酸脱羧酶氨基酸脱羧酶CH2-NH2R（三）（三）H2O的生成的生成 代谢物在脱氢酶催化下脱下的氢由相应的氢载代谢物在脱氢酶催化下脱下的氢由相应的氢载体（

5、体（NAD+、NADP+、FAD、FMN等）所接受，再等）所接受，再通过一系列递氢体或递电子体传递给氧而生成通过一系列递氢体或递电子体传递给氧而生成H2O 。CH3CH2OHCH3CHONAD+ NADH+H+ 乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶例：例：12 O2NAD+电子传递链电子传递链 H2O2eO=2H+脂肪脂肪葡萄糖、葡萄糖、其它单糖其它单糖三羧酸三羧酸循环循环电子传递电子传递（氧化）（氧化）蛋白质蛋白质脂肪酸、甘油脂肪酸、甘油多糖多糖氨基酸氨基酸乙酰乙酰CoAe-磷酸化磷酸化+Pi 小分子化合物分小分子化合物分解成共同的中间解成共同的中间产物（如产物（如丙酮酸丙酮酸、乙酰、乙酰CoA等）等） 共

6、同中间产物进共同中间产物进入三羧酸循环入三羧酸循环,氧氧化脱下的氢由电化脱下的氢由电子传递链传递生子传递链传递生成成H2O，释放出释放出大量能量，其中大量能量，其中一部分通过磷酸一部分通过磷酸化储存在化储存在ATP中中。大分子降解成大分子降解成基本结构单位基本结构单位 生物氧化的三个阶段生物氧化的三个阶段二、电子传递链（呼吸链）二、电子传递链（呼吸链）（一）线粒体结构特点（一）线粒体结构特点（二）电子传递呼吸链的概念（二）电子传递呼吸链的概念（三）呼吸链的组成（三）呼吸链的组成（四）机体内两条主要的呼吸链及其能量变化（四）机体内两条主要的呼吸链及其能量变化（五）电子传递抑制剂（五）电子传递抑制

7、剂（一）线粒体结构（一）线粒体结构嵴嵴线粒体外膜线粒体外膜 自由透过小分子和离子自由透过小分子和离子线粒体内膜线粒体内膜 不能自由透过大部分小分子和离子不能自由透过大部分小分子和离子,包括包括H+。 含有：电子传递体（复合体含有：电子传递体（复合体I、II、III、IV） ADP-ATP转运载体转运载体 ATP合酶（合酶（FoF1） 其他载体其他载体线粒体基质线粒体基质含有丙酮酸脱氢酶含有丙酮酸脱氢酶 柠檬酸循环酶系柠檬酸循环酶系 脂肪酸脂肪酸-氧化酶系氧化酶系 DNA，核糖体其他酶，核糖体其他酶 ATP、ADP、Pi、Mg2+ 、 Ca2+ 、 K+ 可溶的中间代谢产物可溶的中间代谢产物Cr

8、istae (the infoldings of the inner membrane of mitochondria) is where the respiratory chain is located.（二）线粒体呼吸链（二）线粒体呼吸链 线粒体基质是呼吸底物氧化的场所，底物在线粒体基质是呼吸底物氧化的场所，底物在这里氧化所产生这里氧化所产生的的NADH和和FADH2将质子和电子将质子和电子转移到内膜的载体上，经过一系列氢载体和电子转移到内膜的载体上，经过一系列氢载体和电子载体的传递，最后传递给载体的传递，最后传递给O2生成生成H2O。这种由载这种由载体组成的电子传递系统称体组成的电子传递

9、系统称电子传递链（电子传递链（electron transfer chain),因为其功能和呼吸作用直接相关因为其功能和呼吸作用直接相关，亦，亦称为呼吸链。称为呼吸链。v电子传递链在原核生物存在于电子传递链在原核生物存在于质膜质膜上，在真上，在真核细胞存在于核细胞存在于线粒体内膜线粒体内膜上。上。呼吸链由呼吸链由4个多蛋白的复合物个多蛋白的复合物（I, II, III, 和和 IV;3个是质子泵）和个是质子泵）和2个移动的电子个移动的电子载体，泛醌（载体，泛醌（Q或辅酶或辅酶Q）以及细胞色素）以及细胞色素c组组成。成。呼吸链中蛋白质的辅基包括呼吸链中蛋白质的辅基包括：黄素类（黄素类（FMN，F

10、AD），），血红素（血红素血红素（血红素 A，铁原卟啉，铁原卟啉IX ，血红素，血红素 C），），铁硫聚簇（铁硫聚簇（ 2Fe-2S, 4Fe-4S), 和和 铜铜 。呼吸链上很多电子载体的顺序通呼吸链上很多电子载体的顺序通过多种研究得以阐明过多种研究得以阐明 方法一：测量标准还原电位（方法一：测量标准还原电位（ E0） 电子倾向于从低还原电位（电子倾向于从低还原电位（ E0）的载）的载体流向还原电位高的载体（不过在真正体流向还原电位高的载体（不过在真正的细胞中可能有偏差）的细胞中可能有偏差）Electron carriers may have an order of increasing E

11、0方法二：氧化作用动力学研究方法二：氧化作用动力学研究完全的还原伴随着完全的还原伴随着O2的突然传导；的突然传导；较早的氧化作用更接近呼吸链的末端；较早的氧化作用更接近呼吸链的末端；使用快速而灵敏的分光光度技术跟随细使用快速而灵敏的分光光度技术跟随细胞色素的氧化作用，发现最大吸收峰的波胞色素的氧化作用，发现最大吸收峰的波长不同。长不同。方法三方法三: : 各种特异性抑制剂的作用，在阻止步骤各种特异性抑制剂的作用，在阻止步骤之前的处于还原态而阻止之后的处于氧化态。之前的处于还原态而阻止之后的处于氧化态。鱼藤酮鱼藤酮 抗霉素抗霉素 A方法四方法四: :分离并鉴分离并鉴定每个多定每个多蛋白质复蛋白质

12、复合物：合物：链上组分链上组分中特有的中特有的电子供体电子供体和受体可和受体可以确定。以确定。（三）呼吸链的组成（三）呼吸链的组成NADH辅辅 酶酶 Q（CoQ）Fe-SCyt c1O2Cyt bCyt cCyt aa3琥珀酸等琥珀酸等黄素蛋白黄素蛋白（FAD）黄素蛋白黄素蛋白（FMN）细胞色素类细胞色素类铁硫蛋白铁硫蛋白（Fe-S）铁硫蛋白铁硫蛋白（Fe-S）NADH呼吸链呼吸链NADHFMNCoQFe-SCyt c1O2Cyt bCyt cCyt aa3Fe-SFADFe-S琥珀酸琥珀酸等等复合物复合物 II复合物复合物 IV复合体复合体 I复合物复合物 IIINADH脱氢酶脱氢酶细胞色素

13、细胞色素还原酶还原酶细胞色素细胞色素氧化酶氧化酶琥珀酸琥珀酸-辅辅酶酶Q还原酶还原酶FADH2呼吸链呼吸链两条主要呼吸链两条主要呼吸链1.NADH-Q还原酶还原酶(NADH脱氢酶、复脱氢酶、复合体合体） vNADH-Q还原酶是一个大的蛋白质复合体，还原酶是一个大的蛋白质复合体，FMN和铁和铁-硫蛋白硫蛋白（Fe-S）是该酶的辅基，由辅基或辅酶）是该酶的辅基，由辅基或辅酶负责传递电子和氢。负责传递电子和氢。 传递氢机理传递氢机理: NAD+ + 2H+ +2e NADH + H+NAD(P)H + H+FMN FMNH2 +NAD（P）+辅酶辅酶Q是呼吸链是呼吸链电子传递的枢纽电子传递的枢纽Ub

14、iquinone (Q)accepts electronsfrom both NADHand FADH2 in therespiratory chainFMN can accept one electron or FMNH2 can donate one electron to form a semiquinoneradical intermediate.铁硫蛋白铁硫蛋白 +e 传递电子机理传递电子机理：Fe3+ Fe2+ -e 特点特点：含有含有Fe和对酸不稳定的和对酸不稳定的S原子，原子，Fe和和S常以等摩尔量存在（常以等摩尔量存在（Fe2S2, Fe4S4 )，构成构成FeS中心，中心，

15、Fe与蛋白质分子中的与蛋白质分子中的4个个Cys残残基的巯基与蛋白质相连结。基的巯基与蛋白质相连结。2Fe-2SDifferent types of iron-sulfur centers2Fe-2S4Fe-4SFerredoxin（铁氧还蛋白铁氧还蛋白）Iron atoms cycle between Fe2+ (reduced) and Fe3+(oxidized).2. CoQ 特点特点：带有聚异戊二烯侧链的苯醌，带有聚异戊二烯侧链的苯醌，是是脂溶性醌类化合物，而且分子较小，可在线粒体脂溶性醌类化合物，而且分子较小，可在线粒体内膜的磷脂双分子层的疏水区内膜的磷脂双分子层的疏水区自由自由扩

16、散。扩散。 功能基团是苯醌，通过醌功能基团是苯醌，通过醌/酚的互变传递氢，酚的互变传递氢，Q (醌型结构醌型结构) 很容易接受很容易接受2个电子和个电子和2个质子，还原个质子，还原成成QH2（还原型）；（还原型）；QH2也容易给出也容易给出2个电子和个电子和2个质子，重新氧化成个质子，重新氧化成Q。因此，。因此，它在线粒体呼吸它在线粒体呼吸链中作为电子和质子的传递体。链中作为电子和质子的传递体。 泛醌是一个移动泛醌是一个移动的电子的电子/ /质子载体质子载体脂溶性的苯醌有一个脂溶性的苯醌有一个很长的异戊二烯侧链，很长的异戊二烯侧链，可以接受可以接受1或或2个电子，个电子，形成半醌或还原型辅形成

17、半醌或还原型辅酶酶Q。（。（QH2）；）； QH2扩散到下一个复扩散到下一个复合物（合物（III）；是唯一）；是唯一的一个不结合于一种的一个不结合于一种蛋白的电子载体。蛋白的电子载体。3. 琥珀酸琥珀酸- -Q还原酶（复合体还原酶（复合体）v琥珀酸脱氢酶也是此复合体的一部分，其辅基琥珀酸脱氢酶也是此复合体的一部分，其辅基包括包括FAD和和Fe-S聚簇。聚簇。v琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸氧化为延胡索酸，同琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸氧化为延胡索酸，同时其辅基时其辅基FAD还原为还原为FADH2，然后，然后FADH2又将又将电子传递给电子传递给Fe-S聚簇。聚簇。v最后电子由最后电子由Fe-S聚簇传递给琥珀

18、酸聚簇传递给琥珀酸-Q还原酶的还原酶的辅酶辅酶CoQ。 琥珀酸琥珀酸 FADH2 Fe-S CoQ4. .细胞色素还原酶细胞色素还原酶（细胞色素（细胞色素bcbc1 1复合体、复合体复合体、复合体）v含有两种细胞色素（细胞色素含有两种细胞色素（细胞色素b、细胞色、细胞色素素c1）和一铁硫蛋白（）和一铁硫蛋白（ 2Fe-2S ）。）。v细胞色素细胞色素bc1复合体复合体的作用是将的作用是将电子电子从从QH2转移到细胞色素转移到细胞色素cQH2 cyt.b Fe-S cyt.c1 cyt.c细胞色素细胞色素（ 传递电子机理传递电子机理： +e +e Fe3+ Fe2+ Cu2+ Cu+ e e 特

19、点特点：以血红素（以血红素（heme）为辅基，血红素的主要为辅基，血红素的主要成份为铁卟啉。成份为铁卟啉。 类别类别: 根据吸收光谱分成根据吸收光谱分成a、b、c三类，呼吸链中三类，呼吸链中含含5种（种（b、c、c1、a和和a3)，cyt b和和cytc1、cytc在呼在呼吸链中为电子传递体，吸链中为电子传递体，a和和a3以复合物存在，称以复合物存在，称细胞细胞色素氧化酶色素氧化酶，其分子中除含，其分子中除含Fe外还含有外还含有Cu ，可将电，可将电子传递给氧，因此亦称其为子传递给氧，因此亦称其为末端氧化酶末端氧化酶。细胞色素细胞色素=血红素血红素+蛋白质蛋白质血红素有血红素有a,b和和cCy

20、t c是水溶性的，存在于是水溶性的，存在于内外膜之间，在复合体内外膜之间，在复合体III和和IV间传递电子间传递电子血红素中的铁得失电子而血红素中的铁得失电子而还原和氧化还原和氧化Cyt a: 600 nmCyt b: 560 nmCyt c: 550 nmReduced cytochromeshas three absorptionbands in the visible wavelengthsCytochrome bc1 complex (Complex III)5. .细胞色素细胞色素c cv在复合体在复合体III和和之间传递电子。之间传递电子。（细胞色素（细胞色素c 交互地与细胞色素还

21、原酶的交互地与细胞色素还原酶的C1和细胞色素氧化酶接触）和细胞色素氧化酶接触）v是唯一能溶于水的细胞色素。是唯一能溶于水的细胞色素。v相对分子质量为相对分子质量为13000，由，由104个氨个氨基酸构成的单一肽链。基酸构成的单一肽链。1 2345678半胱氨酸6. 细胞色素氧化酶细胞色素氧化酶（复合体（复合体、细胞色素细胞色素c氧化酶氧化酶 ）v由由 cyta和和a3 组成。复合物中除了含有铁卟组成。复合物中除了含有铁卟啉外，还含有啉外，还含有2个铜原子（个铜原子（CuA，CuB）。）。Cyta与与CuA相配合，相配合，cyta3与与CuB相配合，当相配合，当电子传递时，细胞色素的电子传递时，

22、细胞色素的Fe3+ 、 Fe2+间循环，间循环，同时同时Cu2+ 、 Cu+间循环，将电子从间循环，将电子从cytc直接直接传递给传递给O2，也叫末端氧化酶。，也叫末端氧化酶。The three critical subunits of cytochrome oxidase (Complex IV)A 204 kD 13-subunit protein complex, with structure determined in 1996CuBHeme aHeme a32CuACuACuAThe electronpath in Complex IVNADH呼吸链呼吸链NADHFMNCoQFe-S

23、Cyt c1O2Cyt bCyt cCyt aa3Fe-SFADFe-S琥珀酸琥珀酸等等复合物复合物 II复合物复合物 IV复合体复合体 I复合物复合物 IIINADH脱氢酶脱氢酶细胞色素细胞色素还原酶还原酶细胞色素细胞色素氧化酶氧化酶琥珀酸琥珀酸-辅酶辅酶Q还原酶还原酶FADH2呼吸链呼吸链（四）机体内两条主要呼（四）机体内两条主要呼吸链和能量的变化吸链和能量的变化电电子子传传递递链链标标准准氧氧化化还还原原自自由由能能变变化化NADHFMNCoQFe-SCyt c1O2Cyt bCyt cCyt aa3Fe-SFMNFe-S琥珀酸琥珀酸等等复合物复合物 II复合物复合物 IV复合体复合体

24、I复合物复合物 IIINADH脱氢酶脱氢酶细胞色素细胞色素C还原酶还原酶细胞色素细胞色素C氧化酶氧化酶琥珀酸琥珀酸-辅酶辅酶Q还原酶还原酶-0.2-0.400.20.40.60.8E0/VThe chemiosmoticmodel by Mitchell（五）电子传递（五）电子传递 抑制剂抑制剂概念：概念：能够阻断呼吸链中某部位电子传递能够阻断呼吸链中某部位电子传递的物质称为电子传递抑制剂。的物质称为电子传递抑制剂。 电子传递抑制剂的使用是研究电子传递抑制剂的使用是研究呼吸链呼吸链中电子传递体顺序的有效方法。（阻断中电子传递体顺序的有效方法。（阻断部位物质的氧化部位物质的氧化-还原状态可以测出

25、）还原状态可以测出）电子传递电子传递 抑制剂抑制剂NADHFMNCoQFe-SCyt c1O2Cyt bCyt cCyt aa3Fe-SFMNFe-S琥珀酸琥珀酸复合物复合物 II复合物复合物 IV复合物复合物 I复合物复合物 III鱼藤酮鱼藤酮安密妥安密妥抗霉素抗霉素A氰化物氰化物CO抗霉素抗霉素 A的的抑制部位抑制部位NAD FP Q b c aa3NAD FP Q b c aa3呼吸链的比拟图解呼吸链的比拟图解第四节第四节 氧化磷酸化作用氧化磷酸化作用 一、氧化磷酸化一、氧化磷酸化 代谢物在生物氧化过程中释放出的自由能用于代谢物在生物氧化过程中释放出的自由能用于合成合成ATP（即即ADP

26、+PiATP）,这种氧化放能和这种氧化放能和ATP生成（磷酸化）相偶联的过程称氧化磷酸化生成（磷酸化）相偶联的过程称氧化磷酸化。类别类别： 底物水平磷酸化底物水平磷酸化 电子传递水平磷酸化电子传递水平磷酸化ADP + Pi ATP + H2O生物氧化过程中生物氧化过程中释放出的自由能释放出的自由能磷氧比磷氧比（ P/O ）呼吸过程中无机磷酸（呼吸过程中无机磷酸（Pi）消耗量和分子氧（消耗量和分子氧（O2）消耗量的比值称为磷氧比。由于在氧化磷酸化过程中，每消耗量的比值称为磷氧比。由于在氧化磷酸化过程中，每传递一对电子消耗一个氧原子，而每生成一分子传递一对电子消耗一个氧原子，而每生成一分子ATP消

27、耗消耗一分子一分子Pi ，因此，因此P/O的数值相当于一对电子经呼吸链传递的数值相当于一对电子经呼吸链传递至分子氧所产生的至分子氧所产生的ATP分子数。分子数。NADHFADH2O O2 212H2OH2O例例 实测得实测得NADH呼吸链呼吸链： P/O 3ADP+ADP+PiPi ATP ATP实测得实测得FADHFADH2 2呼吸链呼吸链： P/O 2O O2 2122e-2e-ADP+ADP+PiPi ATP ATPADP+ADP+PiPi ATP ATPADP+ADP+PiPi ATP ATPADP+ADP+PiPi ATP ATP二、氧化磷酸化的偶联机理二、氧化磷酸化的偶联机理1.线

28、粒体线粒体ATP合酶（合酶（mitochondrial ATPase）2.能量偶联假说能量偶联假说 1953年年 Edward Slater 化学偶联假说化学偶联假说 1964年年 Paul Boyer 构象偶联假说构象偶联假说 1961年年 Peter Mitchell 化学渗透假说化学渗透假说3.质子梯度的形成质子梯度的形成4.ATP合成的机制合成的机制1978年获诺贝尔化学奖年获诺贝尔化学奖H+被吸引到膜的被吸引到膜的Fo通道的基质侧，在通道的基质侧，在Fo和和F1连接处形成高浓连接处形成高浓度的度的H+通过通过ATP合酶每传合酶每传送送4H+引导引导1个个ATP的的生成生成线粒体线粒体

29、ATP合酶复合体组分合酶复合体组分亚基亚基相对分子质量相对分子质量作用作用定位定位F1378000含有合成含有合成ATP的催化部位的催化部位线粒体内膜向基线粒体内膜向基质侧的球状体质侧的球状体560005300034000140006000F025000、21000、12000、8000含有质子通道含有质子通道跨膜部位跨膜部位IF110000调节质子流及调节质子流及ATP的合成的合成F0F1之间的柄之间的柄OSCP23000F68000 氧化磷酸化重建示意图氧化磷酸化重建示意图内膜内膜F0F1 ATP酶酶e e- -ADP+Pi底物底物H+ATPH+H+H+基质基质膜间隙膜间隙电子传递链电子传

30、递链 电子传递的自电子传递的自由能驱动由能驱动H+从线从线粒体基质跨过内粒体基质跨过内膜进入到膜间隙膜进入到膜间隙，从而形成，从而形成H+跨跨线粒体内膜的电线粒体内膜的电化学梯度，这个化学梯度，这个梯度的电化学势梯度的电化学势( H+ )驱动驱动ATP的合成。的合成。三、化学渗透假说三、化学渗透假说( (chemiosmotic hypothasis) )化学渗透假说原理示意图化学渗透假说原理示意图4H+2H+2H+4H+NADH+H+2H+2H+2H+ ADP+PiATP高高质质子子浓浓度度H2O2e-+ + + + + + + + +_ _ _ _ _ _ _ _ _ _质子流质子流线粒体

31、内膜线粒体内膜磷酸化磷酸化 氧化氧化 线粒体电子传递和线粒体电子传递和H+排出的数目和途径排出的数目和途径H2O2H+CytcCytcCytcQFMNFeSFeSCytc1CytbKCytbrCytaFeSCyta32e-2e-NADH+H+NAD+O2 +2H+ H2O4H+2H+2H+复合物复合物 III12 美国科学家美国科学家Boyer为解释为解释ATP酶作用机理，提出酶作用机理，提出旋转催化假说，认为旋转催化假说，认为ATP合成酶合成酶亚基有三种不同的亚基有三种不同的构象，一种构象构象，一种构象(L)有利于有利于ADP和和Pi结合，一种构象结合，一种构象(T)可使结合的可使结合的AD

32、P和和Pi合成合成ATP，第三种构象第三种构象(O)使合成的使合成的ATP容易被释放出来。在容易被释放出来。在ATP合成过程中合成过程中，三个，三个亚基依次进行上述三种构象的交替变化，亚基依次进行上述三种构象的交替变化，所需能量由跨膜所需能量由跨膜H+提供。提供。 英国科学家英国科学家Walker通过通过x光衍射获得高分辩率的光衍射获得高分辩率的牛心线粒体牛心线粒体ATP酶晶体的三维结构，酶晶体的三维结构， 证明在证明在ATP酶酶合成合成ATP的催化循环中三个的催化循环中三个亚基的确有不同构象，亚基的确有不同构象， 从而有力地支持了从而有力地支持了Boyer的假说。的假说。 ATP合酶结构示意

33、图合酶结构示意图 旋转催化理论认旋转催化理论认为质子流通过为质子流通过Fo引引起亚基起亚基III 寡聚体和寡聚体和 及及 亚基一起转动亚基一起转动,这种旋转配置这种旋转配置 / 亚亚基之间的不对称的基之间的不对称的相互作用相互作用,引起催化引起催化位点性质的转变位点性质的转变, 亚基的中心亚基的中心 -螺旋螺旋被认为是转子被认为是转子,亚基亚基I和和II与与 亚基组合在亚基组合在一起组成定子一起组成定子,它压它压住住 / 异质六聚体异质六聚体.Rotation of the subunit and the ring of c subunitsin the F0F1 complexwas obs

34、erved byin vitro studies using fluorescencemicroscopy 肌动蛋白肌动蛋白 L态态：低亲和力低亲和力态，态，ATP合成合成O态态：开放态，：开放态，亲和力极低，亲和力极低，ATP释放释放T态态：紧密结紧密结合态，合态，ATP合合成成当当H+通过通过Fo时，时， Fo旋转，旋转导致旋转，旋转导致F13个个亚基构象的改变亚基构象的改变F1 构象的变化促构象的变化促使使ADP+Pi合成合成ATP并释放并释放ATP酶作用机理酶作用机理有利于有利于ADP与与Pi结合的构象结合的构象有利于有利于ADP与与Pi生成的构象生成的构象有利于有利于ATP释放释放的

35、构象的构象Oxidative Phosphorylation(on inner membraneof mitochondria)四、四、 线粒体外线粒体外NADH的氧化磷酸化作用的氧化磷酸化作用 1.磷酸甘油穿梭系统磷酸甘油穿梭系统 2.苹果酸苹果酸天冬氨酸穿梭系统天冬氨酸穿梭系统 酵解酵解（细胞质）（细胞质）氧化磷酸化氧化磷酸化 （线粒体）（线粒体）胞浆胞浆NADH不能直接进入线粒体不能直接进入线粒体胞浆胞浆NADH不能直接进不能直接进入线粒体入线粒体穿梭系统：穿梭系统：3-磷酸甘油穿梭磷酸甘油穿梭NADH FADH2脑、骨骼肌等（速度快）脑、骨骼肌等（速度快）苹果酸苹果酸-天冬氨酸穿梭天冬

36、氨酸穿梭NADH NADH心、骨骼肌等心、骨骼肌等 -磷酸甘油穿梭磷酸甘油穿梭（线粒体基质）（线粒体基质）磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮3-磷酸甘油磷酸甘油磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮3-磷酸甘油磷酸甘油FADFADH2NADHFMN CoQ b c1 c aa3 O2NADHNAD+线线粒粒体体内内膜膜（细胞液）（细胞液）苹果酸苹果酸- -草酰乙酸穿梭作用草酰乙酸穿梭作用（、 、 、 为膜上的转运载体）为膜上的转运载体）细胞液细胞液线粒体内膜线粒体内膜体体天冬氨酸天冬氨酸 -酮戊二酸酮戊二酸苹果酸苹果酸草酰乙酸草酰乙酸谷氨酸谷氨酸 -酮戊二酸酮戊二酸天冬氨酸天冬氨酸苹果酸苹果酸谷氨酸谷氨酸NADH+H

37、+NAD+草酰乙酸草酰乙酸NAD+线粒体基质线粒体基质苹果酸苹果酸脱氢酶脱氢酶NADH+H+苹果苹果酸脱酸脱氢酶氢酶谷草转谷草转氨酶氨酶谷草转谷草转氨酶氨酶呼吸链呼吸链NO2NO2O-NO2NO2OHNO2NO2O-NO2NO2OHH+H+线粒体内膜线粒体内膜内内外外v在酸性环境中接受在酸性环境中接受H+,成为不解离形式，是脂溶性的，成为不解离形式，是脂溶性的，很容易过膜，同时将很容易过膜，同时将H+带入膜内，起消除质子浓度梯带入膜内，起消除质子浓度梯度的作用，亦称度的作用，亦称质子载体。质子载体。离子载体离子载体（离子载体抑制剂离子载体抑制剂）v是一类脂溶性物质，是一类脂溶性物质，能与能与H

38、+以外的其他以外的其他一价阳离子结合，一价阳离子结合，并作为他们的载体使并作为他们的载体使它们能够穿过膜，消除跨膜的电位梯度。它们能够穿过膜，消除跨膜的电位梯度。v缬氨霉素（缬氨霉素（K+）v短杆菌肽（短杆菌肽（K+ Na+）五、葡萄糖彻底氧化生成五、葡萄糖彻底氧化生成ATP的总结算的总结算 葡萄糖分解通过糖酵解和柠檬酸循环形成的葡萄糖分解通过糖酵解和柠檬酸循环形成的ATP或或GTP的分子数，根据化学计算可以得到明确的答的分子数，根据化学计算可以得到明确的答复。但是氧化磷酸化产生的复。但是氧化磷酸化产生的ATP分子数并不十分准分子数并不十分准确，因为质子泵、确，因为质子泵、 ATP的合成以及代谢物的转运过的合成以及代谢物的转运过程并不需要是完整的数值甚至不需要是固定值，根程并不需要是完整的数值甚至不需要是固定值，根据当前最新测定，据当前最新测定， H+经经NADH-Q还原酶、细胞色还原酶、细胞色素还原酶和细胞色素氧化酶从线粒体内膜基质泵出素还原酶和细胞色素氧化酶从线粒体内膜基质泵出到膜外的细胞液侧时，到膜外的细胞液侧时，一对电子泵出的质子数依次一对电子泵出的质子数依次为为4、2和和4。合成合成一个一个ATP分