生物：第二部分《实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》(浙科版选修1)

1、实验六实验六-淀粉酶的固定化及淀粉水解淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测作用的检测基础知识：基础知识：酶的固定化技术酶的固定化技术酶固定化的方法：酶固定化的方法：a a、吸附法：、吸附法：将酶吸附到将酶吸附到固体吸附剂固体吸附剂表面的方法，表面的方法，如：如：活性碳、多孔玻璃、活性碳、多孔玻璃、石英砂石英砂等等固体吸附剂固体吸附剂酶酶d d、包埋法：、包埋法：将酶包裹在将酶包裹在凝胶交联后的格子凝胶交联后的格子中中c c、交联法：、交联法：b b、共价偶联法、共价偶联法酶的某些基团（如氨基末端、酶的某些基团（如氨基末端、羧基末端）与载体羧基末端）与载体共价结合。共价结合。利用试剂与酶之间发生分

2、子交联利用试剂与酶之间发生分子交联来把酶固定化的方法。来把酶固定化的方法。a a、吸附法：、吸附法：实验六实验六-淀粉酶的固定化及淀粉水解淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测作用的检测 实验目的：实验目的：1. 1. 掌握掌握-淀粉酶的淀粉酶的固定化固定化2. 2. 实验设备和材料实验设备和材料：38页页39页页固定化酶柱固定化酶柱气门心气门心夹子夹子5ml5ml注射器注射器1.-1.-淀粉酶的固定化淀粉酶的固定化吸附吸附5mg-5mg-淀粉酶淀粉酶+4ml+4ml蒸馏水蒸馏水+5g+5g石英砂，石英砂，搅拌搅拌30min30min装入下端接有气门心并用夹装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中

3、子封住的注射器中 用用1010倍柱体积的倍柱体积的蒸馏水蒸馏水洗涤洗涤除去游离淀粉酶除去游离淀粉酶（1mL/min)1mL/min)装柱装柱洗柱洗柱如何证明淀粉酶已全部被固定如何证明淀粉酶已全部被固定? ?蒸馏水蒸馏水洗柱流出的水洗柱流出的水+淀粉，淀粉，保温保温几分钟后几分钟后+KI-I2变蓝说明水中无游离的变蓝说明水中无游离的淀粉酶，已全部固定淀粉酶，已全部固定固定化装置固定化装置反应柱反应柱遇碘显蓝色遇碘显蓝色红色红色实验原理：实验原理：2、淀粉水解的检测淀粉水解的检测一定浓度的淀粉流经固定化酶柱后，可使淀粉水解一定浓度的淀粉流经固定化酶柱后，可使淀粉水解成成糊精糊精，流出物用，流出物用

4、KI-I2溶液测试呈溶液测试呈红色红色。枯草杆菌的枯草杆菌的-淀粉酶淀粉酶： 最适温度为最适温度为50-7550-75；最适；最适PHPH为为5.5-7.55.5-7.5溶解淀粉溶解淀粉50mg50mg淀粉溶于淀粉溶于100ml100ml热水中，搅拌均匀热水中，搅拌均匀过柱过柱使淀粉溶液以使淀粉溶液以0.3ml/min0.3ml/min的流速过柱，在流出的流速过柱，在流出5ml5ml淀粉后接收淀粉后接收0.5ml0.5ml流出液流出液。检测检测加入加入1-21-2滴滴KI-IKI-I2 2溶液，观察颜色变化。溶液，观察颜色变化。用水稀用水稀释释1 1倍倍后再观察颜色。后再观察颜色。保存及再次使

5、用保存及再次使用1010倍柱体积蒸馏水倍柱体积蒸馏水洗涤洗涤此柱，放置此柱，放置44冰箱冰箱保存，几天后取出重复实验。保存，几天后取出重复实验。实验步骤：实验步骤： 让淀粉和固定的让淀粉和固定的淀粉酶淀粉酶充分反应充分反应2.3实验结果实验结果 1 2 3 41、水水+1+12 2滴滴KI-IKI-I2 2溶液溶液2、淀粉液、淀粉液+1+12 2滴滴KI-IKI-I2 2溶液溶液3、流出液、流出液+1+12 2滴滴KI-IKI-I2 2溶液溶液4、稀释、稀释1 1倍的流出液倍的流出液+1+12 2滴滴KI-IKI-I2 2溶液溶液有些生物无性别，如大部分植物（雌雄同株）；有些生物无性别，如大部

6、分植物（雌雄同株）；有性别的生物大部分由性染色体决定性别有性别的生物大部分由性染色体决定性别XY型（型（雌性为同型的雌性为同型的XX，雄性为异型的，雄性为异型的XY)ZW型（雄性为同型的型（雄性为同型的ZZ，雌性为异型的，雌性为异型的ZW)有些生物有些生物X比比Y大大 ，有些生物，有些生物Y比比X大大果蝇果蝇9.1 1、将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定、将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（相比，其作用不需要适宜的（ ）A A、温度

7、、温度 B B、PHPHC C、水分、水分 D D、营养、营养D习题巩固习题巩固2. 某一实验小组的同学，欲通过制备固定化酵母某一实验小组的同学，欲通过制备固定化酵母细胞进行葡萄糖溶液发酵实验，实验材料及用具齐细胞进行葡萄糖溶液发酵实验，实验材料及用具齐全。全。（2）该实验小组用如图所示的装置来进行葡）该实验小组用如图所示的装置来进行葡萄糖发酵萄糖发酵图中图中a 为固定化酵母；为固定化酵母；b是反应柱。是反应柱。从上端漏斗中加入反应液的浓度不能过高的从上端漏斗中加入反应液的浓度不能过高的原因是：原因是：。为使该实验中所用到的固定化酵母细胞可为使该实验中所用到的固定化酵母细胞可反复运用，实验过程一定要在反复运