实验六酶活性影响因素的测定－温度、pH对酶活性的影响ppt课件

1、酶实验酶实验实验六实验六 酶活性影响要素的测定酶活性影响要素的测定 温度、温度、pHpH对酶活性的对酶活性的影响影响 根本原理根本原理 酶是生物体内具有催化功能的蛋白质，也叫生物催化剂。生物体内存在多种多酶是生物体内具有催化功能的蛋白质，也叫生物催化剂。生物体内存在多种多样的酶，从而使生物体在温暖的条件下可以迅速完成复杂的代谢过程。样的酶，从而使生物体在温暖的条件下可以迅速完成复杂的代谢过程。酶活力受环境酶活力受环境PH值的影响极为显著。通常各种酶只需在一定的值的影响极为显著。通常各种酶只需在一定的PH值范围内才值范围内才表现出活力。一种酶表现活力最高时的表现出活力。一种酶表现活力最高时的pH

2、值，称为该酶的最适值，称为该酶的最适pH。低于或高于最。低于或高于最适适pH时，酶的活力均逐渐降低。不同酶的最适时，酶的活力均逐渐降低。不同酶的最适pH也不同。酶的最适也不同。酶的最适pH也受底物也受底物性质和缓冲液性质的影响。性质和缓冲液性质的影响。酶的催化作用受温度的影响亦很大。在一定温度范围内，随着温度的升高，酶酶的催化作用受温度的影响亦很大。在一定温度范围内，随着温度的升高，酶的热变性不显著，而酶促反响速度添加，直至到达最大值。反响速度到达最大值时的热变性不显著，而酶促反响速度添加，直至到达最大值。反响速度到达最大值时的温度称为酶作用的最适温度。当温度超越酶的最适温度时，酶促反响急剧下

3、降，的温度称为酶作用的最适温度。当温度超越酶的最适温度时，酶促反响急剧下降，直至完全停顿。一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用的时间长短有关，普直至完全停顿。一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用的时间长短有关，普通作用时间长，最适温度低，而作用时间短，那么最适温度高。大多数动物酶的最通作用时间长，最适温度低，而作用时间短，那么最适温度高。大多数动物酶的最适温度为适温度为37-40，植物酶的最适温度为，植物酶的最适温度为40-60。 本实验分别以不同温度及不同本实验分别以不同温度及不同pHpH条件下让淀粉条件下让淀粉酶作用于淀粉，并用碘液检查酶促淀粉的水解程度，酶作用于淀粉，并用碘液检查

4、酶促淀粉的水解程度，来阐明温度及来阐明温度及pHpH对酶活力的影响。对酶活力的影响。实验中以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的实验中以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的淀粉酶可将淀粉逐渐水解成各种不同大小的糊精分淀粉酶可将淀粉逐渐水解成各种不同大小的糊精分子，最终产物为麦芽糖和少量的葡萄糖。它们遇碘子，最终产物为麦芽糖和少量的葡萄糖。它们遇碘呈不同的颜色。直链淀粉即可溶性淀粉遇碘呈呈不同的颜色。直链淀粉即可溶性淀粉遇碘呈蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不

5、显颜色。由于在不同温度，不同显颜色。由于在不同温度，不同pHpH条件下唾液淀粉条件下唾液淀粉酶的活性高低不同，那么淀粉被水解的程度不同，酶的活性高低不同，那么淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反响混合物遇碘所呈现的颜色来判别所以，可由酶反响混合物遇碘所呈现的颜色来判别上述诸要素对酶活性的影响。上述诸要素对酶活性的影响。操作步骤操作步骤2. 温度对酶活力的影响温度对酶活力的影响 取3支试管，编号后各参与淀粉溶液2毫升。将第1，2号试管放入37恒温水浴中保温，第3号试管放入冰水中冷却，5分钟后，向第1号试管中参与煮沸515分钟的稀释唾液1毫升，向第2，3号试管加稀释唾液各1毫升。摇匀，20分钟后取

6、出3支试管，各加碘化钾碘溶液2滴，混匀，比较各管溶液的颜色。判别淀粉被唾液酶水解的程度，并阐明温度对唾液酶活性的影响。1.1.稀释的新颖唾液：稀释的新颖唾液： 取唾液适量，量取取唾液适量，量取 一定体积，用蒸馏水稀释一定体积，用蒸馏水稀释2020倍。倍。3.pH值对酶活力的影响值对酶活力的影响 取取8支支10毫升刻度试管毫升刻度试管,编号。按下表中的比例编号。按下表中的比例,用取样用取样器添加器添加 0.2M 磷酸氢二钠溶液和磷酸氢二钠溶液和 0.1M 柠檬酸溶液柠檬酸溶液,制备制备PH5.0-8.0的的8种缓冲溶液种缓冲溶液.锥形瓶锥形瓶号号0.2M0.2M磷酸氢二钠磷酸氢二钠( (毫升毫升

7、) )0.1M0.1M柠檬酸柠檬酸( (毫毫升升) )缓冲液缓冲液PHPH1 12 23 34 45 56 67 78 85.155.155.805.806.316.316.926.927.727.728.698.699.369.369.729.724.854.854.204.203.693.693.083.082.282.281.311.310.640.640.280.285.05.05.65.66.06.06.46.46.86.87.27.27.67.68.08.0 取9支枯燥的试管,编号.将8支刻度试管中不同pH的缓冲液各取3毫升,分别参与相应的号码(1-8号)的试管中.然后,再向每个试

8、管中添加0.5淀粉溶液2毫升.第9号试管与第5号试管的内容物一样. 向第9号试管中参与50-100倍的唾液2毫升,摇匀后放入37恒温水浴中保温. 每隔1分钟由第9号试管中取出1滴混合液,置于白瓷板上,加1滴碘化钾-碘溶液,检验淀粉的水解程度,待结果呈橙黄色时,取出试管,记录保温时间.留意：掌握第9号试管的水解程度是本实验成败的关键之一. 以以1分钟的间隔分钟的间隔,依次向第依次向第1至第至第8号试管号试管中参与稀释中参与稀释100倍的唾液倍的唾液2毫升毫升,摇匀摇匀,并以并以1分钟的间隔依次将分钟的间隔依次将8支试管放入支试管放入37恒温水恒温水浴中保温浴中保温.然后然后,按照第按照第9 号试管的保温时间号试管的保温时间,依次将各管迅速取出依次将各管迅速取出,并立刻参与碘化钾并立刻参与碘化钾-碘碘溶液溶液2滴滴,充分摇匀充分摇匀.察看各管呈现的颜色察看各管呈现的颜色,判判别在不同别在不同pH值下淀粉被水解的程度值下淀粉被水解的程度,可以看可以看出出PH对唾液淀粉酶活性的影响对唾液淀粉酶活性的影响,并确定其最并确定其最适适pH.思索题：将乳清蛋白、淀粉、胃蛋白酶、唾液淀粉酶和适量思索题：将乳清蛋白、淀粉、胃蛋白酶、唾液淀粉酶和适量水混合装入一个容器内，