生物安全培训资料

1、临床实验室生物污染与生物安全概述 生物安全防护（biosafety containment） （定义）：指在实验室环境下处理和 保存感染性物质的过程中采用 的一系列的防护措施，包括一 级防（primary containment） 和二级防护（secondary- containment）。 概述 生物安全防护（biosafety containment） （目的）：是减低或消除潜在危险因子 对实验人员、实验室内外环境的 污染。 （要素）：1、实验室操作和技术 2、实验室安全设备 3、实验室设施设计 其中一级防护与二级防护有别一级防护与二级防护的区别 一级防护： 包括规范操作技术与规程，配置适

2、当 的安全设备，保护操作人员和室内直 接环境免遭感染性物质的污染。 二级防护： 包括合理的实验室设施设计和严格规 范的操作流程，用以保护实验室外环 境免受感染性物质污染。一、临床实验室生物污染的原因及种类 原因：致病因子，包括细菌、病毒、真菌 寄生虫及其他。 种类：空气污染、水的污染、人体污染、 物体表面的污染。 空气污染 内： 平面布局、气流方向 合理 死角区域 缩小 外： 直接外排或扩散 高效过滤 密闭或压力差水、人体、物体表面污染 实验过程中产生的大量污水 特殊处理后排放 工作人员实验室感染（接触、吸入） 专门防护规程 物体表面污染（溅出、溢出、穿用错误等） 正确实施 二、临床实验室的生

3、物安全防护 概述： 1、目的:(p234 两个确保) 2、内容:(根据实验室级别) 3、评估:(实验对象对人或环境的危害性)（一）实验室的分类、分级及适用范围 分类：一般生物 脊椎动物 一级（BSL-1） 分级：二级（BSL-2） 三级（BSL-3） 四级（BSL-4） 适用范围：级别不同 要求不同 适用范围不同 (biological safety labolatory, BSL)分级原则: 据所处理的微生物及其 毒素的危害程度 （BSL-1) 无致病作用的微生物。 （BSL-2）具有中等潜在危害的微生物。 （BSL-3) 呼吸传播，使人传染严重甚至是致病 微生物及其毒素，传播途径明，目前

4、已有疫苗。 (BSL-4) 高度危险性，通过气溶胶传播或传播途 径不明，目前尚无疫苗或治疗方法的致 病微生物及其毒素。 不同级实验室的适用范围和设置一级生物安全防护实验室 1、适用于： 用于教学的普通微生物实验室 2、要求： 无须使用生物安全柜二级生物安全防护实验室（BSL-2） 1、适用于： (1) 含漱液、血清和血液等样品的诊断检测 (2) 溶液、固定或用其他方法处理灭活的病毒和/或无传染性病毒基因片段 (3）常规的细菌和毒素检测 (4）能产生气溶胶的样品处理 (5）临床样品的包装、分装 (6）离心管和离心机转头的封闭与开启二级生物安全防护实验室（BSL-2）2、特殊情况: （1）致病微生

5、物气溶胶或溅出的操作（2）处理高浓度或大容量感染性材料3、要求： 在生物安全柜或物理抑制设备中进行，并使 用个体防护设备。 三级生物安全防护实验室三级生物安全防护实验室 （BSL- 3）或相当于P3实验室1、适用于： 主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至 是致死疾病的致病微生物及其毒素（如禽 流感），通常已（可）有预防传染的疫 苗。艾滋病病毒的研究（血清学实验除 外）2、要求： 在三级生物安全防护实验室中进行。 BSL-2（P2） BSL-3（P3）BSL 4 戏称为魔鬼实验室分五个区有10道门洁净台/生物安全柜(BSCs)洁净工作台 1、环境空气工作台过滤样本直接 吹向操作者排入室内 2、保

6、护产品，不保护操作人员及操作环境 3、通过样本的空气过滤对直径大于0.3微 米的颗粒，过滤效率99.9%无医院药房 或无菌设备的组装。生物安全柜 1、环境空气进入工作台过滤样本 高效过滤排入室内或室外 2、经过样本的空气及排放出的空气均经过 滤，对直径大于0.3微米的颗粒，超高 效过滤器的过滤效率为99.999%。 3、采用负压装置，形成气幕防护屏障，保 护操作人员安全应用于有一定生物危险 的操作。洁净工作台洁净工作台生物安全柜生物安全柜 1、环境空气（流动/排出方式） 2、使用目的（产品、操作人、环境） 3、空气滤过能力 4、气幕屏障 5、应用生物安全柜工作原理 1. 物理屏障 2. 高效过

7、滤 3. 空气屏障 4. 定向层流生物安全柜生物安全柜 的分型的分型 CLASS级生物安全柜 CLASS级生物安全柜： 1、 CLASSTAPY A型 2、 CLASSTAPY B1型 3、 CLASSTAPY B2型 4、 CLASSTAPY B3型 CLASS级生物安全柜I级生物安全柜 保护操作者和操作环境。 样品没有得到保护。 通过样品区的空气，经高效过滤器的过滤之后，100%地排放到实验室环境中。II 级生物安全柜级生物安全柜 A型型(B3)30% 外排进入环境30% 外界空气补充70% 经过滤后循环使用II 级生物安全柜级生物安全柜 B1型型70% 外排进入环境70% 外界空气补充3

8、0% 过滤后循环使用 II 级生物安全柜级生物安全柜 B2型型100%100%外排进入环境100%100%外界空气补充无循环使用的气流无循环使用的气流III级生物安全柜级生物安全柜 样品、操作者、操作环境都得到保护（操作时戴全密封手套） 100%外排进入环境 100%外界空气补充 无循环使用的气流 (二)实验室生物安全的个人防护一级生物安全防护实验室 无须使用生物安全柜和专用特殊设备等。 应穿工作服，手上有皮肤破损戴手套。 操作中可能有危险物溅出应有适当防护。二级生物安全防护实验室 （1）可能产生病菌气溶胶、溅出的用生物安全柜 （2）当操作不能在安全柜内进行，必须外部操作 时，必须使用面部保护

9、（护目镜、面罩、个体呼 吸保护用品或其他防溅出保护设备）。 （3）应穿工作服或罩衫，离开时，不得穿着外 出，应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢 弃。 （4）当手可能接触感染材料，应戴手套。如可能 发生溢出或溅出，应戴两副手套，一次性手套不 得清洗和再次使用。三级生物安全防护实验室 （1）必须安装级或以上生物安全柜，感 染性材料的操作应在生物安全柜中进行。 （2）当操作不得不在柜外进行时，必须个 体防护与使用物理抑制设备综合防护措施 （3）在进行感染性组织培养、有可能产生 感染性气溶胶的操作时，必须使用个体防 护设备（如呼吸保护装置等）。 （4）入室工作前/后有专用更衣室，室内有必备品（消毒剂

10、、冲洗液、药品等）。四级生物安全防护实验室 1、在级生物安全柜中进行操作。 2、入室必须换上全套实验室服装。 3、实验室必备的配套装置与装备。临床实验室的消毒与灭菌 消毒灭菌方法： 热力灭菌 物理 辐射消毒 超声消毒 滤过除菌 干燥或低温抑菌 化学 消毒 防腐 手卫生 目的： 控制医院性感染的最重要 最简便易行 的措施 之一。 （包括保护个人自己） 手卫生 依据： 常居菌的存在（大部分人体皮肤上能 分离到的，如凝固酶阴性葡萄球菌、棒状 杆菌类、不动杆菌属、丙酸菌属及某些肠 道细菌族成员等），固有，不易被机械性 的摩擦清除。手卫生 暂居菌的存在（接触病人或被污染的物体 表面时获得）。如果没有通过

11、肥皂和水的 冲洗和机械摩擦或者用消毒手刷将其破坏 ，它可随时通过手传播。手卫生 种类： 洗手（handwashing） 手消毒（hand antisepsis） 外科手消毒 （surgical hand antisepsis ）手卫生 设施： 1、流动水、非手触式龙头开关 2、洗手清洁剂普通皂/液 （plain soap and detergent ） 抗菌皂 （antimicrobial soap） 手消毒剂 （hand disinfector） 3、干手设施（纸巾、干手器、专用毛巾）手卫生 洗手指征： 直接接触病人前后 无菌操作前后 穿脱工作服等前后 再进入清洁区前 接触特殊易感病人前后

12、接触或处理病人的血液、体液、分泌物后 等等 1. 1. 消毒消毒 去除或杀灭去除或杀灭传播媒介上传播媒介上病原病原微生物微生物，使其达到，使其达到无害化无害化的处理的处理 2. 2. 灭菌灭菌 杀灭或去除杀灭或去除传播媒介上一切传播媒介上一切微生物微生物的处理的处理 3 3消毒剂消毒剂 用于杀灭传播媒介上的微生物使其达消毒或灭菌要求的制剂用于杀灭传播媒介上的微生物使其达消毒或灭菌要求的制剂 4.4.灭菌剂灭菌剂 可杀灭一切微生物使其达到灭菌要求的制剂可杀灭一切微生物使其达到灭菌要求的制剂 - - 消毒和灭菌为两个不同概念消毒和灭菌为两个不同概念 - - 消毒处理不一定都能达到灭菌要求消毒处理不

13、一定都能达到灭菌要求 而灭菌一定都能达到消毒而灭菌一定都能达到消毒目的目的 基本概念基本概念 消毒和灭菌消毒和灭菌5 5抗菌抗菌 采用化学或物理方法杀灭细菌或妨碍细菌生长繁殖及其活性采用化学或物理方法杀灭细菌或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程的过程6 6. .抗菌剂抗菌剂 能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂7.7.抑菌抑菌 采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程过程8.8.防腐防腐 用化学或物理方法杀灭或清除或抑制无生命有机物内的微生用化学或物理方法杀灭或清除或抑制无生命有机物

14、内的微生物，防止其腐败的处理物，防止其腐败的处理9 9防腐剂防腐剂能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质基本概念基本概念 基本概念基本概念熏蒸消毒熏蒸消毒 在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目的的一种方法（污染的空气、表面）清洁与预清洁清洁与预清洁去垢去垢/ /污剂污剂 指去除污垢、灰尘、有机物和污渍 清洁的过程主要依靠机械作用 清除污染清除污染 指去除/杀死微生物的任何过程，清除污染的应用范围更广消毒与灭菌的方法 化学消毒灭菌化学消毒灭菌 通过化学消毒剂杀灭微生物繁殖体繁殖体或芽孢芽孢 消毒对象：包括物体表面、空气和污染物等 方式：有擦拭、喷

15、洒（雾）、熏蒸和浸泡等。 物理消毒灭菌物理消毒灭菌紫外线热力消毒（干热/焚烧、湿热、微波)等离子体HEPA过滤除菌 常用的消毒方法常用的消毒方法化学消毒方法化学消毒方法 使用方法：使用方法：刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿墩布擦洗 严重污染的物品会严重污染的物品会影响除污染剂的杀菌作用，不能被迅速地消毒或灭菌；许多杀菌剂只对经过预清洁的物品只对经过预清洁的物品才具有杀菌活性。 注意！注意！ 预清洁时必须谨慎，以避免暴露于感染性物质; 必须使用与以后使用的杀菌剂化学上相容的物质; 通常采用相同的清洗消毒剂进行预清洁和消毒; 清洗消毒剂通常由化学消毒剂和洗涤剂或除垢剂以及助洗剂、稳定剂

16、、缓蚀剂等成分组成； 是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定化学方法一. 清洁的作用化学消毒剂种类（按标签说明使用）（1 1）高效）高效（水平）消毒剂： 指可杀灭一切细菌繁殖体（包括分枝杆菌）、病毒、真菌及其孢子等，对细菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定杀灭作用，达到高水平消毒要求的制剂。主要有环氧乙烷、过氧乙酸、过氧化氢、戊二醛、二氧化氯、次氯酸钠等；其中环氧乙烷、戊二醛可作为灭菌剂（2 2）中效）中效消毒剂消毒剂： 指仅可杀灭分枝杆菌、病毒、真菌及细菌繁殖体等微生物，达到消毒要求的制剂。主要有酚类消毒剂、乙醇、碘伏等（3 3）低效）低效消毒剂消毒剂：

17、指仅可杀灭细菌繁殖体及亲脂病毒，达到消毒要求的制剂。主要有季铵盐（苯扎溴铵、杜米芬等）、氯己啶等化学消毒剂化学消毒剂常用化学消毒剂的性能比较常用化学消毒剂的性能比较消毒剂消毒剂使用浓度使用浓度消毒水平消毒水平被灭活被灭活微生物微生物特征特征（）（）细菌细菌包膜病毒包膜病毒无包膜病无包膜病毒毒结核分枝结核分枝杆菌杆菌细菌芽孢细菌芽孢含氯含氯 高效高效+/-过氧乙过氧乙酸酸 0.0010.2 高效高效+戊二醛戊二醛 2化学灭菌化学灭菌/高效高效+甲醛甲醛 3 8高效高效/中效中效+/-酒精酒精 70%中效+-+-季胺盐季胺盐0.4 1.6低效+-常用化学消毒剂的安全性及特征常用化学消毒剂的安全性及

18、特征 消毒剂消毒剂腐蚀性腐蚀性 残留物残留物 有有害害被有机物被有机物灭活灭活皮肤、眼皮肤、眼刺激性刺激性呼吸道呼吸道刺激性刺激性含氯含氯 +-过氧乙酸过氧乙酸 +-+-戊二醛戊二醛 -+-+甲醛甲醛 -+-+酒精酒精 +/-+-季胺季胺 盐盐-+-防止过度使用消毒剂! 正确使用化学消毒剂以确保实验场所的安全， 减少来自感染性物质的危险 -选择合适的化学消毒剂 应考虑经济、控制库存以及限制环境污染等因素，尽可能减少化学消毒剂的使用量 化学消毒剂的作用时间因品种和厂商而异 应按产品说明书配制和使用消毒剂的浓度（浓度越高, 消毒效果越好？ ）消毒剂的作用时间注意消毒剂有效期！注意消毒剂有效期！-消

19、毒剂的有效期消毒剂使用的有效期限（一）表面消毒（1）次氯酸钠（分子式为NaOCl）作为消毒剂/漂白剂使用时为强碱性，具金属腐蚀性 1 1）更换频率取决于）更换频率取决于 有机物有机物（蛋白质） 开口容器开口容器(无盖) 工作液的初始浓度工作液的初始浓度(储藏高浓度或使用浓度) 使用频率使用频率和特性 室内条件室内条件(高温时能释放氯气)2 2）有效氯浓度有效氯浓度常规实验室用于消毒的有效氯浓度应为1 g/L1 g/L。感染性物质的溢出以及含有大量有机物的物质，推荐使用更强作用的含5 5 g/Lg/L有效氯的溶液来处理。 一般情况： 一天多次浸泡、含高浓度有机物的材料，应每天至少更换一次； 使用

20、频率较低的溶液，则可以维持一周时间。（2）次氯酸钙 次氯酸钙Ca（ClO）2的颗粒或片剂一般含有70%的有效氯；其有效氯浓度分别为1g/L和5 g/L；用颗粒或片剂配制浓度1.4 g/L或7.0 g/L溶液 不要把漂白剂当作防腐剂使用不要把漂白剂当作防腐剂使用可以用作普通目的的消毒剂 用于浸泡非金属类浸泡非金属类的的污染材料 在紧急情况下可用终浓度含12 mg/L有效氯的漂白剂消毒饮用水消毒饮用水注意事项1）氯气具有强毒性！因此只能在通风良好的地方储存和使用。2）漂白剂也不能与酸混合不能与酸混合以避免氯气快速释放。3）氯的许多副产物可能对人体及环境有害对人体及环境有害， 避免滥用含氯消毒剂，特

21、别是漂白剂。（3）二氯异氰尿酸钠 二氯异氰尿酸钠（NaDCC）的粉剂含有60%的有效氯。 用NaDCC粉剂配制的浓度为1.7 g/L和8.5 g/L的溶液将分别含有1 g/L和5 g/L的有效氯 NaDCC粉剂和片剂储存方便、安全 血液或其他生物危害性液体溢出时，可以使用固体NaDCC，并使其作用至少10min后再除去，然后对污染区进行进一步的清理。（4 4）氯胺）氯胺 氯胺粉剂含有大约25的有效氯 -氯胺释放氯的速度比次氯酸慢 因此如果需要获得与次氯酸相同的效力，就需要较高的初需要较高的初始浓度始浓度。 -有机物对氯胺溶液的影响没有次氯酸溶液那么大 在在“清洁清洁”和和“污染污染”情况下都推

22、荐使用情况下都推荐使用20 g/L20 g/L的浓度的浓度。 -在氯胺中浸泡过的物品必须要彻底清洗浸泡过的物品必须要彻底清洗，以除去加入到氯胺-T（甲苯磺酰氯醛甲酰胺钠）粉剂中的填充剂的残留物。（5）二氧化氯 二氧化氯是一种高效快速消毒剂。 气态的二氧化氯不稳定，可分解为氯气（Cl2）和氧气（O2），并释放热。二氧化氯溶于水，在水溶液中稳定。 有两种方法可获得二氧化氯： 1 1）将盐酸（）将盐酸（HClHCl）和亚氯酸钠（）和亚氯酸钠（NaClONaClO2 2）两）两种单独成分混合时即可生成；种单独成分混合时即可生成； 2 2）订购其稳定态，然后在需要时随时活化）订购其稳定态，然后在需要时随

23、时活化生成。生成。常规含氯消毒剂的推荐使用浓度常规含氯消毒剂的推荐使用浓度“清洁”条件下a“污染”条件下b所需有效氯浓度所需有效氯浓度0.1%（1 g/L）0.5%（5 g/L）次氯酸钠溶液次氯酸钠溶液（含5%有效氯）20 mL/L100 mL/L次氯酸钙次氯酸钙（含70%有效氯）1.4 g/L7.0 g/L二氯异氰尿酸钠粉剂二氯异氰尿酸钠粉剂（含60%有效氯）1.7 g/L8.5 g/L二氯异氰尿酸钠片剂二氯异氰尿酸钠片剂（每片含1.5 g有效氯）每升1片每升4片氯胺氯胺（含（含25%25%有效氯）有效氯）20 g/L20 g/La 去除大部分污染材料后b 溢流情况（如血液）或大量污染材料没

24、有除去时2 2乙醇乙醇 3. 3.戊二醛戊二醛 5. 季胺盐类化合物 属于低效消毒剂 通常用于环境卫生消毒，如地面、家具、及墙壁。 可杀灭真菌、细菌、包膜病毒；不能杀灭芽孢、结核分枝杆菌及无包膜病毒。有机物水的硬度影响其消毒效果阴离子去污剂 使用时，选择预清洁剂的品种（二）空气熏蒸 多使用甲醛（多使用甲醛（HCHOHCHO）进行空气熏蒸）进行空气熏蒸 在温度高于在温度高于2020时，甲醛是一种能够杀灭所时，甲醛是一种能够杀灭所有微生物及其孢子的气体有微生物及其孢子的气体甲醛甲醛对朊病毒没有杀灭活性对朊病毒没有杀灭活性 市场上出售的产品：市场上出售的产品： 甲醛多聚体甲醛多聚体 （固体）（固体）

25、 甲醛（福尔马林）甲醛（福尔马林） 甲醛浓度约为甲醛浓度约为370 g/L370 g/L（3737）的气体水溶液，其中含甲醇）的气体水溶液，其中含甲醇（100 100 mLmL/L/L）作为稳定剂）作为稳定剂 甲醛甲醛 两种产品经加热都可以产生气体，用于封闭封闭空间（如生物安全柜和房间）空间（如生物安全柜和房间）的清除污染和消毒 甲醛是一种致畸、致癌物质，具有刺鼻的气味，其气体能够刺激眼睛和黏膜；因此必须在通风橱或通风良好的地方储存和使用；甲醛的使用必须遵守国家化学品安全规定；1.1.产生甲醛气体的方法产生甲醛气体的方法（1 1）加热法：）加热法：在在150150200200可使甲醛很快释放，

26、将甲醛直接均可使甲醛很快释放，将甲醛直接均匀铺放于耐热容器内置于热源上加热蒸发。为保证甲醛用匀铺放于耐热容器内置于热源上加热蒸发。为保证甲醛用量和灭菌时间的控制，最好使用甲醛发生器。量和灭菌时间的控制，最好使用甲醛发生器。（2 2）化学反应法：）化学反应法：常用的反应剂有高锰酸钾、重铬酸钾等氧常用的反应剂有高锰酸钾、重铬酸钾等氧化剂，最通用是高锰酸钾与甲醛反应，常用反应比例为甲化剂，最通用是高锰酸钾与甲醛反应，常用反应比例为甲醛醛2 2份对份对1 1份高锰酸钾。份高锰酸钾。2.2.室内空气消毒室内空气消毒 在常温下，相对湿度在常温下，相对湿度7070左右，使用甲醛左右，使用甲醛25ml/m25

27、ml/m3 3或多聚甲或多聚甲醛醛10g/m10g/m3 3。用加热或化学法释放甲醛气体，密闭门窗作用。用加热或化学法释放甲醛气体，密闭门窗作用12h12h以上可达到消毒要求。以上可达到消毒要求。3.3.中和残余甲醛中和残余甲醛 以以2525氨水按氨水按25ml/m25ml/m3 3加热蒸发即可。加热蒸发即可。 物理方法 一一. . 紫外线紫外线 紫外线适用于空气紫外线适用于空气、物体表面等消毒物体表面等消毒 消毒使用的紫外线是C波紫外线，波长范围是100nm280nm杀菌作用最强的波段是250nm280nm紫外线光源必须使用能够产生达到国家标准的辐照值杀菌紫外灯 普通30W30W 直管紫外灯

28、在距离灯管1m1m处检测的辐射253.7nm紫外线强度不得低于70uW/cm2室内安装紫外灯的数量为平均每m3不少于1.5W，照照射时间不少于射时间不少于30min30min。 二. 高压蒸汽灭菌和其他加热灭菌消毒 加热加热是最常用的清除病原体污染的物理手段。是最常用的清除病原体污染的物理手段。 “ “干干”热没有腐蚀性，可用来处理实验器材中许多热没有腐蚀性，可用来处理实验器材中许多可耐受可耐受160160或更高温度或更高温度2 24 h4 h的物品的物品 燃烧或焚化也是一种干热方式燃烧或焚化也是一种干热方式 湿热高压灭菌则最为有效湿热高压灭菌则最为有效 煮沸煮沸消毒具有方法简单、使用方便，并

29、不一定能杀消毒具有方法简单、使用方便，并不一定能杀灭所有的微生物或病原体，但在其他方法（化学杀灭所有的微生物或病原体，但在其他方法（化学杀菌、清除污染、高压灭菌）不可行或没有条件时，菌、清除污染、高压灭菌）不可行或没有条件时，可以作为一种有效的消毒措施。可以作为一种有效的消毒措施。 灭菌后的物品必须小心操作并保存，以保证在使灭菌后的物品必须小心操作并保存，以保证在使用之前不被污染。用之前不被污染。 压力饱和蒸汽灭菌（高压蒸汽灭菌）是对实验材压力饱和蒸汽灭菌（高压蒸汽灭菌）是对实验材料进行灭菌的料进行灭菌的最有效和最可靠最有效和最可靠的方法的方法对于大多数目的，下列组合可以确保正确装载的对于大多

30、数目的，下列组合可以确保正确装载的高压灭菌器的灭菌效果：高压灭菌器的灭菌效果：1. 134 3 min1. 134 3 min2. 126 10 min2. 126 10 min3. 121 15 min3. 121 15 min4. 115 25 min4. 115 25 min1. 预真空式高压灭菌器 蒸汽进入前使空气从灭菌器蒸汽进入前使空气从灭菌器排出。排出。 气体是通过一个装有气体是通过一个装有HEPAHEPA过过滤器的排气阀排出。滤器的排气阀排出。 在灭菌结束时，蒸汽自动排在灭菌结束时，蒸汽自动排出。出。 这种高压灭菌可以在这种高压灭菌可以在134134下下进行，因此灭菌周期可以缩进

31、行，因此灭菌周期可以缩短至短至3min3min。 预真空式高压灭菌器对于多预真空式高压灭菌器对于多孔性物品的灭菌很理想，但孔性物品的灭菌很理想，但由于要抽真空而不能用于液由于要抽真空而不能用于液体的高压灭菌。体的高压灭菌。 2.重力置换式（“下排气式”）高压蒸汽灭菌器 蒸汽在压力作用下进入灭菌器，由上而下蒸汽在压力作用下进入灭菌器，由上而下置换较重（冷）的空气并通过灭菌器的排置换较重（冷）的空气并通过灭菌器的排气阀（装有气阀（装有HEPAHEPA过滤器）排出。过滤器）排出。3.脉动真空蒸汽内循环高压灭菌器 脉动真空压力蒸汽灭菌器利用真空控制系统、脉动真空压力蒸汽灭菌器利用真空控制系统、经预抽真

32、空及有限次脉动抽取，通过压力蒸汽经预抽真空及有限次脉动抽取，通过压力蒸汽循环，强制以饱和蒸汽替换残余空气，可将柜循环，强制以饱和蒸汽替换残余空气，可将柜内冷空气抽除内冷空气抽除9898以上；以上； 避免了因内部冷空气排除不彻底而存在的灭菌避免了因内部冷空气排除不彻底而存在的灭菌效果不稳定等问题。效果不稳定等问题。 灭菌后真空加温热烘干，可快速干燥灭菌物品。灭菌后真空加温热烘干，可快速干燥灭菌物品。 （二）高压蒸汽灭菌器的装载高压蒸汽灭菌器的：高压蒸汽灭菌器的：待灭菌物品应松散包装放待灭菌物品应松散包装放置在灭菌器内：置在灭菌器内：上下左右均应有空隙；上下左右均应有空隙；不能接触器壁；不能接触器

33、壁；物品应放在金属网状篮筐物品应放在金属网状篮筐内或金属网架上；内或金属网架上；物品装载量不应超过灭菌物品装载量不应超过灭菌器内总体积的器内总体积的80%80%-利于蒸汽的渗透和空气利于蒸汽的渗透和空气排出排出-使蒸汽能够作用到其内使蒸汽能够作用到其内容容物；物；压力蒸汽灭菌包内化学指示卡/条（三）高压蒸汽灭菌质量保证的生物指标1. . 干热灭菌干热灭菌 常用灭菌时间和温度是常用灭菌时间和温度是170, 60min170, 60min；160, 160, 120 min;150, 150 min120 min;150, 150 min。应用枯草杆菌黑色变。应用枯草杆菌黑色变种芽孢（种芽孢（AT

34、CC9372ATCC9372，菌片含菌量为，菌片含菌量为5.05.010105 5cfu/cfu/片片 5.05.010106 6cfu/cfu/片）监测灭菌效果。监测培养片）监测灭菌效果。监测培养物应置物应置35 35 3737培养培养242448h48h后观察。后观察。2. 2. 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 指示菌株为耐热嗜热脂肪芽孢杆菌（指示菌株为耐热嗜热脂肪芽孢杆菌（ATCC7953ATCC7953，菌片含菌量为菌片含菌量为5.05.010105 5cfu/cfu/片片 5.05.010106 6cfu/cfu/片）片）监测灭菌效果。监测培养物应置监测灭菌效果。监测培养物应置5555培养

35、培养242448h48h后观察（自含式生物指示物按说明书执行）。后观察（自含式生物指示物按说明书执行）。（四）高压灭菌器使用注意事项下列规定能够减少操作压力容器时可能发生的危害下列规定能够减少操作压力容器时可能发生的危害：1. 1. 应由受过良好培训人员负责高压灭菌器的操作和维护。应由受过良好培训人员负责高压灭菌器的操作和维护。2.2. 预防性的维护程序应包括：由有资质人员定期检查灭菌器预防性的维护程序应包括：由有资质人员定期检查灭菌器柜腔、门的密封性以及所有的仪表和控制器。柜腔、门的密封性以及所有的仪表和控制器。3.3. 应使用不含腐蚀性抑制剂或其他化学品饱和蒸汽，否则可应使用不含腐蚀性抑制

36、剂或其他化学品饱和蒸汽，否则可能污染灭菌的物品。能污染灭菌的物品。4.4. 所有需要高压蒸汽灭菌的物品都应放在空气能够排出并具所有需要高压蒸汽灭菌的物品都应放在空气能够排出并具有良好热渗透性的容器中；灭菌器柜腔装载要松散，以便有良好热渗透性的容器中；灭菌器柜腔装载要松散，以便蒸汽可以均匀作用于装载物。蒸汽可以均匀作用于装载物。5.5. 当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，而没有互锁装置的高压蒸汽灭菌器，应当关闭主蒸汽阀并而没有互锁装置的高压蒸汽灭菌器，应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到待温度下降到8080以下时再打开门。！以下时再打开

37、门。！（四）高压灭菌器使用注意事项6.6. 当对液体高压蒸汽灭菌时，由于取出液体时可当对液体高压蒸汽灭菌时，由于取出液体时可能因过热而沸腾，故应采用慢排式设置。能因过热而沸腾，故应采用慢排式设置。7.7. 即使温度下降到即使温度下降到8080以下，操作者打开门时也以下，操作者打开门时也应当戴适当的手套和面罩来进行防护。应当戴适当的手套和面罩来进行防护。8.8. 在进行高压灭菌效果的常规监测中，生物指示在进行高压灭菌效果的常规监测中，生物指示剂或热电偶计应置于每件高压灭菌物品的中心。剂或热电偶计应置于每件高压灭菌物品的中心。最好在满载时用热偶计和记录仪进行定时监测，最好在满载时用热偶计和记录仪进

38、行定时监测，以确定灭菌程序是否恰当。以确定灭菌程序是否恰当。( (或用化学指示或用化学指示条条) )9. 9. 如果有灭菌器的排水过滤器应当每天拆下清洗。如果有灭菌器的排水过滤器应当每天拆下清洗。10. 10. 应当注意保持高压灭菌器安全阀的通畅应当注意保持高压灭菌器安全阀的通畅。三. 焚烧 在处理经或未经清除污染的动物尸体以及解剖组织或其他在处理经或未经清除污染的动物尸体以及解剖组织或其他实验室废弃物时，焚烧是一种有效的方法。实验室废弃物时，焚烧是一种有效的方法。只有在实验室可以控制焚烧炉的条件下，才能用焚烧代替只有在实验室可以控制焚烧炉的条件下，才能用焚烧代替高压灭菌来处理感染性物质。高压

39、灭菌来处理感染性物质。需要有效控制温度，并配备二级焚烧室时才能实现彻底焚需要有效控制温度，并配备二级焚烧室时才能实现彻底焚烧。烧。许多焚烧炉，尤其是那些只有单个焚烧室的，不能满足处许多焚烧炉，尤其是那些只有单个焚烧室的，不能满足处理感染性物质、动物尸体和塑料制品的要求，微生物、有理感染性物质、动物尸体和塑料制品的要求，微生物、有毒化学品和烟尘可能通过烟囱排放而污染大气毒化学品和烟尘可能通过烟囱排放而污染大气理想的是一级焚烧室的温度至少应达到理想的是一级焚烧室的温度至少应达到800800 二级焚烧室的温度至少应达到二级焚烧室的温度至少应达到10001000HEPAHEPA过滤过滤HEPAHEPA

40、滤器更换程序滤器更换程序：1HEPAHEPA滤器消毒滤器消毒 1 1）福尔马林熏蒸）福尔马林熏蒸( (同生物安全柜消毒步骤同生物安全柜消毒步骤) ) 2 2）或用过氧乙酸对）或用过氧乙酸对HEPAHEPA滤器的滤膜、外周和滤器后方滤器的滤膜、外周和滤器后方检测孔处喷雾消毒检测孔处喷雾消毒, ,消毒时间依所用消毒剂种类而定。消毒时间依所用消毒剂种类而定。2HEPAHEPA滤器卸载滤器卸载 卸载卸载HEPAHEPA滤器时，根据所从事的病原微生物的分类来对滤器时，根据所从事的病原微生物的分类来对操作人员进行相应的防护。将操作人员进行相应的防护。将HEPAHEPA滤器装入医用废物塑料袋滤器装入医用废物

41、塑料袋。3高压灭菌高压灭菌 压力及时间依病原微生物种类而定。压力及时间依病原微生物种类而定。4焚烧焚烧 高压灭菌完成后，用医用废物塑料袋包装后送焚烧高压灭菌完成后，用医用废物塑料袋包装后送焚烧。第四节 实验室消毒灭菌的应用 清除局部环境污染清除局部环境污染 生物安全柜的清除生物安全柜的清除 废物的处理废物的处理 一. 清除局部环境污染（一）（一）表面污染的清除表面污染的清除 使用次氯酸使用次氯酸钠（钠（NaOClNaOCl）溶液）溶液 含有含有1 1有效氯的溶液适于普通的环境卫生设有效氯的溶液适于普通的环境卫生设备备当处理高危环境当处理高危环境时时: : 建议使用高浓度（建议使用高浓度（5 g

42、/L5 g/L）溶液。用于清除环）溶液。用于清除环境污境污染染时时 二二. 生物安全柜污染的清除（生物安全柜污染的清除（1） 在实验结束时，包括仪器在内的生物安全柜里的所在实验结束时，包括仪器在内的生物安全柜里的所有物品应清除表面污染后，才能移出安全柜；有物品应清除表面污染后，才能移出安全柜；在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭（杀灭任何微生作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭（杀灭任何微生物），但不包括送风滤器的扩散板；物），但不包括送风滤器的扩散板；在每天实验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面、在每天实验结束时，应

43、擦拭生物安全柜的工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染。四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染。在对目标生物体有效时，可以采用在对目标生物体有效时，可以采用含氯含氯溶液或溶液或70%70%酒酒精来消毒。在使用腐蚀性精来消毒。在使用腐蚀性的的消毒剂后，还必须用无菌消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。水再次进行擦拭。 研究试剂溢漏或泼洒后，立即清除污染物及污染的研究试剂溢漏或泼洒后，立即清除污染物及污染的表面表面 在更换在更换HEPAHEPA过滤器或内部维修之前，必须对已用于过滤器或内部维修之前，必须对已用于感染性材料工作的生物安全柜进行消毒感染性材料工作的生物安全柜进行消毒

44、在生物安全柜维护、更换过滤器、以及性能测试或在生物安全柜维护、更换过滤器、以及性能测试或重新安置之前，必需消毒重新安置之前，必需消毒 最普通的气体消毒方法：甲醛熏蒸最普通的气体消毒方法：甲醛熏蒸 推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应在关机前运行则应在关机前运行5min5min以净化内部的气体。以净化内部的气体。二二. . 生物安全柜污染的清除（生物安全柜污染的清除（2 2）二二. 生物安全柜污染的清除（生物安全柜污染的清除（3）甲醛熏蒸消毒的基本程序甲醛熏蒸消毒的基本程序清除生物安全柜之前清除生物安全柜之前 需确定需确定 型号、大小、

45、循环参数等型号、大小、循环参数等 消毒剂的降解、吸收、与安全柜材料的兼容性消毒剂的降解、吸收、与安全柜材料的兼容性以维持生物安全柜的完整性和确定消毒时间以维持生物安全柜的完整性和确定消毒时间要使用能让甲醛气体独立发生、循环和中和的设备要使用能让甲醛气体独立发生、循环和中和的设备可使用甲醛蒸汽发生器来进行安全柜的熏蒸，可使用甲醛蒸汽发生器来进行安全柜的熏蒸， 使用参照厂家说明书使用参照厂家说明书1 1）计算生物安全柜的总体积；）计算生物安全柜的总体积；2 2）总体积）总体积x 11g/m3 x 11g/m3 确定多聚甲醛的用量确定多聚甲醛的用量； （中和甲醛：计算以氨气的形式来中和甲醛气体所需的（中和甲醛：计算以氨气的形式来中和甲醛气体所需的NH4HCO3NH4HCO3或其他替代品的理论当量，按或其他替代品的理论当量，按110%110%称取以确保完全中称取以确保完全中和甲醛）和甲醛）甲醛熏蒸消毒的基本程序甲醛熏蒸消毒的基本程序3）确保生物安全柜排风管道的气密性（关闭风阀）；）确保生物安全柜排风管道的气密性（关闭风阀）；4）为能够紧急派出甲醛，以及在生物安全柜旁预先放置一根）为能够紧急派出甲醛，以及在生物安全柜旁预先放置一根软管，其必须与排风装置相连软管，其必须与