多功能酶标仪

1、酶标仪的使用酶标仪的使用 免疫球蛋白的结构免疫球蛋白的结构免疫球蛋白都是大分子的物质，轻链和重链，免疫球蛋白都是大分子的物质，轻链和重链，且具有抗原结合的部位。且具有抗原结合的部位。 什么是抗原什么是抗原 ？ 凡能刺激机体产生抗体，并能与抗体发凡能刺激机体产生抗体，并能与抗体发生特异性结合的物质称为抗原。物质所具有生特异性结合的物质称为抗原。物质所具有的这种特性称为抗原性的这种特性称为抗原性。抗原的物质可以是抗原的物质可以是机体自身的成分如蛋白、酶、多肽或者多糖。机体自身的成分如蛋白、酶、多肽或者多糖。也有外来的抗原（如病毒、污染物）。也有外来的抗原（如病毒、污染物）。ABCD二、酶标仪和多功

2、能酶标仪二、酶标仪和多功能酶标仪 普通酶标仪普通酶标仪 多功能酶标仪多功能酶标仪1.普通酶标仪普通酶标仪即酶联免疫检测仪即酶联免疫检测仪(ELISA Reader）Bio-RadModel 5504万元万元光源光源光电检测器光电检测器电信号经前置放大、对电信号经前置放大、对数放大、模数转换等数放大、模数转换等滤光片滤光片或单色器或单色器酶标仪结构及原理 光源：钨灯光源：钨灯滤光片：常用的波长范围：滤光片：常用的波长范围： 405nm 450nm(四甲基联苯胺四甲基联苯胺) 490nm(邻苯二胺邻苯二胺) 630nm单色器：可调节波长的光单色器：可调节波长的光Thermo公公司全波长多司全波长多

3、功能酶标仪功能酶标仪50多万元多万元三、酶标仪操作三、酶标仪操作 1. 注意事项注意事项 2. 酶标板酶标板 3. 操作要点操作要点1.注意事项1）反复研读）反复研读试剂盒试剂盒说明，熟悉操作步骤。说明，熟悉操作步骤。2）加样的准确性。操作中须注意显色剂和）加样的准确性。操作中须注意显色剂和终止的加量准确，最好使用加样枪加液终止的加量准确，最好使用加样枪加液以保证比色时吸光度的准确性。枪头不以保证比色时吸光度的准确性。枪头不要混用。要混用。3）洗涤时间。一般按照说明书要求，起码）洗涤时间。一般按照说明书要求，起码洗涤洗涤5次，切要把残液甩干。次，切要把残液甩干。4）观察和判读吸光度结果应在）观

4、察和判读吸光度结果应在15min 内完内完成，否则液体颜色会减退。成，否则液体颜色会减退。5）待测生物样品要放在）待测生物样品要放在4冰浴上。冰浴上。6）显色液要现用现配，避光低温保存）显色液要现用现配，避光低温保存 。7）注意购买抗体的保存。）注意购买抗体的保存。2.2.酶标板酶标板酶标板材料酶标板材料 可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式，这是进行酶标记测定的基为不溶形式，这是进行酶标记测定的基本条件。许多物质可作为固相载体，如本条件。许多物质可作为固相载体，如纤维素、交联右旋糖苷、琼脂糖珠、聚纤维素、交联右旋糖苷、琼脂糖珠、聚丙烯、丙烯、聚苯乙烯

5、聚苯乙烯、聚乙烯及、聚乙烯及聚氯乙烯聚氯乙烯等等等。但在等。但在ELISA中最常用的是中最常用的是聚苯乙烯聚苯乙烯或聚氯乙烯或聚氯乙烯微量反应板。由于微量反应微量反应板。由于微量反应板所用试剂量少，操作方便，适合于大板所用试剂量少，操作方便，适合于大规模应用。规模应用。酶标板材料酶标板材料 国产聚苯乙烯微量反应板（上海塑料三国产聚苯乙烯微量反应板（上海塑料三厂出品）目前已大量应用于厂出品）目前已大量应用于ELISA测定，测定，并且获得了满意的结果。但并且获得了满意的结果。但每批微量反每批微量反应板对抗原或抗体蛋白质的吸附性能是应板对抗原或抗体蛋白质的吸附性能是有显著差别的有显著差别的。实验证明

6、，吸附效果似。实验证明，吸附效果似乎与塑料的类型及其表面性质有关。特乎与塑料的类型及其表面性质有关。特别是塑料制品在加工过程中因工艺不同别是塑料制品在加工过程中因工艺不同或受其他因素的影响而造成吸附性能的或受其他因素的影响而造成吸附性能的极大差异，甚至完全丧失吸附能力。极大差异，甚至完全丧失吸附能力。酶标板鉴定酶标板鉴定 对每批制品在使用前，必须经过实验室对每批制品在使用前，必须经过实验室鉴定，鉴定的方法和标准是对每批购置的鉴定，鉴定的方法和标准是对每批购置的微量反应板抽样，用检测试剂盒进行试验，微量反应板抽样，用检测试剂盒进行试验，当显色并终止反应后，在酶标比色计中测当显色并终止反应后，在酶

7、标比色计中测定其定其O.D值。值。 一般认为全板中每两孔间一般认为全板中每两孔间O.D值的误差不值的误差不超过超过10%为合格。如果中间孔与四周孔为合格。如果中间孔与四周孔O.D值相差太大，或者反应板的这一边与值相差太大，或者反应板的这一边与另一边凹孔的另一边凹孔的O.D值相差大，均不合格。值相差大，均不合格。此外，还要检查阳性和阴性参考血清此外，还要检查阳性和阴性参考血清O.D值是否有明显差别。一般要求有值是否有明显差别。一般要求有10倍左倍左右的差异为合格。右的差异为合格。酶标仪单、双波长检测酶标仪单、双波长检测 一般的酶标仪在测定中均有单波长和双一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模

8、式，为什么呢？波长的模式，为什么呢？ 酶标仪是垂直光路，受被测样本液面是酶标仪是垂直光路，受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。等的影响较大。 选择选择 630nm为参比波长为参比波长, 测定其吸光度测定其吸光度A0;在测定波长（如在测定波长（如490nm/450nm）下测定）下测定样本的吸光度样本的吸光度A,双波长测定后双波长测定后,取二者的取二者的差值差值, 测定结果的标准偏差比单波长下测测定结果的标准偏差比单波长下测定的要小定的要小,实验误差小。实验误差小。 在在ELISA测定所使用的底物如邻苯二胺测定所使用的底物如邻苯二胺或四

9、甲基联苯胺，显色终止 后 ， 在或四甲基联苯胺，显色终止 后 ， 在 630nm处的吸光度值都只有吸收峰处处的吸光度值都只有吸收峰处（490nm/450nm）吸光度值的）吸光度值的1%以下，以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测因此，利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。灵敏度。 一般酶标仪比色应该首选双波长。一般酶标仪比色应该首选双波长。酶标仪的工作环境酶标仪的工作环境1.仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。2.仪器应放置在噪音低于仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。分贝的环境下。3.为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。为延缓光学部件的老化，应避免

10、阳光直射。4.操作环境温度应在操作环境温度应在1540之间，环境湿度在之间，环境湿度在15%85%之间。之间。5.操作时电压应保持稳定。操作时电压应保持稳定。6.操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。7.保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。的操作空间。 3.Bio-Rad Model 550酶标仪操作酶标仪操作1.接通电源，打开酶标仪开关。接通电源，打开酶标仪开关。2.仪器开始自检。仪器开始自检。Self disgonsis in progress3.按箭头光标到按箭头光标到Mode,设置参数。当仪器出设置参

11、数。当仪器出现现set analysis mode 时，按时，按enter确定。确定。4.选择测定波长的类型。按箭头光标到选择测定波长的类型。按箭头光标到D/S,按按select选中，选中，enter 确定。光标出现确定。光标出现在在Dual/Single，选择双波长，按选择双波长，按select选中，选中，enter 确定。确定。 5.选择滤光波长，此酶标仪有四个波长：选择滤光波长，此酶标仪有四个波长：1：405nm;2:450nm;3:490nm;4:630nm。按箭头光。按箭头光标到标到Filt,按按select选中，选中，enter 确定。光标出确定。光标出现在现在Mes=#X Ref

12、=# Y，如按光标选择数字，如按光标选择数字3，即即490nm的测定波长的测定波长,enter确定。再按确定。再按Next, 到到Ref,按光标选择参考波长，如选数字按光标选择参考波长，如选数字4.即为即为630nm，enter 确定。确定。 6.选择是否混合。按箭头光标到选择是否混合。按箭头光标到Mix,按按select选中，选中，enter 确定。光标出现在确定。光标出现在yes/No，如，如光标选择光标选择No，按，按select选中选中,enter 确定，说明样确定，说明样品不混合。品不混合。 7.返回原显示，返回原显示，set analysis 的的D/S FiltMix,按按ent

13、er出现出现set analysis的的Mode。说明仪器已经到达测试状态。说明仪器已经到达测试状态。 8.推开测定盖，将酶标板小心正确放到测定槽推开测定盖，将酶标板小心正确放到测定槽内，合住盖。内，合住盖。 9.上好酶标仪专用的光敏打印纸。上好酶标仪专用的光敏打印纸。 10.按按Start，开始测量吸光度，并自动打印测，开始测量吸光度，并自动打印测定结果。定结果。 11.测定完成后，取出酶标板，合上盖，关仪器测定完成后，取出酶标板，合上盖，关仪器开关和电源，盖上防尘罩。开关和电源，盖上防尘罩。 4.Thermo多功能酶标仪的操作 1.开机，点击开机，点击 SkanIt RE for Varioskan flash2.4.3,进入分析系统；进入分析系统； 2. 选择选择new session;name;next； 3.选择酶标板，如选择酶标板，如96孔版；孔版；next； 4.选定文件夹；设定测定方法，如波长；选定文件夹；设定测定方法，如波长； 5.连接仪器连接仪器connect；放板（；放板（in）,save;点