酒石酸美托洛尔缓释片人体相对生物利用度研究

1、鱼!翌型!壁!望翌g!塑!:!堕!:!中国新药杂志2006年第15卷第14期酒石酸美托洛尔缓释片人体相对生物利用度研究徐婷娟,魏伟,徐维平,肖峰,汪庆童,吴成义,杨昭毅(安徽医科大学临床药理研究所,安徽省高校省级抗炎免疫药理学重点实验室,安徽省中药研究与开发重点实验室,合肥230032摘要目的:估算试验酒石酸美托洛尔缓释片(T的药动学参数及相对生物利用度,并以相同规格的酒石酸美托洛尔缓释片作为参比制剂(R,判断2种缓释片是否具有生物等效性。方法:单剂量试验:20例健康志愿者单剂量口服酒石酸美托洛尔缓释片后24h内多点采集血样,采用HPLC法测定人血清中酒石酸美托洛尔的浓度。多剂量试验:20名健

2、康志愿者口服酒石酸美托洛尔缓释片,达稳态后,末次服药后24h内多点采集血样,用HPLC 法测定血清中药物浓度。两试验均采用双周期两制剂交叉试验设计。血药浓度一时间数据经DAS软件处理后得药动学数据,并进行等效性检验。结果:2种酒石酸美托洛尔缓释片中酒石酸美托洛尔的血药浓度经时变化和药代动力学参数相近,以参比制剂做对照,单剂量组酒石酸美托洛尔缓释片的相对生物利用度F,F分别为(93.19±25.55%和(93.20±28.11%,多剂量组酒石酸美托洛尔缓释片稳态时的相对生物利用度为(115.73±57.98%,均符合生物等效性要求。结论:2种酒石酸美托洛尔缓释片的口

3、服生物利用度具有生物等效性。关键词】酒石酸美托洛尔;相对生物利用度;药动学中图分类号】R972.4;R544.1【文献标识码A文章编号】10033734(2006141206一04Relative bioavailability of metoprolol tartrate extended release tablets XU Ting-juan,WEI Wei,XU Weiping,XIAO Feng,WANG Qingtong,WU Chengyi,YANG Zhao-yi (Institute of Clinical Pharmacology,Anhui Medical Univers

4、ity,Key Laboratory ofAntiinflammatoryimmunopharmacology in Anhui Province,Key Laboratory of R&Dof Chinese Traditional Medicine in Anhui Province,Hefei230032,China Abstract0bjective:To characterize the pharmacokinetics profile and relative bioavailahility of test metoprolol tartrate extended rele

5、ase tablets(Tand reference metoprolol tartrate extended release tablets(R.Methods:20healthy volunteers were orally administered with a single crossover dose of the test(Fand(93.20±28.11%(F,repectively,and the relative bioavailability in the muhidoses measurement was(115.73-4-57.98%(F.Conclusion

6、:The test metoprolol tartrate extended release tablets were bioequivalent to the reference metoprolol extended release tablets.Key wordsmetoprolol tartrate;relative bioavailability;pharmacokinetics美托洛尔为B,一受体阻滞药,用于治疗高血压、心绞痛、心肌梗死、肥厚型心肌病、主动脉夹层、心律失常、甲状腺机能亢进、心脏神经官能症等。近年来也用于心力衰竭的治疗。该药对B。一受体有选择性阻断作用,无内源性拟交

7、感活性,有较弱的膜稳定作用。其阻断p.受体的作用约与普萘洛尔(PP相等,对B,一受体的选择性稍逊于阿替洛尔(AT。美托洛一】206一尔对心脏的作用如减慢心率、抑制心肌收缩力、降低自律性和延缓房室传导时间等与PP和AT相似,其降低运动试验时升高的血压和心率的作用也与PP 和AT相似;对血管和支气管平滑肌的收缩作用较PP弱,因此对呼吸道的影响也较小,但仍强于AT;也能降低血浆肾素活性¨。为研究酒石酸美托洛尔缓释片的血药浓度经Chinese Journal of New Drugs2006,V01.15No.14时过程,估算相应的药动学参数,以国内上市的酒石酸美托洛尔缓释片为参比制剂,估算

8、其相对生物利用度,并进行等效性检验,为临床合理用药提供参考。材料与方法1药品与试剂试验酒石酸美托洛尔缓释片(试验制剂,规格:每片100mg,合肥舒博士药业有限公司提供,批号:040601;参比酒石酸美托洛尔缓释片(参比制剂,规格:每片100mg,四川瑞康制药有限公司生产,批号:040801。对照品:酒石酸美托洛尔,中国药品生物制品检定所提供,批号:10084-010。内标物:盐酸艾司洛尔,中国药品生物制品检定所提供,批号:100240203。试剂:甲醇(色谱纯,美国天地公司;磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺、三氯乙酸均为分析纯;水、重蒸水自制。2仪器美国Waters公司高效液相色谱仪,Waters一5

9、15恒流泵,Fluorescence一2475荧光检测器;HS色谱数据工作站(杭州英谱科技开发有限公司;TGL一16G冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂;AA一200DS电子分析天平(Denver仪器公司;SK一1快速混匀器(江苏荣华仪器有限公司;KS一120E超声波清洗器(宁波科生仪器厂。3受试者选择4给药方案及样品采集处理4.1单剂量给药采用双周期两制剂交叉试验设计。20例男性健康志愿者,按体重体型排对,体重体型相近者两两配对,编成10个层次组,在每个层次组内随机确定给药顺序,并将给药顺序相同者归并为A,B两组。A组先口服参比制剂,2周后服试验制剂;B组先口服试验制剂,2周后服参比制剂。中国新

10、药杂志2006年第15卷第14期服药前受试者禁食过夜(10h以上,于次日早晨7:00空腹服用试验制剂1片或参比制剂1片,用200mL温开水吞服,分别于给药前1h给药后1.0, 1.5,2.0,3.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0,14.0, 24.0h从志愿者肘静脉取血4mL,静置,离心取血清1mL,置一20冰箱待测;服药后2h可饮水,4和10h进统一清淡饮食。清洗期密切观察受试者的一般情况,2周后交叉服药。受试者服药过程始终置于主管医师和护理人员的监护下,观察受试者的一般情况和药物不良反应发生情况,备有抢救的一切设备及药品。服药前12hck住病房,服药后024h在病房内活动,服

11、药后取血样在临床监护室中进行,每次取血后至少观察30rain,无任何异常情况才能离开病房,试验期间未进行剧烈活动。4.2多剂量给药采用双周期两制剂交叉试验设计。选择符合上述试验条件的男性健康受试者20例,根据身高、体重相近原则,两两配对,编成10个层次组,组内按随机数字逢单服参比制剂、逢双服试验制剂,达稳态浓度后检测,2周后再交叉服药。服药前受试者禁食过夜(10h以上,于次日早晨6:00空腹服用试验制剂1片或参比制剂1片,均用200mL温开水送服,d3服药前从志愿肘静脉取血4mL,静置,离心取血清1mL,提取并检测,以后每天服药前取血4mL,静置,离心取血清1mL,提取并检测谷浓度(C一,当连

12、续3d所测谷浓度相当时,则认为已达到稳态血药浓度后1d试验制剂组分别于给药前1h和给药后1.0,1.5,2.0,3.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0,14.0,24.0h从志愿者肘静脉取血4mL,静置,离心取血清l mL,置一20冰箱待测;参比制剂组同样处理。清洗期及服药过程处理均同单剂量给药。5酒石酸美托洛尔血药浓度测定H“o5.1色谱条件色谱柱:Waters,NovaPak,C18柱(250mm×4.6mm,5肛m;流动相:甲醇-水(50:50,水相中含0.14%磷酸二氢钾;用磷酸调pH值至4.0;流速:1.0mLrain;检测波长:E。=277nm, E。=299

13、nm;柱温:30。具塞离心管中,加2molL。浓度的NaOH0.1mL,加4mL的二氯甲烷.正己烷(1:4混合液,精密加入艾司洛尔内标溶液(20/zgmL。110肛L,涡旋5min。一1207鱼坚!塑!里!垡塑!旦翌g!螋!:!塑!:!13000rrain1离心25rain。取上清液(有机相 3mL,氮气吹干。残留物用100肛L的流动相溶解,涡旋5min,3000rmin。离心5min,过滤,取20肛L 进样。6数据处理和分析采用DAS软件计算主要药代动力学参数:单剂量有消除相半衰期(t,:、峰浓度(c、达峰时间(T和血药浓度一时间曲线下面积(AUC等;多剂量试验有稳态药时曲线下面积(AUC。

14、、平均稳态血药浓度(C。,、血药浓度波动度(DF。应用各个受试者的AUC。,。和AUC。分别计算相对生物利用度,并求其均值和标准差。计算公式为:F= (AUCo.。T/(AUCo,。R X100%,F=(AUCo.。 T/(AUC。R×100%。C一,AUC在进行对数转换后,采用交叉试验设计的方差分析,分析药物间、个体间及周期间变异的统计学意义。用双向单侧t检验,以DAS软件进行计算,C,AUC(梯形法用对数值,AUC以80%125%作为等效标准,c一以70%一143%作为等效标准,显著性水平Ot=0.05。结果1方法专属性取空白人血清0.3mL,按“血清样品处理方法”项下依法操作,

15、得色谱图1A;将一定浓度的酒石酸美托洛尔标准溶液加入空白血清,同法操作,得色谱图1B;取口服酒石酸美托洛尔缓释片后的血清样品,依法操作,得色谱图1C。结果表明,空白血清中内源性物质不干扰酒石酸美托洛尔的测定。在以上条件下,酒石酸美托洛尔与血清峰分离良好。02468f,min空自IllL清02468tlrain空自札清+内标+美托洛尔(2556ng-m L.10246810tlrain受试者口服3h后样品l美托裕尔(tit=509;2内标(tll=5.75图1酒石酸美托洛尔HPLC色谱图2血清标准曲线的建立及最低检测浓度测定精密吸取不同浓度的标准品溶液一定量置于8个具塞离心管中,以空白血清配成含

16、待测美托洛尔为1.0,7.1,21.3,42.6,85.2,170.4,255.6,497ngmL“的标准血清样本。按“血清样品处理方法”自“精密一】208一生垦堑堑苤查!堕生箜!i鲞笙!塑加入艾司洛尔内标溶液(20/zgmL。10/zL”起同法操作进行分析,建立标准曲线。以美托洛尔峰面积(Ai与内标物峰面积(As的比值(y对浓度(X, ngmL。进行线性回归,得到标准曲线,结果表明在1.0497ngmL。1范围内线性良好,可包括美托洛尔在人体内的血药浓度,其线性回归方程为:Y= 559.35X+1.2197(n=5,r=0.9994。最低定量浓度为1ngmL。3提取回收率取空白试管分别精密加

17、入50肛L不同浓度的对照品溶液和0.25mL空白血清,配制成低、中、高3个浓度(分别为10,80和260ngmL1的血清样品各5份,按“血清样品处理方法”自“精密加入艾司洛尔内标溶液(20ngmL120pL”起同法操作。同时另外用水取代空白血清,同上操作,配制3个相同浓度的样品,进样分析,获得相应峰面积(5次测定的平均值。以每一浓度2种处理方法的峰面积比值计算提取回收率,结果见表1。表1血清中酒石酸美托洛尔提取回收率及精密度i±s.n=5.%4精密度同回收率测定方法配制成低、中、高3个浓度的血清样品,按血样处理方法自“精密加入艾司洛尔内标(20肛gmL。110pL”起同法操作,分别测

18、定日内精密度和实验5d的日间精密度(n=5,计算日内和Et问的相对标准差(RSD均小于10%,测定结果见表l。5稳定性按标准曲线配制方法配制浓度分别为10,80和260ngmL。1的血清质控样品,每个浓度各3份,第1份立即按“血清样品处理”项下操作;第2份室温放置12h后,按“血清样品处理办法”项下操作,考察样品在室温条件下的稳定性;第3份于一20保存5d后,用37水浴解冻,按“血清样品处理”项下操作,测定血清中药物浓度,考察样品在冻融条件下的稳定性。结果见表2。RSD 均<15%,表明血清样品在室温放置和冷冻储存等情况下稳定。表2酒石酸美托洛尔的稳定性试验里!i!翌!垡型!望翌墅!竺!

19、:!型!:!16血药浓度.时间数据受试者单剂量和多剂量口服试验制剂和参比制剂后酒石酸美托洛尔平均血药浓度一时间数据及曲线见图2,3。两制剂的酒石酸美托洛尔血药浓度-时问过程相近。250200宅150宝100o50O0510*f,h图2单剂量口服酒石酸美托洛尔缓释片后的平均血药浓度-时间曲线z。u200150100;50制剂制剂一口一一50-40-3020.10O102030f,h图3多剂量口服酒石酸美托洛尔缓释片后的平均血药浓度-时间曲线7主要药动学参数和相对生物利用度单剂量和多剂量口服试验制剂后,与口服参比制剂的药动学参数接近,主要药动学参数见表3,4。以参比制剂作对照,单剂量组酒石酸美托洛

20、尔缓释片的相对生物利用度F,F分别为(93.19±25.55%和(93.204-28.11%,多剂量组酒石酸美托洛尔缓释片稳态时的相对生物利用度为(115.73±57.98%,均符合相对生物利用度的要求。表3单剂量口服酒石酸美托洛尔缓释片后的主要药动学参数i±s,n=20表4多剂量口服酒石酸美托洛尔缓释片后的主要药动学参数i±s,n=208生物等效性评价log(AUC。叫和log(C在制剂间、周期间.差堂鬯堑蕴壅查!生箜!鲞箜!塑异均无显著性,而个体间差异有显著性,结果表明两制剂具有生物等效性。讨论本研究建立了美托洛尔在人体的血药浓度HPLC一荧光检测方法,方法简便、灵敏,线性关系良好,提取回收率,精密度高,样品峰与杂质峰分离较好,无干扰,适合人体内血药浓度检测和药动学研究。有报道美托洛尔单剂量口服吸收迅速、完全,由于是肝脏代谢,其血药浓度个体差异较大。这与本试验中测定结果基本一致。因此建议在临床使用中采取个体化的给药方案。美托洛尔单剂量和多剂量口服后,其c和L。基本相似。对药动学参数AUC和c进行方差分析和双向单侧t检验及(12ct置信区间分析,方差分析结果表明:制剂间、周期间差异均无显著性,而个体间差异有显著性。双向单侧t检验结果表明:2种制剂的口服生物利