植物离体微繁中存在的主要问题

1、主讲：贾丽慧时间：2017.4目录CONTENTS一褐变二玻璃化三遗传的稳定性四污染褐变一、褐变种子生产与经营专业教学资源库 褐变与菌类污染和玻璃化一起被称为组织培养中的三大障碍。原因：材料的生理状态、培养基成分、外植体大小、人为切割等。克服的措施：选择适当的外植体和培养条件、抗氧化剂和抑制剂的作用、连续转移和预处理。一、褐变种子生产与经营专业教学资源库玻璃化二、 玻璃化 试管苗玻璃化：是指组织培养过程中的特有的一种生理失调或生理病变，试管苗呈半透明状外观形态异常的现象。种子生产与经营专业教学资源库（一）玻璃化苗的形态学、解剖学特征 形态上，水渍化呈半透明状，植株矮小肿胀，茎尖顶端分生组织相对

2、较小，保持分生组织特性的时期也缩短，节间短或几乎没有，叶表面缩小或增大，叶片常皱缩并纵向卷曲，脆弱易破碎，其颜色不正常。八宝景天正常苗八宝景天玻璃化苗种子生产与经营专业教学资源库 显微学观察表明，玻璃化苗一般茎皮层及髓部的薄壁组织过度伸长、细胞间隙大、输导组织发育不良或畸形，导管和管胞木质化不完全。叶片栅栏组织细胞层数减少，或仅有海绵组织，叶肉细胞间隙大。车轮棠玻璃化与正常芽车轮棠玻璃化与正常芽和叶片和叶片显微结构的对比显微结构的对比（一）玻璃化苗的形态学、解剖学特征种子生产与经营专业教学资源库（二）玻璃化苗的生理生化特点 细胞中含水量高，叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素等含量较低。 牛自勉等研

3、究发现苹果玻璃化苗的叶片及茎尖中GA3、IAA、ABA含量极显著上升，而CTK含量则显著下降。hyperhydricity in Oreopanax （及山参属） nymphaefolia种子生产与经营专业教学资源库（三）影响试管苗玻璃化的因素 外植体：外植体类型及大小 培养的环境条件：光照、温度、湿度、pH值。 培养基成分：Ms培养基是控制玻璃化发生较理想的培养基，培养基中增加K、P、Fe、Ca、Mn、Zn元素的含量，降低B含量，增加硝态氮，降低铵态氮，可起到降低玻璃化率的作用。玛卡种子生产与经营专业教学资源库（四）玻璃化苗的综合控制 选择合适的外植体：玻璃化苗绝大多数为来自茎尖或茎切段培养

4、物的不定芽。 改善培养基组成：适当降低培养基中NH4+浓度，适当添加IAA、GA3、ABA，减少BA用量均可降低玻璃化苗的发生频率。 改善培养条件：适当提高培养时的光照强度，延长光照时间，降低培养容器内的空气相对湿度，改善供氧状况，采用有透气膜的培养容器等培养条件的改良均可以降低玻璃化苗的发生频率。种子生产与经营专业教学资源库遗传的稳定性三、遗传的稳定性 实践证明，茎尖分生组织是遗传学上最稳定的部分，通过顶芽和腋芽繁殖途径进行增殖是最能保持原品种优良特性的繁殖方式。变异的白花贝母兰白花贝母兰组培苗种子生产与经营专业教学资源库污染四、 污染（一）来源 植物材料本身（表面、内生菌）； 在无菌操作和

5、培养过程中由外界环境 进入培养容器而引起的。种子生产与经营专业教学资源库四、 污染（二）污染的症状 23d产生菌落表面灭菌不彻底； 35d后陆续产生内生菌所致。种子生产与经营专业教学资源库（三）污染所引起的危害 引起早期培养的失败，试管苗生长速度减慢、生活力下降、增殖效率降低、玻璃苗增加及生长不均匀、叶片失绿甚至死亡等；在后期导致试管苗移栽困难和死亡；污染也会引起培养物的遗传变异。种子生产与经营专业教学资源库（四）污染的防止 供体材料的选择：尽可能使用温室和人工气候条件中培养的健康、无病虫害植物作材料。 培养物的检测：特别要注意培养物和培养基接触的部分。 合理的扩繁殖程序：将最初的无菌培养物中一部分作为“原原种”进行专门保存，分批繁殖和复检后再进行大规模生产。 严格无菌操作规程种子生产与经营专业教学资源库（五）已污染培养物的处理 抗菌素：弄清楚要抑制菌的种类；使用的抗生素是否对培养的植物组织有不良影响；还要确立抗生素的使用浓度、处理时间的长短。 采取措施恢复无菌状态，方法之一是使培养物在试管内长成小植株后移栽，待它生长成健壮的幼苗后再重新消毒接种。另一种方法在一个较大的容器中生长，适当降低容器中的相对湿度，待