天然产物化学成分提取分离方式

1、天然产物化学成分提取分离方式1、 天然产物化学成分的构成特点天然产物化学成分的构成特点 同种植物含有多种结构类型的化学成分同种植物含有多种结构类型的化学成分 总成分含量少、种类多总成分含量少、种类多 有效成分含量低有效成分含量低 立题着眼点立题着眼点 了解前人的研究工作了解前人的研究工作 原材料鉴定原材料鉴定2.1 天然产物化学成分的预试验与提取 开发利用天然产物资源离不开对天然产物复杂化开发利用天然产物资源离不开对天然产物复杂化 学成分的研究，提取分离是开展研究的初期。学成分的研究，提取分离是开展研究的初期。 天然产物化学研究常从有效成分或生理活天然产物化学研究常从有效成分或生理活 性成分的

2、提取、分离工作开始。在进行提性成分的提取、分离工作开始。在进行提 取之前，应了解所用材料的基源（如动、取之前，应了解所用材料的基源（如动、 植物的学名）、产地、药用部位、采集时植物的学名）、产地、药用部位、采集时 间等。间等。一、天然产物化学成分的预试验与系统提取一、天然产物化学成分的预试验与系统提取（一）天然产物化学成分的预试验（一）天然产物化学成分的预试验 初步了解所含成分情况，然后再进行有计划、初步了解所含成分情况，然后再进行有计划、 有针对性的提取分离。有针对性的提取分离。1.系统预试验系统预试验根据各成分极性的不同，选择不同极根据各成分极性的不同，选择不同极性的溶剂，将天然产物化学成

3、分系统的分成几个不同的性的溶剂，将天然产物化学成分系统的分成几个不同的部分，然后再利用显色反应或沉淀反应或结合纸色谱、部分，然后再利用显色反应或沉淀反应或结合纸色谱、薄层色谱定性判断各部分中可能含有的化合物成分类型。薄层色谱定性判断各部分中可能含有的化合物成分类型。2.单项预试验单项预试验 生物碱：在酸性条件下与碘化铋钾显棕黄色或橘生物碱：在酸性条件下与碘化铋钾显棕黄色或橘 红色沉淀。红色沉淀。 黄酮：黄酮类化合物的乙醇溶液中加入镁粉，滴黄酮：黄酮类化合物的乙醇溶液中加入镁粉，滴 入浓盐酸后振荡，泡沫显桃红色。入浓盐酸后振荡，泡沫显桃红色。 皂苷、强心苷、甾体：其乙酐溶液与浓硫酸反应皂苷、强心

4、苷、甾体：其乙酐溶液与浓硫酸反应 后显示各种颜色皂苷；后显示各种颜色皂苷； 水溶液振荡时能产生大量水溶液振荡时能产生大量 泡沫。泡沫。酚类：与三氯化铁反应显示各种颜色。酚类：与三氯化铁反应显示各种颜色。糖苷类：与斐林试剂反应有砖红色沉淀生成。糖苷类：与斐林试剂反应有砖红色沉淀生成。有机酸：与溴酚蓝反应显黄色。有机酸：与溴酚蓝反应显黄色。氨基酸、多肽：与茚三酮反应显蓝紫色。氨基酸、多肽：与茚三酮反应显蓝紫色。蛋白质：双缩脲反应显紫红色。蛋白质：双缩脲反应显紫红色。 1.系统溶剂提取系统溶剂提取选择几种不同极性的溶选择几种不同极性的溶 剂，由低极性到高极性进行分步提取，使剂，由低极性到高极性进行分

5、步提取，使 各成分依其在不同极性溶剂中的溶解度不各成分依其在不同极性溶剂中的溶解度不 同而得以分别提取出来。同而得以分别提取出来。 常用的两种溶剂系统为：常用的两种溶剂系统为： （1）己烷）己烷乙醚乙醚甲醇甲醇水水 （2）己烷）己烷二氯甲烷二氯甲烷甲醇甲醇水水2.单一溶剂提取单一溶剂提取根据水可提取极性成分，石根据水可提取极性成分，石 油醚可提取非极性成分，醇能提取大部分成分油醚可提取非极性成分，醇能提取大部分成分 的特点，用一种溶剂将性质相近的组分集中在的特点，用一种溶剂将性质相近的组分集中在 一起提取出来。一起提取出来。3.混合溶剂提取混合溶剂提取采用两种或两种以上混合溶采用两种或两种以上

6、混合溶 剂进行提取，有时会提高提取效率。剂进行提取，有时会提高提取效率。二、天然产物化学成分的传统提取方法二、天然产物化学成分的传统提取方法 溶剂法溶剂法 水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法 升华法升华法 压榨法压榨法二、天然产物化学成分的传统提取方法二、天然产物化学成分的传统提取方法（一）溶剂提取法（一）溶剂提取法提取原理提取原理:根据天然产物化学成分与溶剂间根据天然产物化学成分与溶剂间“极性相极性相似相溶似相溶”的原理，依据各类成分溶解度的差异，选择的原理，依据各类成分溶解度的差异，选择对所提成分溶解度大、对杂质溶解度小的溶剂，依据对所提成分溶解度大、对杂质溶解度小的溶剂，依据“浓度差浓度差”原理，

7、将所提成分从天然材料中溶解出来。原理，将所提成分从天然材料中溶解出来。提取依据：被提取化学成分的溶解性（极性）提取依据：被提取化学成分的溶解性（极性）提取的关键：提取溶剂的选择提取的关键：提取溶剂的选择 溶剂的选择原则：溶剂的选择原则： 与所提成分不发生化学反应与所提成分不发生化学反应; 对所提成分溶解度大对所提成分溶解度大,对杂质溶解度小对杂质溶解度小; 价廉、易得、无毒、安全、易于回收等。价廉、易得、无毒、安全、易于回收等。 影响溶剂提取的因素：影响溶剂提取的因素： （3）化合物极性的判断）化合物极性的判断： 由分子中官能团的种类、数目、及排列由分子中官能团的种类、数目、及排列方式等综合因

8、素决定。方式等综合因素决定。化学成分的极性：是选择提取溶剂最重要的依据。化学成分的极性：是选择提取溶剂最重要的依据。 影响化合物极性的因素：影响化合物极性的因素： (1) 化合物分子母核大小（碳数多少）：分子大、碳数多，化合物分子母核大小（碳数多少）：分子大、碳数多，极性小；分子小、碳数少，极性大。极性小；分子小、碳数少，极性大。 (2) 取代基极性大小：在化合物母核相同或相近情况下，化取代基极性大小：在化合物母核相同或相近情况下，化合物极性大小主要取决于取代基极性大小。合物极性大小主要取决于取代基极性大小。 常见基团极性；酸酚醇胺醛酮酯醚烯烷常见基团极性；酸酚醇胺醛酮酯醚烯烷 举例：判断下列

9、各组化合物极性大小。举例：判断下列各组化合物极性大小。A B C被提取成分的极性被提取成分的极性2.2.提取溶剂的选择提取溶剂的选择(1)(1)溶剂的分类溶剂的分类: 强极性溶剂强极性溶剂水、酸水、碱水水、酸水、碱水 亲水性有机溶剂亲水性有机溶剂甲醇、乙醇、丙酮甲醇、乙醇、丙酮( (可与水可与水 任意混溶任意混溶) ) 亲脂性有机溶剂亲脂性有机溶剂乙醚、氯仿、苯、石油醚乙醚、氯仿、苯、石油醚 等等( (不与水混溶不与水混溶) )（2 2）常用溶剂极性大小）常用溶剂极性大小：水甲醇乙醇丙酮水甲醇乙醇丙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚氯仿苯四氯化正丁醇乙酸乙酯乙醚氯仿苯四氯化碳正己烷碳正己烷石油醚。石油醚。（

10、3）溶解规律：）溶解规律：水可以溶解：氨基酸、糖类、无机盐等。水可以溶解：氨基酸、糖类、无机盐等。 亲脂性有机溶剂（与水不能任意混溶）可溶解：亲脂性有机溶剂（与水不能任意混溶）可溶解：3溶剂提取顺序：溶剂提取顺序：极性递增的顺序极性递增的顺序 石油醚或汽油石油醚或汽油油脂、蜡、叶绿素、挥发油、油脂、蜡、叶绿素、挥发油、 游离甾体及三萜类化合物游离甾体及三萜类化合物 氯仿或乙酸乙酯氯仿或乙酸乙酯游离的生物碱、有机酸、游离的生物碱、有机酸、 黄酮、香豆素等苷元黄酮、香豆素等苷元甲醇、乙醇、丙酮甲醇、乙醇、丙酮苷类、生物碱、鞣质苷类、生物碱、鞣质水水氨基酸、糖类、无机盐氨基酸、糖类、无机盐提取溶剂提

11、取溶剂 性能特点性能特点 适宜提取成分适宜提取成分 提取方法提取方法强极性溶剂强极性溶剂 溶解范围广溶解范围广 生物碱盐生物碱盐 水水 穿透能力强穿透能力强 苷类苷类 浸渍法浸渍法 易得、安全易得、安全 糅质糅质 煎煮法煎煮法 糖类糖类 渗漉法渗漉法 有些脂溶性成分溶解不完全有些脂溶性成分溶解不完全; 氨基酸氨基酸 有些苷类成分易酶解变质有些苷类成分易酶解变质; 蛋白质蛋白质 水提液易发霉、变质水提液易发霉、变质; 水溶性杂质多水溶性杂质多; 沸点高，浓缩困难沸点高，浓缩困难亲水性有机溶剂亲水性有机溶剂（和水可任意混溶）（和水可任意混溶） 性能特点性能特点 溶解范围溶解范围 提取方法提取方法

12、除多糖、除多糖、 溶解范围广（不同浓度乙醇）溶解范围广（不同浓度乙醇） 蛋白质外蛋白质外 渗滤法渗滤法 （稀醇）水溶性杂质溶出少（稀醇）水溶性杂质溶出少 的大多数的大多数 浸渍法浸渍法 乙醇乙醇 可抑制酶的活性可抑制酶的活性 化学成分化学成分 回流法回流法 提取液不易发霉、变质提取液不易发霉、变质 均可均可 连续回流法连续回流法 大部分可回收利用大部分可回收利用 但有挥发性、易燃烧但有挥发性、易燃烧甲醇甲醇 溶解特点与乙醇相似，但有毒溶解特点与乙醇相似，但有毒丙酮丙酮 溶解性能同乙醇，但沸点低、易挥发，作为提取溶剂不溶解性能同乙醇，但沸点低、易挥发，作为提取溶剂不 常用；但对色素溶解性能好，在

13、分离、精制时常用。常用；但对色素溶解性能好，在分离、精制时常用。 性能特点性能特点 提取范围提取范围 提取方法提取方法 对化合物溶解对化合物溶解 游离生物碱游离生物碱 回流法回流法亲脂性亲脂性 选择性较强选择性较强, 苷苷 元元 连续回流法连续回流法有机溶剂有机溶剂 水溶性杂质少、水溶性杂质少、 某些苷类某些苷类 易纯化易纯化 ; 挥发性大、易燃烧、有毒挥发性大、易燃烧、有毒 ， 价格昂贵，对提取设备要求高，价格昂贵，对提取设备要求高， 穿透力较弱，提取时间长，穿透力较弱，提取时间长， 作为提取溶剂不常用。作为提取溶剂不常用。乙醚乙醚 bp. 35，极易燃，极易燃氯仿氯仿 bp. 61、d 1

14、. 480，不易燃，毒性大，不易燃，毒性大 ，对生物碱溶解性好，对生物碱溶解性好苯苯 bp. 80.1，毒性大，毒性大石油醚石油醚 沸程沸程 3060、6090、90120 脱脂、脱色常用脱脂、脱色常用 与甲醇、乙醇不能任意混溶与甲醇、乙醇不能任意混溶 3.常用的溶剂提取方法常用的溶剂提取方法（1）浸渍法：在常温或温热（）浸渍法：在常温或温热（6080）条件下）条件下,将天将天然材料粗粉以适当的溶剂然材料粗粉以适当的溶剂(水或稀醇水或稀醇)浸泡。适用于遇热易浸泡。适用于遇热易破坏及含大量淀粉、黏液质、树胶、果胶的天然材料的提破坏及含大量淀粉、黏液质、树胶、果胶的天然材料的提取。取。（2）渗漉法

15、：在渗漉筒中，以稀乙醇或酸水为溶剂，）渗漉法：在渗漉筒中，以稀乙醇或酸水为溶剂，不断向天然材料中添加新鲜溶剂，使其渗过原料。适用不断向天然材料中添加新鲜溶剂，使其渗过原料。适用于遇热易破坏及含大量淀粉、黏液质、树胶、果胶的天于遇热易破坏及含大量淀粉、黏液质、树胶、果胶的天然材料的提取。但费然材料的提取。但费时时、费、费溶剂溶剂。 （3）煎煮法：）煎煮法：将天然材料粗粉用水加热煮沸，保持将天然材料粗粉用水加热煮沸，保持一定时间，天然成分即可浸出。煎煮法必须以水为一定时间，天然成分即可浸出。煎煮法必须以水为溶剂。此法提取效率高，但溶剂。此法提取效率高，但对具有挥发性及遇热易对具有挥发性及遇热易破坏

16、的成分、对含大量淀粉、黏液质成分的材料破坏的成分、对含大量淀粉、黏液质成分的材料不宜使用。不宜使用。（4）回流提取法：以有机溶剂加热回流。适用于溶解）回流提取法：以有机溶剂加热回流。适用于溶解度较小的化学成分的提取。对遇热易破坏的成分有影度较小的化学成分的提取。对遇热易破坏的成分有影响，且响，且溶剂消耗量大，需回流设备及几次回流提取方溶剂消耗量大，需回流设备及几次回流提取方可提取完全可提取完全 、操作麻烦。、操作麻烦。（5）连续回流提取法：以索氏提取器（亦称）连续回流提取法：以索氏提取器（亦称 脂肪抽出器）用有机溶剂回流提取。克服了脂肪抽出器）用有机溶剂回流提取。克服了 回流法溶剂消耗量大、需

17、几次回流提取的缺回流法溶剂消耗量大、需几次回流提取的缺 点，提取效率高，节省溶剂。缺点是提取时点，提取效率高，节省溶剂。缺点是提取时 间较长，受热破坏成分不能用此法。间较长，受热破坏成分不能用此法。常用溶剂提取方法常用溶剂提取方法 浸渍法浸渍法 渗漉法渗漉法 煎煮法煎煮法 回流提取法回流提取法 连续回流提取法（索氏提取法）连续回流提取法（索氏提取法）冷提法：冷提法：热提法：热提法：提取方法提取方法 优点优点 缺点缺点 应用范围应用范围浸渍法浸渍法 : 简单、安全简单、安全 提取液体积大、提取液体积大、 含大量多糖及遇热含大量多糖及遇热 易发霉、杂质多易发霉、杂质多 易破坏的成分易破坏的成分渗漉

18、法渗漉法: 提取效率高提取效率高 费溶剂、费时间费溶剂、费时间 以水、醇为溶剂的以水、醇为溶剂的 成分的提取成分的提取煎煮法煎煮法 : 提取效率高提取效率高 热敏性成分及含热敏性成分及含 以水为溶剂的成以水为溶剂的成 多糖的材料不适用多糖的材料不适用 分的提取分的提取回流法回流法: 提取效率高提取效率高 热敏性成分易破坏热敏性成分易破坏 溶解度较小的成分溶解度较小的成分 溶剂消耗量大溶剂消耗量大连续回流法连续回流法:提取效率高提取效率高 热敏性成分易破坏热敏性成分易破坏 溶解度极小的成分溶解度极小的成分 将原材料粗粉或碎片浸泡润湿后，通入水蒸气将原材料粗粉或碎片浸泡润湿后，通入水蒸气 蒸馏（也

19、可在多功能提取器中边煎煮边蒸馏），原材料蒸馏（也可在多功能提取器中边煎煮边蒸馏），原材料 中挥发性成分随水蒸气蒸馏带出，经冷凝后分层收集。中挥发性成分随水蒸气蒸馏带出，经冷凝后分层收集。 该法适用于具有一定挥发性，能随水蒸气蒸馏而该法适用于具有一定挥发性，能随水蒸气蒸馏而不被破坏、难溶或不溶于水的化学成分的提取分离，例不被破坏、难溶或不溶于水的化学成分的提取分离，例如挥发油、某些小分子生物碱（如如挥发油、某些小分子生物碱（如麻黄碱、烟碱、槟榔麻黄碱、烟碱、槟榔碱碱）、）、某些小分子的酚性物质如牡丹酚等某些小分子的酚性物质如牡丹酚等酚类、少数挥酚类、少数挥发性蒽醌苷元、香豆素苷元等，发性蒽醌苷元

20、、香豆素苷元等，可采用水蒸气蒸馏法提可采用水蒸气蒸馏法提取。取。 天然产物化学成分有少量具有升华性，天然产物化学成分有少量具有升华性，如茶碱、咖啡因、游离羟基蒽醌类成分、一些如茶碱、咖啡因、游离羟基蒽醌类成分、一些小分子香豆素类成分等。这些固体成分在受热小分子香豆素类成分等。这些固体成分在受热低于其熔点的温度下，不经液态而直接成为气低于其熔点的温度下，不经液态而直接成为气态，经冷却后又成为固态，从而与天然材料组态，经冷却后又成为固态，从而与天然材料组织分离。织分离。 天然产物多为细胞内物质，在提取时往天然产物多为细胞内物质，在提取时往往需要将植物细胞破碎，现有的机械破碎法往需要将植物细胞破碎，

21、现有的机械破碎法难以将细胞有效破碎，化学破碎法又容易造难以将细胞有效破碎，化学破碎法又容易造成被提取物的结构、性质等发生变化而失去成被提取物的结构、性质等发生变化而失去活性，因而难以取得理想的效果。为了提高活性，因而难以取得理想的效果。为了提高天然产物的提取率，目前人们又提出了一些天然产物的提取率，目前人们又提出了一些新的方法以强化溶剂提取。新的方法以强化溶剂提取。（一）超临界流体萃取（一）超临界流体萃取(supercritical fluid ertraction, SCFE或或SFE)：以超临界流体作为提取溶剂的一种提取：以超临界流体作为提取溶剂的一种提取新技术。新技术。 这种流体可以是单

22、一的，也可以是复合的，添加适这种流体可以是单一的，也可以是复合的，添加适当的夹带剂（如甲醇、乙醇等）可以大大增加其溶解性当的夹带剂（如甲醇、乙醇等）可以大大增加其溶解性和选择性。和选择性。超临界流体超临界流体(supercritical fluid, SCF) :处于临界温度处于临界温度(Tc)、 临界压力（临界压力（Pc）以上、介于气体与液体之间的流体。）以上、介于气体与液体之间的流体。 SCF特点：具有液体和气体的双重特性，如密度特点：具有液体和气体的双重特性，如密度 与液体近似与液体近似 ，对很多物质有很强的，对很多物质有很强的 溶解能力；黏度与气体近似，扩散溶解能力；黏度与气体近似，扩

23、散 系数是液体的系数是液体的100倍（不及气体）。倍（不及气体）。常用的常用的SCF有：二氧化碳、氨、乙烯、丙烷、有：二氧化碳、氨、乙烯、丙烷、 丙烯、水等。丙烯、水等。 目前目前SCFE技术中使用最普遍的溶剂是技术中使用最普遍的溶剂是CO2。 CO2作为作为SFE提取技术的溶剂优点：提取技术的溶剂优点： 1. 临界温度（临界温度（Tc=31.4）接近室温）接近室温, 对热敏性成对热敏性成 分稳定分稳定. 2. 临界压力（临界压力（Pc=7.37 MPa）不太高）不太高, 容易操作容易操作. 3 .其密度对温度和压力变化十分敏感，且与溶解能其密度对温度和压力变化十分敏感，且与溶解能 力在一定范

24、围内成比例，可通过控制温度和压力改力在一定范围内成比例，可通过控制温度和压力改 变物质的溶解能力。变物质的溶解能力。 4. 无毒、不易燃烧、化学惰性。无毒、不易燃烧、化学惰性。 5. 价格便宜，纯度高，容易获得，且价格便宜，纯度高，容易获得，且对环境无污染对环境无污染 SFE的基本原理：在超临界状态下将的基本原理：在超临界状态下将SCF与待分离与待分离 物质接触，利用物质接触，利用SCF的溶解性能与其密度的关系，的溶解性能与其密度的关系， 以及压力和温度对以及压力和温度对SCF溶解能力的影响，用程序升压溶解能力的影响，用程序升压 升温可使其有选择性的依次把极性大小、沸点高低、升温可使其有选择性

25、的依次把极性大小、沸点高低、 分子量大小不同的成分进行分步萃取，然后再借助分子量大小不同的成分进行分步萃取，然后再借助 程序减压、升温的方法使程序减压、升温的方法使SCF变成普通气体，被萃变成普通气体，被萃 取物则自动完全或基本析出，从而达到提取分离的取物则自动完全或基本析出，从而达到提取分离的 目的目的. SFE技术的特点：技术的特点：优点：优点： 1. 萃取和分离合二为一，操作简单、方便。萃取和分离合二为一，操作简单、方便。 2. 萃取效率高，过程易于控制。萃取效率高，过程易于控制。 3. 萃取过程几乎不用有机溶剂，萃取物中无溶剂萃取过程几乎不用有机溶剂，萃取物中无溶剂 残留，对环境无污染

26、。残留，对环境无污染。 4. 萃取流体可循环使用萃取流体可循环使用,节约能耗。节约能耗。 5. SCF的极性可以改变。一定温度下只要改变压的极性可以改变。一定温度下只要改变压 力或加入适当的夹带剂即可提取不同极性的物力或加入适当的夹带剂即可提取不同极性的物 质，大大拓宽了质，大大拓宽了SFE技术的应用范围。技术的应用范围。缺点缺点:处理处理样品量受限样品量受限( 20.2 1055.0520.2 105 20.2 1051mg左右左右 5mg 5mg 5mg10mg100mg 1.鉴定化合物鉴定化合物 2.检验化合物的纯度检验化合物的纯度 3.分离少量亲水性成分，如糖类、酚类、氨基酸、分离少量

27、亲水性成分，如糖类、酚类、氨基酸、 多元醇等。多元醇等。薄层色谱的应用薄层色谱的应用 1.鉴定化合物鉴定化合物 2.检验化合物的纯度检验化合物的纯度 3.分离少量化合物分离少量化合物 4.指导提取溶剂的初步选择指导提取溶剂的初步选择(Rf值大于值大于0.02以上以上) 5.指导分离条件的选择指导分离条件的选择(提取次数、提取时间提取次数、提取时间等等)。1、吸附色谱：活性炭、硅藻土、分子筛、氧化铝、硅、吸附色谱：活性炭、硅藻土、分子筛、氧化铝、硅 胶、聚酰胺、凝胶、硅胶、聚酰胺、凝胶、大孔树脂胶、聚酰胺、凝胶、硅胶、聚酰胺、凝胶、大孔树脂极极性性递递增增己烷己烷-苯苯苯苯-乙醚乙醚石油醚石油醚

28、-乙酸乙酯乙酸乙酯氯仿氯仿-乙醚乙醚氯仿氯仿-乙酸乙酯乙酸乙酯氯仿氯仿-甲醇甲醇丙酮丙酮-水水甲醇甲醇-水水吸附剂吸附剂硅胶硅胶(吸水吸水量超过量超过17%即不能用作即不能用作吸附剂吸附剂)氧化铝氧化铝（有中性、（有中性、酸性、碱性）酸性、碱性）分离原理分离原理吸附原理吸附原理吸附原理吸附原理吸附规律吸附规律弱酸性、极性吸附剂弱酸性、极性吸附剂对极性物质的吸附力较强对极性物质的吸附力较强溶剂极性越小，吸附剂对溶剂极性越小，吸附剂对溶质的吸附力越强溶质的吸附力越强弱碱性、极性吸附剂弱碱性、极性吸附剂吸附规律同上吸附规律同上 酸性、中性成分均可酸性、中性成分均可能用于极性物质、也能用于极性物质、也

29、能用于非极性物质的能用于非极性物质的分离，但不适合碱性分离，但不适合碱性成分的分离成分的分离应用应用注：硅胶和氧化铝吸附色谱在进行展开或洗脱时，所用溶剂的极性宜逐步增加，注：硅胶和氧化铝吸附色谱在进行展开或洗脱时，所用溶剂的极性宜逐步增加，跳跃不能太大，实践中多用混合溶剂，可通过调节比例以改变溶剂极性，达到跳跃不能太大，实践中多用混合溶剂，可通过调节比例以改变溶剂极性，达到梯度洗脱分离物质的目的。梯度洗脱分离物质的目的。碱性、中性成分的分离碱性、中性成分的分离不适合酸性成分的分离不适合酸性成分的分离吸附剂吸附剂活性炭活性炭分离原理分离原理吸附原理吸附原理吸附规律吸附规律非极性吸附剂、非极性吸附

30、剂、在水溶液中对在水溶液中对非极性物质具非极性物质具有较强的吸附力；有较强的吸附力；溶剂极性降低，溶剂极性降低，则活性炭对溶质的则活性炭对溶质的吸附力减弱吸附力减弱 应用应用从稀水溶液中富集从稀水溶液中富集微量非极性物质或微量非极性物质或脱色（脂溶性色素）脱色（脂溶性色素）除杂、除臭除杂、除臭注：从活性炭上洗脱被吸附的物质时，洗脱剂的洗脱能力注：从活性炭上洗脱被吸附的物质时，洗脱剂的洗脱能力随溶剂极性的减弱而增强。常用洗脱剂洗脱能力由小到大随溶剂极性的减弱而增强。常用洗脱剂洗脱能力由小到大的顺序为：水的顺序为：水10%乙醇乙醇20 %乙醇乙醇30 %乙醇乙醇40 %乙醇乙醇50 %乙醇乙醇75

31、 %乙醇乙醇95 %乙醇乙醇 聚酰胺聚酰胺大孔吸附大孔吸附树脂树脂(有极有极性和非极性和非极性两种性两种)吸附剂吸附剂吸附原理吸附原理氢键吸附氢键吸附吸附性和分子吸附性和分子筛筛 吸附规律吸附规律酚羟基数目多，吸附力强酚羟基数目多，吸附力强能形成分子内氢键者，吸附力下降能形成分子内氢键者，吸附力下降母核芳香化程度高者，吸附力增强母核芳香化程度高者，吸附力增强水（介质）中吸附力强，水洗脱力弱水（介质）中吸附力强，水洗脱力弱极性相近相吸极性相近相吸;物质在溶剂中溶解物质在溶剂中溶解度增大，树脂对其吸附力下降；度增大，树脂对其吸附力下降；能与大孔吸附树脂形成氢键者易被吸附能与大孔吸附树脂形成氢键者易

32、被吸附 应用应用黄酮、蒽醌、黄酮、蒽醌、酚类的分离酚类的分离;生物碱、生物碱、萜类、甾体、糖类、萜类、甾体、糖类、氨基酸等的分离；植物氨基酸等的分离；植物粗提液的除鞣质处理。粗提液的除鞣质处理。糖与苷的分离（从水糖与苷的分离（从水提液富集苷类）、黄酮、提液富集苷类）、黄酮、三萜、生物碱等的精制三萜、生物碱等的精制各种溶剂对聚酰胺吸附色谱的洗脱能力由弱至强的顺序为：各种溶剂对聚酰胺吸附色谱的洗脱能力由弱至强的顺序为：水甲醇丙酮水甲醇丙酮 NaOH水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液大孔吸附树脂吸附色谱的洗脱规律：对非极性大孔吸附树脂，洗脱液的极性越小，大孔吸附树脂

33、吸附色谱的洗脱规律：对非极性大孔吸附树脂，洗脱液的极性越小，洗脱能力越强；对极性大孔吸附树脂，洗脱液的极性越大，洗脱能力越强。洗脱能力越强；对极性大孔吸附树脂，洗脱液的极性越大，洗脱能力越强。（1）正相分配色谱：固定相的极性大于流动相的极性。）正相分配色谱：固定相的极性大于流动相的极性。以水或亲水性溶剂为固定相，与水不相混溶的有机溶剂以水或亲水性溶剂为固定相，与水不相混溶的有机溶剂为流动相。适用于分离水溶性或极性较大的组分。为流动相。适用于分离水溶性或极性较大的组分。（2）反相分配色谱：固定相的极性小于流动相的极性。）反相分配色谱：固定相的极性小于流动相的极性。以亲脂性有机溶剂为固定相（石蜡油

34、、以亲脂性有机溶剂为固定相（石蜡油、RP-18 、RP-8 、RP-2 ），以水或亲水性溶剂为流动相。适用于分离脂溶），以水或亲水性溶剂为流动相。适用于分离脂溶性或极性较小的组分。性或极性较小的组分。2、分配色谱、分配色谱（1）正相分配色谱）正相分配色谱： （硅胶（硅胶液液-液分配色谱法液分配色谱法RP-18、RP-8、RP-2 重结晶法重结晶法:利用化合物中各组分在溶剂中的溶解利用化合物中各组分在溶剂中的溶解 度不同为分离依据的一种分离方法。度不同为分离依据的一种分离方法。 蒸馏法蒸馏法:以液体混合物中各组分的挥发性不同作以液体混合物中各组分的挥发性不同作 为分离依据的一种分离方法。为分离依

35、据的一种分离方法。 色谱法色谱法:利用不同物质在流动相和固定相中物理利用不同物质在流动相和固定相中物理 性质不同而达到分离目的的一种分离方法性质不同而达到分离目的的一种分离方法 系统溶剂分离法系统溶剂分离法 两相溶剂萃取法两相溶剂萃取法 沉淀法沉淀法 吸附法吸附法 盐析法盐析法 透析法透析法 色谱法色谱法吸附色谱吸附色谱分配色谱分配色谱离子交换色谱离子交换色谱大孔树脂色谱大孔树脂色谱凝胶色谱凝胶色谱分配色谱法分配色谱法基本原理基本原理正正相相分分配配色色谱谱反反相相分分配配色色谱谱正相正相色谱色谱极性物质吸附强极性物质吸附强非极性物质吸附弱非极性物质吸附弱后出后出先出先出反相反相色谱色谱极性物

36、质吸附弱极性物质吸附弱非极性物质吸附强非极性物质吸附强先出先出后出后出吸附色谱吸附色谱分配色谱分配色谱离子交换色谱离子交换色谱大孔树脂色谱大孔树脂色谱凝胶色谱凝胶色谱亲和色谱亲和色谱一、天然产物化学成分结构鉴定的一般程序一、天然产物化学成分结构鉴定的一般程序 和方法和方法二、四大谱在天然产物化学结构鉴定方面二、四大谱在天然产物化学结构鉴定方面 的应用的应用三、立体结构的测定方法三、立体结构的测定方法四、一些天然产物结构的光谱特征四、一些天然产物结构的光谱特征纯度鉴定纯度鉴定推测母体结构类型推测母体结构类型功能基情况功能基情况分子量分子式的确定分子量分子式的确定波谱、化学方法波谱、化学方法推测出

37、结构式推测出结构式人工合成进行确认人工合成进行确认程序程序方法方法纯度检验纯度检验1.检查有无均匀一致的晶型、颜色检查有无均匀一致的晶型、颜色2.有无敏锐的熔点有无敏锐的熔点3.PC或或TLC在三种展开剂中在三种展开剂中 均呈单一斑点均呈单一斑点4.GC或或HPLC初步推断初步推断化合物类型化合物类型1.观察样品在提取过程中的行为观察样品在提取过程中的行为2.测定其相关理化常数测定其相关理化常数3.结合文献调研结合文献调研测定分子式测定分子式计算不饱和度计算不饱和度1.元素定量分析及分子量测定元素定量分析及分子量测定（同位素峰度比法及（同位素峰度比法及HR-MS）,确定分子式确定分子式2.计算

38、不饱和度计算不饱和度确定分子中含有确定分子中含有的官能团、结构片段的官能团、结构片段或基本结构骨架或基本结构骨架1.官能团定性分析官能团定性分析2.测定并解析化合物的测定并解析化合物的 有关谱学数据有关谱学数据3.结合文献调研结合文献调研判断并确定判断并确定分子的构造式分子的构造式1.综合分析有关谱学数据及综合分析有关谱学数据及 官能团定性定量分析结果官能团定性定量分析结果2.与已知化合物进行多方比较与已知化合物进行多方比较推断并确定分子推断并确定分子的立体结构的立体结构（构型、构象）（构型、构象）1.测定测定ORD或或 CD2.测定测定NOE或或2D-NMR3.进行进行X-射线衍射分析射线衍

39、射分析4.进行人工合成确认进行人工合成确认 1.获得样品的背景信息获得样品的背景信息 2.根据样品来源和参考文献根据样品来源和参考文献(原始文献和二手原始文献和二手 文献文献)确定化合物类型确定化合物类型 3.测定样品的物理常数测定样品的物理常数,查阅有关文献手册查阅有关文献手册, 初步判断样品是已知物或未知物初步判断样品是已知物或未知物,若是已知若是已知 物物,则按已知物的程序进行鉴定则按已知物的程序进行鉴定;若是未知若是未知 物则按未知物的程序进行结构测定物则按未知物的程序进行结构测定.1.纯度检验纯度检验2.测样品的物理常数，与已知标准品的文献值对照，测样品的物理常数，与已知标准品的文献

40、值对照， 比较是否一致或接近。比较是否一致或接近。3.测样品与标准品的混熔点。测样品与标准品的混熔点。4.将样品与标准品在三种溶剂系统中共色谱将样品与标准品在三种溶剂系统中共色谱 (PC或或TLC),比较其比较其Rf值是否一致。值是否一致。5.测样品的测样品的IR光谱图光谱图,与标准品的图谱或与标与标准品的图谱或与标 准谱图进行比较准谱图进行比较。检查纯度的方法：检查纯度的方法： 外观、颜色、形态是否均一；外观、颜色、形态是否均一； 测定各种物理常数，如熔点、沸点、比旋光度、测定各种物理常数，如熔点、沸点、比旋光度、 折光率等，这些物理常数都能反映化合物的纯度。折光率等，这些物理常数都能反映化

41、合物的纯度。 如果可能是已知物，用已知结构的对照品进行如果可能是已知物，用已知结构的对照品进行 对照测定或测定它们的共熔点等；对照测定或测定它们的共熔点等； 也可对照文献报导值（注意各种测定条件的一致性）也可对照文献报导值（注意各种测定条件的一致性） 薄层层析薄层层析（三种（三种展开系统和三种显色方法展开系统和三种显色方法） GC、HPLC等等； 1.纯度检验，物理常数测定，与文献值比对。纯度检验，物理常数测定，与文献值比对。 2.进行检识反应，确定样品类型。进行检识反应，确定样品类型。 3.进行元素定性、定量分析，测得分子量，进行元素定性、定量分析，测得分子量， 确定分子式。确定分子式。 4

42、.化学降解法确定分子结构式。化学降解法确定分子结构式。 5.测四谱并综合分析四谱数据，推导出化合物测四谱并综合分析四谱数据，推导出化合物 的基本结构骨架信息。的基本结构骨架信息。 6.根据推出的结构，将所测得的四谱，特别是根据推出的结构，将所测得的四谱，特别是 NMR谱谱的数据进行归属分析验证。的数据进行归属分析验证。 7.人工合成进行确认人工合成进行确认化学降解法：将复杂分子通过氧化、还原等化学反化学降解法：将复杂分子通过氧化、还原等化学反 应，降解为几个结构比较简单又稳定的小分子化合应，降解为几个结构比较简单又稳定的小分子化合 物，通过对降解产物的结构鉴定，再按降解机理合物，通过对降解产物

43、的结构鉴定，再按降解机理合 理地推导出原来可能的化学结构式理地推导出原来可能的化学结构式 特点：特点：需用化合物量大；反应剧烈；主要产物得率少又需用化合物量大；反应剧烈；主要产物得率少又费时；费时； 现在较少应用，仅保留一些比较简单规律性现在较少应用，仅保留一些比较简单规律性又较强的降解反应又较强的降解反应 衍生物制备：衍生物制备：用化学方法研究结构的一种常用用化学方法研究结构的一种常用 手段，对结构推定有一定意义。手段，对结构推定有一定意义。（一（一）紫外）紫外 可见光谱（可见光谱（UV -VIS）原理：分子中电子跃迁引起的吸收，其中原理：分子中电子跃迁引起的吸收，其中n-*、-* 的跃迁可

44、因吸收紫外光及可见光所引起，的跃迁可因吸收紫外光及可见光所引起，吸收光谱将出现紫外区和可见光区吸收光谱将出现紫外区和可见光区(200700nm)。200nm 400nm 700nm 紫外区（紫外区（UV） 可见区（可见区（VIS） 紫外吸收光谱可获得的结构信息：紫外吸收光谱可获得的结构信息： 1、200400nm无吸收峰，可能为饱和烃或无无吸收峰，可能为饱和烃或无 共轭双键的化合物。例如单烯烃。共轭双键的化合物。例如单烯烃。 2、270350nm有弱吸收峰有弱吸收峰(=10100)取代基团的位置、种取代基团的位置、种类、数目的推断。类、数目的推断。 如加入诊断试剂推断黄酮的取代模式如加入诊断试

45、剂推断黄酮的取代模式（类（类 型、数目、排列方式等）。型、数目、排列方式等）。 （3）用于定量测定（以最大吸收波长作为检）用于定量测定（以最大吸收波长作为检 测波长进行含量测定）。测波长进行含量测定）。 应用：应用： （1）推断化合物的骨架类型）推断化合物的骨架类型 共轭体系。共轭体系。 （2）取代基团的位置、种类、数目的推断。）取代基团的位置、种类、数目的推断。 如加入诊断试剂推断黄酮的取代模式（类如加入诊断试剂推断黄酮的取代模式（类 型、数目、排列方式等）。型、数目、排列方式等）。 （3）用于定量测定（以最大吸收波长作为检）用于定量测定（以最大吸收波长作为检 测波长进行含量测定）。测波长进

46、行含量测定）。 特点：特点： 样品用量少（只需样品用量少（只需5-10 g） 样品能回收测定；样品能回收测定； 常规紫外光谱仪价格低廉；常规紫外光谱仪价格低廉； 原理：分子中价键的伸缩及弯曲振动所引起的吸收而原理：分子中价键的伸缩及弯曲振动所引起的吸收而 测得的吸收图谱，称为红外吸收光谱。测得的吸收图谱，称为红外吸收光谱。 4000 3600 3000 1500 1000 625cm-1特征频率区特征频率区 指纹区指纹区特征官能团的鉴别特征官能团的鉴别 化合物真伪的鉴别化合物真伪的鉴别羟基（酚羟基、醇羟基）羟基（酚羟基、醇羟基） 36003200 cm-1 游离羟基游离羟基 3600 cm-1

47、 氢键缔合羟基氢键缔合羟基 34003200 cm-1 羰基羰基 16001800 cm-1酮酮 1710 cm-1酯酯17101735 cm-1芳环芳环 1600、1580、1500cm-1有有23个峰个峰 双键双键 16201680 cm-1 两个化合物完全相同的条件两个化合物完全相同的条件 1、 特征区完全吻合特征区完全吻合 2、 指纹区也需完全一致指纹区也需完全一致 应用：应用：IR对未知结构化合物的鉴定，主要是用于官能团对未知结构化合物的鉴定，主要是用于官能团 的确认、芳环取代类型的判断等定性分析。的确认、芳环取代类型的判断等定性分析。特征官能团的鉴别特征官能团的鉴别 化合物真伪的鉴

48、别化合物真伪的鉴别IR用于鉴定化合物的方法有两种：用于鉴定化合物的方法有两种：(1)与标准物谱图对照法。在相同条件下，若与标准物谱图对照法。在相同条件下，若 两个谱图完全吻合，则两物质相同；否则两个谱图完全吻合，则两物质相同；否则 不同。不同。(2) 标准谱图查对法。如无对照品，也可检索标准谱图查对法。如无对照品，也可检索 有关有关IR数数据图谱文献，如被测物结构基本据图谱文献，如被测物结构基本 已知，可能局部构型不同，在指纹区就会已知，可能局部构型不同，在指纹区就会 有差别。有差别。谱图三要素：位置、强度、峰形谱图三要素：位置、强度、峰形 测定范围测定范围 波数波数6006004000cm

49、4000cm -1-1之间。之间。 其中其中1600cm1600cm-1-1以上为化合物的特征基团区，以上为化合物的特征基团区， 1000-500cm1000-500cm-1-1为指纹区。为指纹区。 应用应用 主要用于定性分析，功能基的确认，芳环取代类主要用于定性分析，功能基的确认，芳环取代类 型的判断等。型的判断等。 优点：优点：样品用量少（只需样品用量少（只需5-10 5-10 g g） 任何气态、液态、固态样品均可测定；任何气态、液态、固态样品均可测定； 每种化合物都有红外吸收；每种化合物都有红外吸收； 常规红外光谱仪价格低廉；常规红外光谱仪价格低廉；红外光谱红外光谱 NMR谱：化合物分

50、子在磁场中受电磁波的辐射，谱：化合物分子在磁场中受电磁波的辐射， 有磁距的原子核吸收一定的能量产生能级有磁距的原子核吸收一定的能量产生能级 的跃迁，即发生核磁共振，以吸收峰的的跃迁，即发生核磁共振，以吸收峰的 频率对吸收强度作图所得之图谱。频率对吸收强度作图所得之图谱。NMR谱所谱所提供的结构信息有：氢及碳原子的类型、数提供的结构信息有：氢及碳原子的类型、数 目、相互连接方式、周围的化学环境及构型、构象等。目、相互连接方式、周围的化学环境及构型、构象等。（三）核磁共振谱（三）核磁共振谱（NMR） 天然产物化学成分以有机物为主，分子结构中天然产物化学成分以有机物为主，分子结构中必然有必然有C C

51、、H H原子，它们的结合类型、化学环境不原子，它们的结合类型、化学环境不同，均可用同，均可用NMRNMR测定，是天然化合物结构测定的重测定，是天然化合物结构测定的重要手段。要手段。 氢核磁共振（氢核磁共振（1 1H-NMR)H-NMR)谱谱： 化学位移范围：在化学位移范围：在0 020 ppm20 ppm 三大要素三大要素：化学位移化学位移( (ppmppm) )、偶合常数、偶合常数(J)(J)及及 峰面积。峰面积。 灵敏度高，样品用量少（灵敏度高，样品用量少（1 15 mg5 mg），测试时），测试时 间短间短碳核磁共振（碳核磁共振（1313C-NMR)C-NMR)谱：谱： 化学位移范围：在

52、化学位移范围：在0 0250 ppm250 ppm 要素要素：化学位移化学位移( (ppmppm) )灵敏度较低，样品用量较多（灵敏度较低，样品用量较多（5 520 mg20 mg），测），测 试时间长试时间长1. 1H-NMR（核磁共振氢谱）（核磁共振氢谱）: 信息参数：化学位移（信息参数：化学位移（）、峰面积、峰裂分）、峰面积、峰裂分 （s 、d、t、q、m）及偶合常数（）及偶合常数（J） （1）化学位移（）化学位移（ppm）: 020ppm 与与1H核所处的化学环境（核所处的化学环境（1H核周围的电子云密核周围的电子云密度）有关，其外围电子云密度及绕核旋转产生的度）有关，其外围电子云密度

53、及绕核旋转产生的磁屏蔽效应不同，不同类型的磁屏蔽效应不同，不同类型的1H核共振信号出现核共振信号出现的区域不同，据此可以识别。的区域不同，据此可以识别。 电子云密度大，处于高场，电子云密度大，处于高场，值小值小 电子云密度小，处于低场，电子云密度小，处于低场，值大值大0.9-C-CH3 1.8-C=C-CH32.1-COCH3 3.0-NCH3 3.7-OCH3 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0-COOH -CHO Ar-H -C=C-H 常见结构的化学位移大致范围常见结构的化学位移大致范围（要求熟记）（要求熟记） (ppm) 推断化合物的结构（含推断化合物的结构（含1H核基

54、团的结构）核基团的结构） 符合符合 n+1 规律规律 ( n = 磁等同质子的数目磁等同质子的数目 ) 用偶合常数（用偶合常数（J）表示。间隔的键数）表示。间隔的键数越少，则其值越少，则其值 越大，反之越小越大，反之越小 峰裂分的数目峰裂分的数目 裂分峰间的距离裂分峰间的距离 不同系统偶合常数不同系统偶合常数 (J Hz) 大小大小s 单峰单峰 d 双峰双峰 t 三重峰三重峰 q 四重峰四重峰 m 多重峰多重峰 （2）峰面积）峰面积: 磁等同质子的数目与峰面积（高度）有关。磁等同质子的数目与峰面积（高度）有关。（3）峰裂分及偶和常数（）峰裂分及偶和常数（J）:磁不等同的两个或两组磁不等同的两个

55、或两组1H核，在一定距离内因相互自旋偶合干扰使信号发生裂分，核，在一定距离内因相互自旋偶合干扰使信号发生裂分，裂分峰间的距离称为偶合常数。裂分峰间的距离称为偶合常数。 芳环芳环 J邻邻610Hz J间间 03Hz J对对01Hz 双键双键 J顺顺711 Hz J反反1218 Hz 饱和烃类相邻碳原子上质子偶合常数的大小饱和烃类相邻碳原子上质子偶合常数的大小 与两个氢原子之间的立体夹角与两个氢原子之间的立体夹角有关有关 =60 J = 24 Hz =180 J = 910 Hz 环己烷及其类似物相邻碳原子上质子的偶合常数环己烷及其类似物相邻碳原子上质子的偶合常数 Jaa 1013Hz ( =18

56、0 )Jae 25Hz ( =60 )Jee 25Hz ( =60 )13C-NMR：化学位移范围为：化学位移范围为0250ppm， 信息参数：分子中各种不同类型及化学环境碳核的信息参数：分子中各种不同类型及化学环境碳核的化学位移（化学位移（C）、异核偶合常数（）、异核偶合常数（JCH）。其中利用度最高的是化学位移。其中利用度最高的是化学位移。 由于碳谱的化学位移比氢谱大几十倍由于碳谱的化学位移比氢谱大几十倍,因此分子因此分子结构的微小差异所引起的化学位移的不同就能在碳谱结构的微小差异所引起的化学位移的不同就能在碳谱中反映出来如中反映出来如,果消除碳与氢的偶合果消除碳与氢的偶合,碳谱上每个碳原

57、碳谱上每个碳原子都对应有一条尖锐、可分辨的谱线。子都对应有一条尖锐、可分辨的谱线。不同不同 13C 核核C大小与大小与13C 核所处的化学环境（周围核所处的化学环境（周围电子云密度）有关电子云密度）有关 用于用于13C 核类型的推断核类型的推断 ( C ppm ) 150220( c=o) 200 150 100 50 0 c=c Ar 5080 (c-o) 饱和碳原子（饱和碳原子（060） 主要结构主要结构13C 核核C的大致范围的大致范围 ( 要求熟记要求熟记 ) 在碳谱中通常有三种偶合：在碳谱中通常有三种偶合： 13C- 13C偶合、偶合、 13C- 1H偶合、偶合、 13C-X偶合偶合

58、13C- 13C偶合几率很小，偶合裂分峰强度很低，偶合几率很小，偶合裂分峰强度很低， 一般观察不到。一般观察不到。 碳谱中碳谱中JCH偶合裂分的规律如下偶合裂分的规律如下碳原子种类碳原子种类 裂分峰数裂分峰数 峰强度比峰强度比伯碳伯碳-CH3 四重峰四重峰 1：3：3：1仲碳仲碳-CH2- 三重峰三重峰 1：2：1叔碳叔碳 二重峰二重峰 1：1季碳季碳 单峰单峰 1确定分子量（高分辨质谱确定分子量（高分辨质谱 可将分子量精确可将分子量精确 到小数点后三位）到小数点后三位）, 计算分子式。计算分子式。 2提供其他结构信息。如黄酮类，依碎片离提供其他结构信息。如黄酮类，依碎片离 子峰可以确定子峰可

59、以确定A-环、环、B-环的取代模式。环的取代模式。 3与标准图谱比较用于化合物的鉴别（相同与标准图谱比较用于化合物的鉴别（相同 条件下，其裂解是符合一定规律的）。条件下，其裂解是符合一定规律的）。 4依裂解特征及碎片离子，依裂解特征及碎片离子， 推定或复核未知推定或复核未知 化合物分子的部分结构。化合物分子的部分结构。 电子轰击质谱（电子轰击质谱（EI-MS）：目前最常用。）：目前最常用。但对于热敏成分（醇、糖苷、部分羧酸等）但对于热敏成分（醇、糖苷、部分羧酸等）及大分子物质（多糖、肽类）难以气化成分及大分子物质（多糖、肽类）难以气化成分 测不到分子离子峰测不到分子离子峰亦无法测得分子量亦无法

60、测得分子量 解决措施解决措施电离新方法电离新方法 将化合物乙酰化或三甲基将化合物乙酰化或三甲基硅烷化（硅烷化（TMS化）制成热化）制成热稳定性好的挥发性衍生物稳定性好的挥发性衍生物进行测定进行测定 (2)场解吸质谱场解吸质谱 FD-MS(3)快原子轰击质谱快原子轰击质谱 FAB-MS(4)化学电离质谱化学电离质谱 CI-MS(5)电喷雾电离质谱电喷雾电离质谱 ESI-MS(6)基质辅助激光解吸电离质谱基质辅助激光解吸电离质谱 ( MALDI-MS )(7)场致电离质谱场致电离质谱 (FI-MS)(8)串联质谱（串联质谱（MS-MS）样品不必加热汽化而样品不必加热汽化而直接电离的新方法直接电离的