猪肉中瘦肉精的检测——GC-MS法

1、猪肉中瘦肉精猪肉中瘦肉精克伦特罗的检测克伦特罗的检测制作人：制作人：班级：食品班级：食品10011001班班学号：学号：201035090114201035090114目录目录一、背景事件一、背景事件二、概述二、概述 1 1、瘦肉精、瘦肉精 2 2、克伦特罗、克伦特罗三、气相色谱三、气相色谱- -质谱联用法质谱联用法（GC-GC-）检测克伦特罗检测克伦特罗 1 1、检测方法选择、检测方法选择 2 2、实验具体方案、实验具体方案 3 3、实验结果及分析、实验结果及分析四、杜绝措施四、杜绝措施五、参考文献五、参考文献 20112011年年3 31515特别行动中，央视曝光了双汇特别行动中，央视曝光

2、了双汇“瘦肉精瘦肉精”养猪养猪一事一事 。河南省孟州市等地养猪场采用违禁动物药品。河南省孟州市等地养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精瘦肉精”饲养生猪，有毒猪肉流入双汇食品中。饲养生猪，有毒猪肉流入双汇食品中。一、一、“双汇双汇”瘦肉精事件瘦肉精事件 瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺（莱克多巴胺（RactopamineRactopamine）及克伦特罗（）及克伦特罗（ClenbuterolClenbuterol）等。）等。将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少

3、饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。但因为考虑对人体会产生副用、使肉品提早上市、降低成本。但因为考虑对人体会产生副作用，各国开放使用的标准不一。作用，各国开放使用的标准不一。 二、概述二、概述 1 1、瘦肉、瘦肉精精肉质对比肉质对比2.1 2.1 在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗。其学名是盐酸在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗。其学名是盐酸克伦特罗，是一种平喘药。克伦特罗，是一种平喘药。 结构简式：结构简式： CASCAS号：号：37148-27-9 37148-27-9 分子式：分子式：C12-H18-Cl2-N2-O C12-H18-Cl2-N2-O 理化特性：白色或类白色的结晶粉末

4、，无臭、味苦，熔点理化特性：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161161，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。2 2、克伦特罗、克伦特罗2.2 2.2 人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等。麻木等。 国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1 1纳

5、克纳克 。 2.2 2.2 人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等。麻木等。 国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1 1纳克纳克 。 三、气相色谱三、气相色谱- -质谱联用法质谱联用法（GC-GC-）检测克伦特罗检测克伦特罗1 1、检测方法选择、检测方法选择 GC-MSGC-MS法优点：把色谱高

6、效快速的分离效果和质谱高法优点：把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。具更高的检测极限。 GC-MS GC-MS法与法与HPLCHPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，常用作筛选后阳性样品的确证。低，常用作筛选后阳性样品的确证。2.1 2.1 分析方法分析方法 用用C18C18小柱和聚（甲基丙烯小柱和聚（甲基丙烯酸乙二醇二甲基丙烯酸酯）酸乙二醇二

7、甲基丙烯酸酯）整体柱进一步富集净化，经整体柱进一步富集净化，经N N ,O-,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺双三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA) (BSTFA) 衍生，选择离子监测衍生，选择离子监测方式进行气相色谱质谱测定。方式进行气相色谱质谱测定。该方法以克伦特罗同位素该方法以克伦特罗同位素(Clenbuterol-D9) (Clenbuterol-D9) 为内标，内为内标，内标法定量。标法定量。 C18C18小柱小柱2 2、实验具体方案、实验具体方案2.2 2.2 仪器与试剂仪器与试剂 仪器：岛津仪器：岛津GCMS-QP2010 PlusGCMS-QP2010 Plus 高速离心机（转速可达

8、到高速离心机（转速可达到12000r/min12000r/min以上）以上） 漩涡混合器漩涡混合器 超声波清洗器超声波清洗器 氮吹仪氮吹仪 固相萃取装置固相萃取装置 C18 C18固相萃取小柱（固相萃取小柱（100 mg, 3 mL100 mg, 3 mL） 混合型阳离子交换固相萃取柱混合型阳离子交换固相萃取柱试剂：试剂： 盐酸克伦特罗（盐酸克伦特罗（ClenbuterolClenbuterol，CLBCLB）标准溶液）标准溶液1g/mL 1g/mL 内标溶液（内标溶液（Clenbuterol-D9Clenbuterol-D9， CLB-D9 CLB-D9）1g/mL 1g/mL N , O-

9、N , O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFABSTFA） 甲醇甲醇( (分析纯）分析纯） 20 mmol/L 20 mmol/L 磷酸溶液磷酸溶液 甲苯（分析纯）甲苯（分析纯）2.3 2.3 分析条件分析条件 色谱柱：色谱柱：Rtx-5MS (30 mRtx-5MS (30 m0.25 mm0.25 mm0.25 m)0.25 m) 进样口温度：进样口温度：220220 柱温程序：柱温程序：70(0.6 min)-25/min-220(6 min)-70(0.6 min)-25/min-220(6 min)-25/min-280(5 min)25/min-280(5

10、min) 恒线速度方式恒线速度方式, , 柱流量柱流量0.9 mL/min0.9 mL/min 不分流进样不分流进样 检测波长：检测波长：244nm244nm 检测离子：检测离子： CLB CLB：检测：检测 m/z 86, 187, 243, 262 m/z 86, 187, 243, 262， CLB-D9 CLB-D9：检测：检测 m/z 95, 187, 262 m/z 95, 187, 262 以克伦特罗以克伦特罗 (m/z86) (m/z86) 与内标峰与内标峰 (m/z 95) (m/z 95) 的峰面积比校的峰面积比校准定量。准定量。2.4 实验流程称取称取(2 0.01) g

11、 己绞碎的猪肉己绞碎的猪肉4 mL 0.1 mol/L 4 mL 0.1 mol/L 盐酸盐酸旋涡振荡旋涡振荡5 min5 min超声超声10 min10 min离心离心5 min5 min上清液上清液C18C18小柱小柱0.8 mL 0.8 mL 甲醇：甲醇：20 mmol/L 20 mmol/L 磷酸磷酸=1=1：1(v/v1(v/v）解析，调）解析，调ph=7ph=7，定容定容2mL2mL毛细管毛细管整体柱整体柱0.2 mL 0.2 mL 的甲醇解析的甲醇解析+ +50 L 50 L 的内标使用液的内标使用液100 L 100 L 甲苯甲苯100 LBSTFA100 LBSTFA涡旋涡旋

12、30s30s衍生衍生5 min5 min300L300L甲苯混匀甲苯混匀按操作规程使按操作规程使GC-MSGC-MS仪到工作状态，仪到工作状态，基线平直时进样基线平直时进样质谱图质谱图3.1 3.1 盐酸克伦特罗的盐酸克伦特罗的GC-MS GC-MS 测定测定 图图1 1 为衍生化克伦特罗和内标的质谱图，以克伦特罗碎片离为衍生化克伦特罗和内标的质谱图，以克伦特罗碎片离子子 (m/z 86) (m/z 86) 与内标碎片离子与内标碎片离子 (m/z 95) (m/z 95) 的浓度比值为横坐的浓度比值为横坐标，峰面积比值为纵坐标进行定量标，峰面积比值为纵坐标进行定量。 3 3、实验结果及分析、实

13、验结果及分析3.2 3.2 标准曲线标准曲线 图图2 2 为空白猪肉和添加为空白猪肉和添加2.5g/kg 2.5g/kg 克伦特罗的猪肉样品克伦特罗的猪肉样品提取液的离子流图，内标提取液的离子流图，内标 (Peak 1) (Peak 1) 和克伦特罗和克伦特罗 (Peak (Peak 2) 2) 的保留时间分别为的保留时间分别为9.83 min 9.83 min 和和9.92 min, 9.92 min, 空白猪肉样空白猪肉样品在被测物及内标处均无干扰品在被测物及内标处均无干扰相关性分析相关性分析 分别添加不同体积的克伦特罗标准溶液分别添加不同体积的克伦特罗标准溶液(1 g/mL) (1 g/

14、mL) 和和50L 50L 内标溶液于内标溶液于2 g 2 g 猪肉样品中猪肉样品中 ( (其中克伦特罗的质量其中克伦特罗的质量分别为分别为1 1、5 5、1010、2020、40 40 和和100 ng)100 ng)，样品的处理方法如，样品的处理方法如上所述。上所述。 以克伦特罗与内标的峰面积的比值对浓度比值进行线性回以克伦特罗与内标的峰面积的比值对浓度比值进行线性回归，发现克伦特罗在归，发现克伦特罗在0.5-50g/kg 0.5-50g/kg 的浓度范围内，线性的浓度范围内，线性关系良好，相关系数大于关系良好，相关系数大于0.9990.999。3.3 3.3 检测限及精密度检测限及精密度

15、 以信噪比的以信噪比的3 3倍和倍和1010倍分别计算检测限和定量限，方法检测限倍分别计算检测限和定量限，方法检测限为为0.13 g/kg, 0.13 g/kg, 定量限为定量限为0.43g/kg0.43g/kg。该方法有较好的日。该方法有较好的日内及日间精密度，在定量限附近，相对标准偏差小于内及日间精密度，在定量限附近，相对标准偏差小于20%20%（见（见表表1 1），可满足分析要求。），可满足分析要求。 表表1. 1. 克伦特罗的方法学数据克伦特罗的方法学数据 相关部门要对瘦肉精的流通进行严加监管，实行购买登记相关部门要对瘦肉精的流通进行严加监管，实行购买登记制度。制度。 养牲畜者自律，监

16、管人严格监督。养牲畜者自律，监管人严格监督。 对责任人加大处罚力度，完善法律法规实。对责任人加大处罚力度，完善法律法规实。 四、杜绝措施四、杜绝措施11气相色谱质谱联用仪气相色谱质谱联用仪(GC-MS)(GC-MS)测定猪肉中的瘦肉精的含量测定猪肉中的瘦肉精的含量. .食品食品与发酵工业与发酵工业20112011年年0303期期 2Deng Ruiguang2Deng Ruiguang，Zhang HaitangZhang Haitang，Wang ZiliangWang Ziliang， Zhong Hua Zhong Hua， Zhang Gaiping Zhang GaipingDevelopment of GC-MS Method for Development of GC-MS Method for Detecting Clenbuterol Residues and Confirmation of Detecting Clenbuterol Residues and Confirmation of Self-made Strip Performance Self-made