姜黄素结构衍生物抗肿瘤活性筛选及其机理初探-生理学专业毕业论文

1、.优秀毕业论文论 文 独 创 性 声 明文英硕 士 学 位 论 文 答 辩 委 员 会 成 员 名 单姓姓名名职 称称单 位位备 注注胡胡应 和和教授授华 师 大 脑 功 能基 因组 学 研 究所所主 席席lllll习习llll夏夏钢钢教授授华 师 大 脑 功 能基 因组 学 研 究 所所委委 贝贝贝贝贝贝lllll习习llll胡胡金 锋锋教授授华 师 大 脑 功 能基 因组 学研 究所所委委 贝贝贝贝贝贝 11 1文文坷坷副 教 授授华 师 大 脑 功 能基 因组 学研 究所所委委 贝贝贝贝贝贝lllll口口llll许许治 良良副 教 授授华师 大 脑 功 能基 因组 学研 究所所委委 贝贝

2、贝贝贝贝段段雅 乐乐工 程 师师华 师 大 脑 功 能基 因组 学研 究所所答 辩 秘 书：精品参考文献资料华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文摘 要姜 黄 素 结 构 衍 生 物 抗 肿 瘤 活 性 筛 选 及 其 机 理 初 探摘 要肿 瘤 疾 病 已经 严 重 威 胁 人 类 的健 康 。化 学 治 疗 是 目前 肿 瘤 治 疗 的 主 要 方 法 之 一 。从 天 然 化 合 物 中 寻 找 新 的抗 肿 瘤 活 性 药 物 ，以抗 肿 瘤 活 性 好 的化 合 物 为 先 导 进 行 结 构 修 饰 ，以期 改 善 其 理 化 性 质 ，提 高 抗 肿 瘤 效 果 降低 毒

3、 性 ，为 开 发 抗 肿 瘤 新 药 的 思 路 之 一 。本 文 采 用 M T T 比色 法 在 C 6 、H epG Z 、B el一7402 和 SM M e 一772 一等 四种 肿 瘤 细 胞 模 型 上 对 一 系 列 姜 黄 素 的 结构 衍 生 物 进 行 了抗 肿 瘤 活 性 的筛 选 ，并 得 到 了活 性 较 好 的两 个 化 合 物 ccm 一5 和 ccm 一14 ; 利 用 A nllexin V .E G F P 用I 凋 亡 检 测 试 剂 盒 以及 流 式 细 胞 仪 检 测 化 合 物 诱 导 S M M C 一772 1 细 胞 凋 亡 的作 用 ;

4、利 用 PI 染 色 及 流 式 细 胞 仪 检 测 化 合 物 对 S M M C 一7721 细 胞 周 期 分 布 的 影 响 ; 采 用 We stem 一Bl ot 方 法 检 测 化 合 物 对 细 胞 凋 亡 相 关 的 蛋 白活 性 表 达 水 平 ，初 步 探 讨 其 可 能机 理 ， 为 抗 肿 瘤 药 物 先 导 分 子 的 发 现 提 供 实 验 依 据 。1 . 抗 肿 瘤 活 性 化 合 物 的筛 选 及 其 IC 50 测 定为 了考 察 本 研 究 所 在 研 的天 然 产 物 ，重 点 是 姜 黄 素 结 构 衍 生 物 抗 肿 瘤 活 性 大 小 ，确 定

5、了 四种 肿 瘤 细 胞 的 M T T 筛 选 条 件 ，对 一 系 列 化 合 物 进 行 了抗 肿 瘤 活 性 筛 选 ，并 测 定 其 IC 50 。 结 果 显 示 有 较 多 化 合 物 均 具 有 较 好 的抗 肿 瘤 活 性 ，其 中 最 好 的 为 姜 黄 素 结 构 衍 生 物 ccm 一5 和 ccm 一14 ，且 它 们 抑 制 细 胞 增 殖 的作 用 具 有 剂 量 依 赖 性 。2 . 化 合 物 cem 一5 、 cem 一14 诱 导 S M M C 一7 72 1 细 胞 凋 亡 的检 测为 了研 究 ccm 一5 和 ccm 一14 抑 制 肿 瘤 细 胞

6、 增 殖 的 作 用 是 否 通 过 凋 亡 的 方 式 诱 导 ，我 们 利 用 流 式 细 胞 技 术 对 这 些 化 合 物 作 用 S M M C 一7 72 1 细 胞 后 的 凋 亡 率 进 行 了检 测 ，并 用 荧 光 显 微 镜 观 察 细 胞 形 态 。结 果 显 示 化 合 物 可 以浓 度 依 赖 性 地 诱 导 细 胞 凋 亡 ，并 以早 期 凋 亡 为 主 。而 荧 光 显 微 镜 下 观 察 结 果 与 流 式 细 胞 仪 检 测 结 果 基 本 一 致 。3 . 化 合 物 cem 一5 、 ccm 一14 对 S M M C 一7 72 1 细 胞 周 期 影

7、 响 的 检 测一 般 而 言 ， 抗 肿 瘤 化 合 物 诱 导 细 胞 凋 亡 可 能 都 具 有 细 胞 周 期 依 赖 性 ， 故 而我 们 采 用 PI 染 色 法 ， 利 用 流 式 细 胞 仪 检 测 了 化 合 物 ccm 一5 以 及 ccm 一14 对华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文 摘 要S M M C 一77 21 细 胞 周 期 分 布 的影 响 。结 果 发现 ，两 种 化 合 物 均 可 使 细 胞 周 期 各 时 相 的细 胞 百 分 数 发 生 明显 改变 。主 要 表 现 为 随着 浓 度 的提 高 ，使 G O/G I期 细 胞 减 少 ，S

8、 期 以及 G Z/M 期 细 胞 增 加 ，凋 亡 峰 S ub G I峰 逐 渐 增 大 。且 这 种 作 用 在 ccm 一14 上 体 现 更 明显 。结 果 提 示 这 些 化 合 物 可 剂 量 依 赖 性 地 使 细 胞 停 滞 在 S 期 和 G Z舰 期 ， 阻止 q /M 期 细 胞 向 G O/G ，期 移 行 ，最 终 诱 导 细 胞 凋 亡 ，而 且 可 能 以 q /M 期 为 主 。4 .化 合 物 ccm 一5 、 ccm 一14 对 细 胞 凋 亡 调 控 因 子 casp ase一3 蛋 白表 达 活 性 的 影 响因 casp ase一3 是 细 胞 凋

9、亡 的 关 键 执 行 者 ， 故 我 们 采 用 We ster Bl ot 方 法 检 测 化合 物 ccm 一5 ，。cm 一14 对 其 表 达 活 性 的影 响 。结 果 表 明 ，两 种 化 合 物 可 以显 著 提 高casPase一3 蛋 白的表 达 量 ，并 且 随着 浓 度 的提 高 caspase一3 的活 性 亦 逐 渐 增 强 。这与 第 二 章 所 述 高 浓 度 ccm 一5 和 ccm 一14 可 明显 增 加 肿 瘤 细 胞 的凋 亡 率 的 结 果 相 符 ，提 示 姜 黄 素 结 构 衍 生 物 。cm 一5 和 ccm 一14 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋

10、 亡 的 作 用 可 能 与 casPase一3 表 达 与 活 性 的 调 控 途 径 有 关 。关 键 词 :肿 瘤 ; 细 胞 凋 亡 ; 细 胞 周 期 ; C asp ase一3华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文 摘 要A B S T R A C TC a n e e r h a s b e e n a se rio u s th r e a t to h u rn a n h e a lth . C h e m ie a l trC a tm e n t 15 still o n eof the m ajor tools for ean cer theraP y. T

11、h e n atural Produ ct一b ased screen in g an d th e activ e n atural eo m P o u n d 一b ased strueture m od ifieatio n (for im P rov in g eh em ieal an d P h y sical P ro P erties，enh an cin g an ti一tum or effe ets an d redu ein g tox ieities) h av e b een in c re a sin g ly b e lie v e d to b e g o o

12、 d a P P ro a e h e s to P ro v id e a b a se f o r le a d id e n iif ie a tio na n d n e w d m g d e v e lo P m e n i .In th is th esis，th e M T T a ssay w as u sed to ev alu ate the eyto to x icity o f a series o f n a tu ra l e o m P o u n d s a n d P a ritie u la rly e u re u m in str u c t ura

13、l a n a lo g s a g a in st se v e ra l c a n e e r e e ll lin e s in e lu d in g C 6 ，H e P G Z ，B e l一7 4 0 2 a n d S M M C 一7 7 2 1 tu m o r e e lls . T h e re su lts sh o w e d t ha t t w o e u re u m in a n a lo g s o u t o f o th e rs，c c m 一5 a n d e c m 一1 4 ，e x h ib ite d th e h ig h e st e

14、yto to x ie a etiv itie s in th e se tu m o r eells. T h e flo w eyto m etry w ithA n n e x in V - E G F P /P l a P o P to sis d e te c tio n k it a n d P l sta in in g w e re a lso u se d toin v e stig a te th e e f fe e ts o f e e m 一5 a n d e e m 一14 o n S M M C 一7 7 2 1 a P o P to sis a n d e e

15、ll e y c le d istrib u tio n . T h e sig n a lin g P o ssib ly in v o lv e d in th e c o m P o u n d 一trig g e re d a p o P to s is o f th e e a n c e r e e lls w a s th e n e v a lu a te d b y W e ste rn 一B lo t a n a ly sis o f e a sP a se 一3 . T h e e x P re ssio n o f th e P ro te in in th e e e

16、 lls w ith t he tre a tm e n t o f e e m 一5 o r e c m 一14 w a s u P 一re g u la te d in a d o se 一d e P e n d e n t m a nn e r ，su g g e stin g t h a t th e a n ti一tu m o r a e tiv itie s o fth e se e u rc u m in a n a lo g s m ig h t b e re la te d w ith c a sP a se 一3 c a sc a d e .K E Y W O R D S

17、:T u m o r: A P o P to sis ; C e ll e y e le ; C a sP a se 一3华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文目录目录第 一 章抗 肿 瘤 活 性 化 合 物 的筛 选 及 其 IC 50 测 定 .，.，二，.1 摘 要 . 1前 言 .，.，. 11. 材 料 和 方 法 .，.，.22 . 结 果 .33 . 讨 论 .5版 图 与 说 明 .8第 二 章 化 合 物 ccm 一5 、ccm 一14 诱 导 S M M C 一772 1 细 胞 凋 亡 的检 测 .21摘 要 .，.，.，.21前 言 .211. 材 料 和 方

18、法 .，.222 . 结 果 .，.，.，.243 . 讨 论 .，.26版 图与 说 明 .28第 三 章 化 合 物 ccm 一5 、ccm 一14 对 S M M C 一772 1 细 胞 周 期 的 影 响 .36 摘 要 .36前 言 .361. 材 料 和 方 法 .372 . 结 果 .3 93 . 讨 论 .4 0版 图 与 说 明 .4 2第 四 章 化 合 物 ccm 一5 、ccm 一14 对 细 胞 凋 亡 调 控 因 子 casp ase一3 蛋 白表 达 活 性 的 影响 .，.，.4 8摘 要 .48前 言 .，.481. 材 料 和 方 法 .，.492 . 结

19、 果 . 533 . 讨 论 . 53版 图 与 说 明 .，.55第 五 章 文 献 综 述 .，.58华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文目录引 言 .58一 、 细 胞 凋 亡 与 肿 瘤 .，.58二 、 细 胞 周 期 与 肿 瘤 .61版 图 与 说 明 .69参 考 文 献 .73已发 表 论 文 .，.84华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文 第 一 章 抗 肿 瘤 活 性 化 合 物 的筛 选 及 其 I C5 0 测 定第 一 章抗 肿 瘤 活 性 化 合 物 的筛 选 及 其 IC 50 测 定摘 要目的 : 在 多种 肿 瘤 细 胞 系 上 确 定

20、抗 肿 瘤 活 性 化 合 物 的筛 选 条 件 ，对 多 种 天 然 提 取 化 合 物 重 点 是 姜 黄 素 结 构 衍 生 物 进 行 筛 选 ，并 确 定 相 应 化 合 物 的 半 数 抑 制 浓 度 IC 50 ，并 比较 各 化 合 物 IC 50 的大 小 ，从 而 选 择 活 性 较 好 的化 合 物 ，为 进 一 步 的 通 路 分 析 以及 新 药 开 发 提 供 依 据 。方 法 : 采 用 M T T 比色 法 ，根 据 不 同细 胞 系 生 长特 性 于 生 长 对 数 期 选 择 适 当 的细 胞 密 度 接 种 ，%板 培 养 24 小 时后 ，分 组 加 药

21、 (设 5一7 个 浓 度 梯 度 组 ，每 组 平 行 样 本 数 n = 6) ，培 养 48 小 时 ，吸 去 各 孔 上 清 ， 加 入 M T T 100 卜l ( 1m g/m l)，孵 育 4 小 时后 吸 去 M T T 液 ，每 孔 加 入 D M S O 150 林l， 37 “c 培 养 约 0 .5 小 时 ，待 结 晶完 全 溶 解 后 酶 标 仪 A 562nm 处 测 定 光 密 度 (o D 值 )。 结 果 :经 过 筛 选 及 比较 各 化 合 物 IC 50 ，天 然 提 取 化 合 物 w sb 一4 1 ，w sb一12 1，w sb一126 以及 姜

22、 黄 素 结 构 衍 生 物 ccm 一5 ，ccm 一13 及 ccm l4 有 较 高 活 性 ， 并 具 有 剂 量 依 赖 关 系 。关 键 词 : M TT 比色法; 半数抑制浓度(Ic5 0)月叮舀从 天 然 药 物 中 提 取 纯 化 化 合 物 ，并 筛 选 出 具 有 抗 肿 瘤 活 性 的 天 然 产 物 ，或 者 以天 然 产 物 作 为 先 导 化 合 物 进 行 结 构 修 饰 ，合 成 其 衍 生 物 看 是 否 具 有 抗 肿 瘤 活 性 ，进 而 开 发 出 临 床 有 效 的 抗 肿 瘤 药 物 ，一 直 是 抗 肿 瘤 药 物 研 究 领 域 追 求 的 目

23、标 之 一 。在 抗 肿 瘤 药 物 的 体 外 细 胞 模 型 筛 选 中 ，M T T (3 一(4 ，5一二 甲基 噬 哇 一2)一2 ，5 -二 苯 基 四 氮 哇 嗅 盐 ) 比 色 法 以 其 快 速 简 便 ，不 需 要 特 殊 检 测 仪 器 、无 放 射 性 同 位 素 、适 合 大 批 量 检 测 的 特 点 而 得 到 广 泛 的 应 用 。活 细 胞 线 粒 体 中 的 唬 拍 酸 脱 氢 酶 能 使 外 源 性 M T T 还 原 为 水 不 溶 性 的 蓝 紫 色 结 晶 (F orm azan ) 并 沉 积 在 细 胞 中 ， 而 死 细 胞 无 此 功 能 ，

24、M T T 不 被 还 原 。 故 可 通 过 测 定 颜 色 变 化 的 深 浅 来 间 接 反 映 活 细 胞 数 量 。 在 一 定 细 胞 数 范 围 内 ，M T T 结 晶 形 成 的 量 与 细 胞 数 以 及 细 胞 活 性 成 正 比 【l。 该 方 法 已 广 泛 用 于 一 些 生 物 活 性 因 子 的 活 性 检 测 、 大 规 模 的 抗 肿 瘤 药 物 筛 选 、 细 胞 毒 性 试 验 以及 肿 瘤 放 射 敏 感 性 测 定 等 。因 此 ， 我 们 采 用 M T T 比 色 法 对 本 所 在 研 的 天 然 提 取 产 物 以 及 人 工 合 成 的 姜

25、华东师范大学硕 士学位论文第 一章抗肿 瘤活 性化 合物 的筛选 及 其 IC50 测 定黄 素衍 生物 进 行 了抗 肿 瘤 活 性 的筛 选 ，以期 能 找 到 活 性 较 好 的化 合 物 ，为 新 药 的开 发 提 供 新 的 思 路 。1. 材 料 和 方 法1.1 试 剂及 耗 材M T T ，5一氟 尿 嗯 淀 (5一flu orouracil，5一F U ) 购 自Sigm a公 司 ，用 p B S 配 制 成 sm g/m 1母 液 后 过 滤 避 光 保 存 ; 0 .25 % TryP sin 一E D T A ，M 199 培 养 基 ，D M E M 培 养 基 ，

26、即 M l一164 0 培 养 基 购 自G ib co 公 司 ; 胎 牛 血 清 (F B S ) 购 自B iow est公 司 ; 青 霉 素 (P C N )、 链 霉 素 (S T M )购 自P A A 公 司 ; 细 胞 培 养 瓶 、 12 孔 细 胞 培 养 板 、 % 孔 细 胞 培 养 板 购 自C o m in g 公 司 ; D M S O (分 析 纯 ) 购 自G en eb ase公 司 。p B S 溶 液 (p H 7 .4 ) 自 己配 制 ，配 方 如 下 :N aC I:4 .00 9 ， K C L :0 .109 ， N aZH p O 4 :0

27、 .7 19 ，K H Z p O 4 : 0 .13 59 ，溶 于4 0 0m l超 纯 水 ，用 浓 盐 酸 调 节 p H 值 至 7 .4 ，再 加 一o om l定 容 至 soom l，12 0 Oe ，2 0m in高 温 高 压 灭 菌 ， 常 温 冷 却 后 使 用 。1.2 仪 器C O Z培 养 箱 (T herm o L ife ScieneeS公 司 ) ; G en io S多 功 能 酶 标 仪 (瑞 士 T E C A N公 司 ) 。1.3 方 法L 3 .1 细 胞 培 养C 6 大 鼠 神 经 胶 质 瘤 细 胞 ( 中 国 科 学 院 上 海 药 物

28、所 ) 用 M 199 培 养 基 培 养 ， H eP G Z 人 肝 癌 细 胞 ( 中 国科 学 院 上 海 细 胞 生 物 学 研 究 所 ) 、B el一74 02 人 肝 癌 细 胞 (美 国模 式 菌 种 收 藏 所 ，A T C C ) 用 D M E M 培 养 基 培 养 ，S M M C 一77 21 人 肝 癌 细 胞 ( 美 国模 式 菌 种 收 藏 所 A T C C ) 用 RP M I一164 0 培 养 基 培 养 。所 有 培 养 基 均 含 10 %胎 牛 血 清 ，1.0 x 10 ，u /L 青 霉 素 ，100 m g几链 霉 素 ，p H 7 .2

29、一7 .4 。细 胞 培 养 于 37 Oe， 5% c 0 2培 养 箱 内 。当 细 胞 融 合 度 达 到 约 80 % 时 用 0 .25 % Tr yP sin 一E D T A 胰 酶 消 化 后 传 代 培 养 ，每 1一2 天 更 换 培 养 液 1次 。1.3 .2 M T T 条 件 的 摸 索 及 确 定M T T 比 色 法 参 照 文 献 并 进 行 了 改 进 2，3 。 根 据 每 个 细 胞 系 不 同 生 长 特 性 、 倍 增 时 间 以及 细 胞 贴 壁 面 积 大 小 等 ，于 生 长 对 数 期 选 择 多 个 细 胞 密 度 进 行 % 孔 板 接

30、种 (0 .5 x lo4 一l.o x lo4个 /孔 ) ， 培 养 24 小 时 后 ， 分 组 (n = 6 )， 加 不 同 浓 度 梯 度华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文 第一 章 抗肿瘤 活性 化合物 的筛选 及 其 IC50 测 定的D M s O (0.1% 一1% )，继 续 培 养 培 养 48 小 时 ，吸 出各 孔 上 清 ，加 入 M T T 100闪 ( lm g/m l)，孵 育 4 小 时 后 吸 去 M T T 液 ，每 孔 加 入 D M s o 150林l，37 Oe 培 养 约 0 .5 小 时 ，待 结 晶完 全 溶 解 后 酶 标 仪

31、 A 562Iun 处 测 定 光 密 度 (O D 值 )。1.3.3 化 合 物 IC 50 的测 定根 据 己确 定 的M T T 筛 选 条 件 ，在 以上4 种 细 胞 系 上 对 化 合 物 进 行 筛 选 ，各 种 天 然 提 取 化 合 物 以 及 人 工 合 成 化 合 物 均 由 本 研 究 所 提 供 ，同 时 以 5一氟 尿 嗜 淀 ( 5一F U ) 为 阳 性 对 照 。 每 个 细 胞 系 按 相 应 密 度 接 种 % 孔 板 ， 孵 育 24 h 后 分 组 (n= 6 ) ，分 别 设 置 为 : 加 药 组 (加 含 不 同浓 度 化 合 物 培 养 基

32、10 0川/孔 ) ，对 照 组 ( 与 加 药 组 含 相 等 D M s o 浓 度 的培 养 基 100贝/孔 ) ，调 零 组 ( 与 加 药 组 含 相 等 D M S O 浓 度 的 培 养 基 100川/孔 ) 。 继 续 培 养 48 小 时 后 吸 出 各 孔 上 清 ， 加 入 M T T 10 0; l ( lm g/m l)，孵 育 4 小 时 后 吸 去 M T T 液 ，每 孔 加 入 D M s o 150 0 1，37 oe 培 养 约 0 .5 小 时 ，待 结 晶完 全 溶 解 后 酶 标 仪 A 562nm 处 测 定 光 密 度 (O D 值 ) 。化

33、合 物 初 筛 浓 度 定 为 5林M ， 2 5林M ， 50协M ， 100林M 四 个 浓 度 梯 度 ， 通 过 初 筛 后 选 出 Ic 50 100 协M 的化 合 物 ，测 定 其 半 数 抑 制 浓 度 Ic 5O ，此 时 需 根 据 初 筛 浓 度 的抑 制 率 进 行 适 当调 整 ，对 照 组 与 调 零 组 不 变 ，加 药 组 设 5一7个 浓 度 梯 度 (n= 6 ) ，每 种 有 效 化 合 物 的 IC 50 均 单 独 测 定 三 遍 后 取 平 均 值 ， 结 果 以M ean士S E M 表 示 。1.3 .4 数 据 处 理 及 分 析使 用 Sig

34、m aP fot 10 .0 软 件 作 图 ， 实 验 数 据 以M e毗 S E M 表 示 ，n代 表 样 本 数 ， 组 间 差 异 比较 用 t检 验 ，P 0 .05 有 显 著 统 计 学 差 异 ，P 3 8.81 士1.81 拼M ) 相 比 ， 有 很 好 的 抑 制 肿 瘤 增 殖 活 性 ( ccm 一5 :5 .7 3 士0 .0 7 协M 一1 3 .9 4 士0 .7 0 林M ; e e m 一1 3 : 1 .2 6 士0 .0 4 林M 一1 .6 6 士0 .1 0 卜M ; c c m 一1 4 :0 .52士0 .0 6 协M 一1 . 3 1士0 .

35、0 5 林M ) ， 且 具 有 剂 量 依 赖 性 (F ig l一2 ) 。2 .4 筛 选 方 法 的 稳 定 性 考 察在 不 同 %孔 板 之 间 的 检 测 结 果 显 示 ，各 细 胞 系 对 照 组 的 O D 值 均 比 较 稳 定 ，在 可 接 受 范 围 之 内 ( 见 F ig .1一3 A 、 B 、 c 、 D )。华 东 师 范 大 学 硕 士 学 位 论 文第 一 章抗 肿 瘤 活 性 化 合 物 的 筛 选 及 其 I C5 0 测 定3 . 讨 论肿 瘤 疾 病 已经 严 重 威 胁 人 类 的健 康 ，化 学 治 疗 是 目前 肿 瘤 治 疗 的 主 要

36、方 法 之 一 。近 年 来 ，植 物 来 源 的药 物 在 肿 瘤 研 究 方 面 极 受 重 视 ，一 方 面 因 为 它 对 发 现 新药 有 很 大 潜 力 ，另 一 方 面 它 可 为 设 计 更 理 想 的 新 药 提 供 独 特 的化 学 结 构 ，后 者 可被 用 作 创 制 新 药 的先 导 化 合 物 。经 验 表 明 ，这 种 做 法 比传 统 的 随机 筛 选 ，发 现 新 药 的几 率 高 ，更 经 济 。因此 ，我 们 利 用 本 研 究 所 先 进 的化 学 药 物 分 析 实验 室 以及 化 学 药 物 合 成 实 验 室 条 件 ，进 行 了一 系 列 中药

37、生 物 活 性 成 分 筛 选 研 究 以及 以姜 黄 素 为 先 导 的衍 生 物 活 性 筛 选 的研 究 。s一氟 尿 嚓 咤 (5一F h orouraeil，s一F u ) 1957 年 由 D u seh im ky 等 合 成 ， 同年 由 C urreri 及 A usfield 首 先 试 用 于 临 床 。它 是 一 种 作 用 于 D N A 合 成 期 的抗 恶 性 肿 瘤 药 物 ，抗 瘤 谱 广 ，对 增 殖 性 细 胞 各 项 均 有 杀 伤 作 用 。适 应 于 肝 癌 、乳 腺 癌 、结肠癌 、直 肠 癌 、 胃癌 、卵 巢 癌 、宫 颈 癌 、膀 肤 癌 、

38、前 列 腺 癌 和 头 颈 部 肿 瘤 等 治 疗 6， 7 。本 实 验 以 5一F u 为 阳 性 对 照 ，并 测 定 了它 的 Ic 50 ，大 体 上 与 文 献 报 道 一 致 6，8 ，提 示 我 们 的筛 选 方 法 基 本 上 是 有 效 可 靠 的 。在 中 药 生 物 活 性 成 分 筛 选 的 研 究 里 ， 我 们 用 c 6 、H eP G Z 、B el一74 02 以及 SM M C 一77 21 四种 肿 瘤 细 胞 对 一 系 列 的 中药 进 行 了体 外 抗 肿 瘤 活 性 筛 选 。其 中包 括 从 羌 活 分 离 提 取 出来 的 香 豆 素 类 、

39、倍 半 菇 类 单 体 化 合 物 (w sb 一系 列 )，海 桑 及 卵 叶 海 桑 中提 取 鉴 定 的 单 体 化 合 物 (w 一系 列 )，大 红 钓 钟 柳 中分 离 提 取 的环 烯 醚菇 试 类 、苯 乙 醇 昔 类 单 体 化 合 物 而 (ym 一系 列 )，心 叶 风 毛 菊 中 分 离 提 取 的 大 柱 烷 型 降碳 倍 半菇类 、丁 香 昔类 、木 脂 素类 、乌 苏酸类 单 体化 合物 (lxw 一系 列 ) 等 。 中 药 羌 活 为 伞 形 科 植 物 羌 活 N otop tery gium in eisum Tin g ex H .T.e h an g 或 宽叶 羌 活 N otop terygiu m forbesii B o iss.的干