第五章黄酮类化合物

1、 黄酮类化合物黄酮类化合物 （Flavonoids） 以前以前，黄酮类化合物，黄酮类化合物( (flavonoids) )主要是指基本母核主要是指基本母核2-2-苯基苯基色原酮色原酮( (2-phenyl-chromone) )类化合物，类化合物， 黄酮类化合物是泛指两个苯环通过三碳相互连接而成的一黄酮类化合物是泛指两个苯环通过三碳相互连接而成的一系列化合物。系列化合物。第一节第一节 概述概述O12345678913524610ACBC6-C3-C6第一节第一节 概述概述 桂皮酸莽草酸途径桂皮酸莽草酸途径查耳酮查耳酮p分类依据：分类依据：母核中三碳链的氧化程度，三碳链是否成母核中三碳链的氧化程

2、度，三碳链是否成环以及环以及B环的连接位置环的连接位置C3-位：位：有有OH 黄酮醇黄酮醇 无无OH 黄酮黄酮C23饱和：饱和：二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）C3与与B环相连：环相连：异黄酮、二氢异黄酮异黄酮、二氢异黄酮C环开环：环开环：查耳酮、二氢查尔酮查耳酮、二氢查尔酮C环还原：黄烷类环还原：黄烷类其它类型：花色素类、橙酮类（奥弄类）、高异黄酮、其它类型：花色素类、橙酮类（奥弄类）、高异黄酮、 山酮类（双苯吡酮类）山酮类（双苯吡酮类）第一节第一节 概述概述OO双黄酮类：由两分子黄酮或两分子二氢黄酮或一分子黄酮及双黄酮类：由两分子黄酮或两分子二氢黄酮或一分子黄酮及 一一 份子二氢黄酮以份子二氢

3、黄酮以C-C或或C-O-C键连接而成。键连接而成。另外，还有黄酮木脂类、生物碱黄酮类另外，还有黄酮木脂类、生物碱黄酮类第一节第一节 概述概述例例第一节第一节 绪论绪论芦丁(rutin)OHOOHOOHOHrutinoseOrutinoseOOOHOOHOCH3橙皮苷(hesperidin)(+)-儿茶素 OOR2HOR1OR1=R2=H，大豆素 OHOOHOHOHOHHH 多以苷的形式存在：多以苷的形式存在：O-苷和苷和C-苷苷 苷中常见糖的种类苷中常见糖的种类： 单糖单糖：D-葡萄糖，葡萄糖，D-半乳糖，半乳糖，D-木糖，木糖，L-鼠鼠 李糖，李糖，L-阿拉伯糖，阿拉伯糖，D-葡萄糖醛酸葡萄

4、糖醛酸 双糖双糖：槐糖，龙胆二糖，芸香糖（：槐糖，龙胆二糖，芸香糖（Rha1 6Glc），新橙皮糖（），新橙皮糖（Rha12Glc）等）等 三糖三糖：龙胆三糖，槐三糖：龙胆三糖，槐三糖 酰化糖酰化糖：2-乙酰葡萄糖，咖啡酰基葡萄糖乙酰葡萄糖，咖啡酰基葡萄糖第一节第一节 绪论绪论1.1.对心血管系统的作用对心血管系统的作用(1)(1)扩张冠脉：芦丁、葛根素黄酮片临床用于心绞痛、扩张冠脉：芦丁、葛根素黄酮片临床用于心绞痛、高血压。高血压。(2)Vip(2)Vip样作用：橙皮苷可降低血管脆性及异常通透性，样作用：橙皮苷可降低血管脆性及异常通透性，用作高血压辅助治疗剂。用作高血压辅助治疗剂。(3)(3

5、)抑制血小板聚集作用：抑制抑制血小板聚集作用：抑制ADPADP、胶原或凝血酶诱、胶原或凝血酶诱导的血小板聚集，从而防止血栓形成。导的血小板聚集，从而防止血栓形成。(4)(4)降低血胆甾醇作用：山楂总黄酮降低血胆甾醇作用：山楂总黄酮 2.2.抗肝脏毒性作用抗肝脏毒性作用 水飞蓟素为二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合而成，水飞蓟素为二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合而成，适用于适用于急慢性肝炎、肝硬化、中毒性肝损伤。急慢性肝炎、肝硬化、中毒性肝损伤。第一节第一节 绪论绪论 3.3.抗炎作用抗炎作用 黄酮类化合物可抑制脂氧化酶，从而抑制前列腺黄酮类化合物可抑制脂氧化酶，从而抑制前列腺素的生物合成，达到抗炎目的。

6、素的生物合成，达到抗炎目的。4.4.雌性激素样作用雌性激素样作用 大豆素大豆素 己烯雌酚己烯雌酚5.5.抗菌及抗病毒作用抗菌及抗病毒作用 黄芩苷：抗菌黄芩苷：抗菌 山奈酚：抗病毒山奈酚：抗病毒6.6.止咳平喘驱痰作用止咳平喘驱痰作用7.7.泻下作用泻下作用8.8.解痉作用解痉作用第一节第一节 绪论绪论l形态形态：多为结晶，少数为无定形粉末。：多为结晶，少数为无定形粉末。l颜色颜色：结构存在：结构存在交叉共轭体系交叉共轭体系和和助色团助色团，因此化合，因此化合物多有颜色。物多有颜色。 黄酮（醇）及其苷：呈黄色黄酮（醇）及其苷：呈黄色- -灰黄色灰黄色 查耳酮：黄查耳酮：黄- -橙色橙色 二氢黄酮

7、（醇）：无色二氢黄酮（醇）：无色 异黄酮：微黄色异黄酮：微黄色 花色素可随着花色素可随着pHpH值的变化颜色有所不同：值的变化颜色有所不同： 红色（红色（pH7pH8.5)(pH8.5)第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应l 溶解度溶解度黄酮黄酮( (醇醇), ), 查耳酮：查耳酮：二氢黄酮二氢黄酮( (醇醇) )：花色素：花色素：苷元：难溶于水，易溶于乙酸乙酯，乙醚等有苷元：难溶于水，易溶于乙酸乙酯，乙醚等有机溶剂中机溶剂中苷：易溶于水、乙醇、甲醇中，糖链越长水溶苷：易溶于水、乙醇、甲醇中，糖链越长水溶性越大。性越大。第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应水水中中溶

8、溶解解度度增增加加OHHHO平面型分子平面型分子非平面型分子非平面型分子离子离子二氢黄酮二氢黄酮?m酸性：酸性：来源分子中的酚羟基；来源分子中的酚羟基；可溶于碱性水溶液可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺。酰胺。酸性强弱的比较：酸性强弱的比较：取决于羟基的数目和位置：取决于羟基的数目和位置： 7,4-OH 7-或或4 -OH 一般一般Ar-OH 5-OH第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应OOHOOHOHOHOH（可用于提取、分离及鉴定工作）来源：来源：1-1-位氧原子位氧原子的未共用电子对，显微弱的碱的未共用电子对，显微弱的碱性；可与性；可与强酸

9、强酸（如：浓硫酸，盐酸等）生成（）（如：浓硫酸，盐酸等）生成（）盐盐而溶于酸水中。而溶于酸水中。第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应m碱性：碱性：（一）还原反应（一）还原反应（可用于各类化合物的鉴别可用于各类化合物的鉴别）HCl-Mg 反应反应: 多数多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化化合物显橙红合物显橙红紫红色，少数显紫紫红色，少数显紫蓝色。蓝色。查耳酮、查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。(2) HClZn: （同（同HCl-Mg 反应）反应）(3) 四氢硼钠（四氢硼钠（NaB

10、HNaBH4 4) )反应反应： NaBHNaBH4 4是对是对二氢黄酮二氢黄酮（醇）类（醇）类化合物专属性较高的一种还原剂。化合物专属性较高的一种还原剂。 颜色多为颜色多为橙红橙红- -紫红紫红第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应（二）金属盐类试剂的络合反应（二）金属盐类试剂的络合反应黄酮类化合物分子结构中多具有下列结构：黄酮类化合物分子结构中多具有下列结构：可与金属盐类试剂产生络合反应可与金属盐类试剂产生络合反应: （1）锆盐锆盐 （4）镁盐）镁盐 （2）铝盐）铝盐 （5）氯化锶氯化锶 （3）铅盐铅盐 （6）三氯化铁反应三氯化

11、铁反应OOOHOOOHOHOH（1 1）锆盐（锆盐（ZrOClZrOCl2 2）- -枸橼酸反应：枸橼酸反应：区分区分C3-OH和和C5-OHOOOHOOOHOOOZrClOOOZrClOH2OOH2O2%ZrOCl2黄黄绿绿色色络络合合物物2 2% %枸枸橼橼酸酸不不退退色色褪褪色色第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应u 稳定性稳定性: 3-OH，4-酮基络合物酮基络合物 5-OH，4-酮基络合物酮基络合物（仅二（仅二氢黄酮醇除外）氢黄酮醇除外）样 品+ 1% AlCl3或硝酸铝紫紫外外下下有有荧荧光光黄黄色色络络合合物物（2）铝盐）铝盐样品+ 1 1% % 醋醋酸酸铅铅或碱式

12、醋酸铅/H2O黄黄 红红色色 沉沉淀淀（3）铅盐）铅盐第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应可用于定性或定量分析可用于定性或定量分析Note： 醋酸铅（中性）：醋酸铅（中性）：邻二酚邻二酚、3-OH3-OH和和4-4-酮基酮基或或5-OH 5-OH 和和4-4- 酮酮 碱式醋酸铅：碱式醋酸铅：一般酚羟基一般酚羟基均可均可（4）镁盐）镁盐样样品品+醋醋酸酸镁镁/ /M Me eO OH H呈呈色色可可滴滴在在滤滤纸纸上上 二氢黄酮二氢黄酮(醇醇)：显天蓝色荧光显天蓝色荧光, 有有5-OH更明显更明显 黄酮黄酮(醇醇)、异黄酮：、异黄酮：显黄显黄橙、黄橙、黄褐色褐色第二节第二节 理化性

13、质与颜色反应理化性质与颜色反应（5）氯化锶（）氯化锶（SrCl2）（三）硼酸显色反应（三）硼酸显色反应第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应鉴别鉴别5-OH5-OH黄酮黄酮和和2 2 - -羟基查耳酮羟基查耳酮 在无机酸或有机酸存在下，反应生成在无机酸或有机酸存在下，反应生成 亮黄色亮黄色。（四）碱性试剂（四）碱性试剂 NH3蒸气蒸气：颜色加深，可逆；：颜色加深，可逆； Na2CO3反应不可逆。反应不可逆。 1) 二氢黄酮遇碱开环：二氢黄酮遇碱开环：生成查耳酮，显橙黄色。生成查耳酮，显橙黄色。 2) 黄酮醇：黄酮醇：在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色，在碱液中先呈黄色，通入空气后

14、变为棕色，据此可与其他黄酮区别。据此可与其他黄酮区别。 3) 黄酮类有邻二酚羟基或黄酮类有邻二酚羟基或3，4 -二羟基二羟基：在：在OH-中中 易氧化，生成由黄色易氧化，生成由黄色 深红色深红色 绿棕色沉淀。绿棕色沉淀。第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应(五五) Wessely-Moser重排重排 黄酮类黄酮类6-及及8-C-糖苷糖苷在常规酸水解条件下不在常规酸水解条件下不被水解，但可发生互变，成为被水解，但可发生互变，成为6-和和8-C-糖苷的糖苷的混合物。混合物。OHOOHOHOOHOOHOHOa-L-arabino-pyranosylB-D-gluco-pyranosyl

15、a-L-arabino-pyranosylB-D-gluco-pyranosylschaftosideisoschaftoside6%HCl100oC/ 7hr第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应 HCl-Mg反应反应 HCl-Zn反应反应 NaBH4反应反应 锆锆-枸橼酸反应枸橼酸反应 SrCl2反应反应 硼酸硼酸+草酸反应草酸反应 Molish反应反应 （+） （+） （-） 黄色，加枸橼酸黄色，加枸橼酸,褪色褪色 （+） （+）黄色）黄色 （+）OOOHOGlc_RhaOHOHHO第二节第二节 理化性质与颜色反应理化性质与颜色反应练习：练习：下面的一个化合物可能发生的反应下

16、面的一个化合物可能发生的反应芦丁(rutin)OHOOHOOHOHrutinoseO 根据化合物的性质，可采取以下提取方法根据化合物的性质，可采取以下提取方法 化合物：化合物： 极性极性溶剂萃取溶剂萃取 酸性酸性碱提酸沉碱提酸沉 解离性解离性离子交换离子交换 碳粉吸附法碳粉吸附法第三节第三节 提取分离方法提取分离方法 溶剂萃取法：溶剂萃取法： 被分离物质与混入的杂质性质不同，选用不同极性被分离物质与混入的杂质性质不同，选用不同极性溶剂萃取达到去杂质目的。溶剂萃取达到去杂质目的。 例如：例如：醇提液醇提液用用石油醚萃取石油醚萃取可除去可除去油脂、蜡、叶绿素油脂、蜡、叶绿素； 水提液水提液加加醇沉

17、淀醇沉淀可去除可去除蛋白、多糖蛋白、多糖等水溶性杂质。等水溶性杂质。 浸 膏加水水溶液分别用不同极性溶剂萃取石油醚、氯仿、石油醚 氯 仿 乙酸乙酯正丁醇水（极性小）（苷元等） （极性大的苷元）（黄酮苷类）（多糖、蛋白质等）（分步萃取）乙酸乙酯、正丁醇第三节第三节 提取分离方法提取分离方法 药材药材甲醇或乙醇提取，回收醇样样品品OH-提提取取液液过过滤滤H+沉沉淀淀（黄黄酮酮类类）槐花米H2O石灰乳调 pH = 89药渣滤液酸调pH = 34沉淀滤液第三节第三节 提取分离方法提取分离方法2.碱提酸沉法碱提酸沉法 原理：原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出。酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出。

18、 碱：碱：常用常用饱和饱和Ca(OH)2水溶液，石灰乳水溶液，石灰乳， 5%NaCO3溶液，稀溶液，稀NaOH水溶液等。水溶液等。 优点：优点：可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使含可使含COOH的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形成沉淀而除去。成沉淀而除去。 注意：注意：碱性碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核；不宜过强，以免破坏黄酮母核； 酸化时，酸化时，酸性酸性不宜过强，不宜过强，pH34即可，以免形即可，以免形成佯盐而溶解。成佯盐而溶解。第三节第三节 提取分离方法提取分离方法2.碱提酸沉法碱提酸沉法第三节第三节 提取分离方法提取

19、分离方法3. 离子交换离子交换 原理：原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；采用阴离子酚羟基与碱成盐，溶于水；采用阴离子交换树脂交换，加酸后析出，用有机溶剂回流提交换树脂交换，加酸后析出，用有机溶剂回流提取。取。第三节第三节 提取分离方法提取分离方法4.4.炭粉吸附法（炭粉吸附法（主要适用于苷类的精制主要适用于苷类的精制） （一）采用各种色谱方法：（一）采用各种色谱方法： 1 1）硅胶色谱硅胶色谱：按极性大小分离，主要分离极性小：按极性大小分离，主要分离极性小和中等极性的化合物。和中等极性的化合物。 可用可用CCCC（柱色谱），（柱色谱），PTLCPTLC（制备薄层）（制备薄层） 主要适于分离异黄酮、

20、二氢黄酮、二氢黄酮醇主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。 少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其甙类等。性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其甙类等。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法2 2）聚酰胺色谱：）聚酰胺色谱： 原理：原理：聚酰胺分子中具有酰胺羰基，可与酚羟基形成氢聚酰胺分子中具有酰胺羰基，可与酚羟基形成氢键，主要依据与被分离物质成氢键能力不同进行分离。键，主要依据与被分离物质成氢键能力不同进行分离。 吸附强度主要取决于：吸

21、附强度主要取决于： 黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置以及溶剂黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置以及溶剂； 黄酮类化合物黄酮类化合物酚羟基酚羟基与聚酰胺之间形成氢键缔合与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。能力的大小。 （形成氢键形成氢键主要指主要指酚羟基酚羟基，糖部分不参与形成氢键），糖部分不参与形成氢键） 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法p其洗脱规律：（其洗脱规律：（顺序顺序先先后）后） (1)(1)苷元相同苷元相同, , 洗脱洗脱先后顺序先后顺序一般是：一般是： 三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元(2)(2)母核上羟基增加，母核上羟基增加，洗脱速度洗脱速度减慢减慢(3

22、)(3)羟基数目相同羟基数目相同, ,有缔合有缔合羟基羟基 无缔合无缔合羟基羟基(4)(4)不同类型黄酮的洗脱顺序：不同类型黄酮的洗脱顺序： 异黄酮异黄酮 二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇） 查耳酮查耳酮 黄酮黄酮 黄酮醇黄酮醇 （芳香核、共轭双键多者吸附力强芳香核、共轭双键多者吸附力强）第三节第三节 提取分离方法提取分离方法第三节第三节 提取分离方法提取分离方法习题：下列黄酮化合物，习题：下列黄酮化合物， （1 1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱， （2 2）用硅胶柱色谱分离，氯仿）用硅胶柱色谱分离，氯仿- -甲醇梯度洗脱，甲醇梯度洗脱， 分别写出洗脱顺序分别

23、写出洗脱顺序OOHOOHOHAOOHOOHOHOHBOORha-GlcOOHOODOORha-GlcOOHOHOHEOOGlcOOHOHOHC第三节第三节 提取分离方法提取分离方法答案：答案：聚酰胺柱色谱洗脱顺序：由先到后聚酰胺柱色谱洗脱顺序：由先到后 D，E，C，B，A 2. 用硅胶柱色谱洗脱顺序用硅胶柱色谱洗脱顺序：由先到后由先到后 A，B，C，D，Eu常用型号：常用型号： Sephadex-G（适用于水溶性成分分离）（适用于水溶性成分分离） Sephadex-LH20 （可用于亲脂性成分分离可用于亲脂性成分分离 ）u机理：机理： 分离游离黄酮（苷元）分离游离黄酮（苷元）靠靠吸附作用吸附作

24、用。吸附程。吸附程度取决于游离酚羟基数目，度取决于游离酚羟基数目，苷元苷元的的羟基数越多羟基数越多, , 越越难洗脱难洗脱。 分离黄酮苷（苷）分离黄酮苷（苷）分子筛分子筛起主导作用。在洗起主导作用。在洗脱时，脱时，黄酮苷类黄酮苷类按按分子量由大到小分子量由大到小的顺序的顺序流出流出柱体。柱体。3）葡聚糖凝胶色谱）葡聚糖凝胶色谱第三节第三节 提取分离方法提取分离方法例：例：下列化合物，用凝胶柱色谱，含水甲醇洗脱，写出出柱顺序。下列化合物，用凝胶柱色谱，含水甲醇洗脱，写出出柱顺序。第三节第三节 提取分离方法提取分离方法1）2）先后顺序：先后顺序：A B C先后顺序：先后顺序：C A B 应用：应用

25、：分离酸性强弱不同的黄酮苷元分离酸性强弱不同的黄酮苷元 酸性比较：酸性比较：7,4 -OH 7-或或4-OH 一般一般OH 5-OH溶于溶于 NaHCO3 Na2CO3 不同浓度的不同浓度的NaOH样样品品乙醚乙醚乙醚乙醚液液依次依次萃取萃取5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH分别分别酸化酸化各各部部分分黄黄酮酮第三节第三节 提取分离方法提取分离方法（二）梯度（二）梯度pH萃取法萃取法l醋酸铅沉淀法：醋酸铅沉淀法： 邻二酚羟基黄酮醋酸铅邻二酚羟基黄酮醋酸铅 沉淀沉淀 不具有邻二酚羟基碱式醋酸铅不具有邻二酚羟基碱式醋酸铅 沉淀沉淀l硼酸沉淀法硼酸沉淀法： 邻二酚羟基硼酸邻

26、二酚羟基硼酸 络合物溶于水，与其络合物溶于水，与其它黄酮分离。它黄酮分离。第三节第三节 提取分离方法提取分离方法（三）利用分子中的特定基团（三）利用分子中的特定基团习题：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下：习题：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下： 试比较四种化合物的酸性，试比较四种化合物的酸性， 极性大小极性大小 比较它们的比较它们的Rf值大小顺序：值大小顺序： 1）硅胶）硅胶TLC 2）聚酰胺）聚酰胺TLCA R1=R2=H B R1=H, R2=Rha C R1=Glc, R2=HD R1=Glc, R2=Rha酸性酸性 ACBD极性极性 DCBARf ：ABCD DBCA第三节

27、第三节 提取分离方法提取分离方法OOOHR2OOHOR1（一）色谱在黄酮类鉴定中的应用（一）色谱在黄酮类鉴定中的应用 第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定1. 纸色谱纸色谱l苷元（花色苷元除外）：苷元（花色苷元除外）：分配层析。流动相：分配层析。流动相：BAW系统。系统。l苷：苷：双向纸层析。双向纸层析。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定第一向第一向第二向第二向第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定u Rf与结构的关系：与结构的关系：（1）水类溶剂水类溶剂展开时，平面型分子（黄酮、黄酮醇、查耳

28、酮）展开时，平面型分子（黄酮、黄酮醇、查耳酮）几乎停留原点不动，非平面型分子（二氢黄酮、二氢查耳酮）几乎停留原点不动，非平面型分子（二氢黄酮、二氢查耳酮）Rf较大。较大。（2）醇性溶剂醇性溶剂展开时，同一类型苷元，羟基越多，展开时，同一类型苷元，羟基越多，Rf 越小。越小。（3）醇性溶剂醇性溶剂展开时，苷元相同时，展开时，苷元相同时，Rf值大小通常为：苷元值大小通常为：苷元单糖苷单糖苷双糖苷双糖苷（4）醇性溶剂醇性溶剂展开时，羟基被甲氧基取代，展开时，羟基被甲氧基取代，Rf 增大。增大。（5）醇性溶剂醇性溶剂展开时，羟基糖苷化，极性增大，展开时，羟基糖苷化，极性增大，Rf 下降。下降。Note

29、：（2）（）（3）（）（4）（）（5）用酸水展开时，上述顺序颠倒。）用酸水展开时，上述顺序颠倒。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定2. TLC：主要指：主要指吸附薄层吸附薄层，常用硅胶，常用硅胶TLC，聚酰胺，聚酰胺TLC。 硅胶硅胶TLC：鉴定弱极性黄酮类化合物。：鉴定弱极性黄酮类化合物。 聚酰胺聚酰胺TLC：分离大多数黄酮及苷类，适用范围广，：分离大多数黄酮及苷类，适用范围广，分离效果好。分离效果好。 第四节第四节 黄酮类化合物的检识与黄酮类化合物的检识与结构测定结构测定 （二）结构测定（二）结构测定肩峰n*第四节第四节 黄酮类化合物的检识与黄酮类化合物

30、的检识与结构测定结构测定 （二）结构测定（二）结构测定第四节第四节 黄酮类化合物的检识与黄酮类化合物的检识与结构测定结构测定 （二）结构测定（二）结构测定（二）结构测定（二）结构测定GN2-1S5-4 1H-NMR 500MHz CD3OD溶剂峰溶剂峰水峰水峰化学位移化学位移积分积分溶剂峰溶剂峰GN2-1S5-4 13C-NMR 125MHz CD3OD第四节第四节 黄酮类化合物的检识与黄酮类化合物的检识与结构测定结构测定 （二）结构测定（二）结构测定（二）结构测定（二）结构测定ESI-MS正离子质谱正离子质谱负离子质谱负离子质谱M-H-2M-H-2M+H+ 黄酮存在黄酮存在桂皮酰基桂皮酰基及

31、及苯甲酰基苯甲酰基组成的交叉共轭系统，组成的交叉共轭系统，在在200400nm间，有两个主要的紫外吸收带间，有两个主要的紫外吸收带A环苯甲酰系统峰带环苯甲酰系统峰带II，220280nmB环桂皮酰基系统环桂皮酰基系统峰带峰带I，300400nm共性：共性： B环环OH增加，增加，峰带峰带I 红移红移，特别是，特别是4 -OH，红移大；，红移大； A环环OH增加，增加，峰带峰带II 红移红移。OOOO -OO -+（一）（一）第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定1.1.黄酮、黄酮醇类黄酮、黄酮醇类带带I ：黄酮类：黄酮类 30435

32、0nm 黄酮醇（黄酮醇（3-OH被取代）被取代）328357 黄酮醇（黄酮醇（3-OH游离）游离） 352385带带II ： 240285nm* * 峰带峰带I I和和IIII强度相似强度相似nmIII第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定黄酮及黄酮醇类化合物黄酮及黄酮醇类化合物的紫外光谱带的紫外光谱带（MeOH max，nm）l 取代基的影响：取代基的影响： 带带I ：母核上的母核上的OH、-OCH3等供电基，可引起等供电基，可引起相应吸收带红移。氧取代程度越高，带相应吸收带红移。氧取代程度越高，带I红移越大。红移越大。羟基甲基化

33、或苷化，将引起紫移。羟基甲基化或苷化，将引起紫移。 带带II：峰位主要受峰位主要受A-环氧取代程度的影响，氧取代环氧取代程度的影响，氧取代程度越高，带程度越高，带II越向红移。越向红移。B环的取代基只影响峰形。环的取代基只影响峰形。如：只有如：只有4-OR时，为单峰；时，为单峰；3 ，4 -OR时，为双时，为双峰峰。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 2.查耳酮、橙酮类查耳酮、橙酮类nmIIIOCHO12346 查耳酮查耳酮 带带I 340390nm(有裂分有裂分)带带II 220270nm 橙酮橙酮370430nm(34个峰个

34、峰)*带带I 强，带强，带II 次强峰次强峰O2345611246第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定查耳酮一查耳酮一 橙酮橙酮- - -异黄酮一异黄酮一二氢黄酮二氢黄酮- - -3.异黄酮、二氢黄酮异黄酮、二氢黄酮(醇醇)类类nmIII只有只有A-环苯甲酰系统，带环苯甲酰系统，带II 为主峰为主峰带带II： 异黄酮异黄酮 245270nm 二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇） 270295nm带带I： 肩峰肩峰* 带带I 弱，带弱，带II 强峰强峰第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二

35、）结构测定（二）利用诊断试剂，判断羟基位置（二）利用诊断试剂，判断羟基位置1.甲醇钠（甲醇钠（NaOMe） 黄酮类化合物上所有酚羟基，均可在黄酮类化合物上所有酚羟基，均可在 NaOMe 中成盐，引起红移。中成盐，引起红移。确定确定4-OH黄酮醇类：黄酮醇类： a.带带I 位移位移4060nm, 强度不降。示有强度不降。示有4-OH. b.带带I红移红移5060nm, 强度下降。示有强度下降。示有3-OH, 但无但无 4-OH。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定二氢黄酮（醇）、异黄酮类二氢黄酮（醇）、异黄酮类: a. 带带II 红

36、移红移3540nm。示有。示有5,7-OH。 b. 带带I 移至移至400nm。示无。示无5-OH。c. 320330nm, 有峰，有峰，7-OH。 d. 3,4-OH, 3,3,4-OH, 3,4,5-OH等等, 随时间延长随时间延长, 峰衰退峰衰退.第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定2.醋酸钠（醋酸钠（NaOAc） NaOAc碱性较碱性较NaOMe弱，只能使弱，只能使7-OH，4-OH解解离。由于未熔融的离。由于未熔融的NaOAc中含微量中含微量HOAc，限制，限制4-OH的解离。的解离。（二）利用诊断试剂，判断羟基位置（二

37、）利用诊断试剂，判断羟基位置确定确定7-OH黄酮（醇）：黄酮（醇）：带带II 红移红移520nm，示有，示有7-OH，6, 8氧取代时影响位移幅度。氧取代时影响位移幅度。二氢黄酮（醇）：二氢黄酮（醇）：带带II 红移红移60nm，示有，示有7-OH。 带带II 红移红移35nm，示有，示有5，7-OH。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定异黄酮：异黄酮：带带II 红移红移620nm，示有，示有 7-OH，。，。 有有5,6,7-三三OH，6,7,8-三三OH或或3,3,4-三三OH 时，峰随时间衰退。时，峰随时间衰退。2.醋酸钠（

38、醋酸钠（NaOAc）3. NaOAc/H3BO3 邻二酚羟基在邻二酚羟基在NaOAc碱性下，可与碱性下，可与H3BO3螯合，引螯合，引起红移。起红移。黄酮（醇）：黄酮（醇）：带带I 红移红移1230nm；B环具邻二酚羟环具邻二酚羟基。基。 带带II 红移红移510nm A环具邻二酚羟基环具邻二酚羟基 ( 除除5,6-二二OH)。确定邻二确定邻二OH第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定异黄酮，二氢黄酮（醇）：异黄酮，二氢黄酮（醇）： 带带II 红移红移1015nm， A环具邻二酚羟基环具邻二酚羟基( 除除5,6-二二OH)。4. A

39、lCl3及及AlCl3/HClOOOHOOOHOHOH AlCl3与与 引起络合。引起络合。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定生成铝络合物的稳定性顺序：生成铝络合物的稳定性顺序： 3-OH(黄酮醇黄酮醇)5-OH(黄酮黄酮)5-OH(二氢黄酮二氢黄酮)邻邻二酚二酚OH3-OH(二氢黄酮醇二氢黄酮醇)第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 邻二酚邻二酚OH和和 二氢黄酮醇的二氢黄酮醇的 3-OH形成的络合物遇形成的络合物遇酸分解。酸分解。 当当3-OH与与5-OH共存时

40、，优先生成共存时，优先生成3-OH-4-酮基络酮基络合物。合物。 3-OH或或5-OH及邻二酚及邻二酚OH同时存在，形成二络合同时存在，形成二络合物。物。OOHOOOOAl+Al2+应注意以下规律：应注意以下规律：第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定a. AlCl3/HCl与与MeOH中光谱比较中光谱比较 相同时相同时：示无：示无3-OH或或5-OH。 不同时不同时：带：带I 红移红移3355nm，示只有，示只有5-OH，无，无3-OH时。时。 带带I 红移红移1720nm，示有，示有 5-OH，且，且6-氧代；氧代； 带带I 红

41、移红移5060nm，示有，示有5-OH、3-OH； 带带I 红移红移60nm，示只有，示只有3-OH时。时。3-OH, 5-OH4. AlCl3及及AlCl3/HCl第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定b. AlCl3/HCl与与AlCl3中光谱比较中光谱比较 相同时相同时：无邻二酚羟基；：无邻二酚羟基； 不同时不同时：带：带I 紫移紫移3040nm，示，示 B环有邻二酚羟基；环有邻二酚羟基； 带带I 紫移紫移5060nm，示，示A，B环同时有邻二环同时有邻二酚羟基。酚羟基。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的

42、检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定练习：练习： UV max, nm: MeOH 259, 266sh, 299sh, 359 NaOMe 272, 327, 410 NaOAc 271, 325, 393 NaOAc/ H3BO3 262,298,387AlCl3 275, 303sh, 433AlCl3/ HCl 271, 300, 364sh, 402某化合物某化合物HCl-Mg反应（反应（+），），Molish反应（反应（+），），ZrOCl2反应黄色，加入枸橼酸褪色，酸水解检出反应黄色，加入枸橼酸褪色，酸水解检出Glc。紫外谱图数据如下，试推断其结构紫外谱图数据如下，试推断

43、其结构第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定黄酮或黄酮或3-O-苷苷 I=410-359=51nm，4 -OH II=271-259=12nm, 7-OH I=387-359=28nm, B环有邻二环有邻二OHAlCl3/HCl与与AlCl3相比，相比， I=402-433= -31nm, B环有邻二环有邻二OHAlCl3/HCl与与MeOH相比，相比， I=402-359=43nm, 有有5-OH，无，无3-OH分析：分析：OOHHOOHOHOO-Glycosyl第四节第四节 黄酮类化合物的鉴定与结构测定黄酮类化合物的鉴定与结构测

44、定 （二）结构测定（二）结构测定1. 核磁共振氢谱（核磁共振氢谱（1HNMR）A环质子环质子(1). 5,7-二二OH H-6,8 5.76.9, d, J=2.5Hz H-8 H-6OOHHOO568第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定(2). 7-OH H-5：7.78.2, d, J=8Hz H-6：6.47.1, dd, J=8 and 2Hz H-8：6.37.0, d, J=2HzH-5受受C环环C=O的去屏蔽作用而的去屏蔽作用而处于低场，化学位移大。处于低场，化学位移大。OHOO568A环质子环质子1. 核磁共振氢谱

45、（核磁共振氢谱（1HNMR）第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定B环质子环质子4 -OR 2 , 6 -H 7.18.1, d, J=8Hz 3 , 5 -H 6.57.1, d, J=8Hz（两组峰，每个峰有两个（两组峰，每个峰有两个H，AABB系统）系统）ORB2 3456第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定3, 4 二二OR 1)黄酮（醇）黄酮（醇） H-5 6.77.1, d, J=8.5Hz H-6 7.9, dd, J=8.5, 2.5Hz H-2 7.2

46、, d, J=2.5Hz 2)异黄酮，二氢黄酮（醇）异黄酮，二氢黄酮（醇） H-2,5,6 6.77.1 m （峰复杂）（峰复杂）ORORBB环质子环质子第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定3 ,4 , 5 -三三OR H-2, 6 ：6.57.5 R=R , 为一个单峰为一个单峰s(2H); R R ，间位偶合为两个二重峰，间位偶合为两个二重峰d(J=2Hz)ORORBORB环质子环质子第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定C环质子环质子 区别各类黄酮的主要依据区别各

47、类黄酮的主要依据1)黄酮黄酮 H-3 6.3 s (常与常与A环质子重叠环质子重叠)2) 异黄酮异黄酮 H-2 7.67.8(用用DMSO-d6作溶剂时作溶剂时为为 8.58.7)OOHOOH2第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定3) 二氢黄酮二氢黄酮 (2位为位为S构型构型) H-2 5.2, dd, J=11 and 5Hz Ha-3 2.83.0, dd, J=17 and 11HzHe-3 2.8, dd, J=17 and 5Hz( Ha-3 He-3)2OHHaHeO3C环质子环质子第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结

48、构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 4） 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 H-2 4.9, d, J=11Hz H-3 4.3, d, J=11Hz(绝对构型用绝对构型用CD或或ORD测定测定)5） 查耳酮查耳酮 H- 6.77.4, d, J=17Hz H- 7.37.7, d, J=17Hz6） 橙酮橙酮苄基质子苄基质子 6.56.7 sOHHOHOOOCHPhO第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 1）黄酮苷类化合物上糖的端基质子信号）黄酮苷类化合物上糖的端基质子信号 黄酮醇黄酮醇-3-O-葡萄糖苷葡萄糖

49、苷 5.70 6.00 黄酮醇黄酮醇-3-O-鼠李糖苷鼠李糖苷 5.00 5.10 黄酮类黄酮类 -7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 4.80 5.20 黄酮类黄酮类-4-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 黄酮类黄酮类 -5-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 黄酮类黄酮类-6 及及 8-C-糖苷糖苷糖上质子糖上质子第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 2） 端基以外的糖上质子端基以外的糖上质子: 34, 鼠李糖鼠李糖C5- CH3 :0.81.2 , d, J=6.5Hz其它取代基其它取代基 CH3CO- 脂肪族乙酰氧基脂肪族乙酰氧基 1.652.10 (确定糖

50、数确定糖数) 芳香族乙酰氧基芳香族乙酰氧基 2.302.50 (确定酚羟基数确定酚羟基数)第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 2） 端基以外的糖上质子端基以外的糖上质子: 34, 鼠李糖鼠李糖C5- CH3 :0.81.2 , d, J=6.5Hz其它取代基其它取代基 CH3CO- 脂肪族乙酰氧基脂肪族乙酰氧基 1.652.10 (确定糖数确定糖数) 芳香族乙酰氧基芳香族乙酰氧基 2.302.50 (确定酚羟基数确定酚羟基数) 第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定

51、CH3O- 甲氧基质子信号一般在：甲氧基质子信号一般在： 3.50 4.10 可通过可通过NOE核磁共振技术及二维技术确定基位置核磁共振技术及二维技术确定基位置 OH溶剂一般采用溶剂一般采用DMSO-d6(无水无水)作测试溶剂作测试溶剂 5-OH 12.40； 7-OH 10.9； 3-OH 9.7 ； 4-OH 10(这些信号加这些信号加D2O后消失后消失)其它取代基其它取代基第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定2. 核磁共振碳谱（核磁共振碳谱（13CNMR） 根据根据CO的化学位移确定黄酮骨架的化学位移确定黄酮骨架 a. 17

52、4184 黄酮黄酮(醇醇), 异黄酮异黄酮, 橙酮橙酮 b. 188197 查耳酮查耳酮, 二氢黄酮二氢黄酮(醇醇)OOACB第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定黄酮黄酮 104112异黄酮异黄酮122126黄酮醇黄酮醇 136 橙酮橙酮 111112查耳酮查耳酮 116130二氢黄酮二氢黄酮 4245二氢黄酮醇二氢黄酮醇 712. 核磁共振碳谱（核磁共振碳谱（13CNMR） 根据根据C-3的化学位移细分的化学位移细分OOACB第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 取

53、代基位移取代基位移2. 核磁共振碳谱（核磁共振碳谱（13CNMR）ZiZoZmZp+ 26.6- 12.8+ 1.6- 7.1+ 31.4- 14.4+ 1.0- 7.8X-OH-OCH3第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定B环上含氧取代基环上含氧取代基2. 核磁共振碳谱（核磁共振碳谱（13CNMR）155155146-148135145145第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定OHOOOHOH164.2103.3182.2157.999.2164.794.2162.

54、1104.2119.3113.8OH146.2150.1116.4122.1例：下列一个化合物的碳信号归属例：下列一个化合物的碳信号归属第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定1. 电子轰击质谱（电子轰击质谱（EI-MS） 苷元：可得到苷元：可得到M+，且为基峰；，且为基峰； 苷：得不到苷：得不到M+，可得苷元碎片，可制备衍生物。，可得苷元碎片，可制备衍生物。2. 场解析质谱（场解析质谱（FD-MS）和快原子轰击质谱（）和快原子轰击质谱（FAB-MS） 用于测定极性较强的苷类化合物，可得到用于测定极性较强的苷类化合物，可得到M+ ，

55、M+ +1， M+ +Na， M+ +K峰，且给出糖基碎片峰。峰，且给出糖基碎片峰。第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定3.黄酮类化合物苷元的黄酮类化合物苷元的EI-MS裂解途径裂解途径 途径途径 I （RDA裂解）裂解）OOOCO+.+orCHC+.M+.A1+.B1+.m/z 120m/z 102第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定利用利用A1+和和B1+可确定可确定A环和环和B环的取代情况环的取代情况 A1+. B1+.5, 7-二羟基黄酮二羟基黄酮 152 1

56、025, 7, 4 ?-三羟基黄酮三羟基黄酮(芹菜素芹菜素) 152 1185, 7-二羟基二羟基, 4 ? -甲氧基黄酮甲氧基黄酮(刺槐素刺槐素) 152 132第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定途径途径-II： 黄酮类黄酮类: 途径途径-I为主为主 M+常为基峰常为基峰, 还有还有M-28+, A1+(s), B1+(s),及及A1+H+, A1-28+, B2+, B2-28+等。等。 黄酮醇类黄酮醇类: 主要按途径主要按途径-II 进行进行 M+常为基峰常为基峰, 碎片离子主要有碎片离子主要有B2+和和B2-28+及及A

57、1+H+, 此外还有此外还有M-H+, M-15+等。等。OOAA+OCCH+CO+B2+BB第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定 （二）结构测定（二）结构测定 例例1：某黄色结晶：某黄色结晶I，盐酸镁粉反应，盐酸镁粉反应()，Molish反应反应() ，FeCl3反应反应() ，ZrOCl2反应呈黄色，但加入枸橼酸后黄色褪去。反应呈黄色，但加入枸橼酸后黄色褪去。 I的的UV nm如下如下: MeOH 252 267 (sh) 346 NaOMe 261 399 AlCl3 272 426 AlCl3/HCl 260 274 357 385 NaOAc 254

58、 400NaOAc/H3BO3 256 378 I的的1H-NMR (DMSO-d6, TMS) ：7.41 (1H, dd, J = 8, 3Hz), 6.92 (1H, d, J = 8 Hz), 6.70 (1H, d, J = 3 Hz), 6.62 (1H, d, J = 2 Hz), 6.43 (1H, d, J = 2 Hz), 6.38 (1H, s), 5.05 (1H, d, J = 7 Hz)，其余略。，其余略。 FAB-MS示分子中含一分子葡示分子中含一分子葡萄 糖萄 糖 , 苷 元 的 分 子 式 为苷 元 的 分 子 式 为C15H10O6 ,推断化合物的结构，推断化合物的结构，并写出推导过程。并写出