常见血液肿瘤FISH检测小册教学文稿

1、如有侵权请联系网站删除常见血液肿瘤FISH检测小册精品资料如有侵权请联系网站删除一 .FISH 是什么FISH 即荧光原位杂交技术(Fluorescence in situhybridization ) ，是在细胞遗传学水平上检测染色体及基因 数目和结构异常的一种分子病理检测技术。其基本原理是 利用标记了荧光素的核酸作为探针，按照碱基互补原则， 与待检样本中与之互补的核酸经过变性-退火而形成杂交双链核酸，然后通过荧光显微镜进行检测和分析。FISH 技术具有直观、快速、敏感性高和方便灵活等 特点，目前已经广泛应用于临床的肿瘤遗传学及各种基因 相关疾病的分型与个体化治疗等多个领域。二.血液肿瘤的诊

2、断分型MICM :血液肿瘤诊断的精确分型是临床选择正确治疗方案的前提，目前国际上通用的是结合细胞形态学(Morphology)、免疫学(Immunology)、细胞遗传学(Cytogenetics)和分子生物学(Molecular)的 MICM 分 型。形态学诊断(Morphology)细胞学：外周血、骨髓涂片，淋巴结穿刺组织学：骨髓、淋巴结活检精品资料如有侵权请联系网站删除免疫学检查（Immunology）免疫组化（IHC） ，流式细胞（FCM）细胞遗传学检查（Cytogenetics）核型分析，荧光原位杂交（FISH ）分子生物学检查（Molecular）PCR， DNA 测序三 .FIS

3、H 技术的作用及优势FISH 作为一项很重要的分子遗传学检测技术，在血液肿瘤的诊断中有很大的作用，得到了 NCCN 等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。目前与血液肿瘤相关的FISH 探针有接近100 种，常用的就有60 种左右， 包括急慢性白血病、骨髓增生异常综合症（ MDS） 、多发性骨髓瘤（MM ） 、淋巴瘤等多种血液精品资料如有侵权请联系网站删除肿瘤。FISH技术的相对优势：FISH技术更敏感，可检测出核型分析检测不出的细微缺失或易位，如 MDS中的5q缺失综合征；FISH技术不需要中期分裂相细胞，而核型分析需要 培养时间较长且需要较高的操作要求；FISH技术是在细胞形态的基础上进

4、行结果判读，可有效地降低假阴性或假阳性的风险，而 PCR技术经 过倍增扩增，不能在形态的基础上判读，对实验要求 高，易产生假阴性或假阳性。四.常用的血液FISH检测探针1急性粒细胞白血病（AML）:样本建议骨髓口 AML1/ETO融合基因（M2b分型）口 PML/RARA融合基因（M3分型）口 CBFB基因断裂（M4分型）如有侵权请联系网站删除KMT2A (MLL口 其他：口 8号染色体、口 CBFB/MYH11基因融合、口 RARA基 因断裂、口 5q缺失、口 7q缺失、口 EVI基因断裂2慢性粒细胞白血病(CML):样本优先骨髓口BCR/ABL (DF)融合基因检测(指导格列卫用药)口嗜酸

5、性粒细胞增多症(格列卫作用靶标)：口 PDGFRA基因断裂、口 PDGFRBS因断裂、口 FGFR僮因断裂口 其他：口 BCR/ABL(ES、 BCR/ABL(SF)、 i ( 17q)、口ASS 基因缺失3 急性淋巴细胞白血病(ALL):样本建议骨髓口 ETV6 (TEL /AML1融合基因(预后较好，但易复发)口 TCF3 ( E2A)基因断裂(标准化疗后易早期复发)BCR/ABLB合基因(易迅速复发，对挽救性化疗反应不佳)口 儿童急性淋巴细胞白血病染色体及基因异常(4、10、17、TEL/AML1、KMT2A基因断裂、BCR/ABL(DF),预后评估及治疗方案的选择)口 其他：口 TCF

6、3 (E2A)/PBX1、口 4、10、17; 口 MYC 基因断 裂、口 IGH基因断裂、口 KMT2A基因断裂、口 CDKN2A (P16)如有侵权请联系网站删除基因缺失4慢性淋巴细胞白血病(CLD：样本优先外周血或骨髓口 慢性淋巴细胞白血病染色体及基因异常(P53、RB1 (13q14)、ATM(11q22)、D13S25 (13q14)、12,预后评估及治疗方案 的选择)口 其他：口 DLEU1 (13q14)、口 P53、口 ATM (11q22)、口 MYC 基因扩增、口 6q、口 TERC 口 GLI、口 12、口 BCL2GH、口 CCND3GH5骨髓增生异常综合症(MDS):

7、样本建议骨髓口 骨髓增生异常综合症染色体及基因异常( 5q、7q、20q、8、 X/Y,预后评估及治疗方案的选择)口 其他：口 5q、口 7q、口 20q、口EGRT 口 EVI1 基因断裂、口X/Y6多发性骨髓瘤(MM ):样本建议骨髓口 多发性骨髓瘤染色体及基因异常(P5a 1q21、RB1 (13q14)、 D13S319 (13q14)、IGH,预后评估及治疗方案的选择)口 其他：口 CCND1 (BCL1) /IGH、口 MAF/IGH、口 FGFR3GH、口 MAFB/IGH、口 CCND3GH、口 11q23 及 DLEU1 口 P5& 口 15q22 及 6q21、口

8、1q21 及 1p36、口 IGH 基因断裂如有侵权请联系网站删除7淋巴瘤：样本建议骨髓或淋巴结穿刺口 MYC/IGH融合基因（辅助诊断伯基特淋巴瘤、高分级 B细胞 淋巴瘤的治疗）口 BCL2GH融合基因（辅助诊断滤泡性淋巴瘤）口 ALK基因断裂（辅助诊断间变性大细胞淋巴瘤，指导克口坐替尼 用药）口 CCND1 （BCL1）/IGH融合基因（辅助诊断套细胞淋巴瘤，鉴 别诊断MCL和CLD口 IGH基因断裂（发生于多种类型的淋巴瘤中，与超过 50种基 因融合）口 MALT1基因断裂（辅助诊断粘膜相关淋巴组织淋巴瘤，指导HP化疗方案）口 BCL6基因断裂（DLBCL中预后较佳，指导治疗方案）8骨髓

9、移植后嵌合状态监测（X、Y）口 X和丫染色体检测精品资料如有侵权请联系网站删除五.常见血液肿瘤FISH探针介绍血液肿瘤中常见 FISH探针有四种类型，应用于基 因融合、断裂、扩增和缺失检测。检测类型探针举例所含靶标正常信号典型异常信号基因BCR/ABL (DF)GSP BCR碎融合融合基因检测探针GSP ABL基因断裂IGH基因断裂检测探针GSP IGH基因MYC基因扩增检GSP MYC扩增测探针CSP 8W基因缺失P53基因缺失检测探针GSP P53CSP 17&*红色标记表示该基因探针标记红色荧光素（R）,荧光显精品资料如有侵权请联系网站删除微镜相应滤块下观察为红色信号点（某些参数

10、滤块下显示为橙色信号）；* 绿色标记表示该基因探针标记了绿色荧光素（G） ，荧光显微镜相应滤块下观察为绿点信号点；* 黄色标记表示该基因探针包含一组分别标记了红、绿两种荧光素的探针组合，荧光显微镜单通道滤块下可观察到相应颜色信号点（绿色或红色信号点）， 双通道滤块下可观察到红绿相邻或重叠信号（融合，F） 。精品资料如有侵权请联系网站删除1.急性粒细胞白血病（AML ）常用 FISH 检测靶标：AML1/ETO 基因融合、PML/RARA 基因融合、CBFB 基因断裂、MLL 基因断裂AML1 / ETO 融合基因检测 M2b 分型的标志1） 辅助诊断：AML1/ETO 融合基因在M2 患者中的

11、发生率20%-40%，在M2b 亚型中发生率高达90%，是 M2b 分型的标志，在M1 和 M4 中少见。2）判断预后：AML1/ETO 融合基因阳性是预后好的标志，患者对治疗反应佳，完全缓解率可达90%， 5 年无病生存可达 50%-70%。PML /RARA 融合基因检测 M3 分型的标志1） 辅助诊断：PML/RARA 融合基因可见于95%以上的 APL中，成为M3 的一个特异标志，预后好，约占全部AML的 9%。2）指导用药：全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二础能靶向降解 PML/RARA 融合蛋白，恢复野生型PML 和 RARA基因功能，解除其对基因转录的抑制，诱导细胞发生分化和凋亡

12、，使APL 得到有效治疗。ATRA 与化疗联合使用可使 APL 的完全缓解率达90%-95% ，并可使70%以上的患者得到长期生存。CBFB 基因断裂 M4E0 特征性的遗传学改变1）辅助诊断：CBFB 基因断裂重组是AML 的特征性染色体异常， 占总 AML 患者的5%-10%和 23%的 M4 患者， 通常见于AML-M4E0 亚型，在M2, M5及M4 （无嗜酸性粒细胞增多）中较少。 现在认为CBFB 基因断裂重组是M4E0特征性的遗传学改变。2）判断预后：大多数CBFB 基因断裂重组的AML 患者对化疗敏感、预后较好。MLL 基因断裂1）辅助诊断：在成人急性髓细胞白血病（AML） 中，

13、则主要见于 M4/M5 亚型。2）判断预后：除t（9； 11）， t（10； 11）以外，大部分MLL精品资料如有侵权请联系网站删除重排白血病缓解率低，并且第一次缓解后极易复发，生存期短， 预后很差。在 AML 中单纯 MLL 断裂提示预后中等。2.慢性粒细胞白血病(CML )常用 FISH 检测靶标：BCR/ABL 基因融合BCR /ABL 融合基因检测 CML 诊断的 “金标准 ”1)辅助诊断：t(9; 22)(q34; q11)易位形成的BCR/ABL融合基因是CML 的标志物，95%CML 患者可检测出典型的t(9; 22)(q34; q11)易位，约5%的CML患者通过核型分析难以检

14、测到Ph 染色体， 但可检测出融合基因存在，仍被归为 Ph+ CML 分类。2)指导用药：对初诊患者进行BCR/ABL 检测，可以进行精品资料如有侵权请联系网站删除酪氨酸激酶抑制剂受益人群筛查。格列卫可用于治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病(Ph+ CML) 的慢性期、加速期或急变期。3) 疗效监测：Ph 染色体存在于CML 的整个病程中，治疗缓解后， 仍持续存在，只有消除Ph 阳性克隆，才能达到最终治愈。 FISH 可用于治疗期间患者体内BCR/ABL 融合基因细胞量动态变化的检测，用于后续的治疗方案选择及药物使用效果评估。3 .嗜酸粒细胞增多症(HE)常用 FISH 检测靶标：PDGFRA

15、 基因断裂、PDGFRB基因断裂和FGFR1 基因断裂2008 年 WHO 将具有 PDGFRA、 PDGFRB 或 FGFR1 基因断裂异常，伴嗜酸性粒细胞增多的髓系和淋巴系肿瘤独立成一个新类“ Myeloid/lymphoid neoplasms witheosinophilia associated with rearrangements of PDGFRA, 精品资料如有侵权请联系网站删除PDGFRB, or FGFR1 ” 。这类患者具有PDGFRA 基因重排、PDGFRB 基因重排或FGFR1 基因重排，即使不伴有BCR/ABL 融合基因，依然对酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼（ imat

16、inib ）治疗敏感，治疗后完全缓解率高。4 .急性淋巴细胞白血病（ALL ）常用 FISH 检测靶标：ETV6（ TEL） /AML1 基因融合，TCF3 （E2A）基因断裂，BCR/ABL 基因融合，KMT2A（ MLL ）基因断裂及4、 10、 17 号染色体数目异常ALL 中遗传学改变发生的频率可达80%-90%，遗传学变异较大，但大部分是特异性改变，与特定的形态学和免疫学表型有关。ALL 中遗传学改变主要是两种形式，一是精品资料如有侵权请联系网站删除染色体结构异常，二是染色体数目的异常。ETV6 （ TEL ） /AML1 基因融合ETV6 （ TEL ） /AML1 融合基因在儿童

17、ALL 中的发生率高达 20%-25%，是目前儿童ALL 最常见的染色体重排。大多数研究发现ETV6（ TEL） /AML1 阳性的儿童ALL 治疗效果很好，5 年 EFS 和总生存率达到89%和 97%，是预后良好的指标之一。TCF3 （ E2A） 基因断裂约 3%-5%的儿童ALL 携带 E2A 基因断裂。早期研究认为TCF3（ E2A） /PBX1 阳性的 ALL 患儿易发生早期复发，预后不佳，故曾将其作为高危因素之一。核型分析容易导致 20%-25%漏诊，而FISH 可克服这一缺点。BCR /ABL 基因融合t（9； 22）易位形成的BCR/ABL 融合基因，约 25%成人ALL及 2

18、-10%儿童ALL 出现t（ 9； 22）易位，但已被认为是最重要的预后不良的因素之一。一旦检测出BCR/ABL 融合基因，患儿即被划分为高危，接受更为强烈的化疗或造血干细胞移植。但大多数患儿仍会治疗失败，5 年 EFS 只有28.6%。MLL 基因断裂MLL 基因改变在急性白血病中的发生率约为5%-10%，但在婴儿ALL中则高达79%。t(4; 11)(q21; q23)易位形成的 MLL/AF4 融合基因最为常见(占 41%)， 是预后不良的重要标志，5 年 EFS 只有26.7%。4、 10、 17号染色体异常儿童 ALL 约 25%有染色体数目的增加，以 4、 10、 17 号染色体受

19、累较为多见。4、 10 和 17 染色体三体是独立的预后良好的指标，这类患者7 年 EFS 大于90%。5 .慢性淋巴细胞白血病(CLL )常用 FISH 检测靶标：13q-， +12， 17p-， 11q-慢性淋巴细胞白血病是一种进展缓慢、惰性的肿瘤，约占所有白血病的30%，多起源于B 细胞的恶性转化，淋如有侵权请联系网站删除巴细胞分化受阻于未成熟阶段，易伴发自身免疫病和低丙球蛋白血症。约90%的 B 细胞 CLL 伴有特异性染色体及基因异常。由于 CLL 白血病细胞增殖低下，体外培养增殖慢，进入分裂中期的细胞少，传统的核型分析有困难。常规染色体显带技术仅22%CLL 可检测到克隆性染色体异

20、常， 由于加用B 细胞分裂刺激剂，近 50%CLL 检测到克隆性染色体异常。近年来， 随着间期FISH 技术的应用，CLL染色体异常的检出率大大提高，可达到75%-80%。最常见的为 13q-,其次为+12、11q-、17p-、14q32 重排、6q-,对 这些遗传学异常的检测可以预测疾病的预后和治疗反应情况。13q-（含 D13S25 和 RB1 ）13q 缺失是 CLL 最常见的染色体异常，40%-60%的 CLL出现该异常。单纯 del（13q14）常于BinetA期时出现，预后较好，或与正常核型患者相似；中位生存期133 个月，无治疗生存期最长达92个月。若伴有+12、11q-等其它染

21、色体异常，则预后通常较差。+12（即CSP12）+12 是最早发现的B-CLL 常见染色体异常，其发生率约为如有侵权请联系网站删除15%-35%，通常伴有其它核型异常。+12 患者约50%以上伴有不典型的淋巴细胞形态，SmIg 和 FMC7 强表达， Binet分期提前，疾病进展，对嘌呤类似物的反应较差生存期短，预后差，因而需要积极的治疗。但仅有+12 改变，无复杂核型异常，细胞形态正常者，预后与核型正常者基本相似。17p-（含 P53/CSP17）7%-11%的CLL患者伴有17P （P53）缺失，细胞形态多不典型，多处于疾病晚期（BinetB 、 C 期 ），对多种治疗（包括核昔类似物）反

22、应差，生存期短。具有17p-核型异常的CLL患者多数预后不良，早期即出现疾病进展，且大多数化疗方案治疗效果较差，因为多数化疗方案中的细胞毒药物都含有嘌呤类似物，其发挥作用主要依赖完好的P53 介导的促凋亡机制Jo因此P53基因是否缺失为临床治疗方案的选择提供指导，对于有P53 基因缺失的患者，应选用不涉及P53 信号传导系统的药物。11q（ ATM ）缺失11q-是CLL另外一个预后较差的核型异常，常规核型分析检出率 <5%，而应用FISH 可以提高到20%。 ATM 缺失的发生率为12%-20%，一些患者即便在初诊时没有ATM 缺失，但随着疾病进展，可出现ATM 的缺失，提示ATM 的

23、缺失与 CLL 进展密切相关。精品资料6 .骨髓髓增生异常综合征（MDS）常用 FISH 检测靶标：5q-， 7q-， 20q-， +8， -Y克隆性细胞遗传学异常可见于40%-70% 的原发性MDS 和 95%左右的治疗相关性MDS（t-MDS） 。 晚期阶段的MDS 其染色体畸变率较早期阶段MDS 更高 ,其类型也更为复杂。 MDS 染色体异常检出的高低也和染色体检测的方法有关：采用CC 技术只在31%-49%的原发性MDS 患者中检出染色体异常，而采用 FISH 结果在79%的 MDS 中检出了染色体异常。MDS 细胞遗传学异常的类型呈现很大的异质性：包括各种染色体数目和结构异常，几乎涉

24、及每对染色体。其中，除5q-见于5q-综合征外，绝大多数缺乏特异性。但 MDS的染色体畸变主要以染色体缺失和数目异常（增加或丢失）为主，提示其发病的分子机制主要为肿瘤抑制基因丢失或失活或者与单倍基因剂量不足有关。MDS 染色体异常中累及 5、 7、 8、 20 号染色体的异常最为多见，其发生率分别为 20.8%、 19.2%、 16.9%和 6.4%。这些染色体异常既可以单独出现，也可以联合出现。不同类型的MDS 中，染色体异常的发生情况也是不同的。染色体核型对MDS 有独立的预后价值。总的倾向是：正常核型比异常核型预后好，单一异常比复杂异常预后好（-7 例外），核型稳定比核型演变预后好。19

25、97年国际预后积分系统（IPSS）将MDS的染色体异常分为3 种不同的预后亚型：（1）高危： 7 号染色体异常和复杂的染色体异常；低危：单纯5q-,单纯20q-,-Y,和正常核型；（3）中危：其他异常，如+8等。5q-（含 TERT/5q33 和 TERT/5q31）5q 缺失是 AML 和 MDS 中最为常见的重排；5q 内部出现缺失（5q31-q33）出现于10-15%的MDS患者中，而5号染色体异常约占与治疗相关的MDS的40%以上。-5/5q-的患者预后较好，可用于指导临床进行预后判断和治疗方案的选择，如可采用促进造血、诱导分化和生物反应调节剂等方式进行治疗。-5/5q-的MDS患者在

26、接受来那度胺治疗后可达到完全临床缓解和细胞遗传学缓解，但经常会出现复发。-7/7q-（含 D7s486/CSP7 和 D7s522/CSP7）7 号染色体缺失或7q 缺失与 MDS 的复发性异常相关，约发生于5-10%AML（ M4 及 M6） 、 约 15%成人 MDS、 40%儿童MDS及50%与治疗相关的 AML/MDS 。 -7/7q-的患者 预后较差，可用于指导临床进行预后判断和治疗方案的选择， 如可采用AML 联合化疗和造血干细胞移植进行治疗。20q-（即 D20S108）20q 缺失见于骨髓增殖性疾病（MPD ） /MDS（ 4%） /AM（1%）等疾病中。-20/20q-的患者

27、预后较好，可用于指导临床进行预后判断和治疗方案的选择，如可采用促进造血、诱导分化和生物反应调节剂等方式进行治疗。+8（即CSP8）+8 是原发性MDS 最常见的核型异常，国内报道+8的检出概率（21.1%）高于国外（10%） ，可以出现于FAB 分型的每一种MDS亚型，在IPSS积分系统中属于中等预后指标。7.多发性骨髓瘤（MM ）常用 FISH 检测靶标：13q-， 17p-， 1q21 扩增， IGH 基因断裂多发性骨髓瘤是一种最常见的恶性浆细胞病，占造血系统恶性肿瘤的10%，其特征是单克隆浆细胞恶性增生并分泌大量单克隆免疫球蛋白，引起骨痛、病理性骨折、造血异常、单克隆球蛋白血症及肾功能受

28、损等一系列临床变化。目前通用的MM 诊断标准主要是标准WHO（ 2001）和国际 MM 工作组（2003） 。此种疾病容易误诊，误诊率高达60%。临床研究发现，MM 的发生发展中伴随着多种特异的细胞遗传学层次上的相关基因数目或结构的改变。细胞遗传学改变在MM 发病机制中发挥重要作用，MM 常涉及多种染色体异常，主要为数目异常，染色体核型异常分为超二倍体和非超二倍体两大类，其中超二倍体常见染色体改变是+3、+5、+7、+9、+11、+15、+19、+21。非超二倍体主要累及-8、 -13、 -14、 -17、 -22 等。在 MM 染色体异常中结构改变较少见，主要有 1 号染色体 （1p 缺失或

29、 1q 扩增 ）、13q-、14q（多为与14q32有关的几种重排）等。染色体分析需要有较好的中期分裂相，由于骨髓瘤细胞为终末分化细胞，增长率较低，很难获得足够分裂相进行分析，常规细胞遗传学技术检出率低15%-20%， FISH技术可提高至38%-54%。13q-（含 D13S319 和 RB1 ）13 号染色体部分或完全缺失是MM 常见的染色体异常，在MM 发病机制中较早发现，是该病预后及生存期预测重要指标之一。采用 FISH 技术检测检出率可达30%-50%。 RB1缺失， 中位生存期为42.3 个月， 预后中等；D13S319 缺失，中位生存期为42.3 个月，预后中等。如有侵权请联系网

30、站删除P53P53 基因异常在初诊的MM 检出率约5%-10%。 P53 缺失中位生存期为24.7个月，预后差。P53基因参与细胞的凋 亡过程，它的缺失将导致化疗药物的不敏感性，临床也证实具有del (17p)异常患者无论是接受传统化疗还是大剂 量化疗，甚至是 ASCT,疗效和生存情况均比基因正常者 差。1q211q21( CKS1B )是MM 中最为常见的遗传学异常，CKS1B基因扩增导致细胞周期循环的上调，从而引起很多增殖性疾病。1q21扩增往往与MM的浸润表型相关，预后差，疾 病进展快。IGH 基因断裂大约 40-60%的 MM 患者发生IGH 基因断裂及易位，IGH 基因易位的伙伴染色

31、体，主要包括11q13(BCL1/CCND1) 、 4p16.3( FGFR3) 、 16q23(MAF) 、 20q11(MAFB) 和 6p21(CCND3) 等。较常见的易位：t(11 ； 14)(q13； q32)、 t(4； 14)(p16；q32)和 t(14; 16)(q32; q23)分别大约 20%、15%和 5%患者存 在。t(11; 14)(q13; q32)预后较好，t(4; 14)(p16; q32)的 精品资料如有侵权请联系网站删除 患者与其他遗传亚型的患者相比具有显著较差的预后。8.淋巴瘤常用 FISH 检测靶标：CCND1/IGH 基因融合、BCL2/IGH 基因融合、MYC 基因断裂、BCL6 基因断裂、MALT1 基因断裂精品资料如有侵权请联系网站删除CCND1 /IGH 基因融合t(11 ； 14)易位后形成CCND1/IGH 融合基因，IGH 基因附近的增强子使CyclinD1 过表达应用范围套细胞淋巴瘤的诊断性指标，95%左右的 MCL 患者具有t( 11； 14) ( q13；q32) 染色体易位，可用于 MCL 与其他淋巴瘤( CLL/SLL )鉴别诊断。BCL2 / IGH 基因融合t(14； 18)易位后形成