革兰阳性球菌

1、 二、微生物学检验学检验凝固酶试验凝固酶试验玻片法：测定结合玻片法：测定结合型凝固酶，型凝固酶，1010秒钟秒钟观察结果。观察结果。试管法：测定游离试管法：测定游离型凝固酶，型凝固酶，4 4小时后小时后观察结果。观察结果。 ：几种常见葡萄球菌的鉴别：几种常见葡萄球菌的鉴别：色素色素 金黄色金黄色 白色白色 白或柠檬色白或柠檬色凝固酶凝固酶 + - -葡萄糖葡萄糖 + + -甘露醇甘露醇 + - - 溶血溶血 + - -耐热核酸酶耐热核酸酶 + - -SPA + - -致病性致病性 强强 弱弱/无无 无无 性状性状 金葡金葡 表葡表葡 腐生葡腐生葡 球形，链状排列，触酶试验阴性、革兰染球形，链状

2、排列，触酶试验阴性、革兰染色阳性色阳性(G(G+ +) )一、生物学性状一、生物学性状1.1.形态染色形态染色 一、生物学性状一、生物学性状 1.1.形态染色形态染色 液体培养基中链状生长，固体培养基液体培养基中链状生长，固体培养基中可成单，成双生长。中可成单，成双生长。 无鞭毛、无芽胞，某些菌株可形成荚无鞭毛、无芽胞，某些菌株可形成荚膜。膜。二、分类二、分类LancefieldLancefield抗原血清分型抗原血清分型侵袭力侵袭力1.致病物质：致病物质：F蛋白蛋白M蛋白蛋白透明质酸酶透明质酸酶链激酶，链道酶链激酶，链道酶外毒素外毒素链球菌溶素链球菌溶素(SLO,SLS)致热外毒素致热外毒素

3、F蛋白（protein F） 粘附素，有利于细菌在宿主体内定植和繁殖粘附素，有利于细菌在宿主体内定植和繁殖M蛋白 抑制吞噬细胞的吞噬作用抑制吞噬细胞的吞噬作用 介导细菌与上皮细胞的黏附介导细菌与上皮细胞的黏附 与某些超敏反应疾病有关与某些超敏反应疾病有关链球菌溶素（链球菌溶素（streptolysinstreptolysin）致热外毒素（致热外毒素（SPESPE）透明质酸酶透明质酸酶扩散因子扩散因子分解细胞间质的透明质酸分解细胞间质的透明质酸组织中扩散组织中扩散链激酶（链激酶（SKSK） 使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶， 阻止血浆凝固。阻止血浆凝固。

4、链道酶（链道酶（SDSD） 降解脓汁中粘稠的降解脓汁中粘稠的DNADNA，使脓液稀薄。，使脓液稀薄。2.所致疾病：所致疾病：化脓性链球菌化脓性链球菌 淋巴管炎，淋巴管炎，猩红热猩红热超敏反应性疾病超敏反应性疾病化脓性感染化脓性感染中毒性疾病中毒性疾病蜂窝组织炎，蜂窝组织炎，扁桃体炎等扁桃体炎等风湿热风湿热急性肾小球肾炎急性肾小球肾炎其他链球菌其他链球菌 无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌 米勒链球菌为正常菌群，可导致内源性感染米勒链球菌为正常菌群，可导致内源性感染 肺炎链球菌是大叶性肺炎和多种化脓性感染的病肺炎链球菌是大叶性肺炎和多种化脓性感染的病

5、原菌原菌 草绿色链球菌是正常菌群，可导致亚急性细菌性草绿色链球菌是正常菌群，可导致亚急性细菌性心内膜炎心内膜炎咽拭子、痰液、脓液、穿刺液咽拭子、痰液、脓液、穿刺液脑脊液、血液脑脊液、血液直接涂片镜检直接涂片镜检直接检测抗原直接检测抗原分离培养分离培养增菌培养增菌培养5 5%CO%CO2 2接种血平板接种血平板挑选可疑菌落挑选可疑菌落鉴定试验鉴定试验药敏药敏血清学分型血清学分型A A、B B、C C、D D、F F、G G等等溶血链球鉴定溶血链球鉴定杆菌肽杆菌肽敏感敏感A ACAMPCAMP阳性阳性B B非非溶血溶血奥普奥普托辛托辛胆汁胆汁溶菌溶菌肺链肺链胆汁七胆汁七叶苷叶苷牛链牛链草绿色草绿色

6、溶血溶血生化鉴生化鉴定定属内鉴定属内鉴定1.Lancefield1.Lancefield群特异抗原鉴定群特异抗原鉴定 与与B B群抗血清凝集群抗血清凝集无乳链球菌无乳链球菌 与与F F群抗血清凝集，菌落直径小于群抗血清凝集，菌落直径小于0.5mm0.5mm米勒米勒链球菌链球菌 与与A A、C C、G G群抗血清凝集群抗血清凝集根据菌落大小和生化根据菌落大小和生化反应进一步鉴定反应进一步鉴定2.2.杆菌肽敏感试验杆菌肽敏感试验 将将0.04U0.04U杆菌肽药敏纸片贴在涂布有待测菌的羊血杆菌肽药敏纸片贴在涂布有待测菌的羊血琼脂平板上，琼脂平板上，3535过夜，观察抑菌环以判断是否过夜，观察抑菌环

7、以判断是否敏感。敏感。 化脓性链球菌为阳性，可作为筛选试验化脓性链球菌为阳性，可作为筛选试验3.VP3.VP试验试验取过夜菌落置于取过夜菌落置于VPVP肉汤中，孵育肉汤中，孵育6 6小时加入小时加入VPVP试剂。试剂。阳性者为米勒链球菌阳性者为米勒链球菌4.CAMP4.CAMP试验试验 用接种针挑取金黄色葡萄球菌在血琼脂上划出一用接种针挑取金黄色葡萄球菌在血琼脂上划出一条直线，再在与该线相距条直线，再在与该线相距4mm4mm处挑取待检菌垂直划处挑取待检菌垂直划出另一条直线，使成出另一条直线，使成“T”T”字形，过夜后观测结果，字形，过夜后观测结果，出现箭头样的加强溶血区者为阳性，无加强区的出现

8、箭头样的加强溶血区者为阳性，无加强区的为阴性。为阴性。 无乳链球菌为阳性，可作为初步鉴定试验无乳链球菌为阳性，可作为初步鉴定试验5.5.其他鉴别试验其他鉴别试验 PYRPYR试验：试验：A A群群( (化脓化脓 ) )链球菌产生的吡咯烷酮芳基链球菌产生的吡咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮酰胺酶水解吡咯烷酮-萘基酰胺，加入萘基酰胺，加入N N，N-N-二二甲氧基肉桂醛试剂后产生桃红色，为甲氧基肉桂醛试剂后产生桃红色，为PYRPYR试验阳试验阳性性 。 BGURBGUR试验：试验：C C、G G群米勒链球菌阴性。群米勒链球菌阴性。非非溶血性链球菌鉴定溶血性链球菌鉴定1.Optochin1.Optoch

9、in试验：将奥普托欣纸片贴于涂布有待测试验：将奥普托欣纸片贴于涂布有待测菌的平板上，菌的平板上，3535过夜，抑菌圈直径大于过夜，抑菌圈直径大于14mm14mm为为敏感。敏感。 肺炎链球菌为敏感，甲链耐药肺炎链球菌为敏感，甲链耐药2.2.胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 将细菌悬液与等量将细菌悬液与等量2%2%去氧胆酸钠置于试管内，去氧胆酸钠置于试管内，3535孵育孵育2 2小时，菌液变清为阳性；或将小时，菌液变清为阳性；或将10%10%去氧胆去氧胆酸钠滴于待测菌落上，酸钠滴于待测菌落上， 3535孵育孵育1515分钟，菌落消分钟，菌落消失或者变平为阳性。失或者变平为阳性。 肺炎链球菌阳性，甲链阴性肺

10、炎链球菌阳性，甲链阴性3.3.胆汁七叶苷试验（胆汁七叶苷试验（BEBE） 将待测菌接种于胆汁七叶苷培养基，将待测菌接种于胆汁七叶苷培养基，3535孵育孵育4848小时，培养基变黑为阳性。小时，培养基变黑为阳性。 牛链球菌为阳性牛链球菌为阳性非非链球菌的鉴别链球菌的鉴别抗抗O O试验试验抗抗“O”O”试验（试验（ASO testASO test）：链球菌侵入）：链球菌侵入体内产生体内产生SLOSLO，刺激机体产生相应抗体，刺激机体产生相应抗体ASOASO。方法：间接凝集方法：间接凝集结果：效价大于结果：效价大于400400单位单位意义：风湿热及其活动性的辅助诊断意义：风湿热及其活动性的辅助诊断第

11、三节第三节 肠球菌属肠球菌属一、生物学特性一、生物学特性1.1.形态形态 革兰阳性球菌，呈单个、成双或短链装排列、无革兰阳性球菌，呈单个、成双或短链装排列、无芽胞、无荚膜、无鞭毛芽胞、无荚膜、无鞭毛2.2.培养培养 营养要求不高营养要求不高 部分菌株在血平板上出现部分菌株在血平板上出现溶血溶血 在含在含6.5%NaCl6.5%NaCl肉汤中可生长，高胆汁培养基生长肉汤中可生长，高胆汁培养基生长 PYRPYR试验、胆汁七叶苷试验阳性试验、胆汁七叶苷试验阳性二、分类二、分类 原属链球菌属原属链球菌属D D群群 分为分为5 5群群1919个种个种 属间鉴定属间鉴定三、临床意义三、临床意义 多见于泌尿

12、道感染，是重要的医院感染病原多见于泌尿道感染，是重要的医院感染病原菌菌 分离的标本多见于第二群中的粪肠球菌和屎分离的标本多见于第二群中的粪肠球菌和屎肠球菌肠球菌四、微生物学检验四、微生物学检验1.1.检验程序检验程序2.2.标本采集标本采集11小时内接种完成小时内接种完成3.3.直接镜检直接镜检单个、成双或短链状卵圆形单个、成双或短链状卵圆形G+G+球菌球菌4.4.分离培养与鉴定分离培养与鉴定 选择培养基包括叠氮胆汁七叶苷琼脂、哥伦比亚选择培养基包括叠氮胆汁七叶苷琼脂、哥伦比亚多黏菌素奈啶酸琼脂、苯乙基乙醇琼脂多黏菌素奈啶酸琼脂、苯乙基乙醇琼脂鉴定试验鉴定试验1.1.属间鉴定属间鉴定 镜下形态、触酶阴性、镜下形态、触酶阴性、PYRPYR试验阳性、胆汁七叶苷试验阳性、胆汁七叶苷试验阳性、试验阳性、 6.5%NaCl6.5%NaCl肉汤中可生长、肉汤中可生长、D D群血清群血清2.2.属间鉴定属间鉴定耐药性肠球菌耐药性肠球菌1.1.氨基糖甙类高水平肠球菌（氨基糖甙类高水平肠球菌（HLARHLAR）