临床标本检验

1、 常见临床标本的细菌学检验常见临床标本的细菌学检验细菌检验的常见标本细菌检验的常见标本：粪便、血、尿液、痰、脓汁、脑脊液、分泌物等检验的目的检验的目的: 协助疾病的诊断和治疗。原则原则：准确、快速、敏感、低耗、和安全。 一、认真检查细菌学检验单 收到化验单后，应及时登记、并检查化验单上的标本类型、来源、送检目的、患者姓名、性别、年龄、临床诊断等内容。 只有了解标本的来源及病人的临床情况，才能有目的地选择正确的检验方法，检出病原菌。第一节 临床标本细菌学检验的基本要求二、正确采集和处理标本 1.无菌操作 在采集血液、脑脊液或穿刺液时，应严格无菌操作，避免杂菌污染。 2.使用适当的容器 血液、脑脊

2、液等应放在无菌容器内，其他标本尽量用无菌容器盛装。容器灭菌应采用干热、湿热或紫外线照射等方法。 3.应在用药物之前，并选择合适的部位采样。 4.送检 标本采集后，应注明患者姓名、年龄、采样日期、科室或病房，标本名称、临床诊断、检验项目等。 立即送检。 如不能及时送检，可将标本放于运送培养基或保存液中保存送检。脑膜炎和淋病标本需放3537保温送检。 5.安全防护 在采集、运送和检验的过程中务必注意安全，防止污染、传播和自身感染。 6.及时检验和报告 对国家规定的传染病检验结果，必须及时报送上级部门。 三、选择合适的培养基和培养方法 临床常见标本细菌分离用培养基见表： 临床常用细菌分离培养基临床常

3、用细菌分离培养基EB BA SS MAC/EMB CA SNA NYE SA血、骨髓 + + + +尿 + + +粪、肛拭 + + +痰、咽拭 + + + +生殖道标本 + + + + + +眼耳口鼻 + + + + +标本体液（除血 + + + 同时做需氧和厌氧 培养做细菌计数、必要时加厌氧培养霍乱则用碱性蛋白胨水增菌和TCBS分离可直接涂片染色镜检，并同时做需氧和厌氧 培养部分可直接涂片镜检可直接涂片染色镜检，脓汁可同时做需氧和厌氧培养部分可直接涂片镜检EB：增菌肉汤：增菌肉汤 CA：巧克力平板：巧克力平板 SNA：耐瑟菌选择培养基：耐瑟菌选择培养基 SA：沙保培养基：沙保培养基 NYE：

4、耶尔森菌培养：耶尔森菌培养基基四、临床标本细菌学检验基本程序： 培养方法 根据检验目的可选择需氧培养、厌氧培养和二氧化碳培养。 从培养结果中区别污染菌和病原菌： 观察菌落是否在划线上 每次培养均做无菌对照； 结合拟培养细菌的生长特点对照判断 注意培养时间，不同细菌生长速度不同 涂片染色检查，观察是否与目的菌一致。标本选择标本选择采采 集集（保存、运送）观察、前处理观察、前处理直接涂片检查直接涂片检查快速检验快速检验分离培养分离培养（需氧、厌氧、二氧化碳培养）增菌增菌（需氧、厌氧、二氧化碳培养）可疑菌落可疑菌落涂片检查生化试验血清学鉴定药敏试验动物试验报 告报 告报 告 一、标本采集一、标本采集

5、 （一）自然排便采集法 挑取有脓血、粘液部分的粪便23g或液状粪便絮状物12ml，盛于无菌广口瓶/蜡纸盒中或置于保存液/增菌液中送检。 志贺菌检验常用甘油缓冲盐水送检。 霍乱弧菌用碱性蛋白胨水送检。 （二）直肠拭子采集法第四节粪便标本的细菌学检查第四节粪便标本的细菌学检查 不易获得粪便或排便困难的患者及幼儿，用甘油盐水湿润，然后插入肛门约45cm（幼儿23cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦取表面粘液，装入无菌试管或保存液中送检。 如不能立即送检，应放入卡布（Cary-Blair）运送培养或PH7.0的磷酸盐甘油（0.033mol/L磷酸盐缓冲液与等体积甘油的混合液）中运送或保存。 二、检验方法及结

6、果报告 （一）检验程序（一）检验程序 粪便标本的细菌学检验程序见图： 351824 h粪粪 便便 SS和 MAC/EMB初步鉴定初步鉴定 KIA和MIU 分离培养分离培养 最最 终鉴终鉴 定定351824 h涂片检查系统生化试验血清学鉴定药敏试验挑可疑菌落351824 h报告菌种及药敏（二）检验方法及结果报告 1、显微镜检查一般不做直接涂片镜检，只有在检查一些特殊疾病如霍乱、结核、葡萄球菌或艰难梭菌引起的伪膜性肠炎才作直接涂片检查。 （1）霍乱弧菌显微镜检查： 染色检查：取米泔水样便或絮状物、粘液制片2张，干燥后用乙醇或甲醇固定，分别做革兰染色及1：10稀释的石碳酸复染红色，镜检有无革兰阴性呈

7、鱼群排列的弧菌； 悬滴检查：取米泔水样便制成悬滴或压滴标本，检查细菌动力。在悬滴片中加霍乱弧菌血清做制动试验可初步诊断。 （2）葡萄球菌显微镜检查：发现大量革兰阳性呈葡萄状排列的球菌可初步诊断。 （3）结核分枝杆菌显微镜检查：取蚕豆大小粪块与饱和盐水1015ml混合，静置12小时，取浮面液体少许作涂片，行萋尼染色镜检。若找到红色杆菌，可报告“找到抗酸杆菌” （4）艰难梭菌显微镜检查：发现革兰阳性粗大杆菌，无荚膜，有卵圆形芽胞于菌体一端者，可报告找到“革兰阳性芽胞杆菌，形似艰难梭菌”。 （5）空肠弯曲菌显微镜检查：若见细小、长而弯的革兰阴性弧菌、S形或螺旋形成海鸥状的细菌，报告“找到弯曲菌”。

8、2.分离培养及鉴定（1）霍乱弧菌培养： 种于碱性蛋白胨水中，经37 6小时增菌； 取表面生长物移种于碱性琼脂平板上或TCBS平板； 作氧化酶试验，阳性者用霍乱弧菌多价“O”诊断血清作玻片凝集试验，初步报告为霍乱弧菌； 同时挑取菌落作纯培养， 37 培养18小时后，经玻片凝集试验复核无误，即可作生化试验、血清学试验进行全面鉴定，并报告结果。 （2）大肠埃希菌试验： 取脓血或糊状粪便于弱选择性培养培养基（EMB或MAC）， 37培养1824小时后观察； 挑选可疑菌落接种KIA和MIU进行初步生化鉴定； 从斜面是挑取菌苔或直接从上述平板挑取510个菌落，分别与致病性大肠埃希菌诊断血清进行凝集，并与单

9、价血清做分型鉴定。 （3）金黄色葡萄球菌培养：）金黄色葡萄球菌培养： 取呕吐物、粪便等种于高盐甘露醇琼脂或高盐卵黄琼脂平板； 挑取平板上的黄色菌落涂片镜检； 做各项试验加以鉴定，并检测其肠毒素，最后报告。 （4）艰难梭菌培养）艰难梭菌培养：取黄色夹有伪膜的新排出液状粪便，种于环丝氨酸甲氧头孢霉素果糖琼脂（CCFA）平板上， 37厌氧培养48小时后，选择可疑菌落移种于庖肉培养基备毒素测定，同时做其他试验加以鉴定，最后报告。（5）沙门菌及志贺菌属培养（重点）： 取脓血、粘液粪便种于GN增菌液或亚硒酸盐增菌液。 或直接划线接种于强选择性培养基（SS、XLD等）和弱选择性培养（MAC、EMB、CB等）

10、各一个，经37培养1824小时。 挑取不发酵乳糖的小而透明的菌落，接种KIA和MIU 37 孵育后，观察结果。 用生化试验和血清学凝集试验作最后鉴定并报告。如生化试验符合，诊断血清不发生凝集，则将待检菌液隔水煮沸1小时以破坏K抗原和Vi抗原，再作凝集试验。 肠杆菌科生化反应氧化酶硝酸盐还原吲哚甲基红VP柠檬酸盐硫化氢尿酶丙二酸盐苯丙氨酸脱氨酶赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶精氨酸双水解酶动力ONPG埃希菌属 + + + + d + +/-志贺菌属 + d + d d 沙门菌属 + + + + + + +/ d +变形杆菌属 + d + -/+ d +/- + + +克雷伯菌属 + d d d d d

11、d d + 肠道杆菌系统生化反应：沙门菌属细菌的初步鉴定MIU 触酶 氧化酶硝酸盐还原诊断血清凝集KIA斜面 底层 产气 H2S甲型副伤寒 K A + -/+ + - + + AF多价+ A群+乙型副伤寒 K A + + + - + + AF多价+ B群+丙型副伤寒 K A + + + - + + AF多价+ C群+ vi+猪霍乱沙门菌 K A + -/+ + - + + AF多价+ C群+ 伤寒沙门菌 K A - +/- + - + + AF多价+ D群+ vi+其他沙门菌 K A + + + - + + AF多价+ 肠炎+微量生化反应系统Micro-ID系统VP硝酸盐还原 苯丙氨酸脱羧酶硫化氢吲哚鸟氨酸赖氨酸丙二酸盐尿素七叶甘ONPG阿拉伯糖侧金盏花醇肌醇三梨醇421421421421421 + + + + + + + 0 2 0 0 2 1 4 0 0 0 2 1 4 0 0 2 3 4 3 4相加所得数字：23434 查出相应细菌为：大肠埃希菌血清学凝集： 先做AF多价O血清的凝集(95%以上的沙门菌都属于AF群)，然后以6个O群的因子血清定群（O2凝集为A群；O4凝集为B群；O7凝集为C1亚群;O8凝集C2亚群；O9凝集为D群；O